本发明涉及微生物检测技术领域，具体为一种微生物的快速检测方法。
背景技术：
大肠菌群主要包括畅杆菌科中韵埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、魔雷伯氏菌属和肠杆菌属。这些属的细菌均来自于人和温血动物的肠道，需氧与兼性厌氧，不形成芽孢；在35～37℃条件下，48小时内能发酵乳糖声酸产气，革兰氏阴性。大肠菌群中以埃希氏菌属为主，埃希氏菌属教俗称为典型大肠杆菌。大肠菌群都是直接或间接地来自人和温血动物的粪便。本群中典型大肠杆菌以外的菌属，除直接来自粪便外，也可能来自典型大肠杆菌排出体外7-30天后在环境中的变异。所以食品中检出大肠菌群表示食品受到污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染，其他菌属则可能为粪便的陈旧污染
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被广泛应用于食品卫生检验工作中。大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，大肠菌群数的高低，表明了食品及食品生产过程中受污染的程度。现有的大肠菌群检测耗时长，检测效率低，为此，我们提出一种微生物的快速检测方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种微生物的快速检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种微生物的快速检测方法，包括如下步骤：
s1、样品处理：取样品25ml放入含有225ml灭菌磷酸缓冲液稀释液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1ml灭菌吸管吸取1:10样品匀液1ml，注入含有9ml稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液；
s2、接种：食品选2-3个适宜的稀释度进行检测，将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1ml样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片，同时做一片空白阴性对照；
s3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片，培养温度为35-37℃，培养15-24h；
s4、计数：培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15-150cfu之间的纸片进行计数。
优选的，所述步骤s1中样品匀液的ph值控制在6.5-7.5之间，采用1mol/l的氢氧化钠或1mol/l的盐酸调整样品匀液的ph值。
优选的，所述步骤s2中含菌量少的液体样品可直接吸取原液进行检测，所述含菌量少的液体样品包括饮用纯水和矿泉水。
优选的，所述步骤s4中两个稀释度的测试片上的菌落数均在15-150cfu之间时，则取其平均菌落数乘以稀释倍数为检测结果，即为每毫升样品中的大肠菌群菌落数。
优选的，所述步骤s4中所有稀释度的测试片上的菌落数都小于15cfu时，则计数稀释度最低的测试片上的平均菌落乘以稀释倍数为检测结果。
优选的，所述步骤s4中所有稀释度的测试片上均无菌落生长时，则以小于1乘以最低稀释倍数为检测结果。
优选的，所述步骤s4中最高稀释度的测试片上的菌落数大于150cfu个时，计数最高稀释度的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数为检测结果。
优选的，所述步骤s4中最高稀释度的测试片上的菌落数大于150cfu个时，计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以纸片生长面积即为测试片上估算的菌落数，纸面生长面积为20cm2。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明主要采用大肠菌群测试片进行快速检测，大肠菌群测试片含有选择性培养基、大肠菌群特异性半乳糖苷酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，不但可以大大缩短检测时间，而且检测结果与传统方法很接近，符合率可达90％左右，解决了现有的大肠菌群检测耗时长，检测效率低的问题。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案：一种微生物的快速检测方法，包括如下步骤：
s1、样品处理：取样品25ml放入含有225ml灭菌磷酸缓冲液稀释液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1ml灭菌吸管吸取1:10样品匀液1ml，注入含有9ml稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液；
s2、接种：食品选2-3个适宜的稀释度进行检测，将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1ml样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片，同时做一片空白阴性对照；
s3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片，培养温度为35-37℃，培养15-24h；
s4、计数：培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15-150cfu之间的纸片进行计数。
实施例一：
s1、样品处理：取样品25ml放入含有225ml灭菌磷酸缓冲液稀释液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1ml灭菌吸管吸取1:10样品匀液1ml，注入含有9ml稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液；
s2、接种：食品选2-3个适宜的稀释度进行检测，将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1ml样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片，同时做一片空白阴性对照；
s3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片，培养温度为35-37℃，培养15-24h；
s4、计数：培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15-150cfu之间的纸片进行计数。
实施例二：
s1、样品处理：取样品25ml放入含有225ml灭菌磷酸缓冲液稀释液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1ml灭菌吸管吸取1:10样品匀液1ml，注入含有9ml稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，步骤s1中样品匀液的ph值控制在6.5-7.5之间，采用1mol/l的氢氧化钠或1mol/l的盐酸调整样品匀液的ph值；
s2、接种：食品选2-3个适宜的稀释度进行检测，将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1ml样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片，同时做一片空白阴性对照；
s3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片，培养温度为35-37℃，培养15-24h；
s4、计数：培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15-150cfu之间的纸片进行计数。
实施例三：
s1、样品处理：取样品25ml放入含有225ml灭菌磷酸缓冲液稀释液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1ml灭菌吸管吸取1:10样品匀液1ml，注入含有9ml稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，步骤s1中样品匀液的ph值控制在6.5-7.5之间，采用1mol/l的氢氧化钠或1mol/l的盐酸调整样品匀液的ph值；
s2、接种：食品选2-3个适宜的稀释度进行检测，含菌量少的液体样品可直接吸取原液进行检测，所述含菌量少的液体样品包括饮用纯水和矿泉水，将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1ml样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片，同时做一片空白阴性对照；
s3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片，培养温度为35-37℃，培养15-24h；
s4、计数：培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15-150cfu之间的纸片进行计数。
实施例四：
s1、样品处理：取样品25ml放入含有225ml灭菌磷酸缓冲液稀释液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1ml灭菌吸管吸取1:10样品匀液1ml，注入含有9ml稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，步骤s1中样品匀液的ph值控制在6.5-7.5之间，采用1mol/l的氢氧化钠或1mol/l的盐酸调整样品匀液的ph值；
s2、接种：食品选2-3个适宜的稀释度进行检测，含菌量少的液体样品可直接吸取原液进行检测，所述含菌量少的液体样品包括饮用纯水和矿泉水，将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1ml样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片，同时做一片空白阴性对照；
s3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片，培养温度为35-37℃，培养15-24h；
s4、计数：培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15-150cfu之间的纸片进行计数，两个稀释度的测试片上的菌落数均在15-150cfu之间时，则取其平均菌落数乘以稀释倍数为检测结果，即为每毫升样品中的大肠菌群菌落数，所有稀释度的测试片上的菌落数都小于15cfu时，则计数稀释度最低的测试片上的平均菌落乘以稀释倍数为检测结果，所有稀释度的测试片上均无菌落生长时，则以小于1乘以最低稀释倍数为检测结果，最高稀释度的测试片上的菌落数大于150cfu个时，计数最高稀释度的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数为检测结果。
实施例五：
s1、样品处理：取样品25ml放入含有225ml灭菌磷酸缓冲液稀释液或生理盐水的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，用1ml灭菌吸管吸取1:10样品匀液1ml，注入含有9ml稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，步骤s1中样品匀液的ph值控制在6.5-7.5之间，采用1mol/l的氢氧化钠或1mol/l的盐酸调整样品匀液的ph值；
s2、接种：食品选2-3个适宜的稀释度进行检测，含菌量少的液体样品可直接吸取原液进行检测，所述含菌量少的液体样品包括饮用纯水和矿泉水，将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1ml样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片，同时做一片空白阴性对照；
s3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片，培养温度为35-37℃，培养15-24h；
s4、计数：培养后纸片上的蓝色菌落为大肠菌群菌落，选择菌落数在15-150cfu之间的纸片进行计数，两个稀释度的测试片上的菌落数均在15-150cfu之间时，则取其平均菌落数乘以稀释倍数为检测结果，即为每毫升样品中的大肠菌群菌落数，所有稀释度的测试片上的菌落数都小于15cfu时，则计数稀释度最低的测试片上的平均菌落乘以稀释倍数为检测结果，所有稀释度的测试片上均无菌落生长时，则以小于1乘以最低稀释倍数为检测结果，最高稀释度的测试片上的菌落数大于150cfu个时，计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以纸片生长面积即为测试片上估算的菌落数，纸面生长面积为20cm2。
本发明主要采用大肠菌群测试片进行快速检测，大肠菌群测试片含有选择性培养基、大肠菌群特异性半乳糖苷酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，不但可以大大缩短检测时间，而且检测结果与传统方法很接近，符合率可达90％左右，解决了现有的大肠菌群检测耗时长，检测效率低的问题。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。