一种八仙花多糖治疗自身免疫性心肌炎的医药用途的制作方法

本发明属于医药领域，涉及自身免疫性心肌炎的药物，具体涉及一种八仙花多糖治疗自身免疫性心肌炎的医药用途。

背景技术：

心肌炎是心脏的炎症性疾病，是扩张型心肌病的主要病因，并可导致青少年发生心力衰竭及猝死。目前，心肌炎仍是心血管研究领域中一个具有挑战性的临床问题。自身免疫性心肌炎是指由自身免疫机制所致的心脏炎症性疾病。

发明人在先前申请的专利中公开了一种具有拮抗心肌缺血再灌注损伤作用的八仙花多糖(申请号：2019112209788；发明名称：一种八仙花多糖及治疗心肌缺血再灌注损伤的用途)。发明人陆续发现了八仙花多糖新的药理活性，特提出本发明。

技术实现要素：

本发明是为了提供一种八仙花多糖治疗自身免疫性心肌炎的医药用途。

本发明技术方案如下：

一种八仙花多糖治疗自身免疫性心肌炎的医药用途，该八仙花多糖通过如下方法制备：收集八仙花hydrangeamacrophylla叶，洗净，阴干，粉碎，用去离子水热回流提取，过滤，滤液减压浓缩，离心收集上清液，加入三倍体积无水乙醇，混匀、静置醇析，收集沉淀，用去离子水复溶，按照同样的方法重复离心、醇沉一次，收集沉淀，无水乙醇、丙酮洗涤，去离子水复溶，sevag法脱蛋白，冷冻干燥。

优选地，制备八仙花多糖时，热回流提取3次，每次1.5h。

优选地，制备八仙花多糖时，每次静置醇析12h。

优选地，制备八仙花多糖时，离心条件为5000r/min转速离心15min。

有益的技术效果：

本发明发现，八仙花多糖可以有效改善自身免疫性心肌炎大鼠的心肌病变程度和炎性浸润程度，具有开发成治疗自身免疫性心肌炎药物的前景。

附图说明

图1为各组大鼠心肌组织中ifn-γ、il-17表达水平的westernblot检测图。

具体实施方式

下面结合附图具体介绍本发明实质性内容，但本领域技术人员应当知道并不以下述内容限定本发明保护范围。

实施例1：提取纯化实验

收集八仙花hydrangeamacrophylla叶，洗净，阴干，粉碎，取粉末1kg，加10l去离子水，热回流提取3次，每次1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至3l，于5000r/min转速离心15min，收集上清液，加入三倍体积无水乙醇，混匀、静置醇析12h，收集沉淀，用3l去离子水复溶，于5000r/min转速离心15min，收集上清液，按照同样的方法重复醇沉一次，收集沉淀，无水乙醇、丙酮洗涤，去离子水复溶，sevag法脱蛋白，冷冻干燥。

最终收集得到21.8g多糖，苯酚-硫酸法测定多糖纯度为92.5％。

实施例2：药理活性实验

1、动物分组、造模和给药

将40只8～10周龄spf级雄性sd大鼠(体质量190±10g)，随机分为对照组、模型组、低剂量药物组和高剂量药物组，每组10只。使用本领域惯用的方法制备自身免疫性心肌炎模型大鼠，具体操作方法如下：

将浓度为11.7mg/ml的猪心肌球蛋白原液(美国sigma公司)经0.01mol/lpbs稀释成10mg/ml的溶液后与等体积弗氏完全佐剂(含有结核分支杆菌h37ra1mg/ml)混匀成乳浊液。在实验第1、7天，分别于模型组、低剂量药物组和高剂量药物组大鼠的左右后肢足垫皮下各注射混合后的乳浊液0.1ml(即每只大鼠共注射0.2ml乳化液)；对照组用完全弗氏佐剂(等体积0.01mol/lpbs与完全弗氏佐剂混合液)假性免疫。

给药方法为：从实验第1天开始，低剂量药物组、高剂量药物组分别按照25mg/kg/d、50mg/kg/d的剂量灌胃用去离子水溶解的八仙花多糖(实施例1制备)，模型组和对照组灌胃给予等体积去离子水，连续给药21天。

最后一次给药2小时后处死大鼠，留取心脏及血清标本用于指标检测。

2、elisa法检测血清中ifn-γ、il-17的水平

严格按照elisa试剂盒说明书步骤测定大鼠血清中ifn-γ、il-17的水平。

3、he染色法评估心肌病变程度

摘取心脏，用中性福尔马林溶液固定，石碏包埋、切片，用于he染色，评估心肌病变程度。具体方法为：将心肌组织进行常规he染色，在光镜下观察心肌病理学改变，计算心肌病变(炎性浸润及坏死)积分，即每张切片随机取5个高倍视野，计算每个高倍视野中炎性细胞浸润和坏死区域面积与整个视野面积的比值，无病变记为0分，病变面积＜25％记为1分，25％≤2分＜50％，50％≤3分＜75％，4分≥75％。

4、westernblot法检测心肌组织中ifn-γ、il-17的水平

冰上取各组大鼠心肌组织，研磨、裂解液提取细胞总蛋白，bca法测蛋白浓度。各组取等量总蛋白上样进行sds-page电泳，转膜、封闭后，加入待测一抗(ifn-γ、il-17)和内参抗体(β-actin)，于4℃孵育过夜，次日加入相应的二抗，化学发光法检测目的蛋白表达水平，采用imagej软件对显影的条带进行灰度分析。

5、统计学方法

采用spss19.0分析数据，计量资料以均值±sd表示，组间两两比较用lsd-t检验，以p＜0.05代表差异有统计学意义。

二、实验结果

1、各组大鼠血清中ifn-γ、il-17水平

elisa检测结果如表1所示，与对照组相比，模型组大鼠血清中ifn-γ、il-17水平显著升高，说明造模成功；与模型组相比，低剂量药物组、高剂量药物组大鼠血清中ifn-γ、il-17水平显著降低，且高剂量药物组降低更明显，说明八仙花多糖可以显著降低自身免疫性心肌炎大鼠血清中炎性因子的水平。

表1各组大鼠血清ifn-γ、il-17水平

2、各组大鼠心肌病变程度

he染色评分结果如表2所示，与对照组相比，模型组大鼠心肌出现明显病变，说明造模成功；与模型组相比，低剂量药物组、高剂量药物组大鼠心肌病变程度明显好转，且高剂量药物组好转更明显，说明八仙花多糖可以显著降低自身免疫性心肌炎大鼠的心肌病变程度。

表2各组大鼠心肌he染色评分

3、各组大鼠心肌组织中ifn-γ、il-17水平

westernblot检测结果如图1所示，与对照组相比，模型组大鼠心肌组织中ifn-γ、il-17水平显著升高，说明造模成功；与模型组相比，低剂量药物组、高剂量药物组大鼠心肌组织中ifn-γ、il-17水平显著降低，且高剂量药物组降低更明显，说明八仙花多糖可以显著降低自身免疫性心肌炎大鼠心肌组织中炎性因子的水平。

上述实施例表明，八仙花多糖可以有效改善自身免疫性心肌炎大鼠的心肌病变程度和炎性浸润程度，具有开发成治疗自身免疫性心肌炎药物的前景。

上述实施例旨在具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应当将本发明保护范围局限于上述具体实施例。