1.一种免疫信号杂交链式反应(ishcr),其包括将杂交链式反应(hcr)引发链与分析物特异性的抗体偶联,并添加一对hcr放大链以进行杂交链式反应。
2.根据权利要求1所述的免疫信号杂交链式反应,其中所述hcr引发链具有用于与hcr放大链杂交的区域和用于偶联分析物特异性的抗体的区域。
3.根据权利要求1或2所述的免疫信号杂交链式反应,其中所述hcr引发链和/或所述放大链用生物素、acrydite、胺、硫醇、dbco和/或荧光染料进行末端修饰和/或内部修饰,并且所述荧光染料选自fitc、花青染料、dylightfluors、atto染料、janeliafluor染料、alexafluro546、alexafluor488和alexafluor647。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的免疫信号杂交链式反应,其中所述hcr引发链通过选自链霉亲和素-生物素相互作用和共价键相互作用的相互作用与抗体偶联。
5.根据权利要求4所述的免疫信号杂交链式反应,其中所述hcr引发链是生物素化的引发链,它能够与链霉亲和素的空位结合位点相连,链霉亲和素能够与生物素化的抗体相连,从而使所述hcr引发链与所述抗体偶联。
6.根据权利要求4所述的免疫信号杂交链式反应,其中所述共价键相互作用是通过选自含有琥珀酰亚胺酯基团的胺反应性接头和点击化学接头的化学接头的相互作用。
7.根据权利要求6所述的免疫信号杂交链式反应,其中所述点击化学接头选自nhs-叠氮化物接头、nhs-dbco接头、马来酰亚胺-叠氮化物接头和马来酰亚胺-dbco接头。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的免疫信号杂交链式反应,其中放大链或一对放大链经过修饰以进入分支多轮放大以便使hcr聚合物分支和生长。
9.根据权利要求8所述的免疫信号杂交链式反应,其中所述放大链或所述放大链对用化学基团和/或荧光染料进行末端修饰或内部修饰,这允许引发更多轮的放大,所述化学基团选自生物素、洋地黄毒苷、acrydite、胺、琥珀酰亚胺酯、硫醇、叠氮化物、tco、四嗪、炔烃和/或dbco,并且所述荧光染料选自fitc、花青染料、dylightfluors、atto染料、janeliafluor染料、alexafluro546、alexafluor488和alexafluor647。
10.根据权利要求8或9所述的免疫信号杂交链式反应,其中将一对带荧光团标签的放大链添加到所述多轮式ishcr的最后一轮中以进行可视化。
11.根据权利要求8-10中任一项所述的免疫信号杂交链式反应,其中所述放大链在内部位置被修饰,其更易于接近链霉亲和素并充当多轮式ishcr中每个连续的分支轮的锚点。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的免疫信号杂交链式反应,其中所述抗体是与分析物特异性的第一抗体发生反应的第二抗体,所述第二抗体是igg或纳米抗体,并且所述第一抗体是igg、纳米抗体或scfv。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的免疫信号杂交链式反应,其还包括使用氧化石墨烯(go)以吸收未组装的hcr放大链。
14.根据权利要求1-12中任一项所述的免疫信号杂交链式反应,其还包括使用氧化石墨烯(go)以吸收未组装的hcr放大链并猝灭荧光,其中所述放大链被荧光染料末端修饰和/或内部修饰。
15.根据权利要求13或14所述的免疫信号杂交链式反应,其中go的粒度<500nm。
16.一种用于免疫信号杂交链式反应(ishcr)的试剂盒,所述试剂盒包含:(1)分析物特异性的抗体;(a)hcr引发链;和(3)一对hcr放大链,其中所述hcr引发链具有用于与hcr放大链杂交的区域和用于偶联所述抗体的区域。
17.根据权利要求16所述的试剂盒,其中所述hcr引发链和/或所述放大链用生物素、acrydite、胺、硫醇、dbco和/或荧光染料进行末端修饰和/或内部修饰,并且所述荧光染料选自fitc、花青染料、dylightfluors、atto染料、janeliafluor染料、alexafluro546、alexafluor488和alexafluor647。
18.根据权利要求16或权利要求17所述的试剂盒,其中所述hcr引发链通过选自链霉亲和素-生物素相互作用和共价键相互作用的相互作用与抗体偶联。
19.根据权利要求18所述的试剂盒,其中所述hcr引发链是生物素化的引发链,它能够与链霉亲和素的空位结合位点相连,链霉亲和素能够与生物素化的抗体相连,从而使所述hcr引发链与所述抗体偶联。
20.根据权利要求18所述的试剂盒,其中所述共价键相互作用是通过选自含有琥珀酰亚胺酯基团的胺反应性接头和点击化学接头的化学接头的相互作用。
21.根据权利要求20所述的试剂盒,其中所述点击化学接头选自nhs-叠氮化物接头、nhs-dbco接头、马来酰亚胺-叠氮化物接头和马来酰亚胺-dbco接头。
22.根据权利要求16-21中任一项所述的试剂盒,其中放大链或一对放大链经过修饰以进入分支多轮放大以便使hcr聚合物分支和生长。
23.根据权利要求22所述的试剂盒,其中所述放大链或所述放大链对用选自生物素、洋地黄毒苷、acrydite、胺、琥珀酰亚胺酯、硫醇、叠氮化物、tco、四嗪、炔烃和/或dbco的化学基团和/或选自fitc、花青染料、dylightfluors、atto染料、janeliafluor染料、alexafluro546、alexafluor488和alexafluor647的荧光染料进行末端修饰或内部修饰,这允许引发更多轮的放大。
24.根据权利要求22或权利要求23所述的试剂盒,其中将一对带荧光团标签的放大链添加到所述多轮式ishcr的最后一轮中以进行可视化。
25.根据权利要求22-24中任一项所述的试剂盒,其中所述放大链在内部位置被修饰,其更易于接近链霉亲和素并充当多轮式ishcr中每个连续的分支轮的锚点。
26.根据权利要求16-25中任一项所述的试剂盒,其中所述抗体是与分析物特异性的第一抗体发生反应的第二抗体,所述第二抗体是igg或纳米抗体,并且所述第一抗体是igg、纳米抗体或scfv。
27.根据权利要求16-26中任一项所述的试剂盒,其还包含用于吸收未组装的hcr放大链的氧化石墨烯(go)。
28.根据权利要求16-26中任一项所述的试剂盒,其还包含用于吸收未组装的hcr放大链并猝灭荧光的氧化石墨烯(go)。
29.权利要求1-15中任一项所述的免疫信号杂交链式反应或权利要求16-28中任一项所述的试剂盒在强有力放大免疫信号、在分析生物样品中的分析物、或在实验室、临床或诊断应用中的用途。
30.根据权利要求29所述的用途,其中所述应用选自western印迹和elisa。
31.根据权利要求29或权利要求30所述的用途,其中所述生物样品选自培养细胞、分散细胞、组织切片、体液和整个器官。
32.根据权利要求31所述的用途,其中所述临床或诊断应用选自生物学研究、法医检查、临床检验或诊断。