本发明涉及病毒诊断试剂
技术领域：
，具体涉及新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用。
背景技术：
：冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒、中东呼吸综合征(mers)和严重急性呼吸综合征(sars)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，2019-ncov是人类分离的第七类冠状病毒。相关疾病监测，发现多起病毒性肺炎病例，均诊断为病毒性肺炎/肺部感染。新型冠状病毒感染人体后一般有3～14天(有个别案例报道最长24天)的潜伏期，潜伏期内可无临床症状，不易发现。目前的证据表明，潜伏期感染者也有传染性，增大了阻断病毒传播的难度。新型冠状病毒感染临床症状主要表现为发热、咳嗽、乏力等非特异症状，与普通感冒难以区分，其确诊依赖实验室诊断技术。目前新型冠状病毒感染诊断主要依赖基于聚合酶链式反应(pcr)或核酸测序检测病毒特异性基因序列来进行。但是核酸诊断需要有特殊的实验室(要求有4个在物理空间上完全相互独立的区域)和数十种配套设备以及专业操作人员(需认证)才能完成，且检测过程操作复杂，需要数小时才能完成；极易产生气溶胶污染，造成假阳性，也存在因为取样不合适造成漏检的情况，因此核酸检测不适合现场大规模开展。免疫学诊断主要是通过抗原抗体免疫反应检测人体感染病毒以后产生的特异性抗体来诊断。免疫学诊断方法具有操作简单、检测速度快、无需特殊场地及(复杂)仪器设备，且敏感性高等优点，适用于现场大规模开展新型冠状病毒感染筛查及诊断工作。为实现快速，特异性高，灵敏度高的免疫学诊断手段，诊断原料尤为重要，主要体现在抗原稳定性和特异性检出率方面。病毒在感染人体后，释放大量的棘突蛋白(spikeprotein，s蛋白)和核蛋白(nucleoprotein，n蛋白)刺激机体产生免疫反应，产生针对这两种蛋白的抗体，单一采用n蛋白或s蛋白包被生产诊断试剂会造成捕获不完全，存在漏检灵敏度不高的情况。采用两种蛋白混合包被会使生产工艺复杂，批间控制难度大。技术实现要素：本发明的目的在于提供新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用。本发明所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白去除了非表位相关的氨基酸序列，减少了融合蛋白同检测样本的非特异性反应，相应制备的检测试剂特异性更高；同时表位丰富度高，暴露更好，相应制备的检测试剂灵敏度更高(阳性检出率更高)；通过亲水及柔性的连接臂连接多个抗原表位，有效的改善了融合蛋白的生物相容性，溶解度高，稳定性好，更有利于制备相应的检测试剂；基于上述的多种优势表位融合蛋白制备的检测试剂，灵敏度高，特异性好，可实现新型冠状病毒的早期筛查。本发明提供了新型冠状病毒优势表位融合蛋白，所述优势表位融合蛋白包括通过连接臂连接的n蛋白优势表位肽、s蛋白优势表位肽和e蛋白优势表位肽；所述n蛋白优势表位肽包括优势表位肽n1、优势表位肽n2、优势表位肽n3和优势表位肽n4中的一个或两个以上，两个以上优势表位肽之间通过连接臂连接；所述优势表位肽n1的氨基酸序列如seqidno.1所示，所述优势表位肽n2的氨基酸序列如seqidno.2所示，所述优势表位肽n3的氨基酸序列如seqidno.3所示，所述优势表位肽n4的氨基酸序列如seqidno.4所示；所述s蛋白优势表位肽的氨基酸序列如seqidno.5所示；所述e蛋白优势表位肽的氨基酸序列如seqidno.6所示；所述连接臂氨基酸序列如seqidno.7所示。优选的是，所述n蛋白优势表位肽由优势表位肽n1和优势表位肽n4通过连接臂连接得到。优选的是，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如seqidno.8所示。优选的是，所述n蛋白优势表位肽由优势表位肽n1、优势表位肽n2和优势表位肽n4通过连接臂连接得到。优选的是，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如seqidno.9所示。优选的是，所述n蛋白优势表位肽由优势表位肽n1、优势表位肽n2、优势表位肽n3和优势表位肽n4通过连接臂连接得到。优选的是，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如seqidno.10所示。本发明还提供了上述技术方案所述优势表位融合蛋白在制备新型冠状病毒诊断用试剂中的应用。本发明还提供了一种新型冠状病毒诊断试剂，所述诊断试剂包括上述技术方案所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白。本发明还提供了一种双抗夹心体外诊断试剂，所述双抗夹心体外诊断试剂包括上述技术方案所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白。本发明提供了新型冠状病毒优势表位融合蛋白。本发明提供的新型冠状病毒优势表位融合蛋白(含不同融合表位的重组蛋白)，能够提高试剂生产工艺可控性、灵敏度高、特异性好，可获得高稳定性抗原，免疫产生高亲和度抗体。本发明所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白是基于2019-ncov病毒n、s蛋白和e蛋白的多种优势表位融合蛋白，相比于常规的n蛋白、s蛋白、或者n+s蛋白，本发明融合蛋白去除了非表位相关的氨基酸序列，减少了融合蛋白同检测样本的非特异性反应，相应制备的检测试剂特异性更高；同时表位丰富度高，暴露更好，相应制备的检测试剂灵敏度更高(阳性检出率更高)；通过亲水及柔性的连接臂连接多个抗原表位，有效的改善了融合蛋白的生物相容性，溶解度高，稳定性好，更有利于制备相应的检测试剂。因此，基于本发明新型冠状病毒优势表位融合蛋白制备的检测试剂，灵敏度高，特异性好，可实现新型冠状病毒的早期筛查。对比单独的n蛋白或者s蛋白作为捕获/检测抗原，本发明的新型冠状病毒优势表位融合蛋白具备更丰富的表位，能够检测到样本中更多的病毒抗体，可以更早期的检出感染人群；同时融合蛋白生物稳定性好，溶解度相比于全长的蛋白更好，制备的检测试剂性能更好。对比混合的n蛋白和s蛋白作为捕获/检测抗原，本发明的新型冠状病毒优势表位融合蛋白通过特殊的亲水柔性连接臂把n蛋白和s蛋白的优势表位串联在一起，使用更简单(不需要摸索n蛋白和s蛋白混合的比例)，捕获密度更高(如包被在nc膜上时，同样大小的空间，融合蛋白可以包被更多数量的表位)从而灵敏度提高，生物相容性更好，有利于试剂性能提高(低等电点和亲水性的柔性连接臂，有效降低原n蛋白的高等电点，并提高水溶性，避免蛋白聚集)。另外，试剂生产工艺更为简单，易于控制批间差。对比新冠病毒裂解液作为捕获/检测抗原，本发明的新型冠状病毒优势表位融合蛋白特异性高(新冠病毒裂解液存在多种其他病毒类似表位，造成交叉反应高)，生产批间差小(病毒裂解液批次之间差异较大，控制难度大，均一性差)，生物安全性高(病毒裂解液即使灭活也存在潜在的生物危害性)。具体实施方式本发明提供了新型冠状病毒优势表位融合蛋白，所述优势表位融合蛋白包括通过连接臂连接的n蛋白优势表位肽、s蛋白优势表位肽和e蛋白优势表位肽；所述n蛋白优势表位肽包括优势表位肽n1(n蛋白21-43)、优势表位肽n2(n蛋白65-86)、优势表位肽n3(n蛋白248-271)和优势表位肽n4(n蛋白348-406)中的一个或两个以上，两个以上优势表位肽之间通过连接臂连接；所述优势表位肽n1的氨基酸序列如seqidno.1所示(sdstgsnqngersgarskqrrpq)，所述优势表位肽n2的氨基酸序列如seqidno.2所示(kfprgqgvpintnsspddqigy)，所述优势表位肽n3的氨基酸序列如seqidno.3所示(kksaaeaskkprqkrtatkaynvt)，所述优势表位肽n4的氨基酸序列如seqidno.4所示(dqvillnkhidayktfpptepkkdkkkkadetqalpqrqkkqqtvtllpaadlddfskq)；所述s蛋白优势表位肽(s蛋白452-611)的氨基酸序列如seqidno.5所示(disteiyqagstpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkcvnfnfngltgtgvltesnkkflpfqqfgrdiadttdavrdpqtleilditpcsfggvsvitpgtntsnqvavlyqdvnctevpvaiha)；所述e蛋白优势表位肽(e蛋白30-75)的氨基酸序列如seqidno.6所示(tlailtalrlcayccnivnvslvkpsfyvysrvknlnssrvpdllv)；所述连接臂氨基酸序列如seqidno.7所示(gggs)。在本发明中，所述n蛋白优势表位肽由优势表位肽n1和优势表位肽n4通过连接臂连接得到。本发明所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白，通过linker连接降低等电点，能够提高亲和力，溶解度，有利于体外诊断试剂的开发。在本发明中，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如seqidno.8所示。在本发明中，所述n蛋白优势表位肽由优势表位肽n1、优势表位肽n2和优势表位肽n4通过连接臂连接得到。在本发明中，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如seqidno.9所示。在本发明中，所述n蛋白优势表位肽由优势表位肽n1、优势表位肽n2、优势表位肽n3和优势表位肽n4通过连接臂连接得到。在本发明中，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如seqidno.10所示。本发明具体实施例还提供了当所述n蛋白优势表位肽为优势表位肽n4的优势表位融合蛋白。所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如seqidno.11所示。本发明对上述技术方案所述优势表位融合蛋白的合成方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规融合蛋白表达方法即可。如委托专业基因合成公司进行基因合成；将合成好的基因转入载体，通过真核系统和原核系统进行表达；收集表达后的产物，采用亲和层析方法进行纯化，获得多抗原表位的融合蛋白。本发明对获得的优势表位融合蛋白优选通过荧光免疫层析平台进行筛选评价确定等。本发明还提供了上述技术方案所述优势表位融合蛋白在制备新型冠状病毒诊断用试剂中的应用。本发明还提供了一种新型冠状病毒诊断试剂，所述诊断试剂包括上述技术方案所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白。本发明还提供了一种双抗夹心体外诊断试剂，所述双抗夹心体外诊断试剂包括上述技术方案所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白。下面结合具体实施例对本发明所述的新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。实施例1新型冠状病毒2019-ncov多优势表位融合重组蛋白的制备:通过计算预测筛选新型冠状病毒2019-ncovn蛋白、s蛋白、e蛋白的优势抗原表位，并通过柔性多肽(gggs)连接到一起，组成2019-ncov病毒多优势表位融合蛋白。委托北京德奥平生物技术有限公司生产制备，纯度大于90％。本发明实施例中构建了8种重组蛋白，其中4种采用本发明技术方案所述融合蛋白方案，另外4种采用传统根据检索序列进行蛋白构建，并与市面重组蛋白进行对比基本序列一致。融合序列1n蛋白348-406，s蛋白452-611，e蛋白30-75，下划线为linkergggsdqvillnkhidayktfpptepkkdkkkkadetqalpqrqkkqqtvtllpaadlddfskqgggsdisteiyqagstpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkcvnfnfngltgtgvltesnkkflpfqqfgrdiadttdavrdpqtleilditpcsfggvsvitpgtntsnqvavlyqdvnctevpvaihagggstlailtalrlcayccnivnvslvkpsfyvysrvknlnssrvpdllv(seqidno.11)theoreticalpi/mw:8.32/29663.80融合序列2n蛋白21-43，348-406，s蛋白452-611，e蛋白30-75，下划线为linkergggssdstgsnqngersgarskqrrpqgggsdqvillnkhidayktfpptepkkdkkkkadetqalpqrqkkqqtvtllpaadlddfskqgggsdisteiyqagstpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkcvnfnfngltgtgvltesnkkflpfqqfgrdiadttdavrdpqtleilditpcsfggvsvitpgtntsnqvavlyqdvnctevpvaihagggstlailtalrlcayccnivnvslvkpsfyvysrvknlnssrvpdllv(seqidno.8)theoreticalpi/mw:8.77/32407.61融合序列3n蛋白21-43，65-86，348-406，s蛋白452-611，e蛋白30-75，下划线为linkergggssdstgsnqngersgarskqrrpqgggskfprgqgvpintnsspddqigygggsdqvillnkhidayktfpptepkkdkkkkadetqalpqrqkkqqtvtllpaadlddfskqgggsdisteiyqagstpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkcvnfnfngltgtgvltesnkkflpfqqfgrdiadttdavrdpqtleilditpcsfggvsvitpgtntsnqvavlyqdvnctevpvaihagggstlailtalrlcayccnivnvslvkpsfyvysrvknlnssrvpdllv(seqidno.9)theoreticalpi/mw:8.76/35038.43融合序列4n蛋白21-43，65-86，248-271，348-406，s蛋白452-611，e蛋白30-75，下划线为linkergggssdstgsnqngersgarskqrrpqgggskfprgqgvpintnsspddqigygggskksaaeaskkprqkrtatkaynvtgggsdqvillnkhidayktfpptepkkdkkkkadetqalpqrqkkqqtvtllpaadlddfskqgggsdisteiyqagstpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkcvnfnfngltgtgvltesnkkflpfqqfgrdiadttdavrdpqtleilditpcsfggvsvitpgtntsnqvavlyqdvnctevpvaihagggstlailtalrlcayccnivnvslvkpsfyvysrvknlnssrvpdllv(seqidno.10)theoreticalpi/mw:9.27/37941.72对比其他几种蛋白序列及原料，以下为其他人常规设计的蛋白原料序列n蛋白msdngpqnqrnapritfggpsdstgsnqngersgarskqrrpqglpnntaswftaltqhgkedlkfprgqgvpintnsspddqigyyrratrrirggdgkmkdlsprwyfyylgtgpeaglpygankdgiiwvategalntpkdhigtrnpannaaivlqlpqgttlpkgfyaegsrggsqassrsssrsrnssrnstpgssrgtsparmagnggdaalalllldrlnqleskmsgkgqqqqgqtvtkksaaeaskkprqkrtatkaynvtqafgrrgpeqtqgnfgdqelirqgtdykhwpqiaqfapsasaffgmsrigmevtpsgtwltytgaiklddkdpnfkdqvillnkhidayktfpptepkkdkkkkadetqalpqrqkkqqtvtllpaadlddfskqlqqsmssadstqa(seqidno.12)theoreticalpi/mw:10.07/45625.70s1-rbdrvqptesivrfpnitnlcpfgevfnatrfasvyawnrkrisncvadysvlynsasfstfkcygvsptklndlcftnvyadsfvirgdevrqiapgqtgkiadynyklpddftgcviawnsnnldskvggnynylyrlfrksnlkpferdisteiyqagstpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkcvnfa(seqidno.13)theoreticalpi/mw:8.91/25169.48s1vnlttrtqlppaytnsftrgvyypdkvfrssvlhstqdlflpffsnvtwfhaihvsgtngtkrfdnpvlpfndgvyfasteksniirgwifgttldsktqsllivnnatnvvikvcefqfcndpflgvyyhknnkswmesefrvyssannctfeyvsqpflmdlegkqgnfknlrefvfknidgyfkiyskhtpinlvrdlpqgfsaleplvdlpiginitrfqtllalhrsyltpgdsssgwtagaaayyvgylqprtfllkynengtitdavdcaldplsetkctlksftvekgiyqtsnfrvqptesivrfpnitnlcpfgevfnatrfasvyawnrkrisncvadysvlynsasfstfkcygvsptklndlcftnvyadsfvirgdevrqiapgqtgkiadynyklpddftgcviawnsnnldskvggnynylyrlfrksnlkpferdisteiyqagstpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkcvnfnfngltgtgvltesnkkflpfqqfgrdiadttdavrdpqtleilditpcsfggvsvitpgtntsnqvavlyqdvnctevpvaihadqltptwrvystgsnvfqtragcligaehvnnsyecdipigagicasyqtqtnsprrar(seqidno.14)theoreticalpi/mw:8.27/75012.62s2svasqsiiaytmslgaensvaysnnsiaiptnftisvtteilpvsmtktsvdctmyicgdstecsnlllqygsfctqlnraltgiaveqdkntqevfaqvkqiyktppikdfggfnfsqilpdpskpskrsfiedllfnkvtladagfikqygdclgdiaardlicaqkfngltvlpplltdemiaqytsallagtitsgwtfgagaalqipfamqmayrfngigvtqnvlyenqklianqfnsaigkiqdslsstasalgklqdvvnqnaqalntlvkqlssnfgaissvlndilsrldkveaevqidrlitgrlqslqtyvtqqliraaeirasanlaatkmsecvlgqskrvdfcgkgyhlmsfpqsaphgvvflhvtyvpaqeknfttapaichdgkahfpregvfvsngthwfvtqrnfyepqiittdntfvsgncdvvigivnntvydplqpeldsfkeeldkyfknhtspdvdlgdisginasvvniqkeidrlnevaknlneslidlqelgkyeqyikwpwyiwlgfiagliaivmvtimlccmtsccsclkgccscgscckfdeddsepvlkgvklhyt(seqidno.15)theoreticalpi/mw:5.25/64505.74实施例28种重组蛋白原料的性能验证获得以上4种融合蛋白及4种常规表达重组蛋白，分别进行稳定性，抗体滴度检测。稳定性测试：将获得的8种重组蛋白加入保护液pbs+0.2％牛血清白蛋白，放置于室温(大约20℃)和37℃，活性检测活力变化情况，确定重组蛋白稳定性。通过基因重组融合改造，尤其对n蛋白的等电点进行优化，从下表数据可看出，融合蛋白稳定性相比于单独的重组蛋白在室温和37℃环境下放置，活性下降比例降低，稳定性大幅度提升。表18种重组蛋白生物活性对比表室温2天活性下降比例37℃1天活性下降比例融合蛋白152％58％融合蛋白254％76％融合蛋白371％92％融合蛋白465％72％n蛋白85％92％s1-rbd72％83％s1蛋白73％85％s2蛋白75％87％抗体滴度检测：分别采用8种重组蛋白免疫兔子，目前阶段仅免疫一次，观察免疫14天抗体滴度变化，比较8种重组蛋白免疫原性。通过融合病毒蛋白的优势抗原表位，可提高融合蛋白的免疫原性，从而监测免疫14天看题滴度变化，发现融合蛋白免疫14天后，滴度相较重组蛋白整体要高，尤其融合蛋白1显示了较好的免疫原性。表2重组蛋白免疫原性对比表以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。序列表<110>北京丹大生物技术有限公司<120>新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用<160>15<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>23<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>1seraspserthrglyserasnglnasnglygluargserglyalaarg151015serlysglnargargprogln20<210>2<211>22<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>2lyspheproargglyglnglyvalproileasnthrasnserserpro151015aspaspglnileglytyr20<210>3<211>24<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>3lyslysseralaalaglualaserlyslysproargglnlysargthr151015alathrlysalatyrasnvalthr20<210>4<211>59<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>4aspglnvalileleuleuasnlyshisileaspalatyrlysthrphe151015proprothrgluprolyslysasplyslyslyslysalaaspgluthr202530glnalaleuproglnargglnlyslysglnglnthrvalthrleuleu354045proalaalaaspleuaspasppheserlysgln5055<210>5<211>160<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>5aspileserthrgluiletyrglnalaglyserthrprocysasngly151015valgluglypheasncystyrpheproleuglnsertyrglyphegln202530prothrasnglyvalglytyrglnprotyrargvalvalvalleuser354045phegluleuleuhisalaproalathrvalcysglyprolyslysser505560thrasnleuvallysasnlyscysvalasnpheasnpheasnglyleu65707580thrglythrglyvalleuthrgluserasnlyslyspheleuprophe859095glnglnpheglyargaspilealaaspthrthraspalavalargasp100105110proglnthrleugluileleuaspilethrprocysserpheglygly115120125valservalilethrproglythrasnthrserasnglnvalalaval130135140leutyrglnaspvalasncysthrgluvalprovalalailehisala145150155160<210>6<211>46<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>6thrleualaileleuthralaleuargleucysalatyrcyscysasn151015ilevalasnvalserleuvallysproserphetyrvaltyrserarg202530vallysasnleuasnserserargvalproaspleuleuval354045<210>7<211>4<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>7glyglyglyser1<210>8<211>300<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>8seraspserthrglyserasnglnasnglygluargserglyalaarg151015serlysglnargargproglnglyglyglyseraspglnvalileleu202530leuasnlyshisileaspalatyrlysthrpheproprothrglupro354045lyslysasplyslyslyslysalaaspgluthrglnalaleuprogln505560argglnlyslysglnglnthrvalthrleuleuproalaalaaspleu65707580aspasppheserlysglnglyglyglyseraspileserthrgluile859095tyrglnalaglyserthrprocysasnglyvalgluglypheasncys100105110tyrpheproleuglnsertyrglypheglnprothrasnglyvalgly115120125tyrglnprotyrargvalvalvalleuserphegluleuleuhisala130135140proalathrvalcysglyprolyslysserthrasnleuvallysasn145150155160lyscysvalasnpheasnpheasnglyleuthrglythrglyvalleu165170175thrgluserasnlyslyspheleupropheglnglnpheglyargasp180185190ilealaaspthrthraspalavalargaspproglnthrleugluile195200205leuaspilethrprocysserpheglyglyvalservalilethrpro210215220glythrasnthrserasnglnvalalavalleutyrglnaspvalasn225230235240cysthrgluvalprovalalailehisalaglyglyglyserthrleu245250255alaileleuthralaleuargleucysalatyrcyscysasnileval260265270asnvalserleuvallysproserphetyrvaltyrserargvallys275280285asnleuasnserserargvalproaspleuleuval290295300<210>9<211>326<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>9seraspserthrglyserasnglnasnglygluargserglyalaarg151015serlysglnargargproglnglyglyglyserlyspheproarggly202530glnglyvalproileasnthrasnserserproaspaspglnilegly354045tyrglyglyglyseraspglnvalileleuleuasnlyshisileasp505560alatyrlysthrpheproprothrgluprolyslysasplyslyslys65707580lysalaaspgluthrglnalaleuproglnargglnlyslysglngln859095thrvalthrleuleuproalaalaaspleuaspasppheserlysgln100105110glyglyglyseraspileserthrgluiletyrglnalaglyserthr115120125procysasnglyvalgluglypheasncystyrpheproleuglnser130135140tyrglypheglnprothrasnglyvalglytyrglnprotyrargval145150155160valvalleuserphegluleuleuhisalaproalathrvalcysgly165170175prolyslysserthrasnleuvallysasnlyscysvalasnpheasn180185190pheasnglyleuthrglythrglyvalleuthrgluserasnlyslys195200205pheleupropheglnglnpheglyargaspilealaaspthrthrasp210215220alavalargaspproglnthrleugluileleuaspilethrprocys225230235240serpheglyglyvalservalilethrproglythrasnthrserasn245250255glnvalalavalleutyrglnaspvalasncysthrgluvalproval260265270alailehisalaglyglyglyserthrleualaileleuthralaleu275280285argleucysalatyrcyscysasnilevalasnvalserleuvallys290295300proserphetyrvaltyrserargvallysasnleuasnserserarg305310315320valproaspleuleuval325<210>10<211>354<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>10seraspserthrglyserasnglnasnglygluargserglyalaarg151015serlysglnargargproglnglyglyglyserlyspheproarggly202530glnglyvalproileasnthrasnserserproaspaspglnilegly354045tyrglyglyglyserlyslysseralaalaglualaserlyslyspro505560argglnlysargthralathrlysalatyrasnvalthrglyglygly65707580seraspglnvalileleuleuasnlyshisileaspalatyrlysthr859095pheproprothrgluprolyslysasplyslyslyslysalaaspglu100105110thrglnalaleuproglnargglnlyslysglnglnthrvalthrleu115120125leuproalaalaaspleuaspasppheserlysglnglyglyglyser130135140aspileserthrgluiletyrglnalaglyserthrprocysasngly145150155160valgluglypheasncystyrpheproleuglnsertyrglyphegln165170175prothrasnglyvalglytyrglnprotyrargvalvalvalleuser180185190phegluleuleuhisalaproalathrvalcysglyprolyslysser195200205thrasnleuvallysasnlyscysvalasnpheasnpheasnglyleu210215220thrglythrglyvalleuthrgluserasnlyslyspheleuprophe225230235240glnglnpheglyargaspilealaaspthrthraspalavalargasp245250255proglnthrleugluileleuasp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