本发明涉及中药食品及保健品制备技术领域，特别涉及一种非伤害采收哈蟆油的方法。
背景技术：
哈蟆是我国著名的集药用、滋补和美容于一体的经济蛙种。哈蟆油是雌哈蟆怀卵成熟期的输卵管，它含有18种氨基酸、13种无机元素、9种维生素和多种复合多肽等生物活性因子，特别富含三种性激素，即雌二醇、睾酮、孕酮。其中雌二醇和睾酮分别是雌性激素和雄性激素中生理作用最强的激素，具有显著的滋阴强肾激发免疫功能和调节机理作用。
哈蟆油属于蛋白类物质不易被人体消化，同时也带有病毒或寄生虫卵以及浓烈的血腥味，不经过加工处理不能直接食用。现有哈蟆油产品的制备一般是采用干制技术，即将哈蟆整体干制后取油或新鲜哈蟆取油后干制贮存，但是哈蟆油制备过程中均是采用伤害性手段将哈蟆杀死风干后取油或直接杀死哈蟆后鲜哈蟆取油后再风干，两种取油方式均需要将哈蟆处死后取油，无法再次对哈蟆进行利用，严重影响经济效益，造成资源上的浪费，现有技术研究表明，哈蟆卵表面的卵胶膜以及卵核中也具有与哈蟆油相似营养物质组成的组分，但是以哈蟆卵为原料提取哈蟆油的技术还尚未有成体系的研究。
因此，如何提供一种以哈蟆卵为原料的非伤害性采收哈蟆油的方法是本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种非伤害采收哈蟆油的方法，采用哈蟆卵为哈蟆油原料来源，经过促排卵和一系列的加工提取工艺制备哈蟆油，对哈蟆本身无伤害，提升其利用价值。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种非伤害采收哈蟆油的方法，包括以下步骤：
(1)3月中旬至5月中旬采集有卵雌性哈蟆，转移到室温为5-15℃的室内，药物促进其排卵；
(2)收集哈蟆卵，置于通风良好的干燥室内平铺干燥，控制干燥温度至完全干燥；
(3)将干哈蟆卵置于干净热水中浸泡，使其吸水发涨，捞出后用网目小于哈蟆卵核直径的丝网挤压，卵胶膜(即哈蟆油)挤出，卵核即留在丝网内，分别收集卵胶膜和卵核，卵胶膜收集待用，卵核干燥后粉碎；
(4)将干燥粉碎的卵核置于无水乙醇中浸泡一段时间后采用微波辅助法提取，提取完成后过滤；
(5)重复步骤(4)的提取操作2-3次后合并滤液，之后低温旋蒸去除无水乙醇，得到提取哈蟆油；
(6)将所述步骤(3)收集的卵胶膜与所述步骤(5)提取的哈蟆油合并并混合均匀，得到哈蟆油成品。
优选的，所述步骤(1)中采用的药物为绒毛膜促性腺激素、促黄体生成素释放激素类似物或哈蟆脑垂体中的一种或多种。
优选的，所述步骤(2)中控制干燥温度为20～30℃。
上述优选技术方案的有益效果是：控制合理的干燥温度，确保制备效率且避免长时间高温处理对营养组分造成损害，且干燥后也易于贮存使用。
优选的，所述步骤(3)中干哈蟆卵置于常温干净水中浸泡24～48小时。
上述优选技术方案的有益效果是：该温度和浸泡时间下可确保干燥的哈蟆卵快速溶胀达到需求效果，且避免高温破坏营养组分。
优选的，所述步骤(4)中干燥粉碎的卵核与无水乙醇的料液比为1：(8-10)g/ml，浸泡时间为3-3.5h。
上述优选技术方案的有益效果是：当哈蟆卵粉质量一定时，溶液体积增大，接触面积增大，分子扩散速率增加，有利于哈蟆卵中哈蟆油的提取；但是提取溶剂比例太大时，部分微波会被有机溶剂吸收，对哈蟆卵粉内部的微波作用减少，细胞破碎能力减弱，哈蟆卵中哈蟆油提取率降低；随着浸泡时间的延长，哈蟆卵中哈蟆油提取率变化不显著；因此，将料液比控制在一定比列内，并控制浸泡时间，确保提取效果及提取效率。
优选的，所述步骤(4)中微波辅助提取中温度为28-35℃，微波功率500-600w，提取时间25-35min。
上述优选技术方案的有益效果是：随着提取时间的延长，细胞中的油脂与乙醇溶液逐渐达到了相对平衡，提取率变化不显著；温度升高，油会分解或挥发，因此确定微波时间和温度在合理范围内；并且微波产生大量能量，经过热效应作用，萃取物的细胞结构破裂，随着功率的增加，热效应越激烈，提取物吸收的能量越多，细胞结构破裂程度越高，当功率足够高之后，温度升高，部分溶剂会挥发，冷凝的效果不明显，所以哈蟆卵中哈蟆油提取率会有所降低，因此，确定微波功率在合理范围内。
优选的，所述步骤(5)中低温旋蒸温度为50-60℃。
上述优选技术方案的有益效果是：低温旋蒸控制旋蒸温度即可快速蒸发溶剂又可避免高温对营养物质的破坏。
经由上述技术方案，与现有技术相比，本发明提供了一种非伤害采收哈蟆油的方法，采用人工干预手段促进活体哈蟆排卵，之后以哈蟆卵为原料提取哈蟆油，以卵膜和卵核分开处理，卵膜直接作为哈蟆油成品组分，卵核经过一系列的提取并优化提取工艺，有效提取其中哈蟆油组分，最后将卵核提取物与卵膜结合得到哈蟆油产物，该制备工艺对哈蟆本体无伤害，其可重复产油，提升经济效益和哈蟆本体的价值，具有较高的推广应用意义。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种非伤害采收哈蟆油的方法，包括以下步骤：
(1)3月中旬至5月中旬采集有卵雌性哈蟆，转移到室温为5-15℃的室内，采用绒毛膜促性腺激素30微克/千克体重的注射量促进其排卵；
(2)收集哈蟆卵，置于通风良好的干燥室内平铺干燥，控制干燥温度为20～30℃至完全干燥，完全干燥以碾碎为标准；
(3)将干哈蟆卵置于常温干净水中浸泡24～48小时，使其吸水发涨，捞出后用网目小于哈蟆卵核直径的纱网挤压，卵胶膜挤出，卵核即留在纱网上，分别收集卵胶膜和卵核，卵胶膜收集待用，卵核干燥后粉碎；
(4)将干燥粉碎的卵核以料液比1：(8-10)g/ml的比例置于无水乙醇中浸泡3-3.5h后，在28-35℃、微波功率500-600w的条件下采用微波辅助法提取25-35min，提取完成后过滤；
(5)重复步骤(4)的提取操作2-3次后合并滤液，之后50-60℃低温旋蒸去除无水乙醇，得到提取哈蟆油；
(6)将所述步骤(3)收集的卵胶膜与所述步骤(5)提取的哈蟆油合并并混合均匀，得到哈蟆油成品。
试验例
采用gc-ms法对制得的哈蟆油中脂肪酸成分进行分析，具体结果如下表：
注：表中相对分子质量及分子式均为脂肪酸甲酯。
上述测试结果表明，采用本发明的方法所制得的哈蟆油中含有丰富的脂肪酸，具有较高的实用价值。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。