一种用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基及其制备方法和应用与流程

本发明属于细菌培养
技术领域：
，尤其涉及一种用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基及其制备方法和应用。
背景技术：
：变形杆菌是一种具有鞭毛、无荚膜、多形性、运动活泼的革兰氏阴性菌群；广泛存在于禽类肠道前端末端及其生长环境中。肉鸡养殖以笼养模式为主，肉鸭养殖逐渐过渡到多层立体网养模式，养殖量增大导致禽类养殖疾病多发；疾病控制成为肉禽养殖过程中不可避免的环节；细菌学检查是确定临床病因的最主要手段，致病微生物的纯化是做基因组学分析和药敏试验的前提；然而养殖现场环境复杂，且变形杆菌广泛存在于禽类肠道内和环境中，导致采样样品经常受到变形杆菌污染，样品培养平板受变形杆菌扩散式生长覆盖，难以用平板分离纯化病原微生物，继而难以做基因组学和细菌学检查确定病原，并难以精确实施药敏试验确定治疗方案。目前，对于阻止变形杆菌的扩散生长并没有十分有效的方法。因此，发明一种能够有效阻止变形杆菌在平板上扩散式生长的培养基对于采样获取纯化的病原微生物，精准病原定位和提高治疗效果具有重要的意义。技术实现要素：本发明的目的在于提供一个可以有效的阻止变形杆菌扩散生长的培养基。为实现上述目的，本发明提供了一种用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基，每l所述培养基的原料组成为：小牛脑浸粉10-15g、小牛心浸粉2.5-7.5g、蛋白胨7.5-12.5g、氯化钠2.5-7.5g、葡萄糖1.5-2.5g、磷酸氢二钠2-3g、琼脂粉7.5-12.5g、小牛血清40-60ml、90%乙醇10-50ml，以及余量的水。优选地，每l所述培养基的原料组成为：小牛脑浸粉12.5g、小牛心浸粉5g、蛋白胨10g、氯化钠5g、葡萄糖2g、磷酸氢二钠2.5g、琼脂粉10g、小牛血清50ml、90%乙醇30ml，以及余量的水。优选地，所述培养基的制备方法包括如下步骤：（1）按照原料组成比例将小牛脑浸粉、小牛心浸粉、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钠、琼脂粉和水加入到烧瓶中；（2）将烧瓶置于高压灭菌锅中，121℃，灭菌15分钟；（3）将培养基冷却至55℃，加入血清，并搅拌均匀；（4）加入90%乙醇，搅拌均匀即得所述用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基。此外，本发明提供了一种用于阻止变形杆菌扩散生长培养基的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：（1）按照原料组成比例将小牛脑浸粉、小牛心浸粉、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钠、琼脂粉和水加入到烧瓶中；（2）将烧瓶置于高压灭菌锅中，121℃，灭菌15分钟；（3）将培养基冷却至55℃，加入血清，并搅拌均匀；（4）加入90%乙醇，搅拌均匀即得所述用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基。除此之外，本发明提供了一种培养基在阻止变形杆菌扩散生长中的应用，其特征在于，所述培养基每l的原料组成为：小牛脑浸粉10-15g、小牛心浸粉2.5-7.5g、蛋白胨7.5-12.5g、氯化钠2.5-7.5g、葡萄糖1.5-2.5g、磷酸氢二钠2-3g、琼脂粉7.5-12.5g、小牛血清40-60ml、90%乙醇10-50ml，以及余量的水；所述培养基的制备方法为：（1）按照原料组成比例将小牛脑浸粉、小牛心浸粉、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、磷酸氢二钠、琼脂粉和水加入到烧瓶中；（2）将烧瓶置于高压灭菌锅中，121℃，灭菌15分钟；（3）将培养基冷却至55℃，加入血清，并搅拌均匀；（4）加入90%乙醇，搅拌均匀即得所述用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基。本发明的有益效果在于：变形杆菌在本发明所提供的培养基上呈现为单菌落生长，避免扩散式生长导致变形杆菌铺满整个培养皿，从而有利于分离纯化病原菌。其次，本发明所提供的培养基有利于需求高的细菌生长，而且，本发明添加有5%的血清，因此更有利于分离出具有溶血特性的病原菌。附图说明图1为变形杆菌在本发明实施例3上的单菌落生长结果，图2为采样样品中变形杆菌和溶血性鸭源鸡卡氏杆菌在本发明实施例3上的划线单菌落生长结果。具体实施方式为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。需要明白，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1（1）将10g小牛脑浸粉、2.5g小牛心浸粉、7.5g蛋白胨、2.5g氯化钠、1.5g葡萄糖、2g磷酸氢二钠、7.5g琼脂粉和水加入到烧瓶中。（2）将烧瓶置于高压灭菌锅中，121℃，灭菌15分钟；（3）将培养基冷却至55℃，加入40ml小牛血清，并搅拌均匀；（4）加入10ml90%乙醇，搅拌均匀即得所述用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基1。实施例2（1）将15g小牛脑浸粉、7.5g小牛心浸粉、12.5g蛋白胨、7.5g氯化钠、2.5g葡萄糖、3g磷酸氢二钠、12.5g琼脂粉和水加入到烧瓶中。（2）将烧瓶置于高压灭菌锅中，121℃，灭菌15分钟；（3）将培养基冷却至55℃，加入60ml小牛血清，并搅拌均匀；（4）加入50ml90%乙醇，搅拌均匀即得所述用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基2。实施例3（1）将12.5g小牛脑浸粉、5g小牛心浸粉、10g蛋白胨、5g氯化钠、2g葡萄糖、2.5g磷酸氢二钠、12.5g琼脂粉和水加入到烧瓶中。（2）将烧瓶置于高压灭菌锅中，121℃，灭菌15分钟；（3）将培养基冷却至55℃，加入60ml小牛血清，并搅拌均匀；（4）加入50ml90%乙醇，搅拌均匀即得所述用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基3。1.实验方法1（1）将变形杆菌接种于lb培养液中，分别于变形杆菌生长的迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期收取100µl菌液，并10倍比稀释至10-8，制成变形杆菌悬液。（2）将（1）变形杆菌悬液接种于本发明实施例3所制备得到的培养基上，观察变形杆菌的生长情况。（3）将采样样品中变形杆菌和溶血性鸭源鸡卡氏杆菌接种于本发明实施例3所制备得到的培养基上，观察变形杆菌和溶血性鸡卡氏杆菌的生长情况。实验结果如图1和图2所示，变形杆菌在本发明实施例3所制备得到的培养基呈现为单菌落生长，并且可以与溶血性鸡卡氏杆菌很好的区分。2.实验方法2将相同浓度的变形杆菌分别接种于本发明实施例3所制备的培养基，含0.2%硼酸lb培养基，含2.5%琼脂lb培养基，lsw培养基，观察单菌落出现时间和融合成片时间。单菌落出现时间：出现大小适中，光滑，圆形的白色单个菌落时的时间。融合成片时间：菌落发生迁移并且融合成片时的时间。培养基类型单菌落出现时间融合成片时间实施例3496.0±8.71min2817±38.92含0.2%硼酸lb培养基1436±28.00min2191±34.07含2.5%琼脂lb培养基610±5.29min1257±34.28lsw培养基572±10.58min1146±13.86从表1可以看出，本发明所提供的培养基单菌落出现的时间最早，而融合成片的时间最晚，因此，变形杆菌在本发明实施例3所提供的培养基上维持单菌落生长的时间显著长于其他培养基，从而有助于分离纯化病原菌。当前第1页12