技术特征：
1.一种用于培养原代肝癌细胞的原代肝癌细胞培养基，其特征在于：在初始培养基中含有谷氨酰胺、非必需氨基酸、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、il-6、表皮生长因子、胰岛素、y27632、n2添加剂、b27添加剂、primocin、青霉素和链霉素、胎牛血清、以及任选的氢化可的松、任选的r-spondin1，所述初始培养基选自dmem/f12、dmem、f12或rpmi-1640。2.如权利要求1的原代肝癌细胞培养基，其特征在于：所述谷氨酰胺的含量为62.5ng/ml～1000ng/ml；所述非必需氨基酸为选自甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸和丝氨酸中的一种或多种，所述非必需氨基酸的总含量为0.25μm～4μm；所述碱性成纤维细胞生长因子的含量为5ng/ml～80ng/ml；所述肝细胞生长因子的含量为5ng/ml～80ng/ml；所述il-6的含量为1.25ng/ml～20ng/ml；所述表皮生长因子的含量为2.5ng/ml～40ng/ml；所述胰岛素的含量为1.25ng/ml～20ng/ml；所述y27632的含量为5μm～40μm；所述n2添加剂相对于培养基的体积比为1:25～1:400；所述b27添加剂相对于培养基的体积比为1:12.5～1:200；所述primocin的含量为40μg/ml～80μg/ml；所述青霉素的含量为80u/ml～200u/ml；所述链霉素的含量为50μg/ml～150μg/ml；所述胎牛血清相对于培养基的体积比为1:5～1:20；若含有所述氢化可的松，其含量为0.4μg/ml～1.6μg/ml；若含有所述r-spondin1，其含量为62.5ng/ml～1000ng/ml。3.一种原代肝癌细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：使用权利要求1或2所述的原代肝癌细胞培养基对原代肝癌细胞进行培养。4.如权利要求3所述的培养方法，其特征在于：在培养中，以5
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104～1.5
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105个/cm2的细胞密度加入经辐照的滋养层细胞。5.如权利要求4所述的培养方法，其特征在于：所述经辐照的滋养层细胞为小鼠的成纤维细胞，优选为nih-3t3或者j2-3t3。6.如权利要求4所述的培养方法，其特征在于：所述经辐照的滋养层细胞经γ射线或x射线照射，优选经γ射线照射。7.如权利要求6所述的培养方法，其特征在于：辐照剂量为10～50gy。8.如权利要求3～7中任一项所述的培养方法，其特征在于：在原代肝癌细胞生长至占培养器皿底面积75％以上时进行消化传代。9.一种评估用于治疗肝癌疾病的药物的疗效的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)根据权利要求3～8中任一项所述的培养方法培养得到肝癌细胞；(2)选定需要检测的药物，所述药物以其最大血浆浓度c
max
为参考，以2～5倍c
max
为起始浓度，稀释成不同的药物浓度梯度；
(3)将步骤(1)培养得到的肝癌细胞消化成单细胞悬液，并加入多孔板内进行贴壁，对所述贴壁细胞添加梯度稀释后的所述药物；(4)进行细胞活力检测。
技术总结
本发明提供一种用于快速、稳定地培养原代肝癌细胞的原代肝癌细胞培养基和原代肝癌细胞培养方法。上述原代肝癌细胞培养基含有谷氨酰胺、非必需氨基酸、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子、IL-6、表皮生长因子、胰岛素、Y27632、N2添加剂、B27添加剂、Primocin、青霉素和链霉素、胎牛血清、以及任选的氢化可的松、任选的R-spondin1。由本发明的原代肝癌细胞培养基以及本发明的原代肝癌细胞培养方法得到的细胞模型，能够用于药物的疗效评估和筛选。能够用于药物的疗效评估和筛选。能够用于药物的疗效评估和筛选。
技术研发人员：刘青松 赵明 陈程 王文超 任涛 王黎
受保护的技术使用者：合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司
技术研发日：2020.03.10
技术公布日：2021/9/9