发明领域
本发明涉及抑制a2a和a2b腺苷受体中的至少一种的新型化合物，及其药学上可接受的盐，以及包含此类化合物和盐的组合物，此类化合物的合成方法，以及它们在治疗至少部分由腺苷a2a受体和/或腺苷a2b受体介导的多种疾病、病况或病症中的用途。此类疾病、病况和病症包括但不限于癌症和免疫相关病症。本发明进一步涉及组合疗法，包括但不限于包含本发明的化合物和pd-1拮抗剂的组合。
发明背景
腺苷是一种嘌呤核苷化合物，由腺嘌呤和呋喃核糖(一种核糖糖分子)构成。腺苷天然存在于哺乳动物中，并在各种生物化学过程中起重要作用，包括能量转移(如三磷酸腺苷和单磷酸腺苷)和信号转导(如环状单磷酸腺苷)。腺苷在与血管舒张(包括心脏血管舒张)相关的过程中也起诱发作用。它也充当神经调质(例如，被认为参与促进睡眠)。腺苷除了参与这些生物化学过程外，其还用作治疗性抗心律不齐药以治疗室上性心动过速和其他适应症。
腺苷受体是一类以腺苷为内源性配体的嘌呤能g蛋白偶联受体。人类中的四种类型的腺苷受体称为a1、a2a、a2b和a3。已经提出调节a1以用于管理和治疗神经病症、哮喘以及心力衰竭和肾衰竭等。已经提出调节a3以用于管理和治疗哮喘和慢性阻塞性肺病、青光眼、癌症、中风和其他适应症。a2a和a2b受体的调节也被认为具有潜在的治疗用途。
在中枢神经系统中，a2a拮抗剂被认为表现出抗抑郁特性并刺激认知功能。a2a受体以高密度存在于基底神经节中，已知这在运动控制中是重要的。因此，a2a受体拮抗剂被认为可用于治疗抑郁症，并改善由于神经退行性疾病、诸如帕金森氏病、老年性痴呆(如阿尔茨海默氏病中)和各种器官源精神病引起的运动受损。
在免疫系统中，通过在各种免疫细胞和内皮细胞上表达的a2a受体和a2b受体进行的腺苷信号传导已被确定为在炎性应答过程中在保护组织中具有重要作用。以这种方式(和其他方式)，肿瘤已经显示出通过抑制免疫功能和促进耐受而逃避宿主应答。(参见例如，fishman,p.等人,handb.exp.pharmacol.(2009)193:399-441)。此外，已经发现a2a和a2b细胞表面腺苷受体在各种肿瘤细胞中上调。因此，a2a和/或a2b腺苷受体的拮抗剂代表了一类新的有希望的肿瘤治疗剂。例如，a2a腺苷受体的活化导致抑制多种细胞类型对肿瘤的免疫应答，包括但不限于：抑制自然杀伤细胞的细胞毒性，抑制肿瘤特异性cd4+/cd8+活性，促进lag-3和foxp3+调节性t细胞的产生，并介导调节性t细胞的抑制。腺苷a2a受体抑制还已经显示出通过增强抗肿瘤t细胞应答来增加pd-1抑制剂的效力。由于已将这些免疫抑制途径中的每一种鉴定为肿瘤逃避宿主应答的机制，因此包含单独或与一种或多种经设计以减轻免疫抑制的其他治疗剂一起的a2a和/或a2b受体拮抗剂的癌症免疫治疗方案可能导致肿瘤免疫疗法增强。(参见例如p.beavis等人,cancerimmunol.res.doi:10.1158/2326-6066.cir-14-0211,2015年2月11日;willingham,sb.等人,cancerimmunol.res.,6(10),1136-49；和leonerd等人,cancerimmunol.immunother.,aug2018,vol.67,第8期,1271-1284)。
当用化学疗法和放射疗法治疗时，癌细胞将atp释放到肿瘤微环境中，随后将其转化为腺苷。(参见martins,i.等人,cellcycle,vol.8,第22期,pp.3723-3728.)。然后，腺苷可以结合a2a受体，并通过诸如上述那些的机制钝化抗肿瘤免疫应答。已经提出在化学疗法或放射疗法过程中施用a2a受体拮抗剂导致肿瘤特异性t细胞的扩增，而同时防止诱导肿瘤特异性调节性t细胞。(young,a.等人,cancerdiscovery(2014)4:879-888)。
考虑到它们的不同作用机理，a2a受体拮抗剂与抗肿瘤疫苗的组合被认为至少提供了累加的治疗作用。此外，a2a受体拮抗剂可用于与检查点阻断剂组合。例如，pd-1抑制剂和腺苷a2a受体抑制剂的组合被认为减轻了肿瘤抑制肿瘤特异性效应t细胞活性的能力。(参见例如willingham,sb.等人,cancerimmunol.res.;6(10),1136-49;leone,rd.等人,cancerimmunol.immunother.,aug2018,vol.67,第8期,pp.1271-1284;fishman,p.等人,handb.exp.pharmacol.(2009)193:399-441;和sitkovsky,mv.等人,(2014)cancerimmunol.res2:598-605.)。
a2b受体是一种存在于多种细胞类型中的g蛋白偶联受体。与其他腺苷受体亚型(包括a2a)相比，a2b受体需要更高浓度的腺苷进行活化。(fredholm,bb.等人,biochem.pharmacol.(2001)61:443-448)。例如在其中观察到缺氧的肿瘤中已经看到活化a2b的条件。因此，a2b受体可能在与大量腺苷释放相关的病理生理状况中起重要作用。尽管与a2b受体介导的抑制有关的途径尚未得到很好的理解，但认为抑制a2b受体(单独或与a2a受体一起)可能阻断肿瘤微环境中腺苷的促肿瘤发生功能，包括抑制t细胞功能和血管生成，并且因此扩展了通过抑制这些受体可治疗的癌症的类型。
a2b受体主要在骨髓细胞上表达。a2b受体在骨髓来源的抑制细胞(mdscs)上的接合导致其在体外扩增(ryzhov,s.等人,j.immunol.2011,187:6120–6129)。mdscs抑制t细胞增殖和抗肿瘤免疫应答。a2b受体的选择性抑制剂和a2b受体敲除已经显示通过增加肿瘤微环境中的mdscs来抑制小鼠模型中的肿瘤生长。(iannone,r.等人,neoplasiavol.13no.12,(2013)pp.1400-1409;ryzhov,s.等人,neoplasia(2008)10:987–995)。因此，a2b受体抑制已成为治疗涉及骨髓细胞的多种癌症的有吸引力的生物学靶标。通过分析可公开获得的tcga数据库，可以容易获得表达a2b受体的癌症的实例。此类癌症包括肺癌、结直肠癌、头颈癌和宫颈癌等，并且在下面进一步详细讨论。
血管生成在肿瘤生长中起重要作用。血管生成过程受到多种因素的高度调节，并在与缺氧有关的特定情况下由腺苷触发。a2b受体在人微血管内皮细胞中表达，其中a2b受体在调节血管生成因子、诸如血管内皮生长因子(vegf)的表达中起重要作用。在某些肿瘤类型中，已观察到缺氧引起a2b受体的上调，这表明抑制a2b受体可能通过限制向肿瘤细胞的氧供应来限制肿瘤生长。此外，涉及腺苷酸环化酶活化的实验表明，a2b受体是某些肿瘤细胞中唯一的腺苷受体亚型，这表明a2b受体拮抗剂可能表现出对特定肿瘤类型的作用。(参见例如，feoktistov,i.等人,(2003)circ.res.92:485-492;和p.fishman,p.等人,handb.exp.pharmacol.(2009)193:399-441)。
考虑到它们有希望的和变化的治疗潜力，本领域中仍然需要单独或与其他治疗剂组合使用的a2a和/或a2b腺苷受体的有效和选择性抑制剂。本发明解决了这个和其他需求。
发明概述
在一个方面，本发明提供了惊人且有利地发现为腺苷a2a受体和/或腺苷a2b受体的抑制剂的化合物(下文称为本发明的化合物)。本发明的化合物具有根据式(i)的结构：
或其药学上可接受的盐，其中环a、r1、r2和r4如下所定义。
在另一个方面，本发明提供了药物组合物，其在药学上可接受的载体或稀释剂中包含至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐。根据本发明的此类组合物可以任选地进一步包含一种或多种如本文所述的额外治疗剂。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗或预防有此需要的受试者(例如，动物或人)中至少部分由腺苷a2a受体和/或腺苷a2b受体介导的疾病、病况或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用单独或与一种或多种额外治疗剂组合的治疗有效量的至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐。下面更全面地描述本发明的这些和其他方面以及实施方案。
发明详述
对于以下实施方案中的每个，在该实施方案中未明确定义的任何变量如式(i)中所定义。在本文所述的每个实施方案中，每个变量独立于其他选择，除非另有说明。
在一个实施方案中，本发明的化合物具有结构式(i)：
或其药学上可接受的盐，其中：
r1选自h、f、cl、br、cn、oh、(c1-c6)烷基、o(c1-c6)烷基和o(c1-c6)卤代烷基；
r2选自h、f、cl、br、cn、oh、(c1-c6)烷基、(c1-c6)卤代烷基、o(c1-c6)烷基、o(c1-c6)卤代烷基、(c3-c4)环烷基、s(o)2(c1-c6)烷基、s(o)2(c1-c6)卤代烷基和包含1或2个环氮原子的4-5元单环杂环烷基；
r4选自h、f、cl、br、(c1-c6)烷基和(c1-c6)卤代烷基；
条件是r1、r2或r4中的至少一个不是h；且
环a是选自以下的部分：
r3选自：吡唑基、吡啶基、吡嗪基、苯基、噁二唑基、噻唑基、三唑基、嘧啶基、哒嗪基和咪唑基，
其中所述吡啶基、所述吡嗪基和所述苯基被1、2、3或4个r3a基团取代，
其中所述吡唑基、哒嗪基、咪唑基和所述嘧啶基被1、2或3个r3a基团取代，
其中所述三唑基和所述噻唑基被1或2个r3a基团取代，且
其中所述噁二唑基被1个r3a基团取代；
每个r3a独立地选自h、f、cl、(c1-c6)烷基、(c1-c6)烷基-oh、(c1-c6)卤代烷基、(c1-c6)烷基nh2、o(c1-c6)烷基、o(c1-c6)卤代烷基、c(o)(c1-c3)烷基、(c1-c4)烷基c(o)(c1-c3)烷基、(c1-c4)烷基o(c1-c3)烷基、(c1-c4)烷基ch(oh)(c1-c3)烷基、(c1-c4)烷基s(o)2(c1-c3)烷基、(c1-c6)烷基c(o)nh(c1-c6)烷基、(c1-c6)烷基c(o)oh、(c1-c6)烷基c(o)nh(c3-c6)环烷基、
其中所述(c3-c7)环烷基和所述4-7元单环杂环烷基各自未被取代或被1、2或3个独立地选自f、cl、oh、氧代、(c1-c6)烷基、o(c1-c6)烷基、(c1-c6)卤代烷基和o(c1-c6)卤代烷基的基团取代；
n是0、1或2；
每个r3aa独立地选自h、(c1-c4)烷基、o(c1-c4)烷基、(c1-c4)卤代烷基、o(c1-c4)卤代烷基和(c3-c4)环烷基；
ra1选自h和(c1-c4)烷基；
每个ra2独立地选自h、f和(c1-c4)烷基；
ra3选自h、f和(c1-c4)烷基；
ra4选自h和oh；且
ra5选自h、f和(c1-c4)烷基。
在另一个实施方案中，本发明的化合物具有结构式(i.1)：
或其药学上可接受的盐，其中环a和r1如式(i)中所定义。
在前面紧挨的式(i.1)的实施方案的一个替代方案中：
r1选自f、cl、br、cn、oh、ch3、ch2ch3、och3och2ch3和o(c1-c6)卤代烷基。
在前面紧挨的式(i.1)的实施方案的一个替代方案中：
r1选自f、cl、br、cn、oh、ch3、ch2ch3、och3、och2ch3和ochf2。
在前面紧挨的式(i.1)的实施方案的另一个替代方案中：
r1选自f、cl、oh、ch3、ch2ch3、och3和ochf2。
在前面紧挨的式(i.1)的实施方案的另一个替代方案中：
r1是och3。
在前面紧挨的式(i.1)的实施方案的另一个替代方案中：
r1是f。
在另一个实施方案中，本发明的化合物具有结构式(i.2)：
或其药学上可接受的盐，其中环a和r2如式(i)中所定义。
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的一个替代方案中：
r2选自f、cl、br、cn、oh、ch3、chf2、cf3、ch2ch3、och3、och2ch3、ochf、s(o)2ch3、
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2是och3。
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2是f。
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2是cl。
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2是br。
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2是ch3。
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2是ch2ch3。
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2选自chf2和cf3。
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2是
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2是
在前面紧挨的式(i.2)的实施方案的另一个替代方案中：
r2是
在另一个实施方案中，本发明的化合物具有结构式(i.3)：
或其药学上可接受的盐，其中环a和r4如式(i)中所定义。
在前面紧挨的式(i.3)的实施方案的一个替代方案中：
r4选自f、cl、br、(c1-c6)烷基和(c1-c6)卤代烷基。
在前面紧挨的式(i.3)的实施方案的另一个替代方案中：
r4是f。
在前面紧挨的式(i.3)的实施方案的另一个替代方案中：
r4是cl。
在前面紧挨的式(i.3)的实施方案的另一个替代方案中：
r4是cf3。
在另一个实施方案中，本发明的化合物具有结构式(i.4)：
或其药学上可接受的盐，其中环a、r1和r2如式(i)中所定义。
在前面紧挨的实施方案的一个替代方案中，在式(i.4)中：
r1选自f、cl、br、cn、oh、ch3、och3、cf3和ochf2；且
r2选自f、cl、br、cn、oh、ch3、och3、cf3和ochf2。
在前面紧挨的实施方案的另一个替代方案中，在式(i.4)中：
r1是f；且
r2是och3。
在前面紧挨的实施方案的另一个替代方案中，在式(i.4)中：
r1是ch3；且
r2是ch3。
在前面紧挨的实施方案的另一个替代方案中，在式(i.4)中：
r1是och3；且
r2是cl。
在前面紧挨的实施方案的另一个替代方案中，在式(i.4)中：
r1是f；且
r2是f。
在另一个实施方案中，本发明的化合物具有结构式(i.5)：
或其药学上可接受的盐，其中环a、r1和r4如式(i)中所定义。
在前面紧挨的实施方案的一个替代方案中，在式(i.5)中：
r1选自f、cl、br、cn、oh、ch3、och3、cf3和ochf2；且
r4选自f、cl、br、cn、oh、ch3、och3和cf3。
在前面紧挨的实施方案的另一个替代方案中，在式(i.5)中：
r1是f；且
r4是och3。
在前面紧挨的实施方案的另一个替代方案中，在式(i.5)中：
r1是ch3；且
r4是ch3。
在前面紧挨的实施方案的另一个替代方案中，在式(i.5)中：
r1是och3；且
r4是cl。
在前面紧挨的实施方案的另一个替代方案中，在式(i.5)中：
r1是f；且
r4是f。
在前面紧挨的实施方案的另一个替代方案中，在式(i.5)中：
r1是cl；且
r4是cl。
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
其中r3、ra1、每个ra2、ra3和ra5如式(i)中所定义；且其中r1、r2和r4如式(i)中所定义，或其中r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或其中r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或其中r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或其中r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或其中r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
每个r3aa、ra1、每个ra2、ra3和ra5如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
r3a是选自以下的部分：
每个r3aa、ra1、每个ra2、ra3和ra5如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在前述实施方案中的任一个的一个替代方案中：
ra1选自h、ch3和ch2ch3；
每个ra2独立地选自h、f、ch3和ch2ch3；
ra3选自h和f；且
ra5是h。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
ra1选自h和ch3；
每个ra2独立地选自h和ch3；
ra3是h；且
ra5是h。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
ra1是h；
每个ra2是h；
ra3是h；且
ra5是h。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
r3是选自以下的部分：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
每个r3aa、ra1、ra2、ra3和ra4如式(i)中所定义；
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
r3a是选自以下的部分：
每个r3aa、ra1、ra2、ra3和ra4如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在前述实施方案中的任一个的一个替代方案中：
ra1选自h、ch3和ch2ch3；
ra2选自h、f、ch3和ch2ch3；
ra3选自h和f；且
ra4选自h、ch3和oh。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
ra1是h；
ra2是h；
ra3是h；且
ra4选自h、ch3和oh。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
r3是选自以下的部分：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
r3a是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
r3是选自以下的部分：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
r3a是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
r3是选自以下的部分：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；
ra3选自h、f和(c1-c4)烷基；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
r3a是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；
ra3选自h、f和ch3；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
r3是选自以下的部分：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是：
r3是选自以下的部分：
r3a是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
r3是选自以下的部分：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是选自以下的部分：
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是选自以下的部分：
r3是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在另一个实施方案中，在式(i)、(i.1)、(i.2)、(i,3)、(i.4)和(i.5)各自中：
环a是选自以下的部分：
r3是选自以下的部分：
r3a是选自以下的部分：
每个r3aa如式(i)中所定义；且
r1、r2和r4如式(i)中所定义，或者，可替代地，r2和r4不存在且r1如式(i.1)中所定义或如式(i.1)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r4不存在且r2如式(i.2)中所定义或如式(i.2)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r1和r2不存在且r4如式(i.3)中所定义或如式(i.3)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r4不存在且r1和r2如式(i.4)中所定义或如式(i.4)的替代实施方案中的任一个中所定义，或者，可替代地，r2不存在且r1和r4如式(i.5)中所定义或如式(i.5)的替代实施方案中的任一个中所定义。
在前述实施方案中的任一个的另一个替代方案中：
r3是选自以下的部分：
在另一个实施方案中，本发明的化合物包括在本文中鉴定为下表中的实施例的那些化合物及其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了药物组合物，其包含药学上可接受的载体和本发明的化合物或其药学上可接受的盐。根据本发明的此类组合物可任选地进一步包含一种或多种如本文所述的额外治疗剂。
在另一个方面，本发明提供了用于制备药物或组合物的方法，所述药物或组合物可用于治疗至少部分由腺苷a2a受体和/或腺苷a2b受体介导的疾病、病况或病症，所述方法包括将本发明的化合物与一种或多种药学上可接受的载体组合。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗或预防有此需要的受试者(例如动物或人)中的至少部分由腺苷a2a受体和/或腺苷a2b受体介导的疾病、病况或病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用单独或与一种或多种额外治疗剂组合的治疗有效量的至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐。本文描述了此类疾病、病况和病症的具体非限制性实例。
肿瘤学
在一些实施方案中，所述疾病、病况或病症是癌症。本领域普通技术人员认为pd-1拮抗剂和/或a2a和/或a2b抑制剂对其有用的任何癌症均被预期为可通过该实施方案(作为单一疗法或与下面讨论的其他治疗剂组合)治疗的癌症。表达高水平的a2a受体或a2b受体的癌症在预期可通过本发明的化合物治疗的那些癌症中。本领域普通技术人员可以参照癌症基因组图谱(tcga)数据库来识别表达高水平的a2a和/或a2b受体的癌症的实例。表达高水平的a2a受体的癌症的非限制性实例包括肾癌、乳腺癌、肺癌和肝癌。表达高水平的a2b受体的癌症的非限制性实例包括肺癌、结直肠癌、头颈癌和宫颈癌。
因此，一个实施方案提供了治疗癌症的方法，其包括向需要此类治疗的受试者施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症是表达高水平的a2a受体的癌症。一个相关的实施方案提供了治疗癌症的方法，其包括向需要此类治疗的受试者施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自肾(kidney或renal)癌、乳腺癌、肺癌和肝癌。
另一个实施方案提供了治疗癌症的方法，其包括向需要此类治疗的受试者施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症是表达高水平的a2b受体的癌症。一个相关的实施方案提供了治疗癌症的方法，其包括向需要此类治疗的受试者施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述癌症选自肺癌、结直肠癌、头颈癌和宫颈癌。
可通过施用本发明的化合物(单独或与一种或多种下述额外药剂组合)治疗的癌症的额外非限制性实例包括前列腺癌(包括但不限于转移性去势抵抗性前列腺癌)、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、宫颈癌、胃癌、子宫内膜癌、脑癌、肝癌、膀胱癌、卵巢癌、睾丸癌、头癌、颈癌、皮肤癌(包括黑素瘤和基底癌)、间皮内层癌、白血细胞癌(包括淋巴瘤和白血病)、食道癌、乳腺癌、肌肉癌、结缔组织癌、肺癌(包括但不限于小细胞肺癌、非小细胞肺癌和肺腺癌)、肾上腺癌、甲状腺癌、肾癌或骨癌。可用本发明的化合物治疗的额外癌症包括成胶质细胞瘤、间皮瘤、肾细胞癌、胃癌、肉瘤、绒毛膜癌、皮肤基底细胞癌和睾丸精原细胞瘤和卡波西肉瘤。
cns和神经病症
在其他实施方案中，所述疾病、病况或病症是中枢神经系统或神经病症。此类疾病、病况或病症的非限制性实例包括运动障碍，诸如震颤、运动徐缓、步态障碍、张力障碍、运动障碍、迟发性运动障碍、其他锥体外系综合征、帕金森氏病和与帕金森氏病相关的障碍。本发明的化合物还具有或被认为具有用于预防或降低引起或恶化此类运动障碍的药物的作用的潜力。
感染
在其他实施方案中，所述疾病、病况或病症是感染性病症。此类疾病、病况或病症的非限制性实例包括急性或慢性病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。在一个实施方案中，病毒感染是人类免疫缺陷病毒。在另一个实施方案中，病毒感染是巨细胞病毒。
免疫疾病
在其他实施方案中，所述疾病、病况或病症是免疫相关疾病、病况或病症。免疫相关疾病、病况或病症的非限制性实例包括多发性硬化和细菌感染。(参见例如safarzadeh,e.等人,inflammres201665(7):511-20;和antonioli,l.等人,immunolletts0165-2478(18)30172-x2018)。
其他适应症
具有通过抑制a2a和/或a2b腺苷受体而全部或部分治疗或预防的潜力的其他疾病、病况和病症也是本发明的化合物及其盐的候选适应症。本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以有用的其他疾病、病况或病症的非限制性实例包括治疗对肿瘤抗原的超敏反应和改善与骨髓移植或外周血干细胞移植相关的一种或多种并发症。因此，在另一个实施方案中，本发明提供了通过向所述受试者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐来治疗接受骨髓移植或外周血干细胞移植的受试者的方法，所述治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐足以增加对肿瘤抗原的迟发型超敏反应、延迟移植后恶性肿瘤的复发时间、增加移植后无复发存活时间和/或增加长期移植后存活。
组合疗法
在另一个方面，本发明提供了使用本发明的化合物或其药学上可接受的盐(或包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物)与一种或多种额外药剂的组合的方法。此类额外药剂可具有一些腺苷a2a和/或a2b受体活性，或者可替代地，它们可通过不同的作用机制起作用。本发明的化合物可以与一种或多种其他药物组合用于治疗、预防、抑制或改善本发明的化合物或本文所述的其他药物可能对其有用的疾病或病况，其中药物在一起的组合比单独的任一种药物更安全或更有效。组合疗法可以具有累加或协同效应。此类其他药物可以以因此通常使用的量与本发明的化合物或其药学上可接受的盐同期或依次施用。当本发明的化合物与一种或多种其他药物同期使用时，在具体实施方案中，药物组合物可以含有单独剂量或单位剂型的此类其他药物和本发明的化合物或其药学上可接受的盐。然而，组合疗法也可包括其中本发明的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种其他药物以不同或重叠的时间表依次施用的疗法。还预期当与一种或多种其他活性成分组合使用时，本发明的化合物和其他活性成分可以以比各自单独使用时更低的剂量使用。因此，包含本发明的化合物的药物组合物包括除本发明的化合物或其药学上可接受的盐外还含有一种或多种其他活性成分的那些药物组合物。
本发明的化合物与第二活性成分的重量比可以改变，并且将取决于每种成分的有效剂量。通常，将使用各自的有效剂量。因此，例如，当本发明的化合物与另一药剂组合使用时，本发明的化合物与其他药剂的重量比通常可以在约1000：1至约1：1000的范围内，在具体实施方案中，在约200：1至约1：200的范围内。本发明的化合物和其他活性成分的组合通常也将在上述范围内，但是在每种情况下，通常应使用有效剂量的每种活性成分。
考虑到腺苷的免疫抑制作用，根据本发明的a2a受体拮抗剂、a2b受体拮抗剂和/或a2a/a2b受体双重拮抗剂的施用可以增强免疫疗法、诸如pd-1拮抗剂的效力。因此，在一个实施方案中，额外的治疗剂包含抗pd-1抗体。在另一个实施方案中，额外的治疗剂是抗pd-l1抗体。
如上所述，pd-1被认为在免疫调节和维持外周耐受性中具有重要作用。pd-1在天然t细胞、b细胞和nkt细胞上适度表达，并通过淋巴细胞、单核细胞和骨髓细胞上的t细胞和b细胞受体信号传导上调(sharpe等人,natureimmunology(2007);8:239-245)。
pd-1的两种已知配体pd-l1(b7-h1)和pd-l2(b7-dc)在各种组织中产生的人类癌症中表达。在例如卵巢癌、肾癌、结直肠癌、胰腺癌和肝癌的大样品组中和在黑素瘤中，显示pd-l1表达与预后不良和总体存活降低相关，而与随后的治疗无关。(dong等人,natmed.8(8):793-800(2002);yang等人,investophthamolvissci.49:2518-2525(2008);ghebeh等人,neoplasia8:190-198(2006);hamanishi等人,proc.natl.acad.sci.usa104:3360-3365(2007);thompson等人,cancer5:206-211(2006);nomi等人,clin.cancerresearch13:2151-2157(2007);ohigashi等人,clin.cancerresearch11:2947-2953;inman等人,cancer109:1499-1505(2007);shimauchi等人,int.j.cancer121:2585-2590(2007);gao等人,clin.cancerresearch15:971-979(2009);nakanishij.,cancerimmunolimmunother.56:1173-1182(2007);和hino等人,cancer00:1-9(2010))。
类似地，发现在肿瘤浸润淋巴细胞上的pd-1表达标记乳腺癌和黑素瘤中的功能失调的t细胞(ghebeh等人,bmccancer.20088:5714-15(2008);和ahmadzadeh等人,blood114:1537-1544(2009))，并且与肾癌中的预后不良相关(thompson等人,clinicalcancerresearch15:1757-1761(2007))。因此，已经提出表达pd-l1的肿瘤细胞与表达pd-1的t细胞相互作用以减弱t细胞活化并逃避免疫监视，由此导致针对肿瘤的免疫应答受损。
靶向pd-1轴的免疫检查点疗法已导致多种人类癌症的临床应答的突破性改善(brahmer等人,nengljmed2012,366:2455-65;garon等人,nengljmed2015,372:2018-28;hamid等人,nengljmed2013,369:134-44;robert等人,lancet2014,384:1109-17;robert等人,nengljmed2015,372:2521-32;robert等人,nengljmed2015,372:320-30;topalian等人,nengljmed2012,366:2443-54;topalian等人,jclinoncol2014,32:1020-30;和wolchok等人,nengljmed2013,369:122-33)。
“pd-1拮抗剂”是指阻断癌细胞上表达的pd-l1与免疫细胞(t细胞、b细胞或nkt细胞)上表达的pd-1的结合并且还优选阻断癌细胞上表达的pd-l2与免疫细胞表达的pd-1的结合的任何化学化合物或生物分子。pd-1及其配体的替代名称或同义词包括：pd-1的pdcd1、pd1、cd279和sleb2；pd-l1的pdcd1l1、pdl1、b7h1、b7-4、cd274和b7-h；和pd-l2的pdcd1l2、pdl2、b7-dc、btdc和cd273。在其中正在治疗人类个体的本发明的任何治疗方法、药物和用途中，pd-1拮抗剂阻断人pd-l1与人pd-1的结合，并且优选阻断人pd-ll和pd-l2二者与人pd-1的结合。人pd-1氨基酸序列可以在ncbi基因座no.:np005009中找到。人pd-l1和pd-l2氨基酸序列可以分别在ncbi基因座no.:np_054862和np_079515中找到。
可用于本发明的任何治疗方法、药物和用途的pd-1拮抗剂包括单克隆抗体(mab)或其抗原结合片段，其特异性结合pd-1或pd-l1，并且优选地特异性结合人pd-1或人pd-l1。mab可以是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体，并且可以包括人恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自iggl、igg2、igg3和igg4恒定区，并且在优选的实施方案中，人恒定区是igg1或igg4恒定区。在一些实施方案中，抗原结合片段选自fab、fab'-sh、f(ab')2、scfv和fv片段。pd-1拮抗剂的实例包括但不限于派姆单抗(keytruda®,merckandco.,inc.,kenilworth,nj,usa)。“派姆单抗”(以前称为mk-3475、sch900475和帕博利珠单抗，并且有时称为“pembro”)是一种人源化igg4mab，其结构描述于whodruginformation,vol.27,no.2,第161-162页(2013)。pd-1拮抗剂的额外实例包括纳武单抗(opdivo®,bristol-myerssquibbcompany,princeton,nj,usa)、阿特朱单抗(mpdl3280a;tecentriq®,genentech,sanfrancisco,ca,usa)、德瓦鲁单抗(imfinzi®,astrazenecapharmaceuticals,lp,wilmington,de)和阿维单抗(bavencio®,merckkgaa,darmstadt,germanyandpfizer,inc.,newyork,ny)。
结合人pd-1且可用于本发明的治疗方法、药物和用途中的单克隆抗体(mab)的实例描述于us7488802、us7521051、us8008449、us8354509、us8168757、wo2004/004771、wo2004/072286、wo2004/056875和us2011/0271358。
结合人pd-l1且可用于本发明的治疗方法、药物和用途中的mab的实例描述于wo2013/019906、w02010/077634al和us8383796中。在本发明的治疗方法、药物和用途中可用作pd-1拮抗剂的特异性抗人pd-l1mab包括mpdl3280a、bms-936559、medi4736、msb0010718c以及分别包含wo2013/019906的seqidno:24和seqidno:21的重链和轻链可变区的抗体。
可用于本发明的任何治疗方法、药物和用途中的其他pd-1拮抗剂包括特异性结合pd-1或pd-l1，并且优选特异性结合人pd-1或人pd-l1的免疫粘附素，例如，含有与恒定区、诸如免疫球蛋白分子的fc区融合的pd-l1或pd-l2的细胞外或pd-1结合部分的融合蛋白。特异性结合pd-1的免疫粘附素分子的实例描述于wo2010/027827和wo2011/066342中。在本发明的治疗方法、药物和用途中可用作pd-1拮抗剂的特异性融合蛋白包括amp-224(也称为b7-dcig)，它是结合人pd-1的pd-l2-fc融合蛋白。
因此，一个实施方案提供了治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在此类实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐和pd-1拮抗剂并行或依次施用。
根据该实施方案的此类癌症的具体非限制性实例包括黑素瘤(包括不可切除或转移性黑素瘤)、头颈癌(包括复发性或转移性头颈鳞状细胞癌(hnscc))、经典霍奇金淋巴瘤(chl)、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、微卫星不稳定性高(msi-h)癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌、透明细胞肾癌、结直肠癌、乳腺癌、鳞状细胞肺癌、基底癌、肉瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肝癌、胃肠道癌、多发性骨髓瘤、肾癌、间皮瘤、卵巢癌、肛门癌、胆道癌、食道癌和唾液腺癌。
在一个实施方案中，提供了治疗癌症的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合，其中所述癌症选自不可切除或转移性黑素瘤、复发性或转移性头颈鳞状细胞癌(hnscc)、经典霍奇金淋巴瘤(chl)、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、微卫星不稳定性高(msi-h)癌、非小细胞肺癌和肝细胞癌。在一个此类实施方案中，所述药剂是pd-1拮抗剂。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
派姆单抗已被美国fda批准用于治疗患有不可切除或转移性黑素瘤的患者，以及治疗某些患有复发性或转移性头颈鳞状细胞癌(hnscc)、经典霍奇金淋巴瘤(chl)、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、微卫星不稳定性高(msi-h)癌、非小细胞肺癌和肝细胞癌的患者，如keytruda™(merck&co.,inc.,whitehousestation,njusa;2014年初始美国批准,2018年11月更新)的处方信息中所述。在另一个实施方案中，提供了治疗癌症的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与派姆单抗的组合，其中所述癌症选自不可切除或转移性黑素瘤、复发性或转移性头颈鳞状细胞癌(hnscc)、经典霍奇金淋巴瘤(chl)、尿路上皮癌、胃癌、宫颈癌、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、微卫星不稳定性高(msi-h)癌、非小细胞肺癌和肝细胞癌。
在另一个实施方案中，提供了治疗癌症的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合，其中所述癌症选自黑素瘤、非小细胞肺癌、头颈鳞状细胞癌(hnscc)、霍奇金淋巴瘤、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、尿路上皮癌、微卫星不稳定性高癌、胃癌、梅克尔细胞癌、肝细胞癌、食道癌和宫颈癌。在一个此类实施方案中，所述药剂是pd-1拮抗剂。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是德瓦鲁单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿维单抗。
在另一个实施方案中，提供了治疗癌症的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合，其中所述癌症选自黑素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌、膀胱癌、乳腺癌、胃肠道癌、多发性骨髓瘤、肝细胞癌、淋巴瘤、肾癌、间皮瘤、卵巢癌、食道癌、肛门癌、胆道癌、结直肠癌、宫颈癌、甲状腺癌和唾液腺癌。在一个此类实施方案中，所述药剂是pd-1拮抗剂。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是德瓦鲁单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿维单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗不可切除或转移性黑素瘤的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗复发性或转移性头颈鳞状细胞癌(hnscc)的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗经典霍奇金淋巴瘤(chl)的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗尿路上皮癌的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗胃癌的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗宫颈癌的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗原发性纵隔大b细胞淋巴瘤的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗微卫星不稳定性高(msi-h)癌的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗非小细胞肺癌的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在一个实施方案中，提供了治疗肝细胞癌的方法，其包括向有此需要的人施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与pd-1拮抗剂的组合。在一个此类实施方案中，所述药剂是派姆单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是纳武单抗。在另一个此类实施方案中，所述药剂是阿特朱单抗。
在另一个实施方案中，额外的治疗剂是除a2a或a2b受体抑制剂以外的至少一种免疫调节剂。免疫调节剂的非限制性实例包括cd40l、b7、b7rp1、抗-cd40、抗-cd38、抗-icos、4-ibb配体、树突状细胞癌疫苗、il2、il12、elc/ccl19、slc/ccl21、mcp-1、il-4、il-18、tnf、il-15、mdc、ifn-a/-13、m-csf、il-3、gm-csf、il-13、抗-il-10和吲哚胺2,3-双加氧酶1(ido1)抑制剂。
在另一个实施方案中，额外的治疗剂包括放射。此类放射包括局部放射疗法和全身放射疗法。
在另一个实施方案中，额外的治疗剂是至少一种化学治疗剂。预期与本发明的化合物组合使用的化学治疗剂的非限制性实例包括：培美曲塞、烷化剂(例如，氮芥类、诸如苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、美法仑和乌拉莫司汀；氮丙啶类、诸如噻替派；甲磺酸酯类、诸如白消安；核苷类似物(例如吉西他滨)；亚硝基脲类、诸如卡莫司汀、洛莫司汀和链脲霉素；拓扑异构酶1抑制剂(例如伊立替康)；铂配合物、诸如顺铂、卡铂和奥沙利铂；生物还原烷化剂、诸如丝裂霉素、丙卡巴肼、达卡巴嗪和六甲蜜胺)；基于蒽环的疗法(例如阿霉素、柔红霉素、表柔比星和伊达比星)；dna链断裂剂(例如博来霉素)；拓扑异构酶ii抑制剂(例如安吖啶、放线菌素、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、阿霉素、依托泊苷和替尼泊苷)；dna小沟结合剂(例如普卡霉素)；抗代谢物(例如，叶酸拮抗剂、诸如甲氨蝶呤和三甲曲沙；嘧啶拮抗剂、诸如氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、cb3717、阿扎胞苷、阿糖胞苷和氟尿苷；嘌呤拮抗剂、诸如巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、氟达拉滨、喷司他丁；天冬酰胺酶；和核糖核苷酸还原酶抑制剂、诸如羟基脲)；微管蛋白相互作用剂(例如长春新碱、雌莫司汀、长春花碱、多西紫杉醇、埃坡霉素衍生物和紫杉醇)；激素制剂(例如雌激素；共轭雌激素；乙炔雌二醇；己烯雌酚；氯烯雌醚；己二烯雌酚；孕激素、诸如己酸羟孕酮、甲羟孕酮和甲地孕酮；和雄激素、诸如睾酮、丙酸睾酮、氟甲睾酮和甲基睾酮)；肾上腺皮质类固醇(例如强的松、地塞米松、甲基泼尼松龙和泼尼松龙)；黄体生成激素释放剂或促性腺激素释放激素拮抗剂(例如醋酸亮丙瑞林和醋酸戈舍瑞林)；和抗激素抗原(例如，他莫昔芬、抗雄激素药、诸如氟他胺；和抗肾上腺药、诸如米托坦和氨鲁米特)。
在另一个实施方案中，所述额外的治疗剂是至少一种信号转导抑制剂(sti)。信号转导抑制剂的非限制性实例包括bcr/abl激酶抑制剂、表皮生长因子(egf)受体抑制剂、her-2/neu受体抑制剂和法尼基转移酶抑制剂(fti)。
在另一个实施方案中，额外的治疗剂是至少一种抗感染剂。抗感染剂的非限制性实例包括细胞因子，其非限制性实例包括粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)和flt3-配体。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防病毒感染(例如，慢性病毒感染)的方法，所述病毒包括但不限于丙型肝炎病毒(hcv)、人乳头瘤病毒(hpv)、巨细胞病毒(cmv)、爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)、水痘带状疱疹病毒、柯萨奇病毒和人类免疫缺陷病毒(hiv)。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗感染性病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与疫苗的组合。在一些实施方案中，疫苗是抗病毒疫苗，包括例如抗htv疫苗。预期使用的其他抗病毒剂包括抗hiv、抗hpv、抗hcv、抗hsv剂等。在其他实施方案中，疫苗针对结核或疟疾有效。在还有其他实施方案中，疫苗是肿瘤疫苗(例如，针对黑素瘤有效的疫苗)；所述肿瘤疫苗可以包含基因修饰的肿瘤细胞或基因修饰的细胞系，包括已被转染以表达粒细胞-巨噬细胞刺激因子(gm-csf)的基因修饰的肿瘤细胞或基因修饰的细胞系。在另一个实施方案中，疫苗包括一种或多种免疫原性肽和/或树突状细胞。
在另一个实施方案中，本发明提供了通过施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种额外的治疗剂来治疗感染，其中与单独施用任一种后观察到的相同感染症状相比，施用本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)和额外的治疗剂两者后观察到的感染症状得到改善。在一些实施方案中，观察到的感染症状可以是病毒载量减少、cd4+t细胞计数增加、机会感染减少、存活时间增加、慢性感染根除或其组合。
定义
如本文所用，除非另外指出，否则以下术语具有以下含义。
假定本文的文本、方案、实施例、结构式和任何表中的不满足的化合价具有数量足以满足化合价的一个或多个氢原子。
当变量在本发明的任何部分或本发明的任何化合物中出现超过一次时(例如芳基、杂环、n(r)2)，每次出现时定义该变量的部分的选择独立于其在所有其他出现时的定义，除非在局部变量定义中另外指出。
如本文所用，除非另外指出，否则术语“a2a受体拮抗剂”(等效地，a2a拮抗剂)和/或“a2b受体拮抗剂”(等效地，a2b拮抗剂)是指当根据本文所述的程序测定时，分别相对于a2a和/或a2b受体表现出小于约1μm的功效(ic50)的化合物。优选的化合物与任何其他腺苷受体(例如，a1或a3)相比，表现出至少10倍的拮抗a2a受体和/或a2b受体的选择性。
如本文所述，除非另有说明，否则化合物在治疗中的用途是指一定量的化合物(通常以包含其他赋形剂的制剂组分形式存在)以等分的量并以一定时间间隔施用，这提供并维持化合物的至少一种药物活性形式在剂量施用之间的时间间隔内的至少治疗血清水平。
提及构成组合物的组分的数量时使用的短语“至少一种”、例如“至少一种药物赋形剂”是指在该组合物中存在指定组的一个成员，并且另外可以存在超过一个成员。组合物的组分通常是添加到组合物中的分离的纯物质的等分试样，其中添加到组合物中的分离的物质的纯度水平是该类型试剂通常接受的纯度水平。
无论是否是提及化合物或药物组合物的组分上的取代基时使用，短语“一个或多个”均是指与“至少一个”相同。
“并行地(concurrently)”和“同期地(contemporaneously)”两者在其含义上包括(1)在时间上同时(例如，在相同时间)；和(2)在不同的时间但在共同的治疗时间表进程内。
“连续地”是指一个接一个。
“依次地”是指治疗剂的一系列施用，其在施用每种额外的药剂之间等待发生效力的时段；即，在施用一种组分后，在第一组分后的有效时间段之后施用下一组分；有效时间段是实现从施用第一组分获益所给予的时间量。
“有效量”或“治疗有效量”旨在描述提供有效治疗或抑制本文所述疾病或病况并因此产生所需的治疗、改善、抑制或预防作用的至少一种本发明的化合物或包含至少一种本发明的化合物的组合物的量。例如，在用任选与一种或多种额外药剂组合的一种或多种本发明的化合物治疗如本文所述的癌症时，“有效量”(或“治疗有效量”)是指例如提供一定量的至少一种本发明的化合物，其在患有疾病、病况或病症的患者中产生治疗应答，包括适合于管控、缓解、改善或治疗病况或者缓解、改善、减轻或消除归因于病况的一种或多种症状和/或长期稳定病况的应答，例如，可以通过药效动力学标志物的分析或患有病况的患者的临床评价来确定。
“患者”和“受试者”是指动物，诸如哺乳动物(例如人类)，并且优选是人类。
“前药”是指在体内例如通过在血液中水解而迅速转化为母体化合物的化合物，例如，将本发明的化合物的前药转化为本发明的化合物或其盐。在t.higuchi和v.stella,pro-drugsasnoveldeliverysystems,vol.14，a.c.s.symposiumseries，和在edwardb.roche,ed.,bioreversiblecarriersindrugdesign,americanpharmaceuticalassociationandpergamonpress,1987中提供了详尽的讨论，其两者均通过引用并入本文；本发明的范围包括本发明的新型化合物的前药。
术语“取代的”是指一个或多个被列举为特定类型底物的取代基的部分，所述取代基与所述底物连接(或者，其中未具体列举取代基列表，在本申请中其他地方指定取代基)，条件是此类取代不超过该原子在底物中呈现的键合构型中的正常价态规则并且所述取代最终提供了稳定的化合物，也就是说，此类取代不提供具有彼此位于偕位或邻位的相互反应性取代基的化合物；并且其中所述取代提供了足够坚固以经受从反应混合物分离至有用纯度的化合物。
在描述被部分任选取代的情况下(例如“任选取代的”)，该术语是指如果存在取代基，则作为指定底物的任选取代基列出的一个或多个列举(或默认)部分可以以通常被默认取代基占据的键合位置存在于底物上，例如，根据本文呈现的“取代的”的定义，烷基链上的氢原子可以被任选的取代基之一取代。
“烷基”是指可以是直链或支链的包含1至10个碳原子的脂族烃基。“(c1-c6)烷基”是指可以为直链或支链的包含1至6个碳原子的脂族烃基。支链是指一个或多个低级烷基(诸如甲基、乙基或丙基)连接到线性烷基链。烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基。
“卤代烷基”是指如上面定义的烷基，其中烷基上的一个或多个氢原子(至多并包括每个可利用的氢基团)被卤素原子替代。如本领域技术人员所理解的，如本文所用的“卤代”或“卤素”旨在包括氯(cl)、氟(f)、溴(br)和碘(i)。通常优选氯(cl)和氟(f)卤素。
“芳基”是指包含6至14个碳原子，优选6至10个碳原子的芳族单环或多环环系。芳基可以任选地被一个或多个可以相同或不同并且如本文所定义的“环系取代基”取代。合适的芳基的非限制性实例包括苯基和萘基。“单环芳基”是指苯基。
“杂芳基”是指包含5至14个环原子，优选5至10个环原子的芳族单环或多环环系，其中一个或多个环原子是除碳以外的元素，例如氮、氧或硫(单独或组合)。优选的杂芳基含有5至6个环原子。“杂芳基”可以任选地被一个或多个可以相同或不同的如本文所定义的取代基取代。杂芳基根名称前的前缀氮杂、氧杂或硫杂是指至少氮、氧或硫原子分别作为环原子存在。杂芳基的氮原子可任选被氧化成相应的n-氧化物。“杂芳基”还可包括与如上定义的芳基稠合的如上定义的杂芳基。合适的杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基(可替代地，其可称为噻吩基(thiophenyl))、嘧啶基、吡啶酮(包括n-取代的吡啶酮)、异噁唑基、异噻唑基、噁唑基、噁二唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1,2,4-噻二唑基、吡嗪基、哒嗪基、喹喔啉基、酞嗪基、羟吲哚基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[2,1-b]噻唑基、苯并呋咱基、吲哚基、氮杂吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、异喹啉基、苯并氮杂吲哚基、1,2,4-三嗪基、苯并噻唑基等。术语“杂芳基”也指部分饱和的杂芳基部分，诸如例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基等。术语“单环杂芳基”是指如上所述的杂芳基的单环形式，并且包括4-至7-元单环杂芳基，其包含1至4个环杂原子，所述环杂原子独立地选自n、o和s，及其氧化物。与母体部分的连接点是任何可用的环碳或环杂原子。单环杂芳基部分的非限制性实例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、噁二唑基、异噁唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、噻二唑基(例如1,2,4-噻二唑基)、咪唑基和三嗪基(例如1,2,4-三嗪基)及其氧化物。
“环烷基”是指包含3至10个碳原子，优选3至6个碳原子的非芳族完全饱和的单环或多环环系。环烷基可以任选地被一个或多个如本文所述的可以相同或不同的取代基取代。单环环烷基是指本文所述的环烷基部分的单环形式。合适的单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。多环环烷基的非限制性实例包括[1.1.1]-双环戊烷、1-十氢化萘基、降莰基、金刚烷基等。
“杂环烷基”(或“杂环基”)是指包含3至10个环原子，优选5至10个环原子的非芳族饱和单环或多环环系，其中该环系中的一个或多个原子为除碳以外的元素，例如氮、氧或硫(单独或组合)。环系中不存在相邻的氧和/或硫原子。优选的杂环烷基含有4、5或6个环原子。杂环基根名称前的前缀氮杂、氧杂或硫杂是指至少氮、氧或硫原子分别作为环原子存在。杂环基环中的任何-nh可以诸如例如作为-n(boc)、-n(cbz)、-n(tos)基团等被保护存在；此类保护也被认为是本发明的一部分。杂环基可以任选地被一个或多个如本文所述的可以相同或不同的取代基取代。杂环基的氮或硫原子可任选被氧化成相应的n-氧化物、s-氧化物或s,s-二氧化物。因此，术语“氧化物”在本文所述的一般结构中以变量定义出现时，是指相应的n-氧化物、s-氧化物或s,s-二氧化物。“杂环基”还包括其中=o替换相同碳原子上的两个可用氢的环(即，杂环基包括在环中具有羰基的环)。此类=o基团在本文中可以被称为“氧代”。此类部分的一个实例是吡咯烷酮(pyrrolidinone或pyrrolidone)：
注意，在本发明的含杂原子的环系中，在与n、o或s相邻的碳原子上不存在羟基，并且在与另一杂原子相邻的碳上不存在n或s基团。
作为键的线
如本文所用，波浪线
“氧代”定义为与环烷基、环烯基、杂环基、杂环烯基或本文所述的其他环中的环碳双键键合的氧原子，例如，
如本领域所熟知的，除非另有说明，否则从特定原子绘制的键(其中在键的末端未描绘部分)表示通过该键与原子键合的甲基。例如：
一种或多种本发明的化合物也可以作为溶剂化物存在或任选地转化为溶剂化物。溶剂化物的制备是通常已知的。因此，例如，m.caira等人,j.pharmaceuticalsci.,93(3),601-611(2004)描述了抗真菌氟康唑在乙酸乙酯中以及从水中的溶剂化物的制备。e.c.vantonder等人,aapspharmscitech.,5(1),article12(2004);和a.l.bingham等人,chem.commun.,603-604(2001)描述了溶剂化物和半溶剂化物(包括水合物(其中溶剂是水或基于水的)等)的类似制备。典型的非限制性方法包括在高于环境温度下将本发明的化合物溶解在所需量的所需溶剂(例如有机溶剂、水性溶剂、水或其两种或更多种的混合物)中，并在存在或不存在抗溶剂的情况下以足以形成晶体的速率冷却溶液，然后通过标准方法分离。分析技术、诸如例如i.r.光谱法显示晶体中存在溶剂(包括水)，作为溶剂化物(或在将水掺入结晶形式的情况下为水合物)。
化合物的术语“纯化的”、“呈纯化的形式”或“呈分离和纯化的形式”是指所述化合物从合成方法或天然来源或其组合中分离后的物理状态。因此，化合物的术语“纯化的”、“呈纯化的形式”或“呈分离和纯化的形式”是指所述化合物从一种或多种本文所述或本领域技术人员熟知的纯化方法获得后的物理状态，并且纯度足以通过本文所述或本领域技术人员熟知的标准分析技术表征。
本发明还包括呈通过常规技术获得的分离和纯化形式的本发明的化合物。本发明的化合物及其盐、溶剂化物和前药的多晶型物形式旨在包括在本发明中。本发明的某些化合物可以以不同的异构形式(例如对映异构体、非对映异构体、阻转异构体)存在。本发明的化合物包括其所有异构形式，为纯形式和两种或更多种的混合物，包括外消旋混合物。
以类似的方式，除非另有说明，否则呈现表现出互变异构现象的化合物的任何互变异构形式的结构表示意在包括化合物的所有此类互变异构形式。因此，在本发明的化合物、它们的盐和其溶剂化物和前药可以以不同的互变异构形式存在或以此类形式中的平衡存在时，该化合物的所有此类形式都被本发明范围涵盖并包括在本发明范围内。此类互变异构体的实例包括但不限于酮/烯醇互变异构形式、亚胺-烯胺互变异构形式和例如杂芳族形式，诸如以下部分：
在实例中出现的反应方案采用具有一个或多个立体中心的化合物的情况下，立体中心用星号指示，如下所示：
因此，以上描绘由以下几对异构体组成：(i)反式-异构体((2r,7as)-2-甲基六氢-1h-吡咯嗪-7a-基)甲胺(化合物abc-1)和((2s,7ar)-2-甲基六氢-1h-吡咯嗪-7a-基)甲胺(化合物abc-2)；和(ii)顺式-异构体((2r,7ar)-2-甲基六氢-1h-吡咯嗪-7a-基)甲胺(化合物abc-3)和((2s,7as)-2-甲基六氢-1h-吡咯嗪-7a-基)甲胺(化合物abc-4)。
本发明的化合物(包括本发明的化合物和它们的前药的盐和溶剂化物)的所有立体异构体，诸如由于本发明的化合物中存在的不对称碳而可能存在的那些，并且包括对映异构形式(其甚至可以在不存在不对称碳的情况下存在)、旋转异构形式、阻转异构体和非对映异构形式，都预期在本发明的范围内。本发明的化合物的单个立体异构体可以以纯的形式分离，例如基本上不含其他异构体，或者可以作为两种或更多种立体异构体的混合物或作为外消旋体分离。本发明的手性中心可以具有iupac1974recommendations所定义的s或r构型。术语“盐”、“溶剂化物”、“前药”等的使用旨在同样适用于本发明的化合物的分离的对映异构体、立体异构体对或基团、旋转异构体、互变异构体或外消旋体的盐、溶剂化物和前药。
在非对映异构混合物可以基于其物理化学差异通过已知方法例如通过手性色谱法和/或分级结晶而分离成其单独的非对映异构体时，化合物的简单的结构表示预期该化合物的所有非对映异构体。如已知的，对映异构体也可以通过如下来分离：通过与合适的旋光化合物(例如手性助剂、诸如手性醇或mosher酰氯)反应将对映异构混合物转化为非对映异构混合物，分离非对映异构体并将单独分离的非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯化的对映异构体。
由于本文使用了术语，本发明的化合物的盐，无论是与无机和/或有机酸形成的酸式盐、与无机和/或有机碱形成的碱式盐、还是例如当化合物含有碱性部分(例如但不限于氮原子，例如胺、吡啶或咪唑)和酸性部分(例如但不限于羧酸)二者时所形成的包括两性离子特征的盐，都包括在本文所述的本发明的化合物的范围内。例如s.berge等人,journalofpharmaceuticalsciences(1977)66(1)1-19;p.gould,internationalj.ofpharmaceutics(1986)33201-217;anderson等人,thepracticeofmedicinalchemistry(1996),academicpress,newyork;theorangebook(food&drugadministration,washington,d.c.在其网站上);和p.heinrichstahl,camilleg.wermuth(编),handbookofpharmaceuticalsalts:properties,selection,anduse,(2002)int'l.unionofpureandappliedchemistry,pp.330-331讨论了由碱性(或酸性)药物化合物形成药学上有用的盐。这些公开通过引用并入本文。
本发明预期所有可用的盐，包括通常认为安全用于制备药物制剂的盐，以及目前可在本领域普通技术范围内形成并且后来被归类为“通常认为安全”用于制备药物制剂的那些，在本文称为“药学上可接受的盐”。药学上可接受的酸加成盐的实例包括但不限于乙酸盐包括三氟乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐(诸如本文所提及的那些)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate)(也称为甲苯磺酸盐(tosylate))、十一酸盐等。
药学上可接受的碱式盐的实例包括但不限于铵盐，碱金属盐(诸如钠、锂和钾盐)，碱土金属盐(诸如钙和镁盐)，铝盐，锌盐，与有机碱(例如有机胺，诸如苄星、二乙胺、二环己基胺、海巴(与n,n-双(脱氢松香)乙二胺形成)、n-甲基-d-葡糖胺、n-甲基-d-葡糖酰胺、叔丁胺、哌嗪、苯基环己基-胺、胆碱、氨丁三醇)的盐，以及与氨基酸(诸如精氨酸、赖氨酸)的盐等。碱性含氮基团可以转化为铵离子，或用试剂季铵化，所述试剂诸如低级烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳基烷基卤化物(例如苄基和苯乙基的溴化物)等。
所有此类酸和碱盐都意图是在本发明的范围内的药学上可接受的盐，并且出于本发明的范围的目的，所有的酸和碱盐都被认为等同于相应化合物的游离形式。
化合物中称为“保护的”的官能团是指该基团呈修饰形式，以防止当保护的化合物经受旨在修饰分子另一区域的特定反应条件时，在保护的位点发生不希望的副反应。合适的保护基是已知的，例如通过参考标准教科书，例如t.w.greene等人,protectivegroupsinorganicsynthesis(1991),wiley,newyork。
在本发明的化合物中，原子可以表现出其天然同位素丰度，或者一个或多个原子可以被人工富集在具有相同原子序数，但是原子质量或质量数不同于自然界中主要发现的原子质量或质量数的特定同位素。本发明旨在包括本发明的化合物的所有合适的同位素变体。例如，氢(h)的不同同位素形式包括氕(1h)和氘(2h)。氕是自然界中发现的主要氢同位素。富集氘可提供某些治疗优势，诸如增加体内半衰期或降低剂量要求，或者可以提供可用作表征生物样品的标准的化合物。可以通过本领域技术人员熟知的常规技术或使用合适的同位素富集的试剂和/或中间体通过与本文方案和实施例中描述的那些类似的方法来制备本发明的同位素富集的化合物，而不进行过度实验。
本发明还包括与本文所记载的那些在结构上相同的同位素标记的本发明的化合物，但是针对以下事实：该形式化合物中的统计学上显著百分比的一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的最丰富的同位素的原子质量或质量数的原子替代，因此改变了本发明的化合物中存在的该同位素的天然存在的丰度。可以优先掺入本发明的化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、碘、氟和氯的同位素，例如但不限于：2h、3h、11c、13c、14c、13n、15n、15o、17o、18o、31p、32p、35s、18f和36cl、123i和125i。应当理解，其他同位素也可以通过已知方式掺入。
认为本发明的某些同位素标记的化合物(例如，用3h、11c和14c标记的那些)在使用多种已知技术的化合物和/或底物组织分布测定中特别有用。由于其易于制备和检测，特别优选氚化(即3h)和碳-14(即14c)同位素。此外，将天然丰富的同位素取代为较重的同位素，例如，将氕取代为氘(即2h)可能因更高的代谢稳定性(例如，体内半衰期增加或剂量要求降低)而提供某些治疗优势，并且因此在一些情况下可能是优选的。本发明的同位素标记的化合物通常可以按照类似于下文反应方案和/或实施例中公开的那些的以下程序通过用合适的同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂，或通过熟知的适当制备的前体与为此类“标记”反应特别制备的本发明的化合物的反应制备。此类化合物也包括在本发明中。
术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及直接或间接地由指定量的指定成分的组合产生的任何产品。
如本文所用，术语“药物组合物”涵盖由一种或多于一种(例如，两种)药物活性剂、诸如例如本发明的化合物(任选与本文所述的额外药剂一起)以及任何药学上无活性的赋形剂构成的整体组合物和个体剂量单位二者。如本领域普通技术人员将理解的，赋形剂是使组合物适应特定施用途径或帮助将组合物加工成剂型而自身不发挥活性药物作用的任何成分。整体组合物和每个个体剂量单位可含有固定量的前述一种或多于一种药物活性剂。整体组合物是尚未形成个体剂量单位的材料。
应当理解，本发明的药物制剂可以包含多于一种的本发明的化合物(或其药学上可接受的盐)，例如，两种或三种本发明的化合物的组合，各自通过将所需量的药学上可接受的纯形式的化合物添加到制剂中而存在于此类组合物中。还应理解，在配制本发明的组合物时，组合物除一种或多种本发明的化合物外还可包含一种或多种还具有药理活性的如本文所述的其他药剂。
尽管本发明的制剂可以整体形式使用，但是应当理解，对于大多数应用，本发明的制剂将被掺入适合向患者施用的剂型中，每种剂型包含一定量的所选制剂，其含有有效量的一种或多种本发明的化合物。合适剂型的实例包括但不限于适合于以下的剂型：(i)口服施用，例如液体、凝胶、粉末、固体或半固体药物组合物，其被装入胶囊或压入片剂并且可以另外包含一种或多种改变其释放特性的包衣，例如赋予延迟释放的包衣，或具有延长释放特性的制剂；(ii)适于肌内施用(im)的剂型，例如注射溶液或悬浮液，并且其可以适于形成具有延长释放特性的储库；(iii)适于静脉内施用(iv)的剂型，例如溶液或悬浮液，例如作为iv溶液或浓缩物(待注入盐水iv袋中)；(iv)适于通过口腔组织施用的剂型，例如适于提供粘膜内施用的快速溶解片剂、锭剂、溶液、凝胶、小囊或针阵列；(v)适于通过鼻腔或上呼吸腔的粘膜施用的剂型，例如用于在鼻或气道中分散的溶液、悬浮液或乳液制剂；(vi)适于透皮施用的剂型，例如贴剂、乳膏或凝胶；和(vii)适于皮内施用的剂型，例如微针阵列；和(viii)适于通过直肠或阴道粘膜递送的剂型，例如栓剂。
为了制备包含本发明的化合物的药物组合物，通常将本发明的化合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。这些赋形剂赋予组合物以下特性：使其更易于处理或加工，例如，意图待压片的粉状药物中的润滑剂或压制助剂，或者使制剂适应所需施用途径，例如，提供用于口服施用(例如通过从胃肠道吸收)，透皮或透粘膜施用(例如通过粘性皮肤“贴剂”)，或颊施用，或注射(例如肌内或静脉内)施用途径的制剂的赋形剂。这些赋形剂在本文中统称为“载体”。尽管可以制备具有更大量的制剂，但是通常制剂可以包含高达约95%的活性成分。
药物组合物可以是固体、半固体或液体。固体形式的制剂可以适应多种施用模式，其实例包括但不限于粉末、可分散颗粒、小片、珠，其可以例如用于压片、胶囊化或直接施用。液体形式的制剂包括但不限于溶液、悬浮液和乳液，其例如但非专门可用于制备意图用于肠胃外注射、鼻内施用或向某些其他粘膜施用的制剂。用于向各种粘膜施用而制备的制剂还可以包括使它们适于此类施用的额外组分，例如粘度调节剂。
例如适合于通过吸入或通过鼻粘膜施用的气雾剂制剂可以包括溶液和粉末形式的固体，其可以与药学上可接受的推进剂、例如惰性压缩气体、例如氮气组合。还包括固体形式的制剂，其意图在使用前不久转变成悬浮液或溶液，例如用于口服或肠胃外施用。此类固体形式的实例包括但不限于冻干制剂和吸附到固体吸附介质中的液体制剂。
本发明的化合物还可以例如从液体、栓剂、乳膏、泡沫、凝胶或快速溶解的固体形式透皮或透粘膜递送。应当理解，透皮组合物也可以采取乳膏、洗剂、气雾剂和/或乳液的形式，并且可以以单位剂型提供，该剂型包括本领域中任何已知的透皮贴剂，例如掺入了包含药物活性化合物的基质或包含药物活性化合物的固体或液体形式的储库的贴剂。
用于上面提及的各种组合物的药学上可接受的载体和制备方法的实例可以在a.gennaro(编),remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第20版,(2000),lippincottwilliams&wilkins,baltimore,md中找到。
优选地，药物制剂为单位剂型。在此类形式中，将制剂细分为适当大小的单位剂量，其含有适当量的活性组分，例如，达到期望目的的有效量。
所使用的实际剂量可以根据患者的需求和所治疗病况的严重性而变化。确定用于特定情况的合适剂量方案在本领域技术范围内。为了方便起见，可将总日剂量分开，并根据需要在一天期间分批施用。
根据本发明，腺苷a2a和/或a2b受体的拮抗作用是通过向需要此类疗法的患者施用有效量的一种或多种本发明的化合物或其药学上可接受的盐来实现的。
在一些实施方案中，优选以包含本发明的化合物或其盐和至少一种药学上可接受的载体(如本文所述)的药物组合物的形式施用化合物。应当理解，本发明的药物制剂可以包含多于一种的本发明的化合物或其盐，例如，两种或三种本发明的化合物的组合，或者另外地或可替代地，另一种治疗剂，诸如本文所述的那些，各自通过向制剂中添加所需量的已经以药学上可接受的纯形式分离的化合物或其盐(或药剂，适用时)而存在。
如上所述，施用本发明的化合物以实现a2a和/或a2b受体的拮抗作用优选通过将化合物掺入药物制剂(掺入剂型)中来完成，例如，包含有效量的至少一种本发明的化合物(例如1、2或3，或1或2，或1，且通常是1种本发明的化合物)或其药学上可接受的盐的上述剂型之一。确定具有药物活性的化合物(例如本发明的化合物)的安全和有效施用的方法是本领域技术人员已知的，例如，如标准文献中所述，例如，如“physicians’deskreference”(pdr),例如，1996版本(medicaleconomicscompany,montvale,nj07645-1742,usa)、physician’sdeskreference,第56版,2002(出版自medicaleconomicscompany,inc.，montvale,nj07645-1742)，或physician’sdeskreference,第57版,2003(出版自thompsonpdr,montvale,nj07645-1742)所述；其公开通过引用并入本文。本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐的施用量和频率将根据主治医生的判断，考虑诸如患者的年龄、状况和体型以及正在治疗的症状的严重性的因素来调节。本发明的化合物可以以高达1,000mg的总日剂量施用，其可以以一个日剂量施用，或者可以每24小时时段分为多个剂量，例如每天二至四个剂量。
如本领域普通技术人员将理解的，一种或多种本发明的化合物的合适剂量水平通常为每天每kg患者体重约0.01至500mg，其可以单剂量或多剂量施用。合适的剂量水平可以是每天约0.01至250mg/kg，每天约0.05至100mg/kg或每天约0.1至50mg/kg。在该范围内，剂量可以是每天0.05至0.5、0.5至5或5至50mg/kg。对于口服施用，可以以片剂形式提供组合物，其含有1.0至1000毫克活性成分，特别是1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分，以用于对待治疗患者的剂量进行症状调节。化合物可以每天1-4次的方案施用，或者可以每天一次或两次施用。
本领域技术人员将理解，可以根据患者的需要改变利用至少一种本发明的化合物的治疗方案。因此，本发明方法中使用的本发明的化合物可以上述方案的变化形式施用。例如，本发明的化合物可以在治疗周期过程中不连续地而不是连续地施用。
通常，无论以何种形式施用，施用的剂型将含有一定量的至少一种本发明的化合物或其盐，其将提供某种形式化合物的治疗有效的血清水平，持续合适的时间段，诸如至少2小时，更优选至少4小时或更长。通常，如本领域中已知的，提供本发明的化合物的治疗有效血清水平的药物组合物的剂量可以在时间上间隔开以在整个施用治疗的时段内连续提供达到或超过最小治疗有效血清水平的血清水平。应理解，施用的剂型也可以是提供药物活性化合物的延长释放时段的形式，这将提供持续更长时段的治疗血清水平，从而需要较不频繁的剂量间隔。如上所述，本发明的组合物可以掺入额外的药物活性组分，或者与其他药物活性剂同时、同期或依次施用，这在提供治疗的过程中可能是另外需要或期望的。应理解，所施用的剂型也可以是提供药物活性化合物的延长释放时段的形式，这将提供持续更长时段的治疗血清水平，从而需要较不频繁的剂量间隔。
制备实施例
可以使用容易得到的起始材料、试剂和常规合成程序，根据以下方案和具体实施例或其修改形式容易地制备本发明的化合物。在这些反应中，还可以利用本身为本领域普通技术人员已知但未详细提及的变体。通过考察以下方案和描述，本领域技术人员可以容易地理解和领会制备本发明中所要求保护的化合物的通用程序。
用于合成g-a5型的化合物的一种通用策略是经由通用方案a中显示的五步程序，其中or是烷氧基，且其中环a、r1、r2和r4如式(i)中所定义。酯g-a1可以在溶剂、诸如meoh中用水合肼处理以形成中间体酰肼g-a2。在第二步骤中，然后可以在碱、诸如dipea存在的情况下，在溶剂、诸如二氧杂环己烷中将这些酰肼与二氯嘧啶合并，以产生偶联产物g-a3。在第三步骤中，在溶剂、诸如二氧杂环己烷中添加2-4-二甲氧基苄基胺与碱、诸如dipea以生成嘧啶g-a4。在第四步骤中，将嘧啶g-a4在bsa中加热以生成三环嘧啶g-a5。在步骤5中，用酸、诸如tfa、hcl等处理g-a5将得到式(i)的化合物。
通用方案b
用于合成g-b5型的化合物的一种通用策略是经由通用方案b中显示的五步程序，其中r1、r2和r4在式(i)中定义。可以用二氰基锌、适当的钯催化剂、溶剂和碱(当必要时)处理溴化物g-b1，以形成中间体腈g-b2。在第二步骤中，然后可以在碱(诸如吡啶)存在的情况下在溶剂(诸如dcm)中将这些腈与1-(异氰酰甲基)-2,4-二甲氧基苯合并以产生偶联产物g-b3。在第三步骤中，将三苯基膦、dea与四溴化碳一起添加于溶剂、诸如dcm中，以生成腈g-b4。在第四步骤中，可以在酸、诸如acoh存在的情况下在溶剂、诸如dcm中将腈g-a4与酰肼合并，以生成三环嘧啶g-b5。在步骤5中，用酸、诸如tfa、hcl等处理g-b5将得到式(i)的化合物。
实验
以下缩写可用于以下实验中：
通用实验信息：
除非另有说明，否则所有反应均被磁力搅拌并在惰性气氛、诸如氮气或氩气下进行。
除非另有说明，否则下述实验中使用的乙醚是fisheracs认证的材料，并用bht稳定。
除非另有说明，否则“脱气的”是指已从中除去氧气的溶剂，通常通过使用出口针使惰性气体、诸如氮气或氩气鼓泡通过溶液10至15分钟以使压力正常化来除去氧气。
除非另有说明，否则“浓缩的”是指使用旋转蒸发仪或真空泵从溶液或混合物中蒸发溶剂。
除非另有说明，否则硅胶色谱法是在isco®、analogix®或biotage®自动色谱系统上使用市售的筒作为柱进行的。柱通常用硅胶作为固定相填充。反相制备型hplc条件可在实验部分的末尾找到。将水溶液在genevac®蒸发仪上浓缩或冻干。
除非另有说明，否则质子核磁共振(1hnmr)光谱和质子解耦碳核磁共振(13c{1h}nmr)光谱是在环境温度下于400、500或600mhzbruker或variannmr光谱仪上记录的。所有化学位移(δ)均以百万分率(ppm)报告。质子共振是指nmr溶剂中的残留氕，其可以包括但不限于cdcl3、dmso-d6和meod-d4。碳共振是指nmr溶剂的碳共振。如下表示数据：化学位移，多重性(br=宽峰，brs=宽单峰，s=单峰，d=二重峰，dd=双二重峰，ddd=双二倍二重峰，t=三重峰，q=四重峰，m=多重峰)，耦合常数(j)，以赫兹(hz)计，积分。
中间体a1
步骤a–中间体a1.1-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
4-溴-1h-吡唑(5g,34.0mmol)于dmf(4.5ml)中的混合物用碳酸铯(16.63g,51.0mmol)和2,2-二甲基环氧乙烷(7.36g,102mmol)处理。将所得混合物在25℃下搅拌14小时。完成后，将反应混合物用etoac(100ml)和水(100ml)稀释。将有机层分离，用盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥并浓缩。粗制残余物通过以0-15%etoac/石油醚作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供a1。lc/ms(es,m/z)=219,221[m+h]+。
表a中的化合物使用与中间体a1类似的程序、在一些情况下使用更高的反应温度从市售的溴杂环和环氧化物开始进行制备。
中间体a4a和a4b
中间体a4a和a4b：(r)-3-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丁-2-醇和(s)-3-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丁-2-醇的合成。
将中间体a4进行手性sfc(ad-h,chiraltech,50x250mm，助溶剂：45%(meoh))，以得到中间体a4a(较快洗脱的异构体)和中间体a4b(较慢洗脱的异构体)。
中间体a26
步骤a–化合物int-a26-1：4-溴-1-(丙-1-烯-2-基)-1h-吡唑的合成。
将乙酸铜(3.09g,17mmol)和2,2’-联吡啶(5.31g,34mmol)的混合物悬浮于dce(15ml)中，并加热至70℃，持续30分钟。将所得的蓝绿色悬浮液添加至4-溴-1h-吡唑(2.499g,17mmol)、三氟(丙-1-烯-2-基)硼酸钾(5.03g,34mmol)和na2co3(3.60g,34.0mmol)于dce(10ml)中的搅拌溶液。将所得反应混合物在70℃下搅拌48小时。完成后，将反应混合物在etoac和1nhcl水溶液之间分配。分离各层，并将水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并蒸发，以得到粗制残余物，然后通过以0%至10%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供标题化合物int-a26-1。lc/ms(es,m/z)=187,189[m+h]+。
步骤b–4-溴-1-(1-甲基环丙基)-1h-吡唑(中间体a26)的合成。
将具有磁力搅拌棒的25ml圆底烧瓶抽空，然后用氮气回填三次。在搅拌下将dcm(3208μl)和1m二乙基锌/甲苯(4277µl,4.28mmol)添加至烧瓶中，并将溶液在冰水浴中冷却。在搅拌下逐滴添加tfa(330µl,4.28mmol)/dcm(1069µl)。形成沉淀物。将悬浮液在0℃下搅拌20min。在0℃下在搅拌下逐滴添加二碘甲烷(345μl，4.28mmol)/dcm(713μl)。将所得混合物搅拌20min，然后逐滴添加4-溴-1-(丙-1-烯-2-基)-1h-吡唑(400mg,2.139mmol)/dcm(356μl)，并除去冰水浴。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后用饱和nh4cl水溶液淬灭。分离各层，并将水层用二氯甲烷萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并蒸发，以得到粗制残余物。然后将粗制残余物通过以0%至30%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到中间体a26。lc/ms(es,m/z)=201,203[m+h]+。
中间体a27
步骤a–化合物int-a27-1.甲磺酸(1-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲酯。
将(1-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲醇(200mg,1.074mmol)和et3n(0.210ml,1.503mmol)于dcm(2ml)中的混合物冷却至0℃并用mscl(0.211ml,2.71mmol)处理。将所得混合物在0℃下搅拌1小时。然后添加水(10ml)，并将混合物用乙酸乙酯(3×5ml)萃取。合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤，并浓缩以提供int-a27-1，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤b–化合物int-a27-2.1-((4-溴-1h-吡唑-1-基)甲基)环丁醇的合成。
将int-a27-1(39.6mg,0.150mmol)、cs2co3(133mg,0.408mmol)和4-溴-1h-吡唑(20mg,0.136mmol)于dmf(2ml)中的混合物在90℃下搅拌12小时。冷却后，添加水(10ml)，并将混合物用乙酸乙酯(3×5ml)萃取。合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并浓缩。将粗制残余物通过以50%etoac/石油醚作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以提供int-a27-2。lc/ms(es,m/z)=231,233[m+h]+。
步骤c–中间体a27.4-溴-1-((1-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1h-吡唑的合成。
在0℃下将p-tsoh(4.94mg,0.026mmol)和3,4-二氢-2h-吡喃(21.84mg,0.260mmol)添加至1-((4-溴-1h-吡唑-1-基)甲基)环丁醇(60mg,0.260mmol)于dcm(2ml)中的搅拌溶液中。将所得混合物在40℃下搅拌12小时。冷却后，添加水(20ml)，且然后将混合物用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并浓缩。粗制残余物通过以0-10%etoac/石油醚作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供中间体a27。lc/ms(es,m/z)=315,317[m+h]+。
中间体a28
步骤a–中间体a28.4-溴-1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑的合成。
4-溴-1h-吡唑(200mg,1.361mmol)于dmf(2ml)中的溶液用4-氯四氢-2h-吡喃(656mg,5.44mmol)和k2co3(564mg,4.08mmol)处理。将所得反应混合物在100℃下搅拌3h。冷却后，将混合物过滤并将滤液浓缩。所得残余物通过以0-80%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到中间体a28。lc/ms(es,m/z)=231,233[m+h]+。
中间体a29
步骤a–化合物int-a29-1.1-((4-溴-1h-吡唑-1-基)甲基)环丁-1-醇的合成。
在0℃下，向1-(羟基甲基)环丁-1-醇(9.00g,88.0mmol)于dcm(260ml)中的搅拌溶液中添加三乙胺(17.2ml，123mmol)，随后添加甲磺酰氯(7.0ml,90mmol)。将混合物在0℃下搅拌10分钟，且然后在室温下持续15分钟。完成后，将混合物用水洗涤，随后用盐水洗涤。有机层经无水mgso4干燥，过滤并浓缩，以提供int-a29-1，其直接用于下一步骤中。
步骤b–中间体a29.1-((4-溴-1h-吡唑-1-基)甲基)环丁-1-醇的合成。
在0℃下，向4-溴-1h-吡唑(7.7g,52.4mmol)于dmf(60ml)中的溶液中逐部分添加nah(矿物油中60%,2.30g,57.6mmol)。将混合物在0℃下在氮气下搅拌30分钟。向混合物中添加int-a29-1(13.1g,72.8mmol)于dmf(20ml)中的溶液。将混合物在90℃下加热16小时至完成，然后冷却并用水(70ml)淬灭。将混合物用etoac萃取3次。合并的有机层经无水mgso4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过以0-30%etoac/石油醚作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到中间体a29。lc/ms(es,m/z)=231,233[m+h]+。
表b中的化合物使用与中间体a28和a29类似的程序、在一些情况下使用更高的反应温度从市售的溴杂环和烷基醇或烷基卤化物开始进行制备。
中间体a42
步骤a–化合物int-a42-1.2-(苄基氧基)环丁酮的合成。
在室温搅拌下，向0℃的苯基甲醇(1.2ml,12.50mmol)和hcl-二氧杂环己烷(25ml)的混合物中逐滴添加1,2-双((三甲基甲硅烷基)氧基)环丁-1-烯(2.3g,9.98mmol)。完成后，将混合物在80℃下加热16h，然后浓缩。所得残余物通过以0〜15%乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供标题化合物int-a42-1。
步骤b–化合物int-a42-2.2-(苄基氧基)环丁醇的合成。
在0℃下，向int-a42-1(1708mg,7.75mmol)于meoh(12ml)中的搅拌溶液中逐部分添加nabh4(734mg,19.40mmol)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将反应混合物用水(2ml)淬灭，且然后用dcm(20ml)稀释。将有机层分离，经无水na2so4干燥，并过滤。浓缩滤液的溶剂，以提供int-a42-2。
步骤c–化合物int-a42-3.4-(三氟甲基)苯磺酸2-(苄基氧基)环丁酯的合成。
在室温下向int-a42-2(1407mg,6.32mmol)、4-(三氟甲基)苯-1-磺酰氯(3090mg,12.63mmol)和dmap(154mg,1.263mmol)于dcm(25ml)中的搅拌混合物中添加dipea(4.5ml,25.8mmol)。将所得混合物在室温下搅拌14h。完成后，将反应混合物浓缩。所得粗制残余物通过以0-20%etoac/石油醚作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-a42-3。
步骤c–中间体a42.1-(2-(苄基氧基)环丁基)-4-溴-1h-吡唑的合成。
向4-溴-1h-吡唑(263mg,1.789mmol)于dmso(6.5ml)中的搅拌混合物中添加2-甲基丙-2-醇钾(355mg,3.17mmol)和2int-a42-3(755mg,1.583mmol)。将混合物在微波条件下在120℃下加热1h。将所得混合物冷却，过滤，且然后浓缩。残余物通过使用bostongreenods柱和以10-100%mecn/水(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相hplc纯化，以提供中间体a42。lc/ms(es,m/z)=307,309[m+h]+。
中间体a43
步骤a–化合物int-a43-1.4-溴-1-(5,8-二氧杂螺[3.4]辛-2-基)-1h-吡唑的合成。
向2-溴-5,8-二氧杂螺[3.4]辛烷(0.500g,2.59mmol)和4-溴-1h-吡唑(0.761g,5.18mmol)于dmf(2.6ml)中的溶液中添加碳酸钾(1.074g,7.77mmol)和18-冠醚-6(1,4,7,10,13,16-六氧杂环十八烷,0.137g,0.518mmol)。将混合物搅拌，并在90℃下加热。5min后，将混合物冷却至室温，并向混合物中添加额外的4-溴-1h-吡唑(400mg,2.72mmol)。将所得混合物搅拌并在90℃下加热48小时。将混合物冷却至室温，并在etoac(25ml)和水(25ml)之间分配。分离各层，且然后将水层用etoac(15ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤两次，经无水na2so4干燥，过滤，且然后蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过以0-50%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物。int-a43-1。lc/ms(es,m/z)=259,261[m+h]+。
步骤b–化合物int-a43-2.3-(4-溴-1h-吡唑-1-基)环丁酮的合成。
向int-a43-1(270mg,1.042mmol)和ppts(131mg,0.521mmol)于二氧杂环己烷(2.6ml)中的溶液中添加水(2.6ml)。将混合物搅拌并在85℃下加热95h。将混合物冷却至室温。然后将混合物在etoac和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。分离各层，并将水层用etoac萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，过滤，并蒸发溶剂。所得残余物通过以0-100%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到int-a43-2。lc/ms(es,m/z)=215,217[m+h]+。
步骤c–中间体a43.(1s,3s)-3-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-1-甲基环丁醇的合成。
将int-a43-2(129mg,0.600mmol)于乙醚(3.5ml)中的溶液冷却至0℃。向搅拌的混合物中逐滴添加甲基溴化镁(乙醚中的3m,0.240ml,0.720mmol)。将混合物搅拌16h，使冰浴终止。完成后，将混合物在etoac和20%柠檬酸水溶液之间分配，并搅拌2h。分离各层，且然后将水层用etoac萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过以0-60%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物a43。lc/ms(es,m/z)=231,233[m+h]+。
中间体a44
步骤a–化合物int-a44-1.2-(4-溴-1h-吡唑-1-基)环丁-1-酮的合成。
向2-溴环丁酮(16.2g,109mmol)于mecn(30ml)中的溶液中添加4-溴-1h-吡唑(8.00g,54.4mmol)和碳酸钾(30.1g,218mmol)。将混合物在20℃下搅拌10h。将混合物过滤，且然后蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过使用c18柱和以mecn/水(具有0.1%tfa改性剂)作为洗脱剂的反相hplc纯化，以得到标题化合物int-a44-1。lc/ms(es,m/z)=215,217[m+h]+。
步骤b–中间体a44.2-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-1-甲基环丁-1-醇的合成。
在-78℃下将甲基溴化镁(0.248ml,0.744mmol,乙醚中3m)添加至int-a44-1(80.0mg,0.372mmol)于thf(2ml)中的搅拌混合物中。将所得混合物在该温度下搅拌3h。完成后，将反应混合物用饱和nh4cl(2ml)水溶液淬灭，并用etoac(2×20ml)萃取。合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。将所得残余物通过以30%etoac/石油醚作为洗脱剂的制备型硅胶tlc纯化，以得到中间体a44。lc/ms(es,m/z)=231,233[m+h]+。
中间体a45
步骤a–中间体a45.4-溴-1-((1r,2r或1s,2s)-2-甲氧基环戊基)-1h-吡唑的合成。
在室温下，向mei(0.027ml,0.433mmol)和中间体a7(50mg,0.216mmol)于dmf(2ml)中的混合物中添加nah(17.31mg,0.433mmol)。将所得混合物在该温度下搅拌2h。完成后，将混合物用水(10ml)淬灭，用etoac(15ml×3)萃取。合并的有机层经无水na2so4干燥并过滤。浓缩滤液，以得到中间体a45，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。lc/ms(es,m/z)=245,247[m+h]+。
中间体a46
步骤a–中间体a46.4-溴-1-(2-甲氧基-2-甲基丙基)-1h-吡唑的合成。
在室温下，向mei(0.027ml,0.433mmol)和中间体a1(47mg,0.216mmol)于dmf(2ml)中的混合物中添加nah(17.31mg,0.433mmol)。将所得混合物在该温度下搅拌2h。完成后，将混合物用水(10ml)淬灭，且然后用etoac(15ml×3)萃取。合并的有机层经无水na2so4干燥，且然后过滤。在真空中浓缩滤液，以得到中间体a46，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。lc/ms(es,m/z)=233,235[m+h]+。
中间体a47
步骤a–中间体a47.乙酸(1s,3s)-3-(4-溴-1h-吡唑-1-基)环戊酯的合成。
向乙酸(1s,3r)-3-羟基环戊酯(2.0g,13.87mmol)、4-溴-1h-吡唑(2039mg,13.87mmol)和三苯基膦(3639mg,13.87mmol)于thf(10.20ml)中的搅拌溶液中添加(e)-二氮烯-1,2-二甲酸二异丙酯(2.8g,13.87mmol)。将混合物在60℃下搅拌过夜。完成后，将反应混合物浓缩，并将所得残余物通过以0-80%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供中间体a47。lc/ms(es,m/z)=273,275[m+h]+。
中间体a48、a49
步骤a–中间体a48和a49.5-溴-1-(二氟甲基)-3-甲基吡啶-2(1h)-酮和5-溴-2-(二氟甲氧基)-3-甲基-1,2-二氢吡啶的合成。
在0℃下，向5-溴-3-甲基吡啶-2(1h)-酮(5g,26.6mmol)和溴化锂(4.62g,53.2mmol)于dmf(50ml)中的搅拌溶液中添加2-氯-2,2-二氟乙酸钠(8.11g,53.2mmol)和nah(1.170g,29.3mmol)。将所得混合物在80℃下加热16h。完成后，将反应混合物浓缩。将残余物在乙酸乙酯和饱和nh4cl水溶液之间分配。将有机层分离，用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩。残余物通过以0~25%乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供中间体a48和a49的混合物。lc/ms(es,m/z)=240,242[m+h]+。
中间体b1、b2
步骤a–化合物int-b1-1.2-甲基-1-(4-硝基-1h-吡唑-1-基)丙-2-醇的合成。
向500ml圆底烧瓶中添加4-硝基-1h-吡唑(15.0g,133mmol)、碳酸铯(64.8g,199mmol)、dmf(195ml)和2,2-二甲基环氧乙烷(23.56ml,265mmol)。将所得混合物在80℃下加热16小时。将混合物冷却，过滤，并用etoac洗涤。蒸发滤液的溶剂。然后将所得残余物通过以0-80%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到int-b1-1。lc/ms(es,m/z)=186[m+h]+。
步骤b–化合物int-b1-2.1-(4-氨基-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
在n2气氛下，向int-b1-1(18.8g,102mmol)于乙酸乙酯(300ml)中的溶液中添加10%碳载钯。将混合物脱气并在氢气气球下搅拌21小时。将混合物通过celite®(硅藻土)过滤。蒸发滤液的溶剂，得到int-b1-2。lc/ms(es,m/z)=156[m+h]+。
步骤c–化合物int-b1-3：(3r,6s)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-6-i-3-甲酸甲酯和int-b2-1：(3s,6r)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯的合成。
向100ml烧瓶中装入int-b1-2(4.66g,30.0mmol)、2-亚甲基-5-氧代己酸甲酯(3.12g,20.0mmol)和libf4(1.88g,20.0mmol)。向烧瓶中添加tfe(31.2ml)。该烧瓶装备有回流冷凝器，其具有氮气的入口。将混合物在回流下加热48小时。将反应混合物冷却至室温，并添加10%碳载钯(0.639g,6.00mmol)。将混合物置于氢气气氛下，并在室温下搅拌6小时。将混合物过滤，且然后蒸发滤液的溶剂。将残余物通过以0-4%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到外消旋的顺式混合物，其通过使用ad-h柱和以15%meoh(具有0.1%nh4oh改性剂)作为助溶剂的手性sfc拆分，得到int-b1-3(第一洗脱峰)和int-b2-1(第二洗脱峰)。lc/ms(es,m/z)=296[m+h]+。
步骤d–中间体b1：(3r,6s)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼和中间体b2：(3s,6r)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼的合成。
向20ml微波小瓶中添加甲基int-b1-3(300mg,1.016mmol)、乙醇(5ml)和水合肼(0.305ml,6.09mmol)。将小瓶密封并在微波中在180℃下加热3小时。完成后，将混合物浓缩，并将残余物与甲苯进行3次共蒸发，得到中间体b1。lc/ms(es,m/z)=296[m+h]+。基于经由振动圆二色性立体化学确定从中间体b1制备的中间体来指定中间体b1的绝对立体化学。
以与对于制备中间体b1所述的方式类似的方式制备中间体b2，但用中间体int-b2-1取代int-b1-3。lc/ms(es,m/z)=296[m+h]+。
中间体b3
步骤a–化合物int-b3-1.2-甲基-2-(4-硝基-1h-吡唑-1-基)丙酸乙酯的合成。
向4-硝基-1h-吡唑(3.00g,26.5mmol)和2-溴-2-甲基丙酸乙酯(5.69g,29.2mmol)于dmf(50ml)中的搅拌混合物中添加k2co3(11.00g,80.00mmol)。将混合物搅拌并在80℃下加热10h。将混合物冷却，过滤，并蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过以5-20%etoac/石油醚作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物int-b3-1。lc/ms(es,m/z)=228[m+h]+。
步骤b–化合物int-b3-2.2-甲基-2-(4-硝基-1h-吡唑-1-基)丙-1-醇的合成。
向int-b3-1(3.00g,13.2mmol)于etoh(50ml)中的搅拌混合物中添加nabh4(0.999g,26.4mmol)。将混合物在室温下搅拌2h。完成后，将混合物用水(40ml)稀释，并用etoac(2×50ml)萃取。合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂，以得到int-b3-2。lc/ms(es,m/z)=186[m+h]+。
步骤c–化合物int-b3-3.2-(4-氨基-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-1-醇的合成。
使用与int-b1-2的合成的步骤b的程序类似的程序进行int-b3-3的合成的步骤c，以得到标题化合物int-b3-3。lc/ms(es,m/z)=156[m+h]+。
步骤d–化合物int-b3-4.1-(1-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-甲酸甲酯的合成。
使用与int-b1-3和int-b2-1的合成的步骤c的程序类似的程序进行int-b3-4的合成的步骤d，除了将int-b3-4分离为外消旋非对映异构体的混合物。lc/ms(es,m/z)=296[m+h]+。
步骤d–中间体b3：(3r,6s和3s,6r)1-(1-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼和(3s,6s和3r,6r)1-(1-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼的合成
使用与中间体b1的合成的步骤d的程序类似的程序进行中间体b3的合成的步骤d。lc/ms(es,m/z)=296[m+h]+。
使用与对于合成中间体b3所述的程序类似的程序，取代适当的中间体和起始材料，制备下表c中的中间体。
中间体b11
步骤a–化合物int-b11-1.3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯的合成。
向100ml圆底烧瓶中添加2,6-二-叔丁基吡啶(11.1ml,49.4mmol)、3-氧代环己烷-1-甲酸乙酯(6.32ml,35.3mmol)和dce(70.5ml)。将混合物搅拌并冷却至0℃。经5分钟向混合物中逐滴添加tf2o(45.8ml,45.8mmol,thf中的1m)。将混合物搅拌30分钟，且然后温热至室温，持续2小时。完成后，将反应混合物浓缩，且然后向残余物中添加1:1dcm:己烷(20ml)，且然后固体沉淀。通过过滤除去固体。滤饼用1:1dcm:己烷洗涤。蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过以0-100%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到标题化合物int-b11-1。
步骤b–化合物int-b11-2.3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯的合成。
向100ml圆底烧瓶中添加乙酸钾(3.96g,40.4mmol)、pd(dppf)cl2(0.660g,0.808mmol)、双(频哪醇合)二硼(8.21g,32.3mmol)和3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯(7.08ml,26.9mmol)。将烧瓶抽空，并用氮气再填充三次。向烧瓶中添加dma(40ml)。将混合物搅拌并在90℃下加热16小时。将混合物冷却至室温，并倒入含有乙醚(150ml)的烧瓶中。将混合物搅拌15min。通过过滤除去固体。用水(3×100ml)洗涤滤液。有机层经无水硫酸镁干燥，过滤，并蒸发溶剂。所得残余物通过以0-30%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以得到标题化合物int-b11-2。lc/ms(es,m/z)=281[m+h]+。
步骤c–化合物int-b11-3a和int-d11-3b.(r或s)-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯和(s或r)-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯的合成。
向100ml烧瓶中添加pd(dppf)cl2(0.708g,0.968mmol)、k3po4(15.4g,72.6mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯(7.12g,25.4mmol)、1-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(5.30g,24.2mmol)和1,4-二氧杂环己烷(60ml)和水(12ml)。将混合物用氮气脱气5分钟。将所得混合物搅拌并在90℃下加热2小时。完成后，将混合物稀释于etoac(10ml)中，并通过顶部有硫酸钠的celite®(硅藻土)过滤。蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过以0-70%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以得到外消旋物。外消旋物通过使用cca柱和以具有nh4oh改性剂的15%meoh作为助溶剂的手性sfc拆分，以分别得到int-b11-3a(第一洗脱峰)和int-b11-3b(第二洗脱峰)。lc/ms(es,m/z)=293[m+h]+。
步骤d–化合物int-b11-4a.(1r,3r或1s,3s)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酸乙酯的合成。
向250ml圆底烧瓶中添加(r或s)-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己-3-烯-1-甲酸酯(int-b11-3a)(933mg,3.19mmol)、乙酰丙酮钴(ii)水合物(220mg,0.798mmol)和thf(50ml)。向混合物中添加苯基甲硅烷(1.181ml,9.57mmol)，并将混合物在室温下暴露于空气搅拌5天。向混合物中添加tbaf(6.38ml,6.38mmol)于thf中的1m溶液。将混合物搅拌15min。蒸发溶剂。所得残余物通过以0-10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到(1r,3r或1s,3s)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酸乙酯(int-b11-4a)。lc/ms(es,m/z)=311[m+h]+。
步骤e–中间体b11.(1r,3r或1s,3s)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己烷-1-碳酰肼的合成。
向20ml小瓶中添加(1r,3r或1s,3s)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酸乙酯(int-b11-4a)(190mg,0.612mmol)、etoh(1.5ml)和水合肼(0.210ml,3.67mmol)。将混合物在90℃下加热24h。蒸发溶剂，以得到标题中间体b11。lc/ms(es,m/z)=297[m+h]+。
中间体b12
步骤a–中间体b12.3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己烷-1-碳酰肼的合成。
向100ml烧瓶中添加(r或s)-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己-3-烯-1-甲酸乙酯(int-b11-3a)(444mg,1.519mmol)、10%碳载pd(162mg,0.152mmol)和etoac(30ml)。将混合物真空脱气，并用来自气球的氢气再填充三次。将混合物在氢气气氛下搅拌1h。将混合物通过celite®(硅藻土)过滤，并蒸发滤液的溶剂。向残余物中添加etoh(2.5ml)和水合肼(0.511ml,8.96mmol)。将混合物在90℃下加热24h。蒸发溶剂，以得到作为对映异构体纯的非对映异构体的混合物的3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己烷-1-碳酰肼(中间体b12)。lc/ms(es,m/z)=281[m+h]+。
使用与对于制备中间体b12所述的程序类似的程序制备表d中的中间体b13，但以int-b11-3b开始。
中间体b14
步骤a–化合物int-b14-1.外消旋-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-甲酸乙酯的合成。
向40ml反应小瓶中装入外消旋-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-甲酸乙酯(1.00g,6.36mmol)和thf(15ml)。向混合物中添加4-溴-1-甲基-1h-吡唑(4.96ml,48.0mmol)，随后添加t-buxphospdg3(2.02g,2.54mmol)和叔丁醇钠(4.61g,48.0mmol)。将混合物通过n2鼓泡10分钟。将小瓶密封并在65℃下加热24小时。将混合物冷却至室温，稀释至etoac(40ml)，并通过celite®(硅藻土)过滤。蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过以0-10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物int-b14-1。lc/ms(es,m/z)=238[m+h]+。
步骤b–中间体b14.(r)-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼的合成。
向圆底烧瓶中装入int-b14-1(7.72g,32.5mmol)和etoh(77ml)。向混合物中添加水合肼(31.7ml,651mmol)。所述圆底烧瓶装备有回流冷凝器，且然后在80℃下加热16小时。完成后，将混合物冷却至室温，并将溶剂蒸发，以得到(rs)-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼。外消旋混合物通过使用ad-h柱和以40%meoh(0.25%dea改性剂)作为助溶剂的手性sfc分离进行拆分，以得到标题化合物(r或s)-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼(中间体b14，第二洗脱峰)。lc/ms(es,m/z)=224[m+h]+。
中间体b15
步骤a–化合物b15.(r)-3-(肼羰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成。
向100ml圆底烧瓶中添加(r)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-甲酸(2.00g,9.29mmol)、1,1'-羰基二咪唑(1.96g,12.1mmol)和thf(18.6ml)。将混合物在60℃下加热30分钟。完成后，将混合物冷却至室温，并经25min逐滴转移至水合肼(0.447g,13.9mmol)于thf(10ml)中的搅拌混合物中。将所得混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用水(50ml)淬灭，并用etoac(2×60ml)萃取。合并的有机层经无水mgso4干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂，以得到标题化合物中间体b15。lc/ms(es,m/z)=230[m+h]+。
中间体c1
步骤a–化合物int-c1-1.1-(2-氰基-5-甲氧基苯基)-3-(2,4-二甲氧基苄基)脲的合成。
向2-氨基-4-甲氧基苯甲腈(6.0g,40.5mmol)于吡啶(12ml)和二氯甲烷(12ml)中的搅拌溶液中添加1-(异氰酰甲基)-2,4-二甲氧基苯(6.75ml,40.5mmol)。将所得反应混合物密封，且然后在40℃下加热过夜。完成后，将反应物冷却，并用dcm(100ml)稀释，以得到稠的悬浮液。将悬浮液过滤并用最少量的dcm洗涤。将收集的材料重悬浮于100mldcm中，并超声处理20min。过滤悬浮液以提供标题化合物int-c1-1。lc/ms(es,m/z)=342[m+h]+。
步骤b–中间体c1.2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-4-甲氧基苯甲腈的合成。
在0℃下，向int-c1-1(1.0g,2.93mmol)、三苯基膦(1.537g,5.86mmol)和三乙胺(1.633ml,11.72mmol)于dcm(26.4ml)中的溶液中添加四溴化碳(1.943g,5.86mmol)于dcm(2.93ml)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌30min，然后浓缩至干燥。将所得残余物重新溶解于最少量的dcm中，过滤，并将滤液通过以5-50%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以提供中间体c1。lc/ms(es,m/z)=346[m+na]+。
中间体c4
步骤a–化合物int-c4-1.2-溴-1-氯-4-(二氟甲基)苯的合成。
在0℃下，向3-溴-4-氯苯甲醛(1.9g,8.66mmol)于dcm(15ml)中的溶液中添加双(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(6.41ml,17.32mmol,甲苯中2.7m)。将混合物在室温下搅拌24小时。完成后，将混合物冷却至0℃，且然后经5分钟逐滴添加饱和碳酸氢钠(30ml)。将混合物稀释于etoac(30ml)和水(30ml)中。将有机层分离，用水(2×30ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并过滤。蒸发滤液的溶剂，得到int-c4-1。
步骤b–化合物int-c4-2.n-(2-氯-5-(二氟甲基)苯基)-1,1-二苯基亚甲胺(methanimine)的合成。
向20ml微波小瓶中添加pd-binapg3(216mg,0.217mmol)、碳酸铯(2834mg,8.70mmol)、int-c4-1(0.467ml,2.90mmol)、二苯基亚甲胺(methanimine)(0.535ml,3.19mmol)和二氧杂环己烷(14ml)。将混合物搅拌并在微波中在170℃下加热35分钟。完成后，向混合物中添加etoac(10ml)并过滤。蒸发溶剂以提供int-c4-2。该材料不经进一步纯化即用于下一步骤中。lc/ms(es,m/z)=342[m+h]+。
步骤c–化合物int-c4-3.2-氯-5-(二氟甲基)苯胺的合成。
向以上获得的int-c4-2(991mg,2.9mmol)于meoh(1.5ml)中的溶液中添加浓hcl水溶液(4.76ml,58.0mmol)。将混合物搅拌并在80℃下加热30分钟。完成后，将混合物稀释于水(30ml)中，且然后用dcm(3×30ml)萃取。有机层经硫酸钠干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。残余物通过以0-50%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-c4-3。lc/ms(es,m/z)=178[m+h]+。
步骤d–化合物中间体c4.2-氨基-4-(二氟甲基)苯甲腈的合成。
向20ml小瓶中添加锌(10.93mg,0.167mmol)、氰化锌(196mg,1.672mmol)、2-氯-5-(二氟甲基)苯胺(297mg,1.672mmol)和t-buxphospdg3(66.4mg,0.084mmol)。将小瓶密封，抽空，并用n2再填充三次。向混合物中添加dma(3ml)。将所得混合物搅拌并在110℃下加热2小时。完成后，将反应混合物冷却至室温。向混合物中添加乙醚(50ml)，然后将混合物通过celite®(硅藻土)过滤。滤液用水(3×50ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。残余物通过以0-65%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到中间体c4。lc/ms(es,m/z)=169[m+h]+。
中间体c5
步骤a–化合物int-c5-1.4-(甲基磺酰基)-2-硝基苯甲酰胺的合成。
经30秒向4-(甲基磺酰基)-2-硝基苯甲酸(1.5g,6.12mmol)于dcm(35ml)和dmf(0.024ml,0.306mmol)的混合物中逐滴添加草酰氯(0.803ml,9.18mmol)。将所得混合物搅拌30分钟，此时混合物变成溶液。向另一个250ml烧瓶中添加氨(61.2ml,30.6mmol)于二氧杂环己烷中的0.5m溶液。烧瓶装备有添加漏斗，向其中添加酰氯的溶液。将含有氨的烧瓶冷却至0℃，且然后经10分钟逐滴添加酰氯。完成后，将反应混合物用1:1dcm:meoh(100ml)稀释并过滤。滤饼用1:1dcm:meoh(5×50ml)洗涤。将滤液浓缩以提供int-c5-1。
步骤b–化合物int-c5-2.4-(甲基磺酰基)-2-硝基苯甲腈的合成。
向40ml小瓶中添加int-c5-1(1.02g,3.13mmol)和pocl3(2.88ml,30.9mmol)。将小瓶密封，且然后装备有n2入口，并在90℃下加热35分钟。完成后，将混合物冷却至室温。将混合物用无水乙醚(10ml)磨碎，并通过过滤收集固体，用无水乙醚(3×5ml)洗涤，以得到int-e5-2。lc/ms(es,m/z)=227[m+h]+。
步骤c–中间体c5.2-氨基-4-(甲基磺酰基)苯甲腈的合成。
向100ml圆底烧瓶中添加碳载pd(119mg,0.112mmol)、4-(甲基磺酰基)-2-硝基苯甲腈(507mg,2.241mmol)和etoac(20ml)。将混合物脱气，然后在氢气气球下搅拌60小时。完成后，将反应混合物通过celite®(硅藻土)过滤，并用meoh洗涤。蒸发滤液的溶剂，以提供标题化合物中间体c5。lc/ms(es,m/z)=197[m+h]+。
中间体c6
步骤a–化合物中间体c6.2-氨基对苯二甲腈的合成。
向4ml小瓶中添加xphos(0.113g,0.237mmol)、乙酸钯(ii)(0.027g,0.119mmol)、硫酸氢钾(0.032g,0.237mmol)和dma(2ml)。将混合物在65℃下加热15分钟。向20ml微波小瓶中添加锌(0.016g,0.237mmol)、二氰基锌(1.114g,9.49mmol)、2,5-二溴苯胺(1.19g,4.74mmol)和dma(8ml)。向微波小瓶中添加来自4ml小瓶的催化剂混合物。将所得混合物搅拌并在130℃下加热1小时。完成后，将混合物稀释于乙醚(70ml)中，并用水(3×70ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤，并蒸发溶剂，得到中间体c6。
使用与中间体c1类似的程序制备下表e中的中间体，取代适当的中间体和起始材料。
中间体d1
步骤a–化合物d1-1.(r)-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。
将(r)-哌啶-1,3-二甲酸1-(叔丁基)酯3-甲酯(13.3g,51.7mmol)和水合肼(13.0g,259mmol)的甲醇溶液(50ml)在80℃下搅拌12小时。在减压下除去溶剂。残余物通过以0-10%甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以得到标题化合物d1-1。lc/ms(es,m/z)=244[m+h]+。
步骤b–化合物d1-2.(r)-3-(2-(2-氯-8-甲氧基喹唑啉-4-基)肼-1-羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。
在70℃下，经20分钟，向d1-1(11.2g,46.1mmol)和n,n-二异丙基乙胺(12.0g,92mmol)的四氢呋喃溶液(200ml)中逐滴添加2,4-二氯-8-甲氧基喹唑啉(10.4g,35mmol)的四氢呋喃溶液(150ml)。将所得反应混合物在70℃下搅拌12小时。完成后，将反应混合物在减压下浓缩，用二氯甲烷(100ml)稀释，且然后用水(50ml×2)洗涤。有机层经无水硫酸镁干燥，并在减压下浓缩，以得到标题化合物d1-2。lc/ms(es,m/z)=436[m+h]+。
步骤c–化合物d1-3.(r)-3-(2-(2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基喹唑啉-4-基)肼-1-羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。
将d1-2(16g,37mmol)、2,4-二甲氧基苄胺(7.4g,44.4mmol)和n,n-二异丙基乙胺(9.5g,74mmol)于1,4-二氧杂环己烷(300ml)中的溶液在80℃下搅拌12小时。完成后，将溶液在减压下浓缩。将所得残余物用二氯甲烷(100ml)稀释，并用水(50ml×2)洗涤。有机层经无水硫酸镁干燥并浓缩，以得到标题化合物d1-3。lc/ms(es,m/z)=567[m+h]+。
步骤d–中间体d1.(r)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。
将n,o-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(100ml)和d1-3(21g,37mmol)的溶液在140℃下搅拌12小时。完成后，将反应混合物在减压下浓缩。所得残余物通过以20%etoac/石油醚作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物中间体d1。lc/ms(es,m/z)=549[m+h]+。
使用与对于制备中间体d1所述的程序类似的程序，在步骤a中取代适当的酯和适当取代的2,4-二氯喹唑啉，制备表f中的以下中间体。
中间体e1
步骤a–中间体e1.(r)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。
在室温下，将(r)-3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.66g,6.82mmol)于甲苯(20ml)中的溶液逐滴添加至c1(2.1g,6.49mmol)/甲苯(20ml)。将所得混合物在100℃下加热3小时。完成后，将反应混合物冷却至室温并除去甲苯。所得残余物通过以20-60%乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以得到中间体e1。lc/ms(es,m/z)=549[m+h]+。
与对于制备中间体e1所述类似地、在步骤a中用适当的酰肼和适当取代的苯甲腈制备表g中的以下中间体。
中间体f1
步骤a–外消旋，顺式-3-(4-溴-1h-吡唑-1-基)丁-2-醇
向4-溴-1h-吡唑(2.00g,13.6mmol)和碳酸铯(13.3g,40.8mmol)于mecn(20ml)中的混合物中添加顺式-2,3-二甲基环氧乙烷(2.38ml,27.2mmol)。将混合物搅拌并在80℃下加热16h。将混合物冷却至室温，并通过过滤除去固体。将滤液浓缩，并将残余物用dcm稀释，并用水和盐水溶液洗涤。有机层经硫酸钠干燥。残余物通过以0-100%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以得到外消旋，顺式-3-(4-溴-1h-吡唑-1-基)丁-2-醇。lcms(c7h11brn2o)(es,m/z)[m+h]+:219,221。
步骤b–化合物f1外消旋-4-溴-1-((2r,3r)-3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丁-2-基)-1h-吡唑的合成
向外消旋，顺式-3-(4-溴-1h-吡唑-1-基)丁-2-醇(1.10g,5.02mmol)于dcm(21ml)中的溶液中添加3,4-二氢-2h-吡喃(2.290ml,25.1mmol)和ppts(1.26g,5.02mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用dcm(5ml)稀释，用饱和nahco3和盐水溶液洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。残余物通过用0-30%etoac/己烷的硅胶色谱法纯化，以得到中间体f1。lcms(c12h19brn2o2)(es,m/z)[m+h]+:304,306。
以与对于制备中间体f1所述的方式类似的方式从适当的起始材料制备下表h中的中间体。
中间体f4
向4-溴-1h-吡唑(2.00g,13.6mmol)和3-溴-3-甲基丁-2-酮(3.37g,20.4mmol)于mecn(20ml)中的混合物中添加碳酸铯(6.65g,20.4mmol)。将混合物在65℃下加热16h。通过过滤除去固体，并用乙酸乙酯(30ml)洗涤。蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过用3-30%etoac/己烷的硅胶色谱法纯化，以得到中间体f4。lcms(c8h11brn2o)(es,m/z)[m+h]+:231,233。
实施例1
实施例1的化合物的制备
步骤a–化合物int-1a.(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向中间体d1(8.2g,15mmol)于1,4-二氧杂环己烷(20ml)中的溶液中添加4m盐酸/二氧杂环己烷(18ml,75mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时。完成后，将反应混合物在减压下浓缩。所得残余物通过以7%n-氨于甲醇/二氯甲烷中的6%溶液作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到int-1a。lc/ms(es,m/z)=449[m+h]+。
步骤b–实施例1.(r)-7-甲氧基-2-(1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
在氮气下，向装备有搅拌棒的5ml微波小瓶中装入int-1a(100mg,0.214mmol)、t-buxphospdg3(68.1mg,0.086mmol)和叔丁醇钠(82mg,0.86mmol)。向该混合物中添加1-(3-溴-1h-1,2,4-三唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(94mg,0.429mmol)/thf(4ml)。将所得混合物用氮气鼓泡10分钟。然后将小瓶用盖密封并在90℃下搅拌16小时。完成后，将反应物冷却至室温，且然后过滤以除去固体沉淀物。将滤液浓缩。向所得残余物中添加tfa(0.5ml)，并将残余物在50℃下搅拌2小时。将混合物冷却至室温并浓缩。所得残余物通过以具有0.1%tfa的0-100%mecn/h2o作为洗脱剂的反相hplc(sunfireprepc18obd,10um,30x150mm柱)纯化，得到本发明的标题化合物实施例1。
使用与用于制备实施例1的程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物，制备表1中显示的本发明的实施例化合物。
实施例120
实施例120的化合物的制备
步骤a–化合物int-120a.(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-2-(1-(1-三苯甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向含有(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(100mg,0.223mmol)/thf(2ml)的反应小瓶中添加4-溴-1-三苯甲基-1h-吡唑(217mg,0.557mmol)、甲磺酰基(methanesulfonato)(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-异丙基-1,1’-联苯)(2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(t-buxphospdg353.1mg,0.067mmol)和叔丁醇钠(64.3mg,0.669mmol)。将所得反应混合物用n2吹扫10分钟，然后密封并在90℃下加热10小时。完成后，反应混合物通过以4%meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到标题化合物int-120a。lc/ms(es,m/z)=757[m+h]+。
步骤b–化合物int-120b.(r)-2-(1-(1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向int-120a(122mg,0.161mmol)于meoh(2ml)中的搅拌溶液中添加氯化氢/二氧杂环己烷(403µl,1.61mmol)，然后在室温下搅拌1小时。完成后，将反应物浓缩以提供int-120b。粗品不经进一步纯化即用于下一步骤中。lc/ms(es,m/z)=515[m+h]+。
步骤c–实施例120.(r)-2-(1-(1-(2-氨基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
将int-120b(23mg,0.045mmol)、4,4-二甲基-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2,2-二氧化物(22.46mg,0.089mmol)和2,3,4,6,7,8,9,10-八氢嘧啶并[1,2-a]氮杂䓬(13.61mg,0.089mmol)于乙腈(1ml)的混合物在微波反应器上在130℃下加热6小时。将反应物浓缩，并将所得残余物通过使用c18柱(sunfireprepc18obd10um30x150mm柱)和以具有0.1%tfa的10%-100%乙腈/水作为洗脱剂的制备型反相hplc纯化，以提供粗制中间体。
然后将上述中间体添加至1mltfa中，并在60℃下加热1小时。完成后，将反应混合物冷却，且然后浓缩。残余物通过使用c18柱(sunfireprepc18obd10um30x150mm柱)和以具有0.1%tfa的10%-100%乙腈/水作为洗脱剂的制备型反相hplc纯化，以提供120。
使用与用于制备实施例120的程序类似的程序，使用适当的烷基卤化物代替步骤c中的4,4-二甲基-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸叔丁酯2,2-二氧化物，制备表2中显示的本发明的实施例化合物。
实施例123
实施例123的化合物的制备
步骤a–化合物int-123a.(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-2-(1-(1-((甲基硫基)甲基)-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
将int-120b(269mg,0.488mmol)和(氯甲基)(甲基)硫烷(49.2µl,0.586mmol)于二氧杂环己烷(5ml)中的混合物添加至碳酸铯(318mg,0.976mmol)中。将所得混合物在75℃下搅拌过夜，且然后冷却至室温，并用水和dcm稀释。分离dcm层，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过以5%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供标题化合物int-123a。lc/ms(es,m/z)=575[m+h]+。
步骤b–实施例123.(r)-7-甲氧基-2-(1-(1-((甲基磺酰基)甲基)-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向int-123a(95mg,0.165mmol)于meoh(551µl)和水(551µl)中的溶液中添加oxone®(过氧一硫酸钾,203mg,0.331mmol)。将混合物在室温下搅拌10分钟。完成后，然后将反应混合物浓缩。然后将所得残余物用水和dcm稀释。分离dcm层，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过以10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供标题化合物实施例123。
实施例124a和124b
实施例124a和124b的化合物的制备
步骤a–化合物124a、124b.(r)-3-((4-((r)-3-(5-氨基-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)甲基)环戊-1-酮、(s)-3-((4-((r)-3-(5-氨基-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)甲基)环戊-1-酮的合成。
向含有int-1a(100mg,0.223mmol)/thf(2ml)的反应小瓶中添加(1s,2s)-4-((4-溴-1h-吡唑-1-基)甲基)-2-氟环戊醇(35.2mg,0.134mmol)、甲磺酰基(methanesulfonato)(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-异丙基-1,1’-联苯)(2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(t-buxphospdg3,31.9mg,0.040mmol)和叔丁醇钠(77mg,0.803mmol)。将所得反应混合物通入n2鼓泡10分钟，然后将小瓶密封并在90℃下加热10小时。完成后，反应混合物通过以4%meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到22mg极性较高的异构体和21mg极性较低的异构体。
向上述21mg极性较低的异构体中添加1mltfa，并将混合物在60℃下加热1h。然后将所得混合物通过使用c18柱(sunfireprepc18obd10um30x150mm柱)和以具有0.1%tfa的10%-100%乙腈/水作为洗脱剂的制备型反相hplc纯化，以提供实施例124a。
向上述22mg极性较高的异构体中添加1mltfa，并将混合物在60℃下加热1h。然后将所得混合物通过使用c18柱(sunfireprepc18obd10um30x150mm柱)和以具有0.1%tfa的10%-100%乙腈/水作为洗脱剂的制备型反相hplc纯化，以提供实施例124b。
实施例125
实施例125的化合物的制备
步骤a–化合物int-125a.(r)-5-氨基-2-(1-(1-环丙基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-7-醇的合成。
在25℃下，向7(30mg,0.074mmol)于1,2-二氯乙烷(2ml)中的溶液中添加bbr3(0.056ml,0.593mmol)。将所得混合物在100℃下搅拌1小时。完成后，将反应混合物冷却，并添加5ml水。然后将混合物碱化至ph8~9，并用dcm(3×5ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩，以得到int-125a。lc/ms(es,m/z)=391[m+h]+。
步骤b–化合物int-125b.(r,e)-n'-(2-(1-(1-环丙基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-7-羟基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-基)-n,n-二甲基甲脒的合成。
在25℃下，向int-125a(20mg,0.051mmol)于etoh(1ml)中的溶液中添加n,n-二甲基甲酰胺(22.46mg,0.307mmol)。将所得混合物在40℃下搅拌18小时。完成后，将反应混合物冷却，用dcm(15ml)稀释，且然后用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。残余物通过以10%meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以提供int-125b。lc/ms(es,m/z)=446[m+h]+。
步骤c–实施例125.(r)-2-(1-(1-环丙基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-7-(二氟甲氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
在-78℃下向int-125b(20mg,0.045mmol)于1:1acn:h2o(1.0ml)中的搅拌混合物中添加2-氯-2,2-二氟-1-苯基乙酮(42.8mg,0.224mmol)和koh(52.9mg,0.943mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌18小时。完成后，将混合物冷却，用dcm(20ml)稀释，且然后用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩。所得残余物通过以10%meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到实施例125。
使用与用于制备实施例125的程序类似的程序，取代适当的起始材料，制备表3中显示的本发明的实施例化合物。
实施例127
实施例127的化合物的制备
步骤a-化合物int-127a.4-(肼羰基)-2-氮杂双环[2.1.1]己烷-2-甲酸叔丁酯的合成。
向2-氮杂双环[2.1.1]己烷-2,4-二甲酸2-叔丁酯4-甲酯(1g,4.14mmol)于乙醇(10ml)中的搅拌溶液中添加水合肼(4.15g,83mmol)。将混合物在90℃下搅拌5小时。完成后，将混合物浓缩，以得到粗制int-127a。其不经纯化即用于下一步骤。lc/ms(es,m/z)=242[m+h]+。
步骤b-化合物int-127b.4-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-氮杂双环[2.1.1]己烷-2-甲酸叔丁酯的合成。
向int-127a(210mg,0.870mmol)于nmp(2ml)中的搅拌溶液中添加2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-3-甲氧基苯甲腈(c7,298mg,0.923mmol)。将混合物在170℃下在微波加热下搅拌1.5小时。完成后，将混合物用水(20ml)稀释，且然后用dcm(20ml×2)萃取。合并的有机层在减压下浓缩。所得残余物通过以0~30%乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到int-127b。lc/ms(es,m/z)=547[m+h]+。
步骤c–化合物int-127c.2-(2-氮杂双环[2.1.1]己-4-基)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
将int-127b(200mg,0.366mmol)于甲酸(2ml)中的溶液在15℃下搅拌5h。完成后，将混合物在减压下浓缩。将残余物用dcm(20ml)稀释，用nahco3水溶液(20ml)和盐水(10ml)洗涤，且然后经无水na2so4干燥，过滤，并浓缩，以得到粗制的int-127c，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。lc/ms(es,m/z)=447[m+h]+。
步骤d-化合物int-127d.n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-2-(2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-2-氮杂双环[2.1.1]己-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
在n2下，向int-127c(20mg,0.045mmol)、4-溴-1-甲基-1h-吡唑(22mg,0.137mmol)和t-bux-phospdg3(11mg,0.014mmol)于thf(0.5ml)中的溶液中添加叔丁醇钠(18mg,0.187mmol)。然后将所得混合物在100℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却，且然后浓缩。将所得残余物通过以50%etoac/己烷作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到int-127d。lc/ms(es,m/z)=527[m+h]+。
步骤e-实施例127.7-甲氧基-2-(2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-2-氮杂双环[2.1.1]己-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向int-127d(18mg,0.034mmol)于dcm(1ml)中的溶液中添加tfa(2ml)。将反应混合物在45℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却，且然后浓缩。所得残余物通过使用c18柱(sunfireprepc18obd10um30x150mm柱)和以0-100%acn/h2o(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相hplc纯化，以得到标题化合物127。
实施例128a和128b
实施例128a和128b的化合物的制备
步骤a–化合物int-128a.外消旋，顺式-2-甲基-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-甲酸乙酯的合成。
在n2下，在手套箱中，向外消旋，顺式-2-甲基哌啶-3-甲酸乙酯(40mg,0.234mmol)和4-溴-1-甲基-1h-吡唑(113mg,0.701mmol)于thf(1ml)的溶液中添加甲磺酰基(methanesulfonato)(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-异丙基-1,1’-联苯)(2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(55.7mg,0.070mmol)和叔丁醇钠(90mg,0.934mmol)。然后将所得混合物在100℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却并浓缩。所得残余物通过以0-100%acn/水(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相c18柱纯化，以提供标题化合物int-128a。lc/ms(es,m/z)=252[m+h]+。
步骤b–化合物int-128b.外消旋，顺式-2-甲基-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼的合成。
向int-128a(30mg,0.119mmol)于乙醇(5ml)中的搅拌溶液中添加水合肼(120mg,2.387mmol)。将混合物在90℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却，且然后浓缩。所得残余物通过以0-100%acn/水(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相c18柱纯化，以提供标题化合物int-128b。lc/ms(es,m/z)=238[m+h]+。
步骤c–化合物int-128c的合成。
向int-128b(20mg,0.084mmol)于nmp(0.5ml)中的搅拌溶液中添加2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-3-甲氧基苯甲腈(c7,30mg,0.093mmol)。将所得混合物在微波加热下在170℃下搅拌1.5小时。完成后，将反应混合物通过以0-100%acn/水(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相c18柱纯化，以提供int-128c。lc/ms(es,m/z)=544[m+h]+。
步骤c–实施例128a和128b的合成。
向int-128c(15mg,0.028mmol)于dcm(2ml)中的溶液中添加tfa(1ml)。将反应混合物在45℃下搅拌16h。完成后，将反应混合物冷却，浓缩，且然后通过以0-100%acn/水(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相c18柱纯化，以提供外消旋化合物128。然后将产物通过sfc(chiralpakad-3柱，以40%乙醇作为助溶剂)拆分，以得到标题化合物实施例128a(峰1)和实施例128b(峰2)。
实施例129
实施例129的化合物的制备
使用与用于制备实施例128a和128b的化合物的程序类似的程序(除了没有手性拆分)，取代适当的起始芳基卤化物，制备实施例129。
实施例130a和130b
实施例130a和130b的化合物的制备
步骤a–化合物int-130a.2-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-基)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
将中间体e6(141mg,0.245mmol)于甲酸(3ml)中的溶液在室温下搅拌3小时。完成后，将混合物在减压下浓缩。将所得残余物用dcm(20ml)稀释，用nahco3水溶液(20ml)、盐水(10ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤，并浓缩，以得到粗制的int-130a，其不经纯化即用于下一步骤。lc/ms(es,m/z)=475[m+h]+。
步骤b–实施例130a和130b的合成。
向装备有搅拌棒的5ml微波小瓶中装入int-130a(68mg,0.143mmol)和thf(896µl)。向混合物中添加4-溴-1-甲基-1h-吡唑(46mg,0.287mmol)，随后添加t-buxphospdg3(45.5mg,0.057mmol)和叔丁醇钠(55.1mg,0.573mmol)。将混合物用n2吹扫10分钟。然后将小瓶用盖密封，并将混合物在90℃下加热12小时。完成后，将反应混合物冷却，过滤，用dcm洗涤，并将合并的滤液浓缩。接下来，将所得残余物溶解于tfa(552µl,7.16mmol)中，并加热至50℃持续3小时。然后将反应混合物冷却至室温，并将反应物用饱和nahco3水溶液淬灭，并用dcm稀释。使用相分离器收集dcm层，且然后浓缩。将所得残余物通过以0-100%acn/水(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相c18柱(sunfireprepc18obd10um30x150mm柱)纯化，以提供作为外消旋非对映异构体的标题化合物实施例130a(峰1)和实施例130b(峰2)。
实施例131a和131b
实施例131a和131b的化合物的制备
步骤a–化合物int-131a.(2-氰基-6-氟苯基)氨基甲酸乙酯的合成。
向装备有搅拌棒的500ml圆底烧瓶中装入2-氨基-3-氟苯甲腈(25.016g,184mmol)和氯甲酸乙酯(225ml,2339mmol)。反应烧瓶装备有超风冷却的回流冷凝器，并加热至回流持续6小时。完成后，将反应混合物冷却至室温。添加己烷(150ml)，并将混合物短暂搅拌。在氮气流下用真空抽吸过滤固体，以得到标题化合物int-131a。lc/ms(es,m/z)=209[m+h]+。
步骤b–化合物int-131b.外消旋-3-(7-氟-5-羟基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。
向装备有搅拌棒的100ml圆底烧瓶中装入int-131a(5.4g,25.9mmol)和3-(肼羰基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(6.94g,28.5mmol)。将材料悬浮于nmp(27.0ml)中，并将反应混合物在160℃下在氮气气氛下加热。完成后，将反应混合物冷却至室温，且然后用25ml水稀释以引起胶状残余物分离。将混合物超声处理30分钟以得到悬浮液。将悬浮液过滤，以得到标题化合物int-131b。lc/ms(es,m/z)=410[m+na]+。
步骤c–化合物int-131c.外消旋-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-氟-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。
向int-131b(2.0g,5.16mmol)、bop(5.94g,13.42mmol)于乙腈(30.4ml)中的搅拌混合物中逐滴添加dbu(2.412ml,16.00mmol)，且然后将反应混合物搅拌30分钟。然后，添加(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(2.404ml,16.00mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌48小时。完成后，将粗制反应物悬浮于etoac中，并用水洗涤。有机层依次用1mhcl(10ml)、1mnaoh(10ml)和盐水(20ml)洗涤，且然后经无水mgso4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过以0-50%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物int-131c。lc/ms(es,m/z)=537[m+h]+。
步骤d–化合物int-131d.外消旋-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-氟-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向配备有搅拌棒的20ml闪烁小瓶中装入int-131c(356mg,0.663mmol)和甲酸(1.908ml,49.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物浓缩，用50mldcm稀释，并用50ml饱和nahco3溶液洗涤。dcm层经无水mgso4干燥，过滤，并浓缩。所得残余物通过以10-20%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物int-131d。lc/ms(es,m/z)=437[m+h]+。
步骤e–化合物int-131e.外消旋-n-(3,5-二甲氧基苄基)-7-氟-2-(1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向装备有搅拌棒的20ml微波小瓶中装入int-131d(0.235g,0.524mmol)和thf(5.88ml)。向混合物中添加4-溴-1-甲基-1h-吡唑(0.217ml,2.096mmol)，随后添加t-buxphospdg3(0.166g,0.210mmol)和叔丁醇钠(0.201g,2.096mmol)。将混合物用n2吹扫10分钟。然后将小瓶用新盖密封，并将混合物在90℃下加热过夜。然后将反应混合物冷却，过滤，用dcm洗涤，并将合并的滤液浓缩。所得残余物通过以0-10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到标题化合物int-131e。lc/ms(es,m/z)=517[m+h]+。
步骤f–实施例131a和131b.(r或s)-7-氟-2-(1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(s或r)-7-氟-2-(1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
将tfa(477µl,6.19mmol)添加至配备有搅拌棒的20ml闪烁小瓶中的int-131e(64mg,0.124mmol)中，并在50℃下加热3小时。然后将浆液浓缩，用1ml7nnh3/meoh淬灭，并浓缩。将所得残余物用mecn磨碎并过滤，然后将滤饼通过具有ccc柱(chromegachiral™)和以具有0.25%dmea的40%meoh作为助溶剂的sfc进行拆分，以提供标题化合物实施例131a(峰1)和131b(峰值2)。
使用与用于制备实施例131a和131b的程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物和苯甲腈，制备表4中显示的本发明的化合物。
实施例134a和134b
实施例134a和134b的化合物的制备
步骤a–化合物int-134a.3-(5-((3,4-二甲基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)环己-1-酮的合成。
在0℃下向中间体e4(1g,2.157mmol)于dcm(5ml)中的搅拌溶液中添加dess-martin高碘烷(periodinane)(1.830g,4.31mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌1小时。完成后，将反应混合物过滤，并将滤液在减压下浓缩。所得残余物通过以0~65%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-134a。lc/ms(es,m/z)=430[m+h]+。
步骤b–化合物int-134b.3-(5-((3,4-二甲基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)环己-1-醇的合成。
在-78℃下向4-溴-1-甲基-1h-吡唑(209mg,1.300mmol)于thf(3ml)中的搅拌溶液中添加正丁基锂/己烷(0.7ml,1.750mmol)。将混合物在-78℃下搅拌20min，且然后在-78℃下添加int-134a(150mg,0.325mmol)/thf(3ml)。将所得混合物缓慢温热至15℃，持续4小时。完成后，然后将反应物用nh4cl水溶液(40ml)淬灭，且然后用dcm(40ml×2)萃取。浓缩合并的有机层。所得残余物通过以5%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-134b。lc/ms(es,m/z)=544[m+h]+。
步骤c–化合物134a和134b的合成。
在15℃下向int-134b(70mg,0.129mmol)于dcm(2ml)/水(1ml)中的搅拌溶液中添加2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌(58mg,0.256mmol)。将所得反应物在15℃下搅拌2小时，并且，完成后，用10mldcm稀释，且然后用na2so3水溶液(2ml)洗涤。浓缩有机层，并将所得残余物通过使用prepobdc18柱和以0-100%acn/水(0.04%nh4oh)作为洗脱剂的反相hplc纯化，以提供标题化合物实施例134a(峰1)和实施例134b(峰2)。
实施例135
实施例135的化合物的制备
步骤a–化合物int-135a.(1r,3r或1s,3s)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己-1-醇的合成。
向20ml小瓶中添加(1r,3r或1s,3s)-3-羟基-3-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己烷-1-碳酰肼(35.0mg,0.118mmol)、2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-3-甲氧基苯甲腈(中间体c7,49.6mg,0.154mmol)、二氧杂环己烷(0.5ml)和acoh(3µl,0.06mmol)。将混合物搅拌并在65℃下加热2小时。蒸发溶剂。所得残余物通过以0-100%etoac:etoh(3:1)/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物int-135a。lc/ms(es,m/z)=602[m+h]+。
步骤b–化合物135.(1r,3r或1s,3s)-3-(5-氨基-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)环己-1-醇的合成。
向20ml小瓶中添加ddq(30.3mg,0.133mmol)、dcm(1.0ml)和水(0.05ml)。将混合物冷却至0℃。向混合物中添加作为dcm(1ml)中的溶液的int-135a(53.5mg,0.089mmol)。将混合物搅拌4小时。向混合物中添加1mkoh水溶液(20ml)，且然后将混合物用dcm(2×20ml)萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。残余物通过以0-100%etoac:etoh(3:1)/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化。所得残余物通过用oj-h柱和以20%meoh(nh4oh改性剂)作为助溶剂的sfc进一步拆分，以得到标题化合物实施例135。
实施例136a、136b、136c和136d
实施例136a、136b、136c和136d的化合物的制备
步骤a–实施例136a、136b、136c和136d.7-甲氧基-2-((1r,3s)-3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)环己基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺、7-甲氧基-2-((1r,3r)-3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)环己基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺、7-甲氧基-2-((1s,3s)-3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)环己基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和7-甲氧基-2-((1s,3r)-3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)环己基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
在15℃下向int-134b(60mg,0.110mmol)于dcm(1ml)中的搅拌溶液中添加三乙基甲硅烷(0.03ml,0.188mmol)和tfa(1ml,12.98mmol)。将所得反应混合物在15℃下搅拌3小时。完成后，将混合物浓缩以提供粗制的n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-2-(3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)环己基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。
在15℃下向上述粗制残余物(58.5mg,0.111mmol)/dcm(1ml)中添加tfa(1ml,12.98mmol)。将所得混合物在45℃下搅拌16小时。完成后，将混合物浓缩，并将所得残余物通过使用prepobdc18柱和以0-100%acn/水(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相hplc纯化，以得到外消旋的136。然后外消旋混合物通过具有chiralpakad柱和以40%异丙醇(0.05%dea)作为助溶剂的sfc进行拆分，以提供实施例136a(峰1)、实施例136b(峰2)、实施例136c(峰3)和实施例136d(峰4)。
实施例137
实施例137的化合物的制备
步骤a–化合物int-137a.1-(4-((1s,3r或1r,3s)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)环己基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
向20ml小瓶中添加中间体b12(470mg,1.26mmol)、2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-3-甲氧基苯甲腈(中间体c7,528mg,1.63mmol)、二氧杂环己烷(5ml)和acoh(0.036ml,0.63mmol)。将混合物搅拌，且然后在65℃下加热2小时。蒸发溶剂，并将所得残余物通过以0-100%etoac:etoh(1:1)/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到非对映异构体的混合物。混合物通过用lux-3柱和以20%meoh(0.1%nh4oh改性剂)作为助溶剂的sfc进行拆分，以得到对映异构体纯的顺式非对映异构体int-137a(第二洗脱峰)。lc/ms(es,m/z)=586[m+h]+。
步骤b–实施例137.1-(4-((1s,3r或1r,3s)-3-(5-氨基-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)环己基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
向4ml小瓶中添加int-137a(10.9mg,0.019mmol)和tfa(0.5ml)。将混合物搅拌并在65℃下加热2小时。蒸发溶剂。向所得残余物中添加饱和碳酸氢钠(3ml)，并将混合物用dcm(3×3ml)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过以0-100%etoac:etoh(1:1)/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以得到标题化合物实施例137。
使用与用于制备实施例137的化合物的程序类似的程序，用中间体b13取代中间体b12和适当的起始材料，制备表5中显示的实施例138。
实施例139a、139b、139c和139d
实施例139a、139b、139c和139d的化合物的制备
步骤a–化合物int-139a.甲磺酸2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)四氢-2h-吡喃-4-基酯的合成。
在0℃下向丁-3-烯-1-醇(1.964g,27.2mmol)和1-甲基-1h-吡唑-4-甲醛(2g,18.16mmol)于dcm(40ml)中的搅拌溶液中逐滴添加甲磺酸(8.73g,91mmol)。将所得混合物在室温下搅拌12小时。完成后，将反应混合物用dcm(80ml)稀释，用饱和na2co3水溶液(30ml)洗涤，经无水na2so4干燥，并过滤。然后浓缩滤液，并将所得残余物通过以20%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-139a。lc/ms(es,m/z)=260[m+h]+。
步骤b–化合物int-139b.2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)四氢-2h-吡喃-4-甲腈的合成。
向int-139a(3g,11.52mmol)于dmf(35ml)中的搅拌溶液中添加nacn(1.412g,28.8mmol)。将反应混合物在60℃下搅拌10小时。完成后，将反应物用水(40ml)淬灭，且然后用etoac(40ml×3)萃取。将合并的有机层用水(30ml×3)洗涤，经无水na2so4干燥，并过滤。浓缩滤液，并将所得残余物通过以15%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-139b。lc/ms(es,m/z)=191[m+h]+。
步骤c–化合物int-139c.2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)四氢-2h-吡喃-4-甲酸的合成。
向int-139b(1.5g,7.84mmol)于etoh(10ml)和水(2ml)中的溶液中添加koh(3.52g,62.8mmol)。将混合物在90℃下搅拌2小时。完成后，将混合物的ph用hcl(浓)调节至5。然后将混合物浓缩以除去大部分溶剂。向残余物中添加20mldcm。溶液经无水na2so4干燥，过滤并浓缩，以得到int-139c。lc/ms(es,m/z)=210[m+h]+。
步骤d–化合物int-139d.2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)四氢-2h-吡喃-4-甲酸甲酯的合成。
在25℃下，向int-139c(400mg,1.912mmol)于dcm(20ml)和甲醇(2ml)中的溶液中逐滴添加(三甲基甲硅烷基)重氮基甲烷(2.87ml,2.87mmol)。将混合物在25℃下搅拌1小时。完成后，将混合物在减压下蒸发，以得到int-139d。lc/ms(es,m/z)=225[m+h]+。
步骤e–化合物int-139e.2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)四氢-2h-吡喃-4-碳酰肼的合成。
向int-139d(230mg,1.026mmol)于etoh(5ml)中的混合物中添加肼(164mg,5.13mmol)。将混合物在90℃下搅拌1小时。完成后，将反应混合物浓缩以提供int-139e。lc/ms(es,m/z)=225[m+h]+。
步骤f–化合物int-139f.n-(3,4-二甲基苄基)-7-甲氧基-2-(2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)四氢-2h-吡喃-4-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向int-139e(30mg,0.134mmol)于nmp(1ml)中的溶液中添加2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-3-甲氧基苯甲腈(c7,43.3mg,0.134mmol)。将反应混合物在170℃下在微波条件下搅拌1.5小时。将混合物冷却，用etoac(30ml)稀释，用水(10ml×2)洗涤，经无水na2so4干燥，并过滤。蒸发滤液，并将所得残余物通过以5%meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到int-139f。lc/ms(es,m/z)=530[m+h]+。
步骤g–实施例139a、139b、139c和139d的合成。
向int-139f(20mg,0.038mmol)于ch2cl2(2ml)中的溶液中逐滴添加tfa(2ml,26.0mmol)。将混合物在60℃下搅拌8小时。完成后，将混合物在真空中浓缩。所得残余物通过使用制备型obdc18柱和以0-100%acn/水(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相hplc纯化，以得到外消旋非对映异构体的混合物。混合物通过使用手性oj柱(chiraltechnologies)和以40%etoh(0.05%dea)作为助溶剂的sfc进行拆分，以提供实施例139a(峰1)、实施例139b(峰2)、实施例139c(峰3)和实施例139d(峰4)。
实施例140a、140b、140c和140d
实施例140a、140b、140c和140d的化合物的制备
步骤a–化合物int-140a1、int-140a2、int-140a3和int-140a4的合成。
外消旋中间体d2(3.5g,20.67mmol)通过用手性ad-h柱和以具有0.2%dipa的50%ipa作为助溶剂的sfc进行拆分，以得到标题化合物int-140a1(峰1)、int-140a2(峰2)、int-140a3(峰3)和int-140a4(峰4)。lc/ms(es,m/z)=563[m+h]+。
步骤b–化合物int-140b1、int-140b2、int-140b3和int-140b4的合成。
向int-140a1(660mg,1.173mmol)于dcm(10ml)中的溶液中添加4mhcl/二氧杂环己烷(2.053ml,8.21mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物在减压下浓缩，并将所得残余物通过以6%7nnh3/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到int-140b1。lc/ms(es,m/z)=463[m+h]+。利用与对于制备int-140b1所述的方法类似的方法，将int-140a2转化为int-140b2，将int-140a3转化为int-140b3，并且将int-140a4转化为int-140b4。
步骤c–实施例140a、140b、140c和140d的合成。
向含有int-140b1(40mg,0.086mmol)/thf(1ml)的反应小瓶中添加4-溴-1-乙基-1h-吡唑(37.8mg,0.216mmol)，随后添加甲磺酰基(methanesulfonato)(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-异丙基-1,1’-联苯)(2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(t-buxphospdg3,20.61mg,0.026mmol)和叔丁醇钠(24.93mg,0.259mmol)。将所得混合物用n2吹扫10分钟，然后在90℃下加热24小时。完成后，将反应混合物冷却，且然后浓缩。将所得残余物通过以4%7nnh3/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到dmb-保护的中间体(20mg,0.036mmol)。
将dmb-保护的中间体(20mg,0.036mmol)添加至2,2,2-三氟乙酸(1.0ml)中，且然后在60℃下加热1小时。完成后，将反应混合物浓缩。将所得残余物通过以60%3:1etoac:etoh/己烷作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以提供实施例140a。
利用与对于制备实施例140a所述的方法类似的方法，将int-140b2转化为实施例140b，将int-140b3转化为实施例140c，并且将int-140b4转化为实施例140d。
使用与用于制备上面显示的化合物的程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物和中间体int-140b1、int-140b2、int-140b3或int-140b4，制备表6中显示的本发明的实施例化合物。各实施例由其所衍生的中间体都在实施例编号下方的括号中注明。
实施例148a和148b
实施例148a和148b的化合物的制备
步骤a–化合物int-148a.n-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(5-氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向中间体d3(490mg,0.865mmol)于dcm(10ml)中的溶液中添加4mhcl/二氧杂环己烷(1.081ml,4.32mmol)。将所得混合物在室温下搅拌4小时。完成后，将反应混合物在减压下浓缩。所得残余物通过以6%7nnh3/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到int-148a。lc/ms(es,m/z)=467[m+h]+。
步骤b：实施例148a和148b的合成。
向含有int-148a(220mg,0.472mmol)/thf(5.0ml)的反应小瓶中添加4-溴-1-环丙基-1h-吡唑(221mg,1.179mmol)，随后添加甲磺酰基(methanesulfonato)(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-异丙基-1,1’-联苯)(2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(t-buxphospdg3,112mg,0.141mmol)和叔丁醇钠(136mg,1.415mmol)。将所得混合物用n2吹扫10分钟，并在90℃下加热24小时。完成后，将反应混合物冷却，且然后浓缩。将所得残余物通过以4%7nnh3/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶板纯化，以得到dmb-保护的中间体。
将dmb-保护的中间体(210mg,0.367mmol)添加至2,2,2-三氟乙酸(5.0ml)中，且然后在60℃下加热1小时。完成后，将反应混合物浓缩。将所得残余物通过以5%7-n氨/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以提供外消旋产物。其通过使用手性ia柱(chiraltechnologies)以60%meoh作为助溶剂的sfc进行拆分，以得到标题化合物实施例148a(峰1)和实施例148b(峰2)。
实施例149
实施例149的化合物的制备
步骤a–化合物int-149a1、int-149a2的合成。
中间体d3(2.0g,3.53mmol)通过用手性ad-h柱(chiraltechnologies)和以45%ipa作为助溶剂的sfc进行拆分，以得到标题化合物int-149a1(峰1)和int-149a2(峰2)。lc/ms(es,m/z)=567[m+h]+。
步骤b–化合物int-149b1的合成。
向int-149a1(710mg,1.25mmol)于dcm(10ml)中的溶液中添加4mhcl/二氧杂环己烷(2.5ml,10.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过以6%7nnh3/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到int-149b1。lc/ms(es,m/z)=467[m+h]+。
步骤c–实施例149的合成。
向含有int-149b1(60mg,0.129mmol)/thf(1ml)的反应小瓶中添加4-溴-1-((1-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)环丁基)甲基)-1h-吡唑(64.9mg,0.206mmol)，随后添加甲磺酰基(methanesulfonato)(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-异丙基-1,1’-联苯)(2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(t-buxphospdg3,30.7mg,0.039mmol)和叔丁醇钠(37.1mg,0.386mmol)。将所得混合物用n2吹扫10分钟，然后在90℃下加热24小时。完成后，将反应混合物冷却并浓缩。将所得残余物通过以5%meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到dmb-保护的中间体。
将上述中间体(89mg,0.127mmol)添加至2,2,2-三氟乙酸(2.0ml)中，且然后在60℃下加热1小时。完成后，将反应混合物浓缩。将所得残余物通过以60%3:1etoac:etoh/己烷作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以提供实施例149。
使用与以上使用的程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物和int-149b1，制备表7中显示的本发明的实施例化合物。
实施例153a和153b
实施例153a和153b的化合物的制备
步骤a–化合物int-153a1、int-153a2.(r)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯和(s)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。
中间体d4(1.2g,2.03mmol)通过用手性ad-h柱且以具有0.2%dipa的45%ipa作为洗脱剂的sfc进行拆分，以得到标题化合物int-153a1(峰1)和int-153a2(峰2)。lc/ms(es,m/z)=585[m+h]+。
步骤b–化合物int-153b1和int-153b2.(s)-2-(5,5-二氟哌啶-3-基)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(r)-2-(5,5-二氟哌啶-3-基)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向int-153a1(417mg,0.713mmol)于dcm(7ml)中的溶液中添加4mhcl/二氧杂环己烷(1.248ml,4.99mmol)。将反应混合物在室温下在氮气下搅拌2小时。完成后，将反应混合物浓缩，并将所得残余物通过以3%7nnh3/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到int-153b1。lc/ms(es,m/z)=485[m+h]+。
使用与对于将int-153a1转化为int-153b1所概述的方式类似的方式，将int-153a2转化为int-153b2。lc/ms(es,m/z)=485[m+h]+。
步骤c–实施例153a和153b.(s)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(1-(1-乙基-1h-吡唑-4-基)-5,5-二氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(1-(1-乙基-1h-吡唑-4-基)-5,5-二氟哌啶-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向含有int-153b1(40mg,0.083mmol)/thf(0.9ml)的反应小瓶中添加4-溴-1-乙基-1h-吡唑(36.1mg,0.206mmol)，随后添加甲磺酰基(methanesulfonato)(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-异丙基-1,1’-联苯)(2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(t-buxphospdg3,19.67mg,0.025mmol)和叔丁醇钠(23.8mg,0.248mmol)。将所得混合物用n2吹扫10分钟，然后在100℃下加热12小时。完成后，将反应混合物浓缩并将所得残余物通过以4%meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶板纯化，以得到dmb-保护的中间体。
将上述中间体(35mg,0.060mmol)溶解于2,2,2-三氟乙酸(1.0ml)中，并在60℃下加热1小时。完成后，将反应混合物浓缩并将所得残余物通过以3%7n氨/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以提供实施例153a。
使用与对于将int-153b1转化为实施例153a所描述的方法类似的方法，将int-153b2转化为实施例153b。
使用与上面对于合成实施例153a和153b所描述的程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物和胺偶联配偶体，制备表8中显示的本发明的实施例化合物。各实施例由其所衍生的中间体都在实施例编号下方的括号中注明。
实施例160
实施例160的化合物的制备
步骤a–化合物int-160a.(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-2-(吡咯烷-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向中间体d5(2.1g,3.93mmol)于dcm(40ml)中的溶液中添加4mhcl/二氧杂环己烷(5.0ml,20.0mmol)。将反应混合物在室温在氮气下搅拌2小时。完成后，将混合物浓缩。将所得残余物通过以3%7nnh3/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以得到int-160a。lc/ms(es,m/z)=435[m+h]+。
步骤b–化合物160.(r)-2-(1-(1-乙基-1h-吡唑-4-基)吡咯烷-3-基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向含有int-160a(50mg,0.115mmol)/thf(1ml)的反应小瓶中添加4-溴-1-乙基-1h-吡唑(60.4mg,0.345mmol)，随后添加甲磺酰基(methanesulfonato)(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-异丙基-1,1’-联苯)(2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(t-buxphospdg3,27.4mg,0.035mmol)和叔丁醇钠(66.4mg,0.690mmol)。将所得混合物用n2吹扫10分钟，并在100℃下加热12小时。完成后，将反应混合物冷却，且然后浓缩。所得残余物通过以3%meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶板纯化，以得到dmb-保护的中间体。
将上述中间体溶解于2,2,2-三氟乙酸(1.0ml)中，并在60℃下加热1小时。完成后，将反应混合物浓缩并将所得残余物通过以3%7n氨/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板纯化，以提供实施例160。
使用与对于合成实施例160所述的程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物和int-160a，制备表9中显示的本发明的实施例化合物。
实施例165
实施例165的化合物的制备
步骤a–化合物int-165a.2-氨基喹唑啉-4,8-二醇的合成。
向2-氨基-5-氟-3-甲氧基苯甲酸(459mg,3mmol)于乙醇(3000µl)中的搅拌悬浮液中添加氰胺(315mg,7.5mmol)和6m盐酸水溶液(650µl,3.9mmol)。将反应混合物加热至回流，持续16小时。将反应混合物冷却。通过过滤收集形成的沉淀，并在高真空下干燥，以得到标题化合物int-165a。lc/ms(es,m/z)=178[m+h]+。
步骤b–化合物int-165b.2-氨基-4-(1h-1,2,4-三唑-1-基)喹唑啉-8-醇的合成。
将pocl3(70µl,0.75mmol)于乙腈(1.0ml)中的溶液添加至1,2,4-三唑(104mg,1.5mmol)、2-氨基-7-羟基喹唑啉-4-醇(88mg,0.5mmol)和diea(131µl,0.75mmol)于乙腈(1.0ml)中的搅拌的室温混合物中。将所得混合物在40℃下搅拌3小时，且然后在室温下持续16小时。将反应混合物通过celite®(硅藻土)过滤，用乙腈和乙醚彻底洗涤，以得到粗制产物int-165b。lc/ms(es,m/z)=229[m+h]+。
步骤c–化合物int-165c.(r或s)-n’-(2-氨基-8-羟基喹唑啉-4-基)-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-碳酰肼的合成。
向反应小瓶中装入int-165b(61mg,0.267mmol)、中间体b14(898mg,0.4mmol)、dma(1780µl)和diea(233µl,1.335mmol)。将小瓶用盖盖上，并将内容物在80℃下加热4小时。完成后，将混合物在减压下蒸发，以得到标题化合物int-165c。lc/ms(es,m/z)=383[m+h]+。
步骤d-实施例165.(r或s)-5-氨基-2-(1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-7-醇的合成。
将n,o-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(2ml,8.18mmol)添加至int-165c(102mg,0.267mmol)中并将混合物在120℃下搅拌2小时。完成后，通过真空除去挥发物，并将所得残余物溶入dmso(1.5ml)中，过滤，并通过用c18柱和以具有0.1%tfa改性剂的0-100%mecn/水作为洗脱剂的反相hplc纯化，以提供标题化合物实施例165。
通过与上述程序类似的程序，在步骤a中取代适当的苯甲酸，制备表10中显示的本发明的实施例化合物。
实施例179
实施例179的化合物的制备
步骤a–化合物int-175a.2-(氮杂环庚烷-3-基)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-7-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
将中间体d7(113mg,0.201mmol)于甲酸(2311µl,60.2mmol)中的溶液在室温下搅拌过夜。完成后，将反应混合物浓缩。残余物通过以3%7n氨/meoh//dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-175a。lc/ms(es,m/z)=463[m+h]+。
步骤b–实施例175.7-甲氧基-2-(1-(1-甲基-1h-1,2,3-三唑-4-基)氮杂环庚烷-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
在氮气下，向装备有搅拌棒的5ml微波小瓶中装入int-180a(50mg,0.108mmol)、t-buxphospdg3(38.6mg,0.043mmol)和叔丁醇钠(41.6mg,0.432mmol)。然后添加4-溴-1-甲基-1h-1,2,3-三唑(35.0mg,0.216mmol)/thf(1.4ml)。将所得混合物用氮气冲洗10分钟。然后将小瓶用盖密封并在90℃下搅拌16小时。完成后，将反应物冷却至室温并过滤。将滤液浓缩。向所得残余物中添加tfa(0.5ml)。然后将混合物在50℃下搅拌2小时。然后将混合物冷却至室温，并蒸发溶剂。残余物通过用c18柱和以具有0.1%tfa的0-100%mecn/h2o作为洗脱剂的反相hplc纯化，得到标题化合物实施例175。
实施例176
实施例176的化合物的制备
步骤a–化合物int-176a.(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向中间体e1(2.2g,4.01mmol)于dce(4ml)中的溶液中添加tfa(2.0ml,26.0mmol)。将所得混合物在室温下搅拌4小时，然后浓缩。然后将残余物通过以3%7n氨/meoh//dcm作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以提供int-176a。lc/ms(es,m/z)=449[m+h]+。
步骤b–实施例176.(r)-1-((4-(3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)甲基)环丁-1-醇的合成。
在氮气下，向装备有搅拌棒的5ml微波小瓶中装入int-176a(80mg,0.178mmol)、t-buxphospdg3(42.5mg,0.054mmol)和叔丁醇钠(51.4mg,0.535mmol)。然后添加4-溴-1-((1-((四氢-2h-吡喃-2基)氧基)环丁基)甲基)-1h-吡唑(61.8mg,0.196mmol)/thf(1.4ml)。将所得混合物用氮气冲洗10分钟。然后将小瓶用盖密封并在90℃下搅拌16小时。完成后，将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤液浓缩。向所得残余物中添加tfa(0.5ml)，且然后将混合物在50℃下搅拌2小时。将混合物冷却至室温，并蒸发溶剂。所得残余物通过用c18柱和以具有0.1%tfa的0-100%mecn/h2o作为洗脱剂的反相hplc纯化，以提供标题化合物实施例176。
使用与对于合成实施例176所述的程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物和int-176a，制备表11中显示的本发明的实施例化合物。
实施例195a、195b、195c和195d
实施例195a、195b、195c和195d的化合物的制备
步骤a–化合物int-195a.外消旋，顺式-和外消旋，反式-n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
将中间体e2(1.2g,2.133mmol)的溶液溶解于甲酸(10.2ml,266mmol)中，并在23℃下搅拌3小时。然后将反应混合物浓缩，用50mldcm稀释，并用50ml饱和nahco3溶液中和。分离各层，并将碱性水层进一步用额外的50mldcm萃取。合并的有机级分用无水mgso4干燥，过滤并浓缩，以得到int-195a，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。lc/ms(es,m/z)=463[m+h]+。
步骤b–实施例195a、195b、195c和195d的合成。
向配备有搅拌棒的20ml微波小瓶中装入int-195a(142mg,0.649mmol)，随后装入t-buxphospdg3(103mg,0.130mmol)和叔丁醇钠(125mg,1.297mmol)。将混合物用n2吹扫10分钟。然后将小瓶用新盖密封，并在90℃下加热过夜。将反应物冷却并通过celite®(硅藻土)过滤，用dcm洗涤并浓缩。将所得残余物溶解于tfa(1.0ml,12.97mmol)中，并在50℃下搅拌5小时。将所得混合物浓缩。所得残余物通过用c18柱和以具有0.05%tfa的0-100%acn/水作为洗脱剂的反相hplc纯化，以提供顺式和反式异构体。较晚洗脱的外消旋、反式异构体通过用oj-h柱和以20%meohw/0.1%nh4oh改性剂作为助溶剂的sfc进一步拆分，以提供标题化合物实施例195a(峰1)和实施例195b(峰2)。较早洗脱的外消旋、顺式异构体通过用lux-4柱(phenomenex,21mmx250mm)和以具有0.1%nh4oh改性剂的35%meoh作为助溶剂的sfc进一步拆分，以提供标题化合物实施例195c(峰1)实施例195d(峰2)。
实施例196a和196b
实施例196的化合物的制备
步骤a–化合物int-196a.n-(2,4-二甲氧基苄基)-2-(-5-氟哌啶-3-基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
将中间体e3(438mg,0.773mmol)于甲酸(2965µl,77mmol)中的溶液在室温下搅拌过夜。完成后，将混合物用10mldcm稀释，并用饱和nahco3溶液中和至中性ph。将有机层分离，并将水层用15mldcm萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。然后将残余物通过以5%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-196a。lc/ms(es,m/z)=467[m+h]+。
步骤b–实施例196a和196b的合成。
在氮气下，向装备有搅拌棒的5ml微波小瓶中装入int-196a(125mg,0.268mmol)、t-buxphospdg3(106mg,0.134mmol)和叔丁醇钠(103mg,1.072mmol)。向其中添加1-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(117mg,0.536mmol)/thf(4ml)。将所得混合物用氮气冲洗10分钟。然后将小瓶用盖密封并在90℃下搅拌16小时。完成后，将反应物冷却至室温并过滤以除去固体。将滤液浓缩。向残余物中添加tfa(2ml)，并在50℃下搅拌3小时。将混合物冷却至室温，并蒸发溶剂。残余物通过用c18柱和以具有0.1%tfa的0-100%mecn/h2o作为洗脱剂的反相hplc进行纯化，提供外消旋化合物，其通过用手性as-h柱(chiraltechnologies)和以1:1meoh(0.1%nh3h2o)/acn作为洗脱剂的sfc进一步拆分，得到实施例196a(峰1)和实施例196b(峰2)。
通过与对于制备实施例196a和196b所述的程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物和int-196a，制备表12中显示的本发明的实施例化合物。
实施例198
实施例198的化合物的制备
步骤a–化合物int-198a.1-(5-溴-2-氰基苯基)-3-(2,4-二甲氧基苄基)脲的合成。
向20ml小瓶中添加2-氨基-4-溴苯甲腈(2.00g,10.1mmol)和吡啶(3ml)。搅拌混合物。向混合物中添加作为dcm(4.5ml)中的溶液的1-(异氰酰甲基)-2,4-二甲氧基苯(1.96ml,10.1mmol)。将混合物搅拌并在50℃下加热24小时。将混合物在室温下冷却30分钟。通过过滤收集所得固体，并用meoh(3×3ml)洗涤，得到int-198a。lc/ms(es,m/z)=390,392[m+h]+。
步骤b–化合物int-198b.4-溴-2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)苯甲腈的合成。
向100ml圆底烧瓶中添加int-198a(2.37g,6.07mmol)、三苯基膦(3.19g,12.1mmol)、三乙胺(3.39ml,24.3mmol)和dcm(15ml)。搅拌混合物，且然后冷却至0℃。向混合物中添加四溴化碳(4.03g,12.1mmol)。搅拌30分钟后，将混合物浓缩，且然后通过以0-70%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到int-198b。lc/ms(es,m/z)=394,396[m+na]+。
步骤c–化合物int-198c.1-(4-((2s,5r或2r,5s)-5-(8-溴-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
向100ml烧瓶中添加(3r,6s)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼(590mg,2.00mmol)、int-202b(818mg,2.20mmol)和1,4-二氧杂环己烷(15ml)。将混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂。所得残余物通过以0-100%etoac:etoh(3:1)/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到int-198c。lc/ms(es,m/z)=649,651[m+h]+。
步骤d–实施例198.1-(4-((2s,5r或2r,5s)-5-(5-氨基-8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
向4ml小瓶中添加int-198c(56mg,0.086mmol)和tfa(1ml)。将混合物搅拌并在65℃下加热1小时。蒸发溶剂。向所得残余物中添加饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)。分离各层，并将水层用dcm(2×5ml)萃取。合并有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过以0-10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，提供标题化合物实施例198。
使用与对于制备实施例198所述的程序类似的程序，取代适当的中间体和起始材料，制备表13中显示的本发明的实施例化合物。
实施例205
实施例205的化合物的制备
步骤a–实施例205.1-(4-((2s,5r或2r,5s)-5-(5-氨基-8-环丙基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
向4ml小瓶中添加catacxium®apdg3(sigmaaldrich,16.8mg,0.0230mmol)、磷酸钾(49.0mg,0.231mmol)、环丙基硼酸(13.2mg,0.154mmol)和int-198c(50mg,0.077mmol)。向小瓶中添加1,4-二氧杂环己烷(0.5ml)和水(0.1ml)。将混合物用氮气脱气5分钟。将混合物搅拌并在100℃下加热2小时。完成后，将混合物稀释于etoac(10ml)中，并通过顶部有硫酸钠的celite®(硅藻土)过滤。蒸发滤液的溶剂。所得残余物通过以0-10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法进行纯化，得到1-(4-((2s,5r或2r,5s)-5-(8-环丙基-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇。
向4ml小瓶中添加1-(4-((2s,5r或2r,5s)-5-(8-环丙基-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(36mg,0.059mmol)和tfa(0.5ml)。将混合物搅拌并在50℃下加热3小时。将混合物浓缩。将所得残余物在饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和dcm(5ml)之间分配。分离各层，并用dcm(5ml)萃取水层。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发溶剂。所得残余物通过以0-10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，得到实施例205。
实施例206
实施例206的化合物的制备
步骤a–实施例206.1-(4-((2s,5r或2r,5s)-5-(5-氨基-8-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
向4ml小瓶中添加cphospdg4(3.2mg,3.8µmol)和int-198c(50mg,0.077mmol)。将小瓶抽空并用氮气再填充3次。向小瓶中添加thf(0.3ml)。搅拌混合物。向混合物中添加二甲基锌(0.257ml,0.308mmol)于己烷中的1m溶液。将所得混合物在室温下搅拌1小时。完成后，将饱和氯化铵水溶液(0.10ml)逐滴添加至混合物中。然后将混合物稀释于二氯甲烷(30ml)中并剧烈搅拌10分钟。然后将混合物通过顶部有硫酸钠的celite®(硅藻土)过滤。蒸发滤液的溶剂。向所得残余物中添加tfa(0.5ml)。将混合物搅拌并在65℃下加热3小时。将混合物浓缩。将残余物在饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)和dcm(5ml)之间分配。分离各层，并用dcm(5ml)萃取水层。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发溶剂。所得残余物通过以0-10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法进行纯化，提供标题化合物实施例206。
使用与对于制备实施例206所述的程序类似的程序，取代适当的起始烷基锌酸盐，制备表15中显示的本发明的实施例化合物。
实施例208
实施例208的化合物的制备
步骤a–实施例208.1-(4-((2s,5r或2r,5s)-5-(5-氨基-8-(氮杂环丁烷-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
向4ml小瓶中添加4,4’-二甲氧基-2,2’-联吡啶(8.3mg,0.38mmol)、1-(4-((2s,5r或2r,5s)-5-(8-溴-5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(50mg,0.077mmol)、碘化钠(1.1mg,7.7µmol)、mn(12.7mg,0.231mmol)、3-溴氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.025ml,0.15mmol)和nicl2(dme)(8.5mg,0.38mmol)。然后将dmpu(0.5ml)添加至混合物中，随后添加吡啶(0.012ml,7.7µmol)于dmpu中的5%v/v溶液。将小瓶用氮气脱气5分钟。将所得混合物在95℃下加热3小时。完成后，将混合物稀释于乙醚(20ml)中，并通过celite®(硅藻土)过滤。滤液用水(3×30ml)洗涤。有机层经无水硫酸镁干燥，过滤，并蒸发溶剂。向所得残余物中添加tfa(0.5ml)。然后将混合物搅拌并在50℃下加热3小时。将混合物浓缩。所得残余物通过用c18柱和以mecn/水(0.1%tfa)作为洗脱剂的反相hplc进行纯化，得到实施例208。
使用对于制备实施例208所述的程序类似的程序，取代适当的起始烷基溴化物，制备表16中显示的本发明的实施例化合物。
实施例210a和210b
实施例210a和210b的化合物的制备
步骤a–化合物int-210a1和int-210a2.(2s,5r)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯和(2r,5s)-5-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。
中间体e5(2.2g,3.91mmol)通过用手性ad-h柱和以40%i-proh作为助溶剂的sfc进行拆分，以得到标题化合物int-210a1(峰1)和int-210a2(峰2)。lc/ms(es,m/z)=563[m+h]+。
步骤b–化合物int-210b1和int-210b2.n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-((3r,6s)-6-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺和n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-((3s,6r)-6-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向int-210a1(680mg,1.209mmol)于dcm(10ml)中的溶液中添加4mhcl/二氧杂环己烷(3ml,12.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。完成后，将反应物在减压下浓缩。将所得残余物通过以6%7nnh3/meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶tlc板进行纯化，以得到int-210b1。lc/ms(es,m/z)=463[m+h]+。
步骤c–实施例210a和210b的合成。
向含有int-210b1(135mg,292mmol)/thf(3ml)的反应小瓶中添加4-溴-1-(2-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)环戊基)-1h-吡唑(166mg,0.525mmol)，随后添加甲磺酰基(methanesulfonato)(2-二-叔丁基膦基-2’,4’,6’-三-异丙基-1,1’-联苯)(2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(t-buxphospdg3,69.6mg,0.088mmol)和叔丁醇钠(84mg,0.876mmol)。将所得混合物用n2吹扫10分钟，并在90℃下加热24小时。完成后，将反应混合物冷却，且然后浓缩。将所得残余物通过以6%meoh/dcm作为洗脱剂的制备型硅胶板纯化，以得到dmb-保护的中间体。
向上述中间体(20mg,0.036mmol)/dcm(1.0ml)中添加hcl(4.0m，在1,4二氧杂环己烷中,118ul,0.474mmol)。将所得混合物在室温下搅拌30分钟。完成后，将反应混合物浓缩，并将所得残余物通过制备型硅胶tlc板纯化，用6%meoh/dcm洗脱，以得到32mg非对映异构体混合物，其通过用手性as-h柱和以30%meoh(0.2%dipa)作为洗脱剂的sfc进一步拆分，以得到峰1(15mg,0.024mmol)和峰2(12mg,0.021mmol)。
将峰1和峰2于tfa(0.5ml)中的分开溶液各自在50℃下加热3小时，然后浓缩。所得残余物通过用c18柱和以0-100%mecn/水w/0.1%tfa作为洗脱剂的反相hplc进行纯化，提供实施例210a(源自峰1)和实施例210b(源自峰2)。
使用与上述程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物和int-210b1，制备表17中显示的本发明的实施例化合物。对于实施例210a、210b、211a、211b、212a、212b、213和214，基于两种顺式哌啶对映异构体的相对功效和通过振动圆二色性对类似分子的绝对立体化学确定，推导顺式取代的哌啶的绝对立体化学。
实施例215a、215b、215c和215d
实施例215a、215b、215c和215d的化合物的制备
步骤a–化合物int-215a.2-(3-氧代戊基)丙二酸二乙酯的合成。
将密封管中的丙二酸二乙酯(10g,62.4mmol)、戊-1-烯-3-酮(5.78g,68.7mmol)和碳酸钾(0.863g,6.24mmol)的混合物(注意：放热)在室温下搅拌3天。将所得混合物过滤，并通过以0-80%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以提供int-215a。lc/ms(es,m/z)=245[m+h]+。
步骤b–化合物int-215b.2-(3-((1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)氨基)戊基)丙二酸二乙酯的合成。
向int-215a(2.0g,12.89mmol)于dcm(129ml)中的搅拌溶液中添加2-(3-氧代戊基)丙二酸二乙酯(6.93g,28.4mmol)和乙酸(0.077g,1.289mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟，随后逐部分添加氰基硼氢化钠(1.620g,25.8mmol)。然后将所得混合物在室温下搅拌额外30分钟，且然后用150ml1nhcl水溶液淬灭。分离各层，并将水层用dcm萃取两次。合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并浓缩，以得到int-215b。lc/ms(es,m/z)=384[m+h]+。粗材料不经进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤c–化合物int-215c.6-乙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-2-氧代哌啶-3-甲酸乙酯的合成。
向int-215b(1.7g,4.43mmol)于甲苯(22ml)中的溶液中添加乙酸(0.532g,8.87mmol)。然后将混合物在90℃下搅拌2天。完成后，将反应混合物浓缩。所得残余物通过以0-100%etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-215c。lc/ms(es,m/z)=339[m+h]+。
步骤d–化合物int-215d.6-乙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-2-氧代哌啶-3-碳酰肼的合成。
向int-215c(820mg,2.43mmol)于meoh(4.86ml)中的溶液中添加肼(312mg,9.72mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌4天，然后浓缩，并将所得残余物通过以10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法纯化，以提供int-215d。lc/ms(es,m/z)=324[m+h]+。
步骤e–化合物int-215e1、int-215e2、int-215e3和int-215e4的合成。
将int-215d(500mg,1.546mmol)于二氧杂环己烷(7ml)中的溶液添加至乙酸(0.044ml,0.773mmol)中。然后将2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-4-甲氧基苯甲腈(500mg,1.546mmol)添加至混合物中。将混合物在60℃下搅拌2天。完成后，将所得混合物直接通过以0-100%30%etoh/etoac/己烷作为洗脱剂的硅胶柱色谱法进行纯化，以提供期望的中间体。向中间体/thf(5ml)中添加1m硼烷thf络合物(6.0ml,6.0mmol)。将混合物在50℃下搅拌过夜。将所得反应混合物冷却，且然后用50ml1nhcl水溶液淬灭。将混合物用etoac(2×50ml)萃取。合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤，且然后浓缩。所得残余物通过用c18柱和以0-100%acn/水作为洗脱剂的反相hplc进行纯化，以得到外消旋的顺式-1-(4-(5-(5-((3,4-二甲基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇和外消旋的反式-1-(4-(5-(5-((3,4-二甲基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇。lc/ms(es,m/z)=583[m+h]+。
上面的外消旋的顺式-1-(4-(5-(5-((3,4-二甲基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇通过用手性as-h柱(chiraltechnologies)和以50%ipa(0.2%dipa)作为助溶剂的sfc进一步拆分，以提供int-215e1(峰1)和int-215e2(峰2)。外消旋的反式-1-(4-(5-(5-((3,4-二甲基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-乙基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇通过用手性ad-h柱(chiraltechnologies)和以35%etoh(0.2%dipa)作为助溶剂的sfc进一步拆分，以提供int-215e3(峰1)和int-215e4(峰2)。
步骤f–实施例215a、215b、215c和215d的合成。
将int-215e1(98mg,0.159mmol)于2,2,2-三氟乙酸(4ml)中的溶液在60℃下加热1.5小时，然后浓缩。然后将残余物通过用c18柱和以0-100%mecn/水w/0.1%tfa作为洗脱剂的反相hplc纯化以提供实施例215a(反式峰1)。
使用与对于合成实施例215a所述的条件类似的条件，从int-215e2制备实施例215b。
使用与对于合成实施例215a所述的条件类似的条件，从int-215e3制备实施例215c。
使用与对于合成实施例215a所述的条件类似的条件，从int-215e4制备实施例215d。
使用与对于制备实施例215a-d所述的程序类似的程序，从必需的起始材料制备表18中显示的本发明的实施例化合物。
实施例217
实施例217的化合物的制备
步骤a–化合物int-217a.3-(肼羰基)氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯的合成。
向20ml闪烁小瓶中装入cdi(333mg,2.055mmol)和thf(5138µl)。将所得混合物在60℃下加热20min。在单独的20ml闪烁小瓶中加入水合肼(200µl,4.11mmol)/thf(5138µl)，并在室温下向其中缓慢添加酰基咪唑混合物，持续5分钟。将所得混合物搅拌5分钟，并在减压下浓缩。将所得残余物溶入20ml的etoac中，并用10ml的饱和盐水溶液洗涤。浓缩有机层以得到int-217a。lc/ms(es,m/z)=258[m+h]+。
步骤b–化合物int-217b.3-(5-((3,4-二甲基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯的合成。
向int-217a(477mg,1.856mmol)于1,4-二氧杂环己烷(10ml)中的溶液中添加乙酸(0.044ml,0.773mmol)，随后添加作为固体的2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-4-甲氧基苯甲腈(500mg,1.546mmol)。将所得混合物在60℃下搅拌过夜。完成后，在减压下除去溶剂以提供int-217b。lc/ms(es,m/z)=563[m+h]+。
步骤c–化合物int-217c.2-(氮杂环庚烷-3-基)-n-(3,4-二甲基苄基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
向20ml闪烁小瓶中装入int-217b(800mg,1.422mmol)和甲酸(5453µl,142mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2天。完成后，将反应混合物浓缩并用1nnaoh中和至中性ph，然后用20mldcm萃取。有机相经无水mgso4干燥，过滤并浓缩。粗制残余物通过以30%甲醇/dcm作为洗脱剂的硅胶柱色谱法进行纯化，以提供标题化合物int-217c。lc/ms(es,m/z)=463[m+h]+。
步骤d–化合物int-217d.1-(4-(3-(5-((3,4-二甲基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)氮杂环庚烷-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
在氮气下，向装备有搅拌棒的5ml微波小瓶中装入int-217c(150mg,0.324mmol)、t-buxphospdg3(129mg,0.162mmol)和2-甲基丙-2-醇钠(125mg,1.297mmol)。向其中添加5mlthf中的1-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(142mg,0.649mmol)。将混合物用n2吹扫10分钟。然后将小瓶用新盖密封，并加热至90℃过夜。将反应物冷却至室温，且然后添加5ml的水和15ml的dcm。将混合物搅拌5分钟。将有机层分离，经无水mgso4干燥，过滤，并浓缩，以提供标题化合物int-217d。lc/ms(es,m/z)=601[m+h]+。
步骤e–实施例217.1-(4-(3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)氮杂环庚烷-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成。
向20ml闪烁小瓶中装入int-217d(150mg,0.250mmol)和tfa(1250µl,16.23mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌3小时。在减压下除去溶剂，并将粗制残余物通过硅胶制备型tlc纯化，以提供标题化合物实施例217。
实施例218a和218b
实施例218a和218b的化合物的制备
步骤a–3-(肼羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
向20ml小瓶中添加cdi(1.36g,8.41mmol)、1-(叔丁氧基羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-3-甲酸(2.50g,8.41mmol)和thf(21ml)。将所得混合物搅拌并在60℃下加热20min。向单独的小瓶中添加水合肼(0.817ml,16.8mmol)/thf(21ml)，并在室温下经5min向其中缓慢添加酰基咪唑混合物。将所得混合物搅拌5min。蒸发溶剂。将所得残余物溶入etoac中，并用盐水溶液洗涤。浓缩有机层，以得到3-(肼羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。lcms(c12h20f3n3o3)(es,m/z)[m+na]+:334。
步骤b–3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
向3-(肼羰基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.16g,3.71mmol)于1,4-二氧杂环己烷(10ml)中的溶液中添加乙酸(0.088ml,1.5mmol)。将混合物在室温下搅拌。向混合物中添加2-((((2,4-二甲氧基苄基)亚氨基)亚甲基)氨基)-4-甲氧基苯甲腈中间体c1(1.00g,3.09mmol)。将所得混合物在75℃下搅拌16h。然后将混合物浓缩，并溶入20mldcm中。有机层用饱和碳酸氢钠溶液和盐水溶液洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过用5-30%etoac/己烷的硅胶色谱法进行纯化，以得到3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。lcms(c30h35f3n6o5)(es,m/z)[m+h]+:617。
步骤c–n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(5-(三氟甲基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
将3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.50g,2.43mmol)和甲酸(9.33ml,243mmol)的混合物在室温下搅拌4h。用1nnaoh(水溶液)使反应混合物达到中性ph。将混合物用dcm(30ml)萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，并蒸发溶剂，以得到n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(5-(三氟甲基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。lcms(c25h27f3n6o3)(es,m/z)[m+h]+:517。
步骤d–实施例218a和218b:1-(4-((3s,5s或3r,5r)-3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇和1-(4-((3r,5r或3s,5s)-3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇的合成
在氮气下，向20ml小瓶中装入n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(5-(三氟甲基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(250mg,0.484mmol)、1-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(中间体a1,212mg,0.968mmol)、2-甲基丙-2-醇钠(186mg,1.94mmol)和t-buxphospdg3(192mg,0.242mmol)。添加thf(3.5ml)，并混合物用氮气吹扫10min。然后将混合物搅拌并在105℃下加热2天。将反应混合物冷却至室温。向混合物中添加水(10ml)和dcm(10ml)。将混合物搅拌10min并过滤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。向所得残余物中添加tfa(0.037ml,0.48mmol)，并将混合物在50℃下加热3h。蒸发溶剂。向所得残余物中添加饱和nahco3水溶液。混合物用dcm(30ml)萃取，且有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过以5-30%甲醇/dcm作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化。所得产物通过sfc手性分离(oj-h21x250mm柱，以20%meoh(w/0.1%nh4oh改性剂)作为助溶剂)进行纯化，以得到峰1：1-(4-((3s,5s或3r,5r)-3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(实施例218a)和峰2：1-(4-((3r,5r或3s,5s)-3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-(三氟甲基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(实施例218b)。
实施例219a、219b、219c和219d
实施例219a-d的化合物的制备
步骤a–化合物(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺的合成。
将中间体e2(1.2g,2.133mmol)的溶液溶解于甲酸(10.2ml,266mmol)中，并在23℃下搅拌3小时。然后将反应混合物浓缩，用50mldcm稀释，并用50ml饱和nahco3溶液中和。分离各层，并将碱性水层用额外的50mldcm进一步萃取。合并的有机部分用无水mgso4干燥，过滤并浓缩，以得到n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺，其不经进一步纯化即使用。lc/ms(es,m/z)=463[m+h]+。
步骤b–n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-((3s,5r和3r,5s)-5-甲基-1-(3-甲基-1-((2s,3s和2r,3r)-3-(((rs)-四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丁-2-基)-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
向含有搅拌棒的20ml微波小瓶中依次装入n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(5-甲基哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(520mg,1.12mmol)、叔丁醇钠(432mg,4.50mmol)和t-buxphospdg3(447mg,0.562mmol)。将小瓶用盖盖上，用氮气冲洗5分钟，并进行三个抽空循环，持续30秒，并用氮气回填30秒。向混合物中添加4-溴-3-甲基-1-(3-(((rs)-四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丁-2-基)-1h-吡唑(中间体f1,713mg,2.25mmol)于thf(10ml)中的脱气溶液。将反应混合物用氮气再
冲洗1分钟，并置于微波中，在80℃下搅拌过夜(14小时)。冷却后，将5ml饱和nh4cl和dcm添加至反应容器中。搅拌5分钟后，将反应混合物倒入含有10mldcm和水的分液漏斗中。分离各层，并将水层用dcm(10ml)萃取。合并的有机层用mg2so4干燥，过滤，并在减压下浓缩。残余物通过以0-10%meoh/dcm(w/1%et3n)作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以得到n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-((3s,5r和3r,5s)-5-甲基-1-(3-甲基-1-((2s,3s和2r,3r)-3-(((rs)-四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丁-2-基)-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。lcms(c38h50n8o5)(es,m/z)[m+h]+:699。
步骤c–实施例219a、219b、219c和219d:(2s,3s)-3-(4-((3s,5r)-3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丁-2-醇、(2r,3r)-3-(4-((3r,5s)-3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丁-2-醇、(2r,3r)-3-(4-((3s,5r)-3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丁-2-醇和(2s,3s)-3-(4-((3r,5s)-3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-5-甲基哌啶-1-基)-3-甲基-1h-吡唑-1-基)丁-2-醇的合成。
将水(1.471ml)和浓盐酸(1.51ml,18.4mmol)依次添加至40ml闪烁小瓶中，所述闪烁小瓶含有n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-((3s,5r和3r,5s)-5-甲基-1-(3-甲基-1-((2s,3s和2r,3r)-3-(((rs)-四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丁-2-基)-1h-吡唑-4-基)哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(514mg,0.735mmol)和搅拌棒。将混合物在45℃下搅拌。3小时后，将所得浆液过滤并用水(25ml)彻底冲洗。将水层倒入分液漏斗中，并用dcm(2×25ml)萃取。将水层用氢氧化钠(882mg,22.1mmol)于水(10ml)中的溶液碱化。向混合物中添加3:1chcl3/ipa(10ml)，并将混合物剧烈搅拌16h。将混合物倒入含有3:1chcl3/ipa(25ml)的分液漏斗中。分离各层，并用3:1chcl3/ipa(25ml)萃取水层。合并的有机层用无水mgso4干燥，过滤，并在减压下浓缩。所得残余物通过以0-10%meoh/dcm(w/1%et3n)作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以得到异构体的混合物。混合物通过sfc手性分离(lux-221x250mm柱，以35%meoh(w/0.1%nh4oh改性剂)作为助溶剂)进行纯化，以得到化合物实施例219a(峰1)、实施例219b(峰2)、实施例219c(峰3)和实施例219d(峰4)。
使用与对于制备实施例219a、219b、219c和219d所述的程序类似的程序，取代适当的起始芳基卤化物和胺，制备表19中显示的本发明的实施例化合物。
实施例223
实施例223的化合物的制备
步骤a–2-氨基-5-氟-7-甲氧基喹唑啉-4-醇
向2-氨基-6-氟-4-甲氧基苯甲酸(1000mg,5.40mmol)于etoh(10.8ml)中的搅拌悬浮液中添加氰胺(568mg,13.5mmol)和hcl(1.17ml,7.02mmol)(6m,水溶液)。将混合物在回流下加热16小时。将混合物冷却至室温。通过过滤收集沉淀，并在高真空下干燥，以得到2-氨基-5-氟-7-甲氧基喹唑啉-4-醇。lcms(c9h8fn3o2)(es,m/z)[m+h]+:210。
步骤b–5-氟-7-甲氧基-4-(1h-1,2,4-三唑-1-基)喹唑啉-2-胺
向1,2,4-三唑(175mg,2.54mmol)、2-氨基-5-氟-7-甲氧基喹唑啉-4-醇(177mg,0.846mmol)和dipea(443µl,2.54mmol)于mecn(4.2ml)的搅拌混合物中逐滴添加pocl3(237µl,2.54mmol)。将混合物在40℃下搅拌4小时，且然后在室温下搅拌16小时。将混合物通过celite®过滤，用mecn和乙醚洗涤，以得到5-氟-7-甲氧基-4-(1h-1,2,4-三唑-1-基)喹唑啉-2-胺。lcms(c11h9fn6o)(es,m/z)[m+h]+:261。
步骤c–(3r,6s)-n'-(2-氨基-5-氟-7-甲氧基喹唑啉-4-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼
向20ml小瓶中装入5-氟-7-甲氧基-4-(1h-1,2,4-三唑-1-基)喹唑啉-2-胺(50mg,0.192mmol)、(3r,6s)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼(85mg,0.288mmol)、dma(1.3ml)和dipea(168µl,0.961mmol)。将小瓶盖上盖子，并将混合物搅拌并在80℃下加热4小时，且然后在室温下持续16小时。浓缩混合物，以得到(3r,6s)-n'-(2-氨基-5-氟-7-甲氧基喹唑啉-4-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼，其不经进一步纯化即使用。
步骤d–实施例223的合成
将(3r,6s)-n'-(2-氨基-5-氟-7-甲氧基喹唑啉-4-基)-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)-6-甲基哌啶-3-碳酰肼(93mg,0.192mmol)吸收于n,o-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(2.00ml,0.192mmol)中，并将混合物搅拌并在120℃下加热2小时。将混合物浓缩，并将残余物溶入dcm(1ml)中，并用盐酸(1ml,4.00mmol)(二氧杂环己烷中的4m溶液)酸化。将所得溶液在室温下搅拌30分钟。浓缩混合物，用二氯甲烷(10ml)稀释，用碳酸氢钠水溶液(饱和，10ml)洗涤，并使用分相器收集有机层并浓缩。残余物通过反相hplc(watersxbridgec18obdprep柱，具有0.1%nh4oh改性剂的19x150mmmecn/水)纯化，以得到1-(4-((2s,5r)-5-(5-氨基-10-氟-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)-2-甲基哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(实施例223)。
使用与对于制备实施例223所述的程序类似的程序，取代适当的起始材料，制备表20中显示的本发明的实施例化合物。
实施例225a和225b
实施例225a和225b的化合物的制备
步骤a–(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺
向装备有搅拌棒的200ml圆底烧瓶中装入(r)-3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯中间体e1(1.93g,3.52mmol)。向烧瓶中添加甲酸(40.5ml,1060mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。蒸发溶剂。向所得残余物中添加饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)，并将混合物用dcm(2x100ml)萃取。合并有机层，经无水硫酸镁干燥，过滤，并蒸发溶剂，以得到(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺。lcms(c24h28n6o3)(es,m/z)[m+h]+:449。
步骤b–(r)-3-(4-(3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-3-甲基丁-2-酮
向40ml小瓶中装入(r)-n-(2,4-二甲氧基苄基)-8-甲氧基-2-(哌啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-5-胺(1.00g,2.23mmol)、3-(4-溴-1h-吡唑-1-基)-3-甲基丁-2-酮(1.03g,4.46mmol)、t-buxphospdg3(0.886g,1.12mmol)和2-甲基丙-2-醇钠(0.857g,8.92mmol)。小瓶用氮气吹扫。向混合物中添加thf(13.5ml)，并将混合物搅拌并在105℃下加热过夜。混合物通过celite®过滤，用dcm冲洗，并将滤液浓缩。所得残余物通过以0-10%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶色谱法纯化，以得到(r)-3-(4-(3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-3-甲基丁-2-酮。lcms(c32h38n8o4)(es,m/z)[m+h]+:599。
步骤c–(r)-3-(4-(3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-3-甲基丁-2-酮
向含有(r)-3-(4-(3-(5-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-3-甲基丁-2-酮(1.00g,1.670mmol)和搅拌棒的30ml小瓶中添加tfa(16.70ml)，并将反应混合物搅拌并在50℃下加热2h。蒸发溶剂。将残余物溶解于25%ipa/氯仿(40ml)中，并添加饱和nahco3水溶液(40ml)。将该混合物在室温下搅拌2h。分离各层，并用25%ipa/氯仿(2x50ml)萃取水层。合并的有机层经无水mgso4干燥，过滤并浓缩，以得到(r)-3-(4-(3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-3-甲基丁-2-酮，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。lcms(c23h28n8o2)(es,m/z)[m+h]+:449。
步骤d–实施例225a和225b的合成
将3-(4-(3-(5-氨基-8-甲氧基-[1,2,4]三唑并[1,5-c]喹唑啉-2-基)哌啶-1-基)-1h-吡唑-1-基)-3-甲基丁-2-酮(1.00g,2.23mmol)的样品悬浮于40ml小瓶中的etoh(22.30ml)中，并向该混合物中添加硼氢化钠(0.253g,6.69mmol)。将混合物在室温下搅拌3h。将混合物倒入250mlerlenmeyer烧瓶中，并用水(25ml)淬灭。混合物用dcm(40ml)萃取，随后用25%ipa/氯仿(2x50ml)萃取。合并的有机层经无水mgso4干燥，过滤并浓缩。所得残余物通过以0-30%meoh/dcm作为洗脱剂的硅胶色谱法进行纯化，以得到异构体的混合物。混合物通过sfc手性分离(ic21x250mm柱，以40%ipa(w/0.1%nh4oh改性剂)作为助溶剂)进行拆分，以得到化合物实施例225a(峰1)和实施例225b(峰2)。
生物测定
下表中所示的对于每种本发明的化合物报告的ic50值是根据下述方法测量的。表中的星号(*)指示该数据点不可用或未测量。
a2a受体亲和力结合测定测量了对a2a腺苷受体具有高亲和力的氚化配体与由重组表达人a2a腺苷受体的hek293或cho细胞制备的膜在不同浓度的本发明的化合物存在的情况下的结合量。在每种测定中，将测试的本发明的化合物溶解在100%dmso中，并进一步稀释在100%dmso中，通常以半对数间隔产生10点滴定，使得最终测定浓度不超过10μm化合物或1%dmso。
使用放射性配体结合测量a2a结合亲和力
将148μl(5μg/ml)膜(perkinelmer,目录号rbha2am400ua)和2μl待测试的本发明的化合物(测试化合物)转移到96孔聚丙烯测定板的各个孔中，并在室温下孵育15至30分钟。将[3h]sch58261((7-(2-苯基乙基)-5-氨基-2-(2-呋喃基)-吡唑并-[4,3-e]-1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶))在测定缓冲液(50mmtrisph7.4,10mmmgcl2,0.005%tween20)中稀释至4nm的浓度，并将50μl转移到测定板的每个孔中。为了定义总结合和非特异性结合，还包括分别含有1%dmso和1μmzm241385(tocrisbioscience,目录号1036)的孔。将测定板在室温下在搅拌下孵育60分钟。使用filtermateharvester®(perkinelmer)，通过unifilter-96®pei包被板(perkinelmer目录号6005274或6005277)过滤测定板的内容物。过滤通过如下实现：抽吸测定板的内容物5秒，然后用冰冷的洗涤缓冲液(50mmtris-hclph7.4,150mmnacl)洗涤并抽吸内容物3次，并使真空歧管干燥板30秒。将过滤板在55℃孵育至少1小时，并使其干燥。过滤板的底部用背衬胶带(backingtape)密封。将40μlultimagold™(perkinelmer,目录号6013329)添加到过滤板的每个孔中，并用topseal-aplus®透明板密封物(perkinelmer,目录号6050185)密封板的顶部。将板孵育至少20分钟，并且然后使用topcount®(perkinelmer)闪烁计数器确定每个孔中剩余的放射性量。归一化为总结合和非特异性结合后，计算各化合物浓度下的效应百分比。使用基于levenberg-marquardt算法的4参数逻辑斯谛拟合以电子方式分析效应百分比对化合物浓度的对数的图，以产生ic50值。
a2b结合亲和力的测量
使用放射性配体过滤结合测定通过实验确定本发明的化合物对人a2b腺苷受体的报告的亲和力。该测定在本发明的化合物存在和不存在的情况下测量氚化的专有a2b受体拮抗剂与由重组表达人a2b腺苷受体的hek293细胞制备的膜(perkinelmer,目录号es-013-c)的结合量。
为了进行测定，首先将待测试的本发明的化合物溶解于100%dmso中，并且进一步稀释于100%dmso中，通常以半对数间隔产生10点滴定，使得最终测定浓度不超过10μm化合物或1%dmso。将148μl(135μg/ml)的膜和2μl的测试化合物转移到96孔聚丙烯测定板的各个孔中，并在室温下在搅拌下孵育15至30分钟。在测定缓冲液(不含镁和钙的磷酸盐缓冲盐水，ph7.4;gehealthcarelifesciences,目录号sh30256.01)中将氚化的放射性配体稀释至14nm的浓度，并且然后将50μl溶液转移至测定板的每个孔中。为了定义总结合和非特异性结合，还包括分别含有1%dmso和20μmn-乙基甲酰胺基腺苷(tocrisbioscience,目录号1691)的孔。将测定板的孔在室温下在搅拌下孵育60分钟，然后使用filtermateharvester®(perkinelmer)或类似设备通过unifilter-96®pei包被板(perkinelmer目录号6005274或6005277)过滤。过滤通过如下实现：抽吸测定板的内容物5秒，然后用冰冷的洗涤缓冲液(补充有0.0025%brij58的测定缓冲液)洗涤并抽吸内容物3次，并使真空歧管干燥板30秒。将过滤板在55℃孵育至少1小时，并使其干燥。然后用背衬胶带密封过滤板的底部。将40μlultimagold™(perkinelmer,目录号6013329)添加到过滤板的每个孔中，并用topseal-aplus®透明板密封物(perkinelmer,目录号6050185)密封板的顶部。然后将板孵育至少20分钟，并且然后使用topcount®(perkinelmer)闪烁计数器确定每个孔中剩余的放射性量。归一化为总结合和非特异性结合后，计算各化合物浓度下的效应百分比。使用基于levenberg-marquardt算法的4参数逻辑斯谛拟合以电子方式分析效应百分比对化合物浓度的对数的图，以产生ic50值。
基于camp细胞的测定中a2a和a2b拮抗作用的测量
使用试剂盒来测定化合物拮抗人a2a和a2b腺苷受体的能力，以测量细胞内环状amp水平的变化(lancecamp384试剂盒,perkinelmer,目录号ad0264)。将先前在恢复培养基(lifetechnologies，目录号12648-010)中冷冻的重组表达人a2a或a2b受体的hek293细胞解冻，并稀释至刺激缓冲液(hbss(hyclonesh30268.01)，5mmhepes(gibco15630-106)，200nm咯利普兰(tocris,目录号0905)和1.5%(v/v)bsa稳定剂(试剂盒组分)中。将细胞悬浮液以200xg离心10min，且然后在补充有alexafluor647抗camp抗体的1:10000稀释液的刺激缓冲液中重悬浮至6.0x105个细胞/ml的密度。使用labcyteecho550声学分配器来将最多达25nl的溶解于dmso中的测试化合物转移至干燥的optiplate-384板(perkinelmer，目录号6008289)的孔中。使用多通道移液器进行所有随后的液体添加。接下来，将5µl细胞悬浮液添加至optiplate-384的孔中并在湿润环境中在37℃和5%co2下孵育30min。该时间之后，对于a2a和a2b分别添加5µl的300nm或600nm腺苷(sigma目录号a9251)，并在湿润环境中在37℃和5%co2下孵育30分钟。此时，根据制造商的方案，通过将lanceeu-w8044标记的链霉抗生物素蛋白和生物素-camp在检测缓冲液中合并来制备检测混合物。将10µl的检测混合物添加至optiplate-384的每个孔中，其用板密封物覆盖，并在环境条件下孵育2小时，然后使用envision(perkinelmer,waltham,ma)多模式读板器读取板。通过将最小效应定义为在0.25%(v/v)dmso存在的情况下的刺激和将最大效应定义为在1μmzm241385(cayman,目录号1036)存在的情况下的刺激，对数据进行归一化。效应百分比数据相对于化合物浓度对数的曲线拟合使用4-参数浓度响应曲线拟合算法来计算ic50值。测试的化合物浓度为10,000、3,333、1,111、370.4、123.4、41.2、13.7、4.6、1.5和0.5nm，以及0.25%残余dmso。