单核细胞增生李斯特菌快速检测试剂盒的制作方法

本实用新型涉及一种单核细胞增生李斯特菌检测试剂盒，属于单核细胞增生李斯特菌检测技术领域。

背景技术：

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一类人畜共患的食源性致病菌。简称“单增李斯特菌”，广泛分布于自然界中，肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品和蔬菜中均有其存在。单增李斯特菌会引起人、畜的李斯特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多，因为该菌是一种细胞内寄生菌，宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能，因此对新生儿、孕妇及40岁以上的成人、酗酒者、免疫系统损伤或缺陷者、接受免疫抑制剂和皮质激素治疗的患者及器官移植者危害严重。

目前食品中单增李斯特菌的检测方法包括平板培养法、免疫学方法和分子生物学方法。平板培养法采用选择性培养基对目标菌进行增菌培养，然后进行生化鉴定。平板培养法灵敏度高，成本低，可以给出定性和定量的结果。但采用平板培养法工艺步骤都耗时耗力，不能满足食品快速检测的需求。免疫学方法是基于抗体、抗原的天然密切关系，只需少许样品纯化就可以精确检出抗原，不易受基质影响，可以提供实时信息，具有操作简便、快速的特点。但是检测灵敏度低，特异性较差。分子生物学方法包括DNA探针、PCR(聚合酶链反应)和DNA芯片等，其中PCR检测方法检测准确性高和检测时间短等优势，越来越多地被应用在实际的致病单增李斯特菌的检测中。但常规的PCR技术往往需要采用专用的基因扩增设备，不方便随时取样快速检测。

NASBA是一种恒温的体外扩增方法，它包括3种酶，即逆转录酶、核糖核酸酶H和RNA聚合酶T7，以及两种目标序列的特异性寡核苷酸引物，它们共同作用于90min内可以将目标RNA或DNA序列扩增超过10⁸倍。在该方法中，mRNA作为靶序列比rRNA或全部RNA更能预测出细胞的生存能力。NASBA技术的主要优势在于：产物积累的速度快；不需要专门的设备，如定温循环机。但酶的活性受温度的影响较大，其中保藏运输和使用需要不同的温度，因此不易携带和使用。同时，反应所需试剂种类多，现有的试剂盒仅仅将试剂分试管保存，使用需移液枪、超净工作台等等设备，非常不方便，操作复杂，减缓了检测速度。

技术实现要素：

本实用新型要解决的技术问题是提高单核细胞增生李斯特菌检测试剂盒的保温性能和试剂的转移速度。

为解决本实用新型的技术问题，本实用新型的单核细胞增生李斯特菌快速检测试剂盒包括内盒体、试剂包和内盒盖，所述内盒盖可拆卸扣接在内盒体上，所述试剂包位于内盒体内，所述单核细胞增生李斯特菌快速检测试剂盒还包括分析管、管道、第一分析管盖、试剂包固定保温层、分析管固定保温层和外盒体，所述试剂包上设置有试剂包管、试剂包管与试剂包之间设置有薄膜，试剂包管上还设置有尖刺部，所述试剂包管为软管，试剂包管与管道相通；所述分析管上设置有第二分析管盖，所述第二分析管盖可拆卸卡接在分析管上，所述管道通过第二分析管盖与分析管相通；所述第一分析管盖可拆卸扣接在分析管上；

所述分析管、管道、第一分析管盖、试剂包固定保温层和分析管固定保温层均位于盒体内，所述试剂包位于试剂包固定保温层内，所述分析管位于分析管固定保温层内；

所述试剂包固定保温层设置有冷冻剂放置口；所述分析管固定保温层设置有保温剂放置口；

所述内盒体位于外盒体内，所述外盒体上还设置有支撑柱、外盒盖和真空孔；所述支撑柱位于外盒体的内部平面上；所述外盒盖可拆卸扣接在外盒体上；所述真空孔内设置有止回阀。

优选的，所述外盒盖扣接在外盒体上形成缝隙，所述缝隙上设置有密封胶层。

优选的，所述外盒体的每个内部平面上均设置有个支撑柱。

优选的，所述第一分析管盖上设置有卡接部和盖沿，所述卡接部与分析管的内径相适配，并位于第一分析管盖底部，所述卡接部与第一分析管盖交接处设置有突起的盖沿。

优选的，所述第二分析管盖上设置有第二卡接部和第二盖沿，所述第二卡接部与分析管的内径相适配，并位于第二分析管盖底部，所述第二卡接部与第二分析管盖交接处设置有突起的第二盖沿。

优选的，所述内盒盖采用保温材料制备而成。

有益效果：

本实用新型的单核细胞增生李斯特菌快速检测试剂盒，可将待测样品添加在分析管内，用尖刺部刺破薄膜，试剂包内的试剂通过管道进入分析管内，无需反复使用移液枪，具有试剂取用方便，操作简单快速的特点；同时，因需要的检测设备简单，成本低，易于推广；试剂取用过程无菌，减少了让杂菌对检测的干扰，检测结果准确。

其次，本实用新型的单核细胞增生李斯特菌快速检测试剂盒有内盒体和外盒体，内外盒体之间设置有支撑柱，可将内盒体与外盒体之间的空间抽真空，减少内盒体与外界的热传递，从而达到非常优良的保温效果。

附图说明

图1为单核细胞增生李斯特菌快速检测试剂盒图。

图2为第一分析管盖图。

1-内盒体；2-分析管；21-第二分析管盖；211-第二盖沿；212-第二卡接部；3-试剂包；31-试剂包管；311-尖刺部；32-薄膜；4-管道；5-第一分析管盖；51-卡接部；52-盖沿；6-试剂包固定保温层；61-冷冻剂放置口；7-分析管固定保温层；71-保温剂放置口；8-内盒盖；9-外盒体；91-支撑柱；92-缝隙；921-密封胶层；93-外盒盖；94-真空孔；941-止回阀。

具体实施方式

下面结合实施例对本实用新型的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本实用新型限制在所述的实施例范围之中。

如图1所示，单核细胞增生李斯特菌快速检测试剂盒，包括内盒体1、试剂包3和内盒盖8，所述内盒盖8可拆卸扣接在内盒体1上，所述试剂包3位于内盒体1内，所述单核细胞增生李斯特菌快速检测试剂盒还包括分析管2、管道4、第一分析管盖5、试剂包固定保温层6、分析管固定保温层7和外盒体9，所述试剂包3上设置有试剂包管31、试剂包管31与试剂包3之间设置有薄膜32，试剂包管31上还设置有尖刺部311，所述试剂包管31为软管，试剂包管31与管道4相通；所述分析管2上设置有第二分析管盖21，所述第二分析管盖21可拆卸卡接在分析管2上，所述管道4通过第二分析管盖21与分析管2相通；所述第一分析管盖5可拆卸扣接在分析管2上；

所述分析管2、管道4、第一分析管盖5、试剂包固定保温层6和分析管固定保温层7均位于盒体1内，所述试剂包3位于试剂包固定保温层6内，所述分析管2位于分析管固定保温层7内；

所述试剂包固定保温层6设置有冷冻剂放置口61；所述分析管固定保温层7设置有保温剂放置口71；

所述内盒体1位于外盒体9内，所述外盒体9上还设置有支撑柱91、外盒盖93和真空孔94；所述支撑柱91位于外盒体9的内部平面上；所述外盒盖93可拆卸扣接在外盒体9上；所述真空孔94内设置有止回阀941。

试剂包3用于盛装NASBA法检测单核细胞增生李斯特菌的试剂，NASBA法检测单核细胞增生李斯特菌所需的每一种试剂均设置在一个独立的试剂包3内；分析管2内为空管，用于检测时盛装待测样品。

储存运输时，将第二分析管盖21与分析管2连接，将第一分析管盖5单独放置在内盒体1内；将内盒盖8扣在内盒体1上，试剂包固定保温层6内可从冷冻剂放置口61处放入冰块、相变冷冻剂等等，保持试剂的活性，盖上外盒盖93，从真空孔94处抽真空。由于内盒体1在外盒体9内部，在外盒体9的内表面上设置有支撑柱91，减少了外盒体9与内盒体1的接触，从而减少了内盒体1与外界的热传递，还可将外盒体9与内盒体1之间形成的空间抽为真空，进一步减少内盒体1与外界的热传递；为了抽真空，在外盒体9上设置真空孔94，真空孔94在外盒体9上的位置不定，但为了方便外盒体9的放置，真空孔94最好不设置在外盒体9的底面；真空孔94内有止回阀941，防治气体倒流回外盒体9内。

使用时，将外盒盖93和内盒盖8拆掉，将待测样品加入分析管2内，用尖刺部311刺穿薄膜32，试剂包3中的试剂经过试剂包管31和管道4进入分析管2内，发生反应。固定保温层7内可按反应所需从保温剂放置口71处添加对应的保温、加热或冷却材料。

如果需要将分析管2取出操作，也可将第二分析管盖21拆除，换上第一分析管盖5。

如图1所述，由于外盒盖93扣接在外盒体9上，可能会形成漏气的缝隙92，因此优选在缝隙92上粘一层密封胶层921，让外盒体9与内盒体1之间的空间更好的保持真空，减少内盒体1与外界的热传递。

支撑柱91设置在外盒体9的每个内部平面上，起到支撑外盒体9和内盒体1的作用，但支撑柱91太多，会增加外盒体9和内盒体1之间的热传递，太少内盒体1又容易相对外盒体9滑动，因此，优选在外盒体9的每个内部平面上均设置2个支撑柱91。

如图2所示，所述第一分析管盖5上设置有卡接部51和盖沿52，所述卡接部51与分析管2的内径相适配，并位于第一分析管盖5底部，所述卡接部51与第一分析管盖5交接处设置有突起的盖沿52。

安装第一分析管盖5时，可将卡接部51插入分析管2内，盖沿52起限位作用，当需要拆除第一分析管盖5时，可握住盖沿52向分析管2外拉，盖沿52起到方便把持的作用。

第二分析管盖21与第一分析管盖5的区别仅为：第二分析管盖21上设置有管道4；与第一分析管盖5相同的是，所述第二分析管盖21上设置有第二卡接部212和第二盖沿211，所述第二卡接部212与分析管2的内径相适配，并位于第二分析管盖21底部，所述第二卡接部212与第二分析管盖21交接处设置有突起的第二盖沿211。

为减少试剂盒与外界的热传递，试剂的储存和使用活性，内盒盖8也优选采用保温材料制备而成。