本发明涉及药物化学领域，一种氨基糖苷类化合物的制备方法，具体来说是一种3-n-乙基庆大霉素c1a的合成方法。
背景技术：
硫酸依替米星(etimicinsulfate)是我国科研人员自行研制的，拥有自主知识产权的高效、低毒、抗耐药菌的新一代半合成氨基糖苷类抗生素，是唯一获得国家一类新药证书的抗感染药物。
其制剂硫酸依替米星注射液适用于对其敏感的大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、沙雷氏杆菌属、枸橼酸杆菌、肠杆菌属、不动杆菌属、变形杆菌属、嗜血流感杆菌、绿脓杆菌和葡萄球菌等引起的各种感染。临床研究显示本品对以下感染有较好的疗效。呼吸道感染：如急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作、社区肺部感染等；肾脏和泌尿生殖系统感染：如急性肾盂肾炎、膀胱炎、慢性肾盂肾炎或慢性膀胱炎急性发作等；皮肤软组织和其它感染：如皮肤及软组织感染，外伤、创伤和手术产后的感染及其他敏感菌感染。
药品在临床使用中产生的不良反应除了与药品本身的药理活性有关外，与药品生产中产生的杂质也有一定的关系。所以将杂质单独分离研究对提高药品质量与临床应用安全性有很大的意义。
3-n-乙基庆大霉素c1a，结构式如下：
3-n-乙基庆大霉素c1a是硫酸依替米星原料药以及制剂中残留的主要杂质之一，由于与依替米星结构相似，性质相近，极难从生产中分离。国内外均没有3-n-乙基庆大霉素c1a的标准品出售。
目前有关于3-n-乙基庆大霉素c1a制备方法的专利(中国专利申请号：201710823129.6)，其主要步骤为：将乙二醇二甲醚、六甲基二硅胺烷、浓硫酸、2″,6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a投入到圆底烧瓶中回流，待反应物溶解，蒸出部分溶剂。加入二氯甲烷并置于10℃下搅拌，滴加乙醛。反应结束后加硼氢化钾、硼酸缓冲液搅拌反应，常压蒸出部分溶剂。加入10％～20％的氢氧化钠溶液，加热回流，降温至室温，浓缩反应体系。除盐，通过分离得到目标化合物3-n-乙基庆大霉素c1a。该制备方法存在无法区分1-c-氨基和3-c-氨基，致使制备过程中必定产生副反应，生成大量的依替米星及其他相关副产物，因难以分离而导致产率低或者纯度低等问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种3-n-乙基庆大霉素c1a的制备方法。该方法具有专属性好副反应少，易于纯化分离的优点。
本发明所述的制备方法，包括以下步骤：
步骤1)2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a和乙酸锌反应得锌络合物。
步骤2)其与二碳酸二叔丁酯反应得氨基被保护的锌络合物。
步骤3)再与草酸钠反应解开络合。
步骤4)加入乙酸酐反应后得到氨基被乙酰化的产物。
步骤5)加盐酸脱保护得到1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a。
步骤6)1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a加入乙二醇二甲醚、六甲基二硅氮烷和浓硫酸反应形成硅烷，再加入二氯甲烷和乙醛反应，随后加入硼氢化钾和硼酸缓冲液反应得到乙基化物，用氢氧化钠溶液水解硅烷再经纯化得到3-n-乙基庆大霉素c1a。
本发明所述方法的合成路线，如下所示：
优选的，本发明的合成方法，步骤如下：
步骤1)取2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a溶于按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量5～10倍比例体积的甲醇中得溶液1，溶液1中加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量0.5～2倍比例的无水乙酸锌，搅拌溶解搅拌1～3小时，得反应液1。
步骤2)反应液1冷却至0～10℃，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量1～2倍比例的三乙胺和按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a物质的量2～3倍比例的二碳酸二叔丁酯，搅拌2～5小时，得反应液2。
步骤3)反应液2浓缩去溶剂，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量10～15倍比例体积的水溶解，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量0.5～2倍比例的草酸钠，搅拌3～5小时，沉淀过滤，得滤液，滤液浓缩去溶剂，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量5～10倍比例的甲醇溶解，得溶液2。
步骤4)溶液2冷却至0～10℃，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量1～2倍比例的三乙胺和按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a质量0.2～1倍比例的乙酸酐，搅拌1～2小时，得反应液3。
步骤5)反应液3浓缩去溶剂，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量10～15倍比例体积的浓度为1～6摩尔每升盐酸，搅拌1～2小时，得反应液4，反应液4以氢氧化钠溶液调节ph8～9，浓缩去溶剂后，以硅胶层析柱分离，得到1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a。
步骤6)1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的8～12倍比例体积的乙二醇二甲醚、1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的4～6倍比例体积的六甲基二硅氮烷和按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a物质的量的0.05～0.5倍比例的浓硫酸，加热至90～100℃溶解回流2～4小时，得反应液5；反应液5浓缩蒸去大部分溶剂，以1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的8～12倍比例体积的二氯甲烷溶解，得溶液3；溶液3冷却至0～10℃，加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的0.3～0.5倍比例体积的40％乙醛，搅拌1～2小时，得反应液6；反应液6中加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量0.6～0.8倍比例的硼氢化钾，搅拌0.5～3小时，得反应液7；反应液7中加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量2～3倍比例体积的ph为9～11硼酸缓冲液，搅拌2～12小时，得反应液8；反应液8中加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量5～8倍比例体积的10％氢氧化钠溶液，浓缩蒸去二氯甲烷，再加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量10～15倍比例体积的20％氢氧化钠溶液，升温至100～120℃回流，搅拌24～36小时，得反应液9；反应液9以大孔树脂吸附，以无盐水除盐，以5％～40％乙醇梯度洗脱，收集纯度＞95％的洗脱液，真空浓缩后得到3-n-乙基庆大霉素c1a。
本发明的制备方法，相对于现有的工艺而言，具有以下有益效果：
本发明以乙酸锌作为络合剂络合1-c-氨基，以二碳酸二叔丁酯保护3-c-氨基，再以草酸钠沉淀出锌断开络合，以乙酸酐保护1-c-氨基，再以盐酸选择性脱去3-n-叔丁氧羰基保护基，获得1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a，使之后续乙醛参与反应的位点只有3-c-氨基。而申请号为201710823129.6的专利没有进行区分保护，而导致副反应严重。通过本发明的方法制备得到的3-n-乙基庆大霉素c1a有专属性好副反应少，产品易于分离纯化，产率高等特点。对于提高药品质量，提高临床用药的安全性具有重大的意义。
以下通过对比进一步说明本发明的有益效果:
具体实施方式：
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1
取2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a1.0g溶于甲醇10ml中得溶液1。溶液1中加入无水乙酸锌0.86g，搅拌溶解搅拌2小时，得反应液1。反应液1冷却至0～10℃，加入三乙胺2ml和2.0当量的二碳酸二叔丁酯0.82g，搅拌3小时，得反应液2。反应液2浓缩去溶剂，加入水15ml溶解，加入草酸钠0.79g，搅拌3小时，沉淀过滤，得滤液。滤液浓缩去溶剂，加入甲醇10ml溶解，得溶液2。溶液2冷却至0～10℃，加入三乙胺2ml和乙酸酐0.27ml，搅拌1小时，得反应液3。反应液3浓缩去溶剂，加入6摩尔每升盐酸12ml，搅拌2小时，得反应液4。反应液4以氢氧化钠溶液调节ph8～9，浓缩去溶剂后，以硅胶层析柱分离，得到1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a。1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a0.6g加入乙二醇二甲醚5ml、六甲基二硅氮烷2.4ml和浓硫酸0.01ml，加热至90℃溶解回流2小时，得反应液5。反应液5浓缩蒸去大部分溶剂，以二氯甲烷5.4ml溶解，得溶液3。溶液3冷却至0～10℃，加入40％乙醛0.24ml，搅拌1小时，得反应液6。反应液6中加入硼氢化钾0.36g，搅拌1小时，得反应液7。反应液7中加入ph为10的硼酸缓冲液1.44ml(由10.0g硼酸加去离子水30ml搅拌溶解，用氢氧化钠调节ph＝10制得)，搅拌5小时，得反应液8。反应液8中加入10％氢氧化钠溶液5ml，浓缩蒸去二氯甲烷，再加入20％氢氧化钠12ml溶液，升温至110℃回流，搅拌24小时，得反应液9。反应液9以大孔树脂吸附，以无盐水冲洗除盐，以5％～40％乙醇梯度洗脱，收集纯度＞95％的洗脱液，真空浓缩后得到3-n-乙基庆大霉素c1a，纯度为97％。
实施例2
取2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a3.0g溶于甲醇30ml中得溶液1。溶液1中加入无水乙酸锌2.58g，搅拌溶解搅拌2小时，得反应液1。反应液1冷却至0～10℃，加入三乙胺6ml和3.0当量的二碳酸二叔丁酯3.7g，搅拌3小时，得反应液2。反应液2浓缩去溶剂，加入水30ml溶解，加入草酸钠2.37g，搅拌3小时，沉淀过滤，得滤液。滤液浓缩去溶剂，加入甲醇30ml溶解，得溶液2。溶液2冷却至0～10℃，加入三乙胺6ml和乙酸酐1.6ml，搅拌0.5小时，得反应液3。反应液3浓缩去溶剂，加入6摩尔每升盐酸40ml，搅拌2小时，得反应液4。反应液4以氢氧化钠溶液调节ph8～9，浓缩去溶剂后，以硅胶层析柱分离，得到1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a。1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a1.6g加入乙二醇二甲醚15ml、六甲基二硅氮烷6.4ml和浓硫酸0.02ml，加热至95℃溶解回流3小时，得反应液5。反应液5浓缩蒸去大部分溶剂，以二氯甲烷15ml溶解，得溶液3。溶液3冷却至0～10℃，加入40％乙醛0.8ml，搅拌1小时，得反应液6。反应液6中加入硼氢化钾0.96g，搅拌1小时，得反应液7。反应液7中加入ph为10的硼酸缓冲液3.84ml(由10.0g硼酸加去离子水30ml搅拌溶解，用氢氧化钠调节ph＝10制得)，搅拌3小时，得反应液8。反应液8中加入10％氢氧化钠溶液8ml，浓缩蒸去二氯甲烷，再加入20％氢氧化钠20ml溶液，升温至115℃回流，搅拌30小时，得反应液9。反应液9以大孔树脂吸附，以无盐水冲洗除盐，以5％～40％乙醇梯度洗脱，收集纯度＞95％的洗脱液，真空浓缩后得到3-n-乙基庆大霉素c1a，纯度为98％。
实施例3
取2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a5.3g溶于甲醇70ml中得溶液1。溶液1中加入无水乙酸锌4.55g，搅拌溶解搅拌3小时，得反应液1。反应液1冷却至0～10℃，加入三乙胺10.6ml和3.0当量的二碳酸二叔丁酯6.54g，搅拌2小时，得反应液2。反应液2浓缩去溶剂，加入水100ml溶解，加入草酸钠4.2g，搅拌3小时，沉淀过滤，得滤液。滤液浓缩去溶剂，加入甲醇70ml溶解，得溶液2。溶液2冷却至0～10℃，加入三乙胺12ml和乙酸酐2.8ml，搅拌1小时，得反应液3。反应液3浓缩去溶剂，加入3摩尔每升盐酸70ml，搅拌3小时，得反应液4。反应液4以氢氧化钠溶液调节ph8～9，浓缩去溶剂后，以硅胶层析柱分离，得到1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a。1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a2g加入乙二醇二甲醚16ml、六甲基二硅氮烷8ml和浓硫酸0.02ml，加热至90℃溶解回流3小时，得反应液5。反应液5浓缩蒸去大部分溶剂，以二氯甲烷18ml溶解，得溶液3。溶液3冷却至0～10℃，加入40％乙醛0.8ml，搅拌1小时，得反应液6。反应液6中加入硼氢化钾1.2g，搅拌1.5小时，得反应液7。反应液7中加入ph为10的硼酸缓冲液4.8ml(由10.0g硼酸加去离子水30ml搅拌溶解，用氢氧化钠调节ph＝10制得)，搅拌5小时，得反应液8。反应液8中加入10％氢氧化钠溶液10ml，浓缩蒸去二氯甲烷，再加入20％氢氧化钠25ml溶液，升温至115℃回流，搅拌36小时，得反应液9。反应液9以大孔树脂吸附，以无盐水冲洗除盐，以5％～40％乙醇梯度洗脱，收集纯度＞95％的洗脱液，真空浓缩后得到3-n-乙基庆大霉素c1a，纯度为98％。
实施例4
一种3-n-乙基庆大霉素c1a的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、取2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a溶于一定比例的甲醇中得溶液1。
步骤2、溶液1中加入一定比例的无水乙酸锌，搅拌溶解搅拌一段时间，得反应液1。
步骤3、反应液1冷却至0～10℃，加入一定比例的三乙胺和二碳酸二叔丁酯，搅拌一段时间，得反应液2。
步骤4、反应液2浓缩去溶剂，加入一定比例的水溶解，加入一定比例的草酸钠，搅拌一段时间，沉淀过滤，得滤液。
步骤5、滤液浓缩去溶剂，加入一定比例的甲醇溶解，得溶液2。
步骤6、溶液2冷却至0～10℃，加入一定比例的三乙胺和乙酸酐，搅拌一段时间，得反应液3。
步骤7、反应液3浓缩去溶剂，加入一定比例的盐酸，搅拌一段时间，得反应液4。
步骤8、反应液4以氢氧化钠溶液调节ph8～9，浓缩去溶剂后，以硅胶层析柱分离，得到1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a。
步骤9、1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a加入一定比例的乙二醇二甲醚、六甲基二硅氮烷和浓硫酸，加热溶解回流一段时间，得反应液5。
步骤10、反应液5浓缩蒸去大部分溶剂，以一定比例二氯甲烷溶解，得溶液3。
步骤11、溶液3冷却至0～10℃，加入一定比例的40％乙醛，搅拌一段时间，得反应液6。
步骤12、反应液6中加入一定比例的硼氢化钾，搅拌一段时间，得反应液7。
步骤13、反应液7中加入一定比例的硼酸缓冲液，搅拌一段时间，得反应液8。
步骤14、反应液8中加入一定比例的10％氢氧化钠溶液，浓缩蒸去二氯甲烷，再加入一定比例的20％氢氧化钠溶液，升温至回流，搅拌一段时间，得反应液9。
步骤15、反应液9经大孔树脂吸附除盐分离，得到目标产物3-n-乙基庆大霉素c1a。
其中，步骤1中溶剂甲醇的加入体积比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量的5～10倍。
其中，步骤2中无水乙酸锌的加入比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a物质的量的0.5～2倍当量，搅拌时间为1～3小时。
其中，步骤3中三乙胺的加入比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量的1～2倍，二碳酸二叔丁酯的加入比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a物质的量的2～3倍当量，搅拌时间为2～5小时。
其中，步骤4中水的加入比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量的10～15倍，草酸钠的加入比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量的0.5～2倍当量，搅拌时间为3～5小时。
其中，步骤5中溶剂甲醇的加入体积比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量的5～10倍。
其中，步骤6中三乙胺的加入比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量的1～2倍，乙酸酐的加入比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a质量的0.2～1倍当量，搅拌时间为1～2小时。
其中，步骤7中盐酸浓度为1～6摩尔每升，加入体积比例为2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量的10～15倍，搅拌时间为1～2小时。
其中，步骤9中乙二醇二甲醚的加入体积比例为1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的8～12倍，六甲基二硅氮烷的加入体积比例为1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的4～6倍，浓硫酸的加入比例为1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a物质的量的0.05～0.5倍，回流温度为90～100℃，回流时间为2～4小时。
其中，步骤10中二氯甲烷的加入体积比例为1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的8～12倍。
其中，步骤11中40％乙醛的加入体积比例为1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的0.3～0.5倍，搅拌时间为1～2小时。
其中，步骤12中硼氢化钾的加入比例为1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量0.6～0.8倍，搅拌时间为0.5～3小时。
其中，步骤13中硼酸缓冲液的ph为9～11，加入比例为1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量2～3倍，搅拌时间为2～12小时。
其中，步骤14中10％氢氧化钠溶液的加入体积比例为1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的5～8倍，20％氢氧化钠溶液的加入体积比例为1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的10～15倍，回流温度为100～120℃，回流时间为24～36小时。
其中，步骤15中分离是以大孔树脂吸附，以无盐水除盐，以5％～40％乙醇梯度洗脱，收集纯度＞95％的洗脱液，真空浓缩后得到3-n-乙基庆大霉素c1a。
实施例5
步骤1、取2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a溶于按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量5～10倍比例体积的甲醇中得溶液1。
步骤2、溶液1中加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量0.5～2倍比例的无水乙酸锌，搅拌溶解搅拌1～3小时，得反应液1。
步骤3、反应液1冷却至0～10℃，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量1～2倍比例的三乙胺和按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a物质的量2～3倍比例的二碳酸二叔丁酯，搅拌2～5小时，得反应液2。
步骤4、反应液2浓缩去溶剂，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量10～15倍比例体积的水溶解，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量0.5～2倍比例的草酸钠，搅拌3～5小时，沉淀过滤，得滤液。
步骤5、滤液浓缩去溶剂，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量5～10倍比例的甲醇溶解，得溶液2。
步骤6、溶液2冷却至0～10℃，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量1～2倍比例的三乙胺和按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a质量0.2～1倍比例的乙酸酐，搅拌1～2小时，得反应液3。
步骤7、反应液3浓缩去溶剂，加入按照2″，6″-n,n-二乙酰基庆大霉素c1a重量10～15倍比例体积的浓度为1～6摩尔每升盐酸，搅拌1～2小时，得反应液4。
步骤8、反应液4以氢氧化钠溶液调节ph8～9，浓缩去溶剂后，以硅胶层析柱分离，得到1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a。
步骤9、1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的8～12倍比例体积的乙二醇二甲醚、1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的4～6倍比例体积的六甲基二硅氮烷和按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a物质的量的0.05～0.5倍比例的浓硫酸，加热至90～100℃溶解回流2～4小时，得反应液5。
步骤10、反应液5浓缩蒸去大部分溶剂，以1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的8～12倍比例体积的二氯甲烷溶解，得溶液3。
步骤11、溶液3冷却至0～10℃，加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量的0.3～0.5倍比例体积的40％乙醛，搅拌1～2小时，得反应液6。
步骤12、反应液6中加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量0.6～0.8倍比例的硼氢化钾，搅拌0.5～3小时，得反应液7。
步骤13、反应液7中加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量2～3倍比例体积的ph为9～11硼酸缓冲液，搅拌2～12小时，得反应液8。
步骤14、反应液8中加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量5～8倍比例体积的10％氢氧化钠溶液，浓缩蒸去二氯甲烷，再加入按照1，2″，6″-n，n，n-三乙酰基庆大霉素c1a重量10～15倍比例体积的20％氢氧化钠溶液，升温至100～120℃回流，搅拌24～36小时，得反应液9。
步骤15、反应液9以大孔树脂吸附，以无盐水除盐，以5％～40％乙醇梯度洗脱，收集纯度＞95％的洗脱液，真空浓缩后得到3-n-乙基庆大霉素c1a。