本发明属于医药技术领域，涉及烯丙基胺类化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体，及包含这些化合物的药物制剂、药物组合物及其在预防和/或治疗与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病中的应用。
背景技术：
氨基脲敏感的胺氧化酶(ssao，semicarbaide-sensitiveamineoxidase)是一类对氨基脲特别敏感的胺氧化酶，其在体内分布广泛，在细胞膜上和血浆中都有分布。在内皮细胞中，ssao以血管粘附蛋白-1(vap-1,vascularadhesionprotein-1)的形式存在。目前认为其在体内的生理作用主要是参与胺的代谢，催化如甲胺和氨基丙酮等短链伯胺氧化脱氨并生成相应的醛类、过氧化氢和氨。ssao结构中含有1个二价的铜离子，以醌基作为辅酶。ssao没有专一的底物，以脂肪族和芳香族伯胺为主。
目前尚未有ssao/vap-1抑制剂上市，本发明的ssao/vap-1抑制剂可用于有效地减轻多种疾病状态下与ssao/vap-1过表达等相关的失调状态下的症状和病变，因此具有巨大的应用前景。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一类新型的ssao/vap-1抑制剂，此类化合物对与ssao/vap-1蛋白表现出很强的抑制活性，其可用于预防和/或治疗与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病。并且，本发明的烯丙基胺类化合物对于ssao/vap-1蛋白表现出优异的选择性，因此在预防和/或治疗与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病的同时，避免了其他副作用。
具体而言，本发明提供以下技术方案。
本发明的一个实施方案中，提供下式i所示的化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体(以下，有时也称为“本发明化合物”)：
其中，r1和r2各自独立地选自氢、卤素，且r1和r2不同时为氢；
r3和r4各自独立地选自氢或c1-6烷基，或者与其连接的n原子一起组成任选被取代基取代的含氮5-10元杂环；
r5和r6各自独立地选自氢或c1-6烷基；
l1为键，或为-cr’r”-、-n-、-o-、-s-、-so2-、s(o)、-sonr’-、-so2nr’-或-nr’conr’，r’和r”各自独立地选自氢或c1-6烷基；
cy1为未被取代或被一至多个ra取代的如下式(a)所示基团：
m、n为0-3的整数，x1、x2、x3分别独立的选自ch2、ch、n、o、s、nh、c＝o，x4、x5、x6分别独立的选自ch或n，x7、x8分别独立的选自ch或c，当m和n＞0时，每个x3或者x4可以相同或者不同；
每个ra独立地选自：羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素原子、氨基磺酰基，或未被取代或被一至多个rb取代的c1-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c1-6烷氧c1-6烷氧基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基硫基c1-6烷基、c1-6烷基氨基、(c1-6烷基)2氨基、c1-6烷基氨基c1-6烷基、c1-6烷基氨基羰基、(c1-6烷基)2氨基羰基、c1-6烷基氨基羰基c1-6烷基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基羰基氨基c1-6烷基、(c1-6烷基)2氨基c1-6烷基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基羰基c1-6烷基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基磺酰基c1-6烷基、c1-6烷基氨基磺酰基、c1-6烷基氨基磺酰基c1-6烷基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氨基c1-6烷基、cy2-、cy2-c1-6烷基、cy2-c1-6烷氧基、cy2-o-、cy2-c(o)-、cy2-nh-c(o)-，cy2为3-12元环烷基、3-12元环烯基、3-12元杂环基、芳基、5-14元杂芳基；
每个rb独立地选自：羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素原子、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷氧基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基氨基、(c1-6烷基)2氨基、c1-6烷基氨基羰基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基氨基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰基、3-12元环烷基、3-12元环烯基、3-12元杂环基、芳基、5-14元杂芳基；
条件是，当cy1是
在一个实施例中，式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体，其中，r1和r2各自独立地选自氢、卤素，且r1和r2不同时为氢；
r3和r4各自独立地选自氢或c1-6烷基；
r5和r6各自独立地选自氢或c1-6烷基；
l1为键，或为-cr’r”-、-n-、-o-、-s-，r’和r”各自独立地选自氢或c1-6烷基；
cy1为未被取代或被一至多个ra取代的如下式(a-1)所示基团：
m、n为0-3的整数，x1、x2、x3分别独立的选自ch2、ch、n、o、nh、c＝o，x4、x5、x6分别独立的选自ch或n，当m和n＞0时，每个x3或者x4可以相同或者不同；
每个ra独立地选自：羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素原子、氨基磺酰基，或未被取代或被一至多个rb取代基取代的c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷氧基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基硫基c1-6烷基、c1-6烷基氨基、(c1-6烷基)2氨基、c1-6烷基氨基c1-6烷基、c1-6烷基氨基羰基、(c1-6烷基)2氨基羰基、c1-6烷基氨基羰基c1-6烷基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基羰基氨基c1-6烷基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基羰基c1-6烷基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基磺酰基c1-6烷基、c1-6烷基氨基磺酰基、c1-6烷基氨基磺酰基c1-6烷基、c1-6烷基磺酰氨基、cy2-、cy2-c1-6烷基、cy2-c1-6烷氧基、cy2-o-、cy2-c(o)-、cy2-nh-c(o)-，cy2为3-8元环烷基、4-10元杂环基、苯基、5-10元杂芳基；
每个rb独立地选自：羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素原子、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷氧基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基氨基、c1-6烷基氨基羰基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基羰基、3-8元环烷基、5-10元杂环基、苯基、5-10元杂芳基；
条件是，当cy1是
在一个实施例中，式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体，
cy1为未被取代或被一至多个ra取代的如下式(a-1)所示基团：
m、n为1-2的整数，x1、x2、x3分别独立的选自ch2、ch、n、o、nh，x4、x5、x6分别独立的选自ch或n，当m和n＞0时，每个x3或者x4可以相同或者不同；
在一个实施例中，式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体，
其中，cy1为未被取代或被一至多个ra取代的如下式(a-11)、(a-12)所示基团：
m、n为1-2的整数，x1、x2、x3分别独立的选自ch2、ch、n、o、nh，x4、x5、x6分别独立的选自ch或n，当m＞0时，每个x3可以相同或者不同；
在一个实施例中，式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体，
其中，cy1为未被取代或被一至多个ra取代的如下基团：
在一个实施例中，式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体，
其中，cy1为未被取代或被一至多个ra取代的如下基团：
每个ra独立地选自：羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素原子、氨基磺酰基，或未被取代或被一至多个rb取代基取代的c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷氧基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基氨基、c1-6烷基氨基羰基、(c1-6烷基)2氨基羰基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基羰基c1-6烷基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基磺酰基c1-6烷基、c1-6烷基氨基磺酰基、c1-6烷基氨基磺酰基c1-6烷基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氨基c1-6烷基、cy2-、cy2-c1-6烷基、cy2-c1-6烷氧基、cy2-o-、cy2-c(o)-、cy2-nh-c(o)-，cy2为3-8元环烷基、4-10元杂环基、苯基、5-10元杂芳基；
每个rb独立地选自：羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素原子、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷氧基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基氨基、c1-6烷基氨基羰基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基羰基、3-8元环烷基、5-10元杂环基、苯基、5-10元杂芳基；
条件是，当cy1是
在一个实施例中，式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体，
其中，cy1为未被取代或被一至多个ra取代的如下基团：
每个ra独立地选自：羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素原子、氨基磺酰基，或未被取代或被一至多个rb取代基取代的c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基氨基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基羰基、(c1-6烷基)2氨基羰基、c1-6烷基羰基c1-6烷基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基氨基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氨基c1-6烷基、cy2-、cy2-c1-6烷基、cy2-c1-6烷氧基、cy2-o-、cy2-c(o)-、cy2-nh-c(o)-，cy2为3-8元环烷基、4-10元杂环基、苯基、5-10元杂芳基；
每个rb独立地选自：羟基、氨基、羧基、氰基、硝基、卤素原子、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基氨基、c1-6烷基氨基羰基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基羰基、3-8元环烷基、5-10元杂环基、苯基、5-10元杂芳基。
在一个实施例中，式i化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体，
其中，cy1为未被取代或被一至多个ra取代的如下基团：
每个ra独立地选自：羟基、氨基、卤素原子、氨基磺酰基，或未被取代或被一至多个rb取代基取代的c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷基羰基氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基氨基磺酰基、(c1-6烷基)2氨基羰基、c1-6烷基羰基c1-6烷基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰氨基c1-6烷基、cy2-、cy2-c1-6烷基、cy2-c(o)-、cy2-nh-c(o)-，cy2为3-6元环烷基、4-6元杂环基、苯基、5-10元杂芳基；
每个rb独立地选自：羟基、氨基、卤素原子、c1-6烷基、卤代c1-6烷基、c1-6烷氧基、卤代c1-6烷氧基、c1-6烷氧基c1-6烷基、4-6元杂环基。
本发明的另一个实施例中，提供如下化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体：
本发明的另一技术方案中，提供含有式i所示化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体的药物组合物，其可以任选含有一种或多种药用载体。
本发明的另一技术方案中，所述的药物组合物可以以本领域公知的任何合适的给药方式，例如可以通过口服，肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬膜外)，透皮，直肠，鼻，经肺，局部(包括口腔和舌下)，阴道，腹膜内，肺内和鼻内等给药等方式，施用于需要预防和/或治疗的患者或受试者。
本发明的另一技术方案中，所述药物组合物可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。用于肠胃外给药时，所述药物组合物可制成注射剂、包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配置注射剂时，可以不加入附加剂，也可以根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，所述药物组合物可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物组合物可制成吸入剂或喷雾剂等。
本发明的另一技术方案中，提供式i所示化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体在制备用于预防和/或治疗与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病的药物中的应用。
本发明的另一技术方案中，提供一种预防和/或治疗与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病的方法，其包括对对象施用式i所示化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体。
本发明的另一技术方案中，提供式i所示化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体，其用于预防和/或治疗与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病。
本发明的另一技术方案中，提供上述药物组合物用于预防和/或治疗与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病的用途。
发明效果
本发明提供一种新型的烯丙基胺类化合物，其在与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病的治疗和/或预防中是有效的。具体而言，本发明的式i所示化合物，其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体对ssao/vap-1蛋白表现出很强的抑制活性。并且，相对于rhaoc1蛋白(dao)，本发明的化合物对于ssao/vap-1蛋白表现出优异的选择性。
由此，本发明可以提供一种预防和/或治疗与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病的药物。
发明详述
下面将结合具体实施方式对本发明的实施方案进行更为详细的说明，但是本领域的技术人员将会理解，下列描述的具体实施方式仅用于说明本发明，而不应视为对本发明的保护范围的限定。相反，本发明意图涵盖可被包括在由权利要求所限定的本发明范围之内的所有替代、修改和等同的方式。在没有特别说明的情况下，本发明的各实施方案可以以任意地方式进行组合，由此而得的技术方案的转换、变形、改变也包括在本发明的范围之中。
定义
本发明中，“ca-b基团”(a和b表示1以上的整数，a＜b)的表述表示“基团”存在a-b个碳原子，例如，c1-6烷基，即表示碳原子数为1-6的烷基，c1-6烷氧基，即表示碳原子数为1-6的烷氧基，c3-8环烷基，即表示碳原子数为3-8的环烷基，c1-6烷氧基c1-6烷基，即表示碳原子数为1-6的烷氧基与碳原子数为1-6的烷基键合而成的基团。
本发明所述的“卤素”或“卤素原子”是指氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。优选为氟原子，氯原子。
本发明所述的“c1-6烷基”指从含有1-6个碳原子的烷烃部分去除一个氢原子而衍生得到的直链或支链的烷基，其包括直链c1-6烷基和支链c1-6烷基。事实上，本领域技术人员公知的是，c1-6烷基具有支链(支链c1-6烷基)的情况下，其至少具有3个碳原子。作为“c1-6烷基”的例子，例如，可以列举甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基和1-甲基-2-甲基丙基等。所述“c1-4烷基”指含有1-4个碳原子的上述实例。
本发明所述的“c2-6烯基”指从含有至少一个碳碳双键的2-6个碳原子的烯烃部分去除一个氢原子而衍生得到的直链或支链的烯烃基，例如，可以列举乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1,3-丁二烯-1-基、1-戊烯-3-基、2-戊烯-1-基、3-戊烯-1-基、3-戊烯-2-基、1,3-戊二烯-1-基、1,4-戊二烯-3-基、1-己烯-3-基、1,4-己二烯-1-基等。优选的是，“c2-6烯基”中含有一个碳碳双键。
本发明所述的“c2-6炔基”指从含有至少一个碳碳叁键的2-6个碳原子的炔烃部分去除一个氢原子而衍生得到的直链或支链的炔烃基，例如，可以列举乙炔基、丙炔基、2-丁炔-1-基、2-戊炔-1-基、3-戊炔-1-基、4-甲基-2-戊炔-1-基、2-己炔-1-基、3-己炔-2-基、3-己炔-1-基、3-己炔-2-基等。优选的是，“c2-6炔基”中含有一个碳碳叁键。
本发明所述的“c1-6烷氧基”是指前文所定义的“c1-6烷基”通过氧原子与母体分子部分连接的基团，即“c1-6烷基-o-”基团，例如，可以列举上述“c1-6烷基”中所列举的基团与-o-键合而得的基团，包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、新戊氧基和正己氧基等。所述的“c1-4烷氧基”指含有1-4个碳原子的上述实例，即“c1-4烷基-o-”基团。
所述的“c1-6烷氧c1-6烷氧基”是指c1-6烷氧基取代c1-6烷氧基上的一至多个氢原子所形成的基团。
所述的“c1-6烷基氨基”、“(c1-6烷基)2氨基”、“c1-6烷基羰基氨基”、”c1-6烷氨基羰基”、“c1-6烷基羰基”、“c1-6烷基氨基磺酰基”、“c1-6烷基磺酰氨基”、“c1-6烷基磺酰基”、“c1-6烷基硫基”是指c1-6烷基各自与-nh2、-co-nh2-、-nh2-co-、-co-、-nh2so2-、-so2nh2-、-so2-、-s-连接形成的基团。
所述的“c1-6烷氧c1-6烷基”、“c1-6烷硫基c1-6烷基”、“c1-6烷氨基c1-6烷基”、“c1-6烷氨基羰基c1-6烷基”、“c1-6烷羰基氨基c1-6烷基”、“c1-6烷基羰基c1-6烷基”、“c1-6烷基氨基磺酰基c1-6烷基”、“c1-6烷基磺酰氨基c1-6烷基”、“c1-6烷基磺酰基c1-6烷基”是指c1-6烷氧基、c1-6烷硫基、c1-6烷氨基、c1-6烷氨基羰基、c1-6烷羰基氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基氨基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基磺酰基取代c1-6烷基上的一至多个氢原子所形成的基团。
本发明所述的“稠环”是指由两个或两个以上环状结构以并、螺、桥的连接方式所形成的多环系结构。所述的并环是指由两个或两个以上环状结构彼此公用两个相邻的环原子(即共用一个键)所形成的稠环结构。所述的桥环是指由两个或两个以上环装结构彼此共用两个非相邻的环原子所形成的稠环结构。所述的螺环是指由两个或两个以上环状结构彼此共用一个环原子所形成的稠环结构。
本发明所述的“环烷基”，是指从环烷烃衍生得到的一价基团或(根据需要的)二价基团，所述环烷烃包括单环环烷烃或者稠环环烷烃，可以具有3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个碳原子。在不特别指明的情况下，某元环烷基，包括可能形成的所有单环、稠环(包括以并、螺、桥的形式稠合)的情形。环烷基可以是3-12元的一价基团或(根据需要的)二价以上的基团，可以是3-10元的一价基团或(根据需要的)二价以上的基团、3-8元的一价基团或(根据需要的)二价以上的基团、3-6元的一价基团或(根据需要的)二价以上的基团、4-6元的一价基团或(根据需要的)二价以上的基团、5-7元的一价基团或(根据需要的)二价以上的基团。
(一价或二价以上的)单环环烷基可以为3-12元环烷基、3-10元环烷基、3-8元环烷基、3-6元环烷基、4-6元环烷基、5-7元环烷基，其实例包括但不限于：环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、环辛烷基、环戊烷-1,3-二基、环己烷-1,4-二基、环庚烷-1,4-二基等。
(一价或二价以上的)稠环环烷基包括并环环烷基、桥环烷基、螺环烷基。
(一价或二价以上的)并环环烷基可以为6-12元并环环烷基、7-10元并环环烷基，其实例包括但不限于：双环[3.1.1]庚烷基、双环[2.2.1]庚烷基、双环[2.2.2]辛烷基、双环[3.2.2]壬烷基、双环[3.3.1]壬烷基和双环[4.2.1]壬烷基。
本发明所述的“环烯基”，是指在上述环烷基的基团中具有至少一个碳碳双键而得的基团。优选具有一个碳碳双键。
“环烷基”和“环烯基”还可以是从6-12元螺环、7-11元螺环去掉一个氢原子而得的一价基团，或者根据需要从不同的两个碳原子上分别去掉一个氢原子而得的二价基团。螺环实例包括但不限于：
“环烷基”和“环烯基”还可以是从6-12元桥环、7-11元桥环去掉一个氢原子而得的一价基团，或者根据需要从不同的两个碳原子上分别去掉一个氢原子而得的二价基团。所述的桥环的实例包括但不限于：
因此，本发明所述的“3-12元环烯基”，在不特别指明的情况下，包括可能形成的所有单环、稠环(包括以并、螺、桥的形式稠合)的情形。其是在上述列举的3-12元的一价基团或(根据需要的)二价以上基团的环烷基中具有至少一个碳碳双键的基团。例如可以是由3-8元环烯、7-11元螺环烯、7-11元并环烯、6-11元桥环烯等衍生得到的一价或二价基团。例如可以列举环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、1,4-环己二烯基、环庚烯基、1,4-环庚二烯基、环辛烯基、1,5-环辛二烯基。
本发明所述的“杂环基”是指上述环烷基的至少一个环碳原子被选自o、s、n的杂原子替代的非芳香性的一价或二价的环状基团。优选不具有碳碳双键或具有一个碳碳双键。优选被1-3个选自o、s、n的杂原子替代。另外，本发明所述的杂环基还包括作为成环原子的碳原子、硫原子被氧代、氮代的情况，例如碳原子被c(＝o)、s(＝o)、s(＝o)2、s(＝o)(＝nh)替代。
具体而言，“杂环基”，可以为具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个成环原子的基团。其可以是3-14元杂环基、3-12元杂环基、3-10元杂环基、4-10元杂环基、3-8元杂环基、4-12元杂环基、4-8元杂环基、4-6元杂环基、5-10元杂环基。
另外，“杂环基”包括一价或(根据需要的)二价以上的单环杂环基系统或一价或(根据需要的)二价以上的多环杂环基系统(也称为稠环系统)，包括饱和、部分饱和的杂环基，但不包括芳环。在不特别指明的情况下，包括可能形成的所有单环、稠环(包括以并、螺、桥的形式稠合)、饱和、部分饱和的情形。
一价或(根据需要的)二价以上的单杂环基可以为3-14元杂环基、3-12元杂环基、3-10元杂环基、4-10元杂环基、3-8元杂环基、4-12元杂环基、4-8元杂环基、4-6元杂环基、5-10元杂环基、3-8元饱和杂环基、3-6元杂环基、4-12元杂环基、4-7元杂环基、4-6元杂环基、5-10元杂环基、5-7元杂环基、5-6元杂环基、5-6元含氧杂环基、5-6元含氮杂环基、5-6元饱和杂环基、5-7元饱和杂环基等，其可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的，但不是芳香性的。其实例包括但不限于：氮杂环丙烷基、2h-氮杂环丙烷基、二氮杂环丙烷基、3h-二氮杂环丙烯基、氮杂环丁烷基、1,4-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环己烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、1,4-二氧杂环己二烯基、四氢呋喃基、二氢吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氢咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氢吡唑基、2,5-二氢噻吩基、四氢噻吩基、4,5-二氢噻唑基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、六氢嘧啶基、六氢哒嗪基、4,5-二氢噁唑基、4,5-二氢异噁唑基、2,3-二氢异噁唑基、2h-1,2-噁嗪基、6h-1,3-噁嗪基、4h-1,3-噻嗪基、6h-1,3-噻嗪基、2h-吡喃基、2h-吡喃-2-酮基、3,4-二氢-2h-吡喃基、1,1-二氧代四氢噻喃基、1,1-二氧代四氢噻吩基、1-亚氨基-1-氧代-四氢硫丁环基、1-亚氨基-1-氧代-四氢噻吩基、1-亚氨基-1氧代-六氢噻喃基等。
一价或(根据需要的)二价以上的稠杂环包括并杂环基、螺杂环基、桥杂环基，其可以是饱和的、部分饱和的或不饱和的，但不是芳香性的。
所述的并杂环基可以为6-12元并杂环基、7-10元并杂环基、6-10元并环基、6-12元饱和并杂环基、7-8元饱和并杂环基、8元饱和并杂环基，其实例包括但不限于：3-氮杂双环[3.10.]己烷基、3,6-二氮杂双环[3.2.0]庚烷基、3,8-二氮杂双环[4.2.0]辛烷基、3,7-二氮杂双环[4.2.0]辛烷基、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢吡咯并[3,4-b]吡咯基、八氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基、八氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶基、2,3-二氢苯并呋喃-2-基、2,3-二氢苯并呋喃基-3-基、二氢吲哚-1-基、二氢吲哚-2-基、二氢吲哚-3-基、2,3二氢苯并噻吩-2-基、八氢-1h-吲哚基、八氢苯并呋喃基、八氢环戊二烯并[c]吡咯基、六氢环戊二烯并[c]呋喃基、2,2-二氧代六氢环戊二烯并[c]噻吩基、2-亚氨基-2氧代-八氢环戊烷并[c]噻吩基。
所述的螺杂环基可以为从6-12元螺杂环、7-11元螺杂环、6-12元饱和螺杂环、7元饱和螺杂环去掉一个氢原子而得的一价基团，或者根据需要从不同的两个碳原子上分别去掉一个氢原子而得的二价基团，螺杂环的实例包括但不限于：
所述的桥杂环基可以为从6-12元桥杂环、7-11元桥杂环、6-12元饱和桥环，7-8元饱和桥环去掉一个氢原子而得的一价基团，或者根据需要从不同的两个碳原子上分别去掉一个氢原子而得的二价基团，桥杂环的实例包括但不限于：
本发明所述的“芳基”是指从芳香性的碳环烃衍生得到的一价基团或根据需要的二价以上基团，所述芳香性的碳环烃包括6-8元单环芳烃和8-14元稠环芳烃。6-8元单环芳基例如为苯基。8-14元稠环芳基例如为萘基、菲基、蒽基等。当为二价基团时，可以列举亚苯基、亚萘基等。
本发明所述的“杂芳基”可以是5-14元杂芳基、5-10元杂芳基、5-6元杂芳基，是指具有至少一个选自o、s、n的杂原子的成环原子数为5、6、7、8、9、10、11、12、13或14的芳香性的一价或二价环状基团。优选具有1-3个杂原子。另外，杂芳基还包括作为成环原子的碳原子、硫原子被氧代、氮代的情况，例如碳原子被c(＝o)、s(＝o)、s(＝o)2、s(＝o)(＝nh)替代。本发明所述的杂芳环可以是单环系统，也可以是稠环系统(以并、螺、桥的形式稠合)杂芳基包括单杂芳基和稠杂芳基，在不特别指明的情况下，某元杂芳基，包括可能形成的所有单环、稠环、全部芳香、部分芳香的情形。单杂芳基可以为5-7元杂芳基、5-6元杂芳基，其实例包括但不仅限于呋喃基、咪唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、吡啶酮基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基和三嗪基。稠杂芳基可以为8-12元并杂芳基、9-10元并杂芳基，其实例包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻吩基、苯并噁二唑基、苯并噻唑基、噌啉基、吲唑基、吲哚基、异喹啉基、萘啶基、嘌呤基、喹啉基。所述杂芳基也可以是从上述基团衍生的二价基团。
本发明所述的“3-6元环”、3-8元环”、“4-6元环”、“4-7元环”是指化学结构上可行的3-6个环原子、3-8个环原子、4-6个环原子、4-7个环原子的环状结构，环原子可以任选地选自c、n、o、s、c(＝o)、s(＝o)、s(＝o)2、s(＝o)(＝nh)，所形成的环状结构可以是单环，也可以是稠合的多环，可以是饱和的，也可以是部分饱和的，还可以是芳香的。具体而言，可以列举上述作为环烷基、环烯基、杂环基、芳基、杂芳基所列举的基团。
本发明所述的“药学上可接受的盐”是指式i化合物的可药用的酸或碱的加成盐或其溶剂化物。当化合物中存在酸性官能团(如-cooh、-oh、-so3h等)与适当的无机或有机阳离子(碱)形成的盐，包括与碱金属或碱土金属形成的盐、铵盐，以及与含氮有机碱形成的盐。当化合物中存在碱性官能团(如-nh2等)与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐，包括与无机酸盐、有机酸形成的盐。这样的“药学上可接受的盐”包括但不限于诸如以下的酸的盐：盐酸、三氟乙酸、磷酸、氢溴酸、硫酸、亚硫酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、硝酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、马来酸、氢碘酸、链烷酸(如乙酸、hooc-(ch2)n-cooh(其中n是0～4))等形成的盐；碱的盐：钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、镁盐等。
本发明中，在反应时，氨基的n原子可以任选地用氨基保护基进行保护。“氨基保护基”是指连接在氨基上且在一定条件下容易脱除的化学基团，其包括但不限于烷氧羰基类、酰基类、烷基类；例如叔丁氧羰基、苄氧羰基、芴甲氧羰基、烯丙氧羰基、邻苯二甲酰基、苄基、对甲氧基苄基、三苯甲基等。本领域技术人员可以参照本领域常用教科书greene'sprotectivegroupsinorganicsynthesis(4thedition)进行适当的选择和操作。
术语“任选取代的”或“任选被取代的”表示本领域技术人员已知可供取代的该部分的任一部分可以是未取代或被本发明所描述的取代基所取代，其中如果存在多于一个取代基，则每个取代基可被独立地选择。
短语“药学上可接受的”表示该物质或组合物与包含在制剂和/或药物组合物中的其他成分必须在药学上和/或毒理学上兼容。
本发明所述“异构体”包括立体异构体和互变异构体。
立体异构体是指当化合物存在不对称碳原子时，会产生对映异构体；当化合物存在碳碳双键或环状结构时，会产生顺反异构体。
“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体，互变异构体是一种特殊的官能团异构体。如含有α-h的羰基化合物的互变异构，具体如
t、t1、t2分别独立地为任意符合化合物成键规律的基团。
如其他质子迁移互变异构，具体如酚-酮互变异构、亚硝基-肟互变异构、亚胺-烯胺互变异构。
所有式i化合物的对映异构体、非对映异构体、消旋异构体、顺反异构体、几何异构体、差向异构体、互变异构体及其混合物，均包括在本发明范围中。
本发明的药物组合物包含式i所示化合物或其药学上可接受的盐、酯、立体异构体、互变异构体的至少一种和任选的一种或多种药用载体。
本发明的药物组合物可以以本领域公知的任何合适的给药方式，例如可以通过口服，肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬膜外)，透皮，直肠，鼻，经肺，局部(包括口腔和舌下)，阴道，腹膜内，肺内和鼻内等给药等方式，施用于需要预防和/或治疗的患者或受试者。
本发明的药物组合物可制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的赋形剂、稀释剂、甜味剂、增溶剂、润滑剂、粘合剂、片剂崩解剂、稳定剂、防腐剂或包封材料的一种或多种物质。用于肠胃外给药时，所述药物组合物可制成注射剂、包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配置注射剂时，可以不加入附加剂，也可以根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，所述药物组合物可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物组合物可制成吸入剂或喷雾剂等。本发明中，合适的固体载体包括但不限于例如纤维素、葡萄糖、乳糖、甘露醇、硬脂酸镁、碳酸镁、碳酸钠、糖精钠、蔗糖、糊精、滑石、淀粉、果胶、明胶、黄芪胶、阿拉伯胶、藻酸钠、对羟基苯甲酸酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。合适的液体载体包括但不限于水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、甘油酯及其混合物。
制备本发明的药物组合物的方法一般是已知的。以已知的方法制备本发明的药物组合物包括常规的混合、制粒、压片、包衣、溶解或冻干方法。
药物制剂优选为单位剂量形式。在该形式中，制剂被细分成含有适当量的活性组分的单位剂量。可以将单位剂量形式包装成含有离散量的制剂的包装，诸如包装的片剂、胶囊剂或在小瓶或安瓿中的粉剂。
药物的施用剂量取决于各种因素，包括患者的年龄、体重和状态以及给药途径。施用的精确剂量基于治疗医生的判断确定。用于施用活性化合物的通常剂量可以是例如：每天约0.01至大约100mg，大约0.05至大约75mg/天，大约0.1至大约50mg/天，或者大约5至大约10mg/天。期望的剂量还取决于采用的具体化合物、疾病的严重程度、施用途径、患者的体重和健康状况以及治疗医生的判断。
本发明的化合物还包含一个或多个的氢原子、氟原子、碳原子、氮原子、氧原子、硫原子被置换为放射性同位素或稳定同位素的化合物。这些标记化合物可用于代谢或药代动力学研究、作为受体的配体等进行生物学分析等。
本发明的化合物可以用于治疗和/或预防与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病，其包括对对象施用本发明的化合物。
包含本发明化合物的药物组合物可以用于治疗和/或预防与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病，其包括对对象施用本发明的化合物。
本发明通式(i)化合物的制备方法
通过标准化学方法在内的多种方法，可以制备本发明的化合物。除非另外指出，否则任何前面定义的变量将继续具有前面定义的含义。示例性的一般合成方法阐述在下述方案中，并且可以很容易的改进以制备本发明的其他化合物。本领域技术人员可以根据本领域教导的常规方法(例如organicsynthesis2ndedition,michaelb.smithetc.)实施以下的反应。在实施例部分中具体地制备本发明的具体化合物。
在本发明的一个实施方式中，通式(i)化合物，通过式(sm1)与式(sm2)反应获得，
其中，cy1、r1、r2、r3、r4、r5、r6、l1如前文所述；x1为离去基团，包括但不限于卤素或磺酸酯。
进一步的，当r3和r4为氢时，在制备过程中需要对
所述的“氨基保护基”，为本领域技术人员常用的保护基，例如：叔丁氧羰基、苄氧羰基、叔丁基、9-芴基甲氧基羰基、烯丙氧羰基、三氟乙酰基、氯乙酰基、三苯基甲基、四氢吡喃基、4-甲氧基苄基、2,4-二甲氧基苄基、邻硝基苯磺酰基、邻苯二甲酰基。并且，氨基的保护和脱保护的方法也可以通过本领域技术人员所公知的方法来进行，例如，可以参考protectivegroupsinorganicsynthesis,3rdedition中记载的步骤。
在本发明的一个实施方式中，通过以下步骤，制备通式(i’)所示的化合物：
其中，cy1、g1、g2、x1的定义如前文所述。
(1)将式(sm1)溶于有机溶剂1中，加入合适的碱，与式(sm2-a)进行反应，得到式(ii-a)；
(2)将式(ii-a)溶于有机溶剂2中，加入合适的脱保护试剂进行脱保护，得到式(i’)。
在本发明的一个实施方式中，通过以下步骤，制备通式(i’)所示的化合物：
其中，cy1、x1的定义如前文所述；
g2选自：叔丁氧羰基、苄氧羰基、叔丁基、9-芴基甲氧基羰基、烯丙氧羰基、三氟乙酰基、氯乙酰基、三苯基甲基、四氢吡喃基、4-甲氧基苄基、2,4-二甲氧基苄基、邻硝基苯磺酰基；其中，
(1)将式(sm1)溶于有机溶剂1中，加入式(sm2-c)和碱，得到式(ii-c)；
(2)将式(ii-c)溶于有机溶剂2中，加入脱保护剂进行脱保护，得到式(i’)。
在本发明的一个实施方式中，通过以下步骤，制备通式(i’)所示的化合物：
其中，cy1、x1的定义如前文所述，其中，
(1)将式(sm1)溶于有机溶剂1中，加入合适的碱，与式(sm2-b)进行反应，得到式(ii-b)；
(2)将式(ii-b)溶于有机溶剂2中，加入水合肼进行肼解反应，得到式(i’)。
在本发明的一个实施方式中，所述的有机溶剂1为dmf、dma、acn、甲醇、乙醇、异丙醇、thf。
在本发明的一个实施方式中，所述的有机溶剂2为甲醇、乙醇、异丙醇。
在本发明的一个实施方式中，所述的碱为氢化钠、碳酸铯、碳酸钾、二(三甲基硅基)氨基锂。
在本发明的一个实施方式中，所述的脱保护剂为盐酸、三氟乙酸、氢溴酸、三甲基碘硅烷等。
在本发明的一个实施方式中，在反应过程中，可加入相转催化剂以得到目标化合物，所述相转催化剂，可以是本领域常用的催化剂，包括但不限于如醋酸铜，氯化铜、钯炭、氯化铁、醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、四丁基溴化铵、苄基三乙基氯化铵、四丁基氯化铵等。
所述的“合适的脱保护剂”，是指本领域技术人员根据化学结构中氨基保护基g1和g2的种类不同，选择相应的酸、碱或者氧化剂，进行脱保护反应所用的试剂。其可以使用protectivegroupsinorganicsynthesis,3rdedition中记载的那些。
本发明中，所述的“酸”，可以是本领域常用的酸类，包括有机酸和无机酸。作为有机酸，可以列举甲酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、草酸、马来酸、富马酸、扁桃酸、戊二酸、苹果酸、安息香酸、邻苯二甲酸、抗坏血酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲基磺酸、乙基磺酸；作为无机酸，可以列举盐酸、硫酸、硝酸、碳酸、氢溴酸、磷酸、氢碘酸等。优选盐酸。
本发明中，所述的“碱”，可以是本领域常用的碱类，包括有机碱和无机碱。作为有机碱，可以列举甲胺、乙胺、丙胺、n,n-二异丙基乙胺、三甲胺、三乙胺、n-甲基吗啉、二环己基胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、葡甲胺、二乙醇胺、乙二胺、吡啶、甲基吡啶、喹啉等；作为无机碱，可以列举碱金属(例如锂、钠、钾、铯)的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐、二(三甲基硅基)氨基锂；碱土金属(镁、钙、锶、钡)的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐；叔丁醇钠，叔丁醇钾，乙醇钠等。
本发明中，所述的“氧化剂”，可以是本领域常用的氧化剂，包括但不限于，硝酸铈铵、2,3-二氯-5,6-二氰对苯醌、氯化铜、二氧化锰、高锰酸盐、重铬酸盐、过氧乙酸、过氧苯甲酸等。
本发明中，所述的“有机溶剂1”是指本领域常用的单一或混合有机溶剂，包括但不限于醚类，烷烃类，卤代烷烃类，芳烃类，醇类等。具体而言，可以列举n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜，芳族烃类(例如甲苯、苯、二甲苯、三甲苯等)、饱和烃类(例如环己烷、己烷等)，卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等)，醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷等)，酯类(例如乙酸甲酯、乙酸乙酯等)，酮类(例如丙酮、甲基乙基酮等)，腈类(例如乙腈等)，醇类(例如甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇等)，水和它们的混合溶剂等。
本发明中，所述的“有机溶剂2”是指本领域常用的单一或混合有机溶剂，包括但不限于醚类，烷烃类，卤代烷烃类，芳烃类，醇类等。具体而言，可以列举n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜，芳族烃类(例如甲苯、苯、二甲苯、三甲苯等)，饱和烃类(例如环己烷、己烷等)，卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等)，醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1,2-二甲氧基乙烷等)，酯类(例如乙酸甲酯、乙酸乙酯等)，酮类(例如丙酮、甲基乙基酮等)，腈类(例如乙腈等)，醇类(例如甲醇、乙醇、异丙醇、叔丁醇等)，水和它们的混合溶剂等。
本发明中，在上述反应过程中，可根据需要调节反应温度，例如高温，室温，低温等。高温通常指高于30℃，需要时可进行加热处理，室温通常指15～30℃，低温通常指低于15℃，需要时可进行冷却处理。
实施例
实施例中未注明具体反应条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售获得的常规产品。
在本发明中，除非另外说明，其中：(i)温度以摄氏度(℃)表示，操作在室温环境下进行；(ii)反应进程用薄层色谱(tlc)或lc-ms跟踪；(iii)终产物具有清晰的质子核磁共振光谱(1h-nmr)数据和质谱(ms)数据。
在本发明中所使用的缩写和英文表述具有以下含义：
dast：二乙胺基三氟化硫
dcm：二氯甲烷
dipea：n,n-二异丙基乙胺
-boc：叔丁氧羰基
(boc)2o：二碳酸二叔丁酯
t-buona：叔丁醇钠
nabh3cn：氰基硼氢化钠
nah：氢化钠
lihmds：二(三甲基硅基)氨基锂
etoh：乙醇
tfa：三氟乙酸
dmf：n,n-二甲基甲酰胺
pd2(dba)3：三(二亚苄基丙酮)二钯
acoh：乙酸
thf：四氢呋喃
dmac：二甲基乙酰胺
dioxane：二恶烷
pd(dppf)cl2：1,1'-双(二苯膦基)二茂铁合氯化钯
ea：乙酸乙酯
pe：石油醚
hatu：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-四甲基脲六氟磷酸酯
meoh：甲醇
mtbe：甲基叔丁基醚
xphos：2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯
中间体
实施例1(e)-(1-(2-(氨基甲基)-3-氟烯丙基)二氢吲哚-5-基)(吡咯烷-1-基)甲酮(化合物3)盐酸盐的合成
步骤1：(1h-吲哚-5-基)(吡咯烷-1-基)甲酮的合成
将原料吲哚-5-羧酸(5.00g,0.03mol,1.0eq)溶于dmf(35ml)中，冷却至0℃，搅拌下依次加入hatu(18.10g,0.05mol,1.5eq)、四氢吡咯(2.60g,0.04mol,1.2eq)和dipea(12.00g,0.09mol,3.0eq)，氮气保护下搅拌反应过夜，tlc监测反应完全。向反应液中加h2o(70ml)稀释，有固体析出，抽滤，滤饼用水淋洗，烘干得到产品(5.20g,收率:79.0％)。
步骤2：二氢吲哚-5-基(吡咯烷-1-基)甲酮的合成
将中间体(1h-吲哚-5-基)(吡咯烷-1-基)甲酮(3.00g,14mmol,1eq)溶于acoh(30ml)中，冷却至0℃，搅拌下缓慢加入nabh3cn(2.20g,35mmol,2.5eq)，室温下反应过夜，tlc监测反应完全。向反应液中加入饱和na2co3水溶液，调节反应液ph＝7，用ch2cl2萃取，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品(理论量3.03g)，直接投下步反应。
步骤3：(z)-2-(3-氟-2-((5-(吡咯烷-1-羰基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮的合成
将中间体二氢吲哚-5-基(吡咯烷-1-基)甲酮(0.44g,2.01mmol,1eq)溶于thf(5ml)中，冷却至-20℃，氮气保护下，缓慢滴加lihmds(0.37g,2.21mmol,1.1eq)，加毕，搅拌10min，滴加(e)-2-(2-(溴甲基)-3-氟烯丙基)异吲哚-1,3-二酮(0.72g,2.41mmol,1.2eq)的thf(4ml)溶液，室温下反应过夜，tlc监测反应完全，向反应液中加入nh4cl水溶液(8ml)，ch2cl2(10ml×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(dcm:meoh＝150:1)得到产品(0.61g,收率:70.1％)。
步骤4：(e)-(1-(2-(氨基甲基)-3-氟烯丙基)二氢吲哚-5-基)(吡咯烷-1-基)甲酮盐酸盐的合成
将中间体(z)-2-(3-氟-2-((5-(吡咯烷-1-羰基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(0.61g,1.41mmol,1eq)溶于etoh(15ml)中，加入85％的水合肼(0.29g,4.94mmol,3.5eq)，回流反应5小时。tlc监测反应完毕，抽滤，浓缩，粗品先经制备薄层色谱纯化(dcm:meoh＝15:1)，再溶解于少量乙醇中，加入氯化氢乙醇溶液，至溶液ph＝4，搅拌1h，加入乙腈，在30℃下浓缩，固体加入少量无水乙醇浆洗，抽滤，得到产品(33mg,收率:6.9％)1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.36(s,3h),7.25-7.27(d,2h),7.03-7.24(d,1h),6.71-6.73(d,1h),3.83(s,2h),3.43-3.50(d,6h),3.28-3.32(t,2h),2.90-2.94(t,2h),1.81(s,4h).
分子式:c17h22fn3o分子量:303.38lc-ms(pos,m/z)＝304.23[m+h]+.
实施例2(e)-(1-(2-(氨基甲基)-3-氟烯丙基)二氢吲哚-5-基)(吗啉代)甲酮(化合物7)的合成
步骤1：(1h-吲哚-5-基)(吗啉代)甲酮的合成
将原料吲哚-5-羧酸(5.00g,31.02mmol,1.0eq)溶于dmf(30ml)中，冷却至0℃，在搅拌下，先加入hatu(17.68g,46.54mmol,1.5eq)，后缓慢滴加吗啉(3.24g,37.23mmol,1.2eq)与dipea(12.02g,93.07mmol,3.0eq)的混合物，加毕后，室温下反应16小时，tlc监测反应完全。向反应液中加水稀释，ea萃取，有机相用水反洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化得到产品(3.60g,收率:50.4％)。
步骤2：二氢吲哚-5-基(吗啉代)甲酮的合成
将中间体(1h-吲哚-5-基)(吗啉代)甲酮(1.09g,4.73mmol,1.0eq)溶于acoh(10ml)中，冷却至0℃，缓慢加入nabh3cn(0.74g,11.83mmol,2.5eq)，加完室温反应1小时，tlc监测反应完全。向反应液中加水稀释，0℃下加入naoh溶液，调节反应液ph＝8，用ea萃取，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩得到产品，直接投下步反应。
步骤3：(z)-2-(3-氟-2-((5-(吗啉-4-羰基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异吲哚-1,3-二酮的合成
将中间体二氢吲哚-5-基(吗啉代)甲酮的粗品(按1.10g计,4.73mmol,1eq)溶于dmf(11ml)中，冷却至0℃，n2保护下加入60％含量的nah(0.21g,5.21mmol,1.1eq)，搅拌30min后，滴加(e)-2-(2-(溴甲基)-3-氟烯丙基)异吲哚-1,3-二酮(1.69g,5.68mmol,1.2eq)的dmf(11ml)溶液，室温下反应过夜，tlc监测反应完全，加入水(60ml)，ea(80ml×3)萃取，有机相用水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(dcm:meoh＝150:1)得到产品(0.80g,收率:37.6％)。
步骤4：(e)-(1-(2-(氨基甲基)-3-氟烯丙基)二氢吲哚-5-基)(吗啉代)甲酮的合成
将中间体(z)-2-(3-氟-2-((5-(吗啉-4-羰基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异吲哚-1,3-二酮(0.80g,1.78mmol,1eq)溶于etoh(20ml)中，加入85％的水合肼(0.37g,6.23mmol,3.5eq)，回流反应2小时。tlc监测反应完毕，抽滤，浓缩，粗品经制备薄层色谱纯化(dcm:meoh＝10:1)得到产品(0.12g,收率:20.6％)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):7.10-7.12(m,2h),6.89-7.10(d,1h),6.67-6.69(t,1h),6.15-6.20(m,2h),3.78(d,2h),3.57-3.59(t,4h),3.47-3.49(t,4h),3.37-3.38(d,2h),3.30-3.34(t,2h),2.90-2.95(t,2h).
分子式:c17h22fn3o2分子量:319.38lc-ms(pos,m/z)＝320.24[m+h]+.
实施例3(e)-3-氟-2-((5-吗啉代二氢吲哚-1-基)甲基)丙-2-烯-1-胺(化合物11)的合成
步骤1：5-溴二氢吲哚的合成
将原料5-溴吲哚(50.00g,0.26mol,1.0eq)溶于acoh(500ml)中，冷却至0℃，搅拌下缓慢加入nabh3cn(40.00g,0.64mol,2.5eq)，室温反应1小时，tlc监测反应完全。向反应液中加水稀释，0℃下加入naoh水溶液，调节ph值至8，用ea萃取，有机相无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品(理论产量50.50g)，直接投下步反应。
步骤2：5-溴二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯的合成
将中间体5-溴二氢吲哚(按50.50g计,0.26mol,1eq)溶于thf(500ml)中，缓慢滴加(boc)2o(61.20g,0.28mol,1.1eq)，加毕，室温搅拌过夜，tlc监测反应完全。反应液浓缩，抽滤，滤饼用ea加热溶解，加入5％的活性炭，回流10min，趁热过滤，滤液浓缩，抽滤，滤饼在50℃下烘干得到产品(62.00g,收率:81.6％)。
步骤3：5-吗啉代二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯的合成
氮气保护下，将中间体5-溴二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯(5.00g,16.76mmol,1eq)、吗啉(7.30g,83.84mmol,5eq)、t-buona(12.60g,130.79mmol,7.8eq)、xphos(0.60g,1.34mmol,0.08eq)和pd2(dba)3(0.60g,0.69mmol,0.04eq)加入1,4-二氧六环(100ml)与h2o(20ml)的混合溶剂中，110℃回流反应105min，tlc监测反应完全。向反应液中加入水(300ml)，ea(400ml×2)萃取，有机相用水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(pe:ea＝10:1)得到产品(3.60g,收率:70.6％)。
步骤4：4-(二氢吲哚-5-基)吗啉的合成
将中间体5-吗啉代二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯(2.00g,6.57mmol,1eq)溶于ch2cl2(10ml)中，室温下滴加tfa(15.00g,131.41mmol,20eq)，40℃下搅拌反应1小时。tlc监测反应完全，加入饱和nahco3水溶液，调节ph＝7，ch2cl2萃取，有机相无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，柱层析分离，得到褐色固体4-(二氢吲哚-5-基)吗啉(1.40g，收率:94.8％)。
步骤5：(z)-2-(3-氟-2-((5-吗啉代二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
将中间体4-(二氢吲哚-5-基)吗啉(1.10g,5.38mmol,1eq)溶于dmf(11ml)中，冷却至0℃，氮气保护下，加入60％含量的nah(0.24g,5.92mmol,1.1eq)，搅拌30min后，滴加(e)-2-(2-(溴甲基)-3-氟烯丙基)异吲哚-1,3-二酮(1.93g,6.46mmol,1.2eq)的dmf(11ml)溶液，室温下反应3小时，tlc监测反应完全，加入水(50ml)，ea(80ml×3)萃取，有机相用水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析分离(dcm:meoh＝50:1)得到产品(2.00g,收率:88.1％)。
步骤6：(e)-3-氟-2-((5-吗啉代二氢吲哚-1-基)甲基)丙-2-烯-1-胺的合成
将中间体(z)-2-(3-氟-2-((5-吗啉代二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.00g,4.75mmol,1eq)溶于etoh(50ml)中，加入85％的水合肼(0.98g,16.62mmol,3.5eq)，回流反应3小时。tlc监测反应完全，抽滤，滤液浓缩，粗品经制备薄层色谱纯化(dcm:meoh＝10:1)得到产品(0.16g,收率:12.3％)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):7.78-7.90(m,2h),6.97-7.18(d,1h),6.79(s,1h),6.64-6.67(t,2h),3.69-3.72(t,4h),3.63(d,2h),3.49(d,2h),3.09-3.13(t,2h),2.90-2.93(t,4h),2.80-2.84(t,2h).
分子式:c16h22fn3o分子量:291.37lc-ms(pos,m/z)＝292.24[m+h]+.
实施例4：(e)-(1-(2-(氨基甲基)-3-氟烯丙基)二氢吲哚-5-基)(哌啶-1-基)甲酮(化合物8)盐酸盐的合成
步骤1：(1h-吲哚-5-基)(哌啶-1-基)甲酮的合成
将1h-吲哚-5-羧酸(5.00g,31.02mmol,1eq)溶于dmf(35ml)中，冷却至0℃，加入hatu(18.16g,46.54mmol)、六氢吡啶(3.17g,37.23mmol,1.2eq)和dipea(12.03g,0.0931mol,3eq)，氮气保护下反应过夜，lc-ms检测反应完毕，加入水(70ml)，析出大量固体，抽滤，滤饼用水洗涤，烘干得到产品(4.94g,收率:70.7％)。
步骤2：二氢吲哚-5-基(哌啶-1-基)甲酮的合成
将(1h-吲哚-5-基)(哌啶-1-基)甲酮(3.00g,14.00mmol,1.0eq)溶于冰醋酸中(30ml)，冰浴下加入氰基硼氢化钠(2.06g,32.87mmol,2.5eq)，搅拌20分钟，升至室温反应过夜。lc-ms检测显示反应完全，加入饱和碳酸钠水溶液调节ph值至7，二氯甲烷(100ml×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到产品(3.5g粗品,理论量3.02g)。
步骤3：(z)-2-(3-氟-2-((5-(哌啶-1-羰基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮的合成
将二氢吲哚-5-基(哌啶-1-基)甲酮(610mg,2.65mmol,1eq)溶于四氢呋喃中，冷却至-20℃，加入lihmds(1mol/l,3ml,2.92mmol,1.1eq)，搅拌30分钟，滴加(e)-2-(2-(溴甲基)-3-氟烯丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.24g,4.15mmol,1.2eq)的四氢呋喃溶液，室温反应4.5小时，lc-ms监测反应完全，加入饱和氯化铵水溶液(13ml)，dcm萃取(15ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(dcm:meoh＝150:1)得到产品(1g,收率:84％)。
步骤4：(e)-(1-(2-(氨基甲基)-3-氟烯丙基)二氢吲哚-5-基)(哌啶-1-基)甲酮盐酸盐的合成
将(z)-2-(3-氟-2-((5-(哌啶-1-羰基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(1g,2.24mmol,1.0eq)溶于etoh(25ml)中，加入水合肼(80％,0.46g,7.83mmol,3.5eq)，回流反应过夜。lc-ms监测反应完全，抽滤，滤液减压浓缩，加入ea(20ml)，回流，趁热过滤，滤液减压浓缩，加入乙醇，加入氯化氢乙醇溶液，至ph为3，加入乙腈(10ml)，减压浓缩，加入乙醇和乙酸乙酯混合溶剂(1:1,10ml)打浆，抽滤得到产品(311mg,收率:43.8％)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.37(brs,1h),7.07-7.09(m,2h),7.03-7.24(d,j＝83hz,1h),6.73-6.75(d,1h),3.82-3.83(d,2h),3.49-3.50(d,2h),3.43-3.47(m,4h),3.30-3.32(t,2h),2.90-2.95(t,2h),1.58-1.60(m,2h),1.48-1.49(m,4h).
分子式:c18h24fn3o分子量：317.41lc-ms(pos,m/z)＝318.23[m+h]+.
实施例5(e)-(1-(2-(氨基甲基)-3-氟烯丙基)二氢吲哚-5-基)(4-羟基哌啶-1-基)甲酮(化合物9)的合成
步骤1：(e)-(3-氟-2-((5-(4-羟基哌啶-1-羰基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将(e)-1-(2-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-3-氟烯丙基)吲哚啉-5-羧酸(412.0mg,1.17mmol,1.0eq.)加入dmf(3.5ml)，冰浴下加入dipea(453.3mg,3.51mmol,3.0eq.)和hatu(670.6mg,1.76mmol,1.5eq.)，搅拌2小时，再加哌啶-4-醇(165.6mg,1.63mmol,1.4eq.)，逐渐升至室温搅拌12小时，tlc监测反应完全，减压浓缩，加入ea(50ml)和水(80ml)，分液，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱层析(dcm:meoh＝100:1～50:1)纯化得到产品(217.6mg,收率:42.8％)。
步骤2：(e)-(1-(2-(氨基甲基)-3-氟烯丙基)二氢吲哚-5-基)(4-羟基哌啶-1-基)甲酮的合成
将(e)-(3-氟-2-((5-(4-羟基哌啶-1-羰基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)氨基甲酸叔丁酯(217.6mg,0.50mmol,1.0eq.)加入etoh(4ml)，冰浴下滴加氯化氢乙醇溶液(4ml)，逐渐升至室温搅拌2小时，tlc监测反应完全，减压浓缩，加入dcm(20ml)和饱和碳酸钠水溶液(40ml)，分液，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，粗品经制备薄层色谱(dcm:meoh＝10:1)纯化得到产品(25.1mg,收率:15.1％)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):7.06-7.07(m,2h),6.97(s,0.4h),6.76(s,0.5h),6.60-6.62(m,1h),4.76(s,1h),3.79(s,2h),3.71-3.72(s,3h),3.29(s,4h),3.27(s,2h),3.10-3.15(m,2h),2.90-2.94(m,2h),1.71-1.74(d,2h),1.30-1.34(m,2h).
分子式:c18h24fn3o2分子量:333.41lc-ms(pos,m/z)＝334.23[m+h]+.
实施例6：(e)-2-((5-环丙基二氢吲哚-1-基)甲基)-3-氟丙-2-烯-1-胺(化合物10)的合成
步骤:
步骤1：5-环丙基二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯的合成
将5-溴二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯(5g,16.8mmol,1.0eq)、磷酸钾(11.7g,55.3mmol,3.3eq)、三环己基膦(0.47g,1.68mmol,0.1eq)、环丙基硼酸(2.02g,23.5mmol,1.4eq)和醋酸钯(0.38g,1.68mmol,0.1eq)加入反应瓶中，加入甲苯(50ml)和水(5ml)，氮气置换3次，回流反应5小时。lc-ms检测显示反应完全，加水溶解，乙酸乙酯稀释，抽滤，滤液分液，有机相用无水硫酸钠干燥，粗品经硅胶柱层析纯化(pe:ea＝5:1)得到产品(3.6g,产率:82.6％)。
步骤2：5-环丙基二氢吲哚的合成
将5-环丙基二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯(3g)与三氟乙酸(21ml)混合，室温搅拌过夜。tlc显示反应完全，加入饱和碳酸钠水溶液，调节ph值至7～8，二氯甲烷(20ml×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到产品(2.2g粗品)，直接用于下步反应。
步骤3：(z)-2-(2-((5-环丙基二氢吲哚-1-基)甲基)-3-氟烯丙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
将5-环丙基二氢吲哚(1.3g粗品)溶于dmf(26ml)中，冰浴下加入氢化钠(60％,0.22g,8.98mmol)，搅拌30分钟，滴加(e)-2-(2-(溴甲基)-3-氟烯丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.92g,9.79mmol)的dmf溶液(26ml)，室温反应过夜，lc-ms监测反应完全，加入水(50ml)，dcm萃取(70ml×3)，有机相用水反洗(50ml×5)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到产品(3.8g粗品)，直接用于下步反应。
步骤4：(e)-2-((5-环丙基二氢吲哚-1-基)甲基)-3-氟丙-2-烯-1-胺的合成
将(z)-2-(2-((5-环丙基二氢吲哚-1-基)甲基)-3-氟烯丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.00g粗品)溶于乙醇(25ml)中，加入水合肼(0.547g,9.30mmol,3.5eq)，回流反应2h。lc-ms监测反应完全，抽滤，滤液减压浓缩，粗品经制备薄层色谱分离(dcm:meoh＝10:1)得到产品(38mg,三步收率:5.8％)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):6.91-7.12(d,j＝84hz,1h),6.76-6.78(m,2h),6.58-6.60(d,1h),4.70(s,2h),3.63-3.64(d,2h),3.42-3.43(d,2h),3.12-3.17(m,2h),2.80-2.84(t,2h),1.76-1.82(m,1h),0.83-0.84(m,2h),0.45-0.55(m,2h).
分子式:c15h19fn2分子量:246.33lc-ms(pos,m/z)＝247.21[m+h]+.
实施例7:(e)-3-氟-2-((5-(噻唑-2-基)二氢吲哚-1-基)甲基)丙-2-烯-1-胺(化合物32)的合成
步骤:
步骤1：5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯的合成
将5-溴二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯(5.0g,16.8mmol,1eq)、乙酸钾(4.9g,50.4mmol,3eq)、联硼酸频那醇酯(8.5g,33.5mmol,2eq)和pd(dppf)cl2(1.5g,1.68mmol,0.1eq)加入反应瓶中，加入dmac(25ml)，90℃反应5小时，lc-ms检测显示反应完全，加入水稀释，乙酸乙酯萃取(100ml×2)，有机相合并，水反洗(50ml×4)，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(pe:ea＝5:1)得到产品(4.8g,收率:82.8％)。
步骤2：5-(噻唑-2-基)二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯的合成
将5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯(3.6g,10.427mmol,1.0eq)、碳酸铯(6.79g,20.854mmol,2.0eq)、2-溴噻唑(1.71g,10.427mmol,1.0eq)和pd(dppf)cl2(0.95g,1.043mmol,0.1eq)加入反应瓶中，加入1,4-二氧六环(36ml)和水(3.6ml)，氮气置换3次，回流反应5天。加入水稀释，乙酸乙酯萃取(80ml×3)，有机相用水反洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化(pe:ea＝5:1)得到产品(1.1g,收率:34.9％)。步骤3：2-(二氢吲哚-5-基)噻唑的合成
将5-(噻唑-2-基)二氢吲哚-1-羧酸叔丁酯(1g,3.31mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(7ml)，室温搅拌2小时。加入饱和碳酸钠水溶液，调节ph值至8，二氯甲烷(20ml×2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到油状产品(650mg,收率:97.2％)。
步骤4：(z)-2-(3-氟-2-((5-(噻唑-2-基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮的合成
将2-(二氢吲哚-5-基)噻唑(700mg,3.46mmol,1.0eq)溶于thf(10ml)中，冷却至-20℃，加入lihmds(1mol/l,3.8ml,3.81mmol,1.1eq)，搅拌30分钟，滴加(e)-2-(2-(溴甲基)-3-氟烯丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.24g,4.15mmol,1.2eq)的thf(4ml)溶液，10℃反应3小时，lc-ms监测反应完全，加入冰醋酸，调节ph值至7，加入二氯甲烷(20ml)稀释，水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化得到产品(1.00g,收率:68.96％)
步骤5：(e)-3-氟-2-((5-(噻唑-2-基)二氢吲哚-1-基)甲基)丙-2-烯-1-胺
将(z)-2-(3-氟-2-((5-(噻唑-2-基)二氢吲哚-1-基)甲基)烯丙基)异二氢吲哚-1,3-二酮(1g,2.38mmol,1.0eq)溶于etoh(30ml)中，加入水合肼(0.49g,8.34mmol,3.5eq)，回流反应2h。lc-ms监测反应完毕，抽滤，滤液减压浓缩，粗品先经制备薄层色谱纯化(dcm:meoh＝10:1)，再加入少量mtbe，搅拌，抽滤得到产品(81mg,收率:11.75％)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):8.26(brs,2h),7.77(s,1h),7.63-7.66(d,2h),7.04-7.25(d,j＝83hz,1h),6.80-6.82(d,1h),3.88(s,2h),3.50(s,2h),2.97-2.99(s,2h).
分子式:c15h16fn3s分子量:289.37lc-ms(pos,m/z)＝290.12[m+h]+.
参照上述方法，可以制备发明其他化合物。
生物实施例1：酶学活性测定
测试物：表1所示本发明化合物，按照实施例方法制备
1.化合物对rhvap-1酶的抑制活性
(1)仪器耗材及试剂
多功能酶标仪(md，flexstation3)、黑色不透底96孔板(corning)、rhvap-1(peprotech)
(2)化合物浓度梯度溶液配制
取待测化合物适量，dmso溶解至10mm后储存。实验前取适量10mm待测化合物母液用dmso稀释至1mm溶液，然后用dmso进行3倍梯度稀释，共10个浓度梯度，再使用pbs进行100倍稀释，制成10×系列浓度化合物溶液。
(3)酶溶液配制
加入适量的蛋白稀释液至rhvap-1粉末中，得到1mg/ml的母液用于储存。实验前用pbs稀释得到4×浓度酶溶液。
(4)2×浓度底物混合液配制
称取苯甲胺适量，加入pbs溶解得200mm的苯甲胺溶液，加入2mm的amplexred母液和500u/ml的hrp母液，用pbs稀释得到2×浓度底物混合液。
(5)试验方法
首先向96孔板中加入10μl不同浓度的化合物溶液，25μl4×rhvap-1酶液以及15μlpbs，振荡混匀后，37℃孵育30min。然后每孔加入50μl2×底物混合液，即刻使用酶标仪进行检测，激发光565nm，发射光590nm，检测各孔的荧光强度，5min/次，共检测25min，抑制率按照如下公式计算：
v(rfu/min)＝(ft(rfu)-f0(rfu))/(时间(min))
抑制率(％)＝100％-vcmpd(rfu/min)/vmax(rfu/min)×100％
v：荧光变化速率；ft：t时间点的荧光读数；f0：初始荧光读数；时间：时长t；vcmpd：受试化合物荧光变化速率；vmax：max孔荧光变化速率。
(6)拟合量效曲线
以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpadprism5的log(inhibitor)vs.response-variableslope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic50值。
2.化合物对rhaoc1酶的选择性
(1)仪器耗材及试剂
酶标仪(perkinelmer，nivo5s)、黑色不透底96孔板(corning)和rhaoc1(r&d)
(2)化合物浓度梯度溶液配制
取待测化合物适量，dmso溶解至10mm后储存，实验前取适量10mm待测化合物母液用dmso进行3倍梯度稀释，共10个浓度梯度。然后各浓度梯度分别用0.1mpbs进行10倍稀释。
(3)酶溶液配制
取适量浓度为0.441mg/ml的rhaoc1母液，加入适量50mmhepes缓冲溶液，稀释得到4×浓度酶溶液。
(4)2×浓度底物混合液配制
称取组胺适量，加入50mmhepes缓冲溶液，溶解得20mm的组胺溶液，加入2mm的amplexred母液和500u/ml的hrp母液，用50mmhepes缓冲溶液稀释得到2×浓度底物混合液。
(5)试验方法
首先向96孔板中加入10μl不同浓度的化合物溶液，25μl4×rhaoc1酶液以及15μl50mmhepes缓冲溶液，振荡混匀后，37℃孵育30min。然后每孔加入50μl2×底物混合液，即刻使用酶标仪进行检测，激发光580nm(20nm)，发射光620nm(10nm)，检测各孔的荧光强度，5min/次，共检测30min，抑制率按照如下公式计算：
v(rfu/min)＝(ft(rfu)-f0(rfu))/(时间(min))
抑制率(％)＝100％-vcmpd(rfu/min)/vmax(rfu/min)×100％
v：荧光变化速率；ft：t时间点的荧光读数；f0：初始荧光读数；时间：时长t；vcmpd：受试化合物荧光变化速率；vmax：max孔荧光变化速率。
(6)拟合量效曲线
以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpadprism5的log(inhibitor)vs.response-variableslope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic50值。
3.试验结果如表1所示
表1
“—”表示未测试。
由上表可知，本发明的化合物对rhvap-1酶具有良好的抑制活性，且相对于rhaoc1酶，本发明化合物对vap-1酶表现出优异的选择性抑制活性。这表明本发明化合物可应用于与vap-1酶表达升高或者活性增加相关疾病的预防和/或治疗。
生物实施例2：酶学活性测定
测试物：表2所示本发明化合物，按照实施例方法制备
1.化合物对rhvap-1酶的抑制活性
(1)仪器耗材及试剂
酶标仪(perkinelmer，nivo5s)、黑色不透底96孔板(corning)、rhvap-1(peprotech)
(2)化合物浓度梯度溶液配制
取待测化合物适量，dmso溶解至10mm后储存。实验前取适量10mm待测化合物母液用dmso进行3倍梯度稀释，共10个浓度梯度。然后各浓度梯度分别用0.1mpbs进行100倍稀释。
(3)酶溶液配制
加入适量的蛋白稀释液至rhvap-1粉末中，得到1mg/ml的母液用于储存。实验前用pbs稀释得到4×浓度酶溶液。
(4)2×浓度底物混合液配制
称取苯甲胺适量，加入pbs溶解得200mm的苯甲胺溶液，加入2mm的amplexred母液和500u/ml的hrp母液，用pbs稀释得到2×浓度底物混合液。
(5)试验方法
首先向96孔板中加入10μl不同浓度的化合物溶液，25μl4×rhvap-1酶液以及15μlpbs，振荡混匀后，37℃孵育30min。然后每孔加入50μl2×底物混合液，即刻使用酶标仪进行检测，激发光580nm(20nm)，发射光620nm(10nm)，5min/次，共检测30min，抑制率按照如下公式计算：
v(rfu/min)＝(ft(rfu)-f0(rfu))/(时间(min))
抑制率(％)＝100％-vcmpd(rfu/min)/vmax(rfu/min)×100％
v：荧光变化速率；ft：t时间点的荧光读数；f0：初始荧光读数；时间：时长t；vcmpd：受试化合物荧光变化速率；vmax：max孔荧光变化速率。
(6)拟合量效曲线
以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpadprism5的log(inhibitor)vs.response-variableslope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic50值。
2.化合物对rhaoc1酶的选择性
(1)仪器耗材及试剂
酶标仪(perkinelmer，nivo5s)、黑色不透底96孔板(corning)和rhaoc1(r&d)
(2)化合物浓度梯度溶液配制
取待测化合物适量，dmso溶解至10mm后储存，实验前取适量10mm待测化合物母液用dmso进行3倍梯度稀释，共10个浓度梯度。然后各浓度梯度分别用0.1mpbs进行10倍稀释。
(3)酶溶液配制
取适量浓度为0.441mg/ml的rhaoc1母液，加入适量50mmhepes缓冲溶液，稀释得到4×浓度酶溶液。
(4)2×浓度底物混合液配制
称取组胺适量，加入50mmhepes缓冲溶液，溶解得20mm的组胺溶液，加入2mm的amplexred母液和500u/ml的hrp母液，用50mmhepes缓冲溶液稀释得到2×浓度底物混合液。
(5)试验方法
首先向96孔板中加入10μl不同浓度的化合物溶液，25μl4×rhaoc1酶液以及15μl50mmhepes缓冲溶液，振荡混匀后，37℃孵育30min。然后每孔加入50μl2×底物混合液，即刻使用酶标仪进行检测，激发光580nm(20nm)，发射光620nm(10nm)，检测各孔的荧光强度，5min/次，共检测30min，抑制率按照如下公式计算：
v(rfu/min)＝(ft(rfu)-f0(rfu))/(时间(min))
抑制率(％)＝100％-vcmpd(rfu/min)/vmax(rfu/min)×100％
v：荧光变化速率；ft：t时间点的荧光读数；f0：初始荧光读数；时间：时长t；vcmpd：受试化合物荧光变化速率；vmax：max孔荧光变化速率。
(6)拟合量效曲线
以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpadprism5的log(inhibitor)vs.response-variableslope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic50值。
3.试验结果如表2所示
表2
“—”表示未测试。
由上表可知，本发明的化合物对rhvap-1酶具有良好的抑制活性，且相对于rhaoc1酶，本发明化合物对ssao/vap-1酶表现出优异的选择性抑制作用。这表明本发明化合物可应用于与vap-1酶表达升高或者活性增加相关疾病的预防和/或治疗。
生物实验例3本发明化合物对mao-a/b酶的选择性
(1)仪器耗材及试剂
酶标仪(perkinelmer，envision)、384孔板(perkinelmer)、离心机(eppendorf)、mao-glotm(promega)、mao-a(activemotif)和mao-b(activemotif)。
(2)化合物浓度梯度溶液配制
取待测化合物适量，dmso溶解至10mm后储存，然后用dmso进行4倍梯度稀释，共6个浓度梯度。
(3)酶溶液配制
用mao-a/b的实验缓冲液稀释mao-a/b母液至2×浓度酶溶液。
(4)2×浓度底物混合液配制
用mao-a/b的实验缓冲液稀释mao-a/b底物混合液母液至2×浓度底物混合液。
(5)试验方法
向384孔板中加入200nl不同浓度的化合物溶液或溶剂，10μl2×mao-a/b酶液，1000rpm离心60s，振荡混匀后，室温孵育15min。然后每孔加入10μl2×底物混合液，起始反应。将384孔板1000rpm离心60s，振荡混匀后室温孵育60min。。加入20μl终止检测液停止反应，1000rpm离心60s，振荡混匀。静置30min后用酶标仪进行读数。
抑制率按照如下公式计算：
抑制率(％)＝(signal_max-signal_sample)/(signal_max-signal_min)×100
(6)拟合量效曲线
以浓度的log值作为x轴，百分比抑制率为y轴，采用分析软件graphpadprism5的log(inhibitor)vs.response-variableslope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的ic50值。
3.试验结果
表3
由上表3可知，本发明的化合物相对于单胺氧化酶(mao)，对于ssao/vap-1酶表现出优异的选择性抑制活性。
产业实用性
本发明的烯丙基胺类化合物可以用于预防和/或治疗与ssao/vap-1蛋白有关或由ssao/vap-1蛋白介导的疾病，并且，本发明的化合物对于ssao/vap-1酶表现出优异的选择性。