促甲状腺素释放激素的制备方法及应用与流程

1.本发明涉及多肽药物制备技术领域，尤其是涉及一种促甲状腺素释放激素的制备方法及应用。


背景技术：

2.促甲状腺素释放激素(thyrotropin releasing hormone)，一种肽类激素，其化学结构式为pglu-his-pro-nh2。由下丘脑室旁核内的一些神经细胞合成、分泌。经垂体门脉系统输送至腺垂体。由焦谷氨酸、组氨酸和脯氨酰胺组成。促甲状腺素释放激素能够促使腺垂体分泌促甲状腺激素(tsh)，并通过tsh影响甲状腺的分泌。此外，促甲状腺素释放激素还具有促进生乳素、催产素和辊压素的分泌，以及影响大脑的机能，如抗抑郁、改变睡眠觉醒和行为的生理功能。因此，作为药物，促甲状腺素释放激素的需求量日益增加。
3.张家瑾等(张家瑾，张绍东，盛树力.促甲状腺素释放激素合成法的改进[j].首都医学院学报，1990(04):276-278.)提供的促甲状腺素释放激素合成法的改进包括依次制备z-pglu-onb、z-pglu-his-oh、h-pro-och3→
h-pro-nh2、z-pglu-his-pro-nh2和氢解制备pglu-his-pro-nh2。其在制备z-pglu-his-pro-nh2的工序中，需要两次乙醚沉淀，重结晶，需72小时以上，耗时较长。且乙醚使用量大(得产物3.22克需1.5l乙醚)，乙醚闪点为-40℃，对操作环境温度、通风设施、厂房防爆要求高。产业化安全隐患极大。
[0004]
一种促甲状腺素释放激素及其可药用盐的制备方法(申请号cn201010137327.5)包括制备z-pglu-his-pro-nh2和氢解制备pglu-his-pro-nh2，在制备z-pglu-his-pro-nh2的工序中涉及两次乙醚沉淀，重结晶，耗时较长。乙醚使用量大(得产物12.6克需约4l乙醚)，且对沉淀物溶解时，采用加热进行助溶，溶解液闪点低(优选的乙醇闪点13℃、异丙醇闪点为12℃)乙醚闪点为-40℃，异丙醚为-28℃。对操作环境温度、通风设施、厂房防爆要求极高。产业化采用加热方式进行溶解，再倒入低闪点的乙醚等溶剂中沉淀。安全隐患极大，不可行。
[0005]
由此可知，现有的促甲状腺素释放激素制备工艺，均采用两次乙醚沉淀，重结晶，耗时较长。且使用大量的低闪点的乙醚。安全隐患极大，难以实现工业化生产。因此，如何能够安全、高效地实现促甲状腺素释放激素的合成制备，成为亟待解决的问题。
[0006]
有鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

[0007]
本发明的主要目的在于提供一种促甲状腺素释放激素的制备方法，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。
[0008]
本发明提供了一种促甲状腺素释放激素的制备方法，所述制备方法依次包括制备z-pglu-onb、制备z-pglu-his-oh、制备z-pglu-his-pro-nh2和氢解z-pglu-his-pro-nh2，得到所述促甲状腺素释放激素；
[0009]
其中，制备z-pglu-his-pro-nh2的步骤包括：
[0010]
向z-pglu-his-oh和pro-nh的混合溶液中加入活化剂反应后浓缩至干，浓缩产物加乙腈溶解后结晶析出，得到所述z-pglu-his-pro-nh2。
[0011]
进一步的，将pro-nh的dmf溶液加入z-pglu-his-oh的dmf溶液中，得到所述z-pglu-his-oh和pro-nh的混合溶液；
[0012]
优选地，所述活化剂包括honb和dcci，优选在所述z-pglu-his-oh和pro-nh的混合溶液中先加入honb，然后在搅拌下滴加dcci；
[0013]
优选地，加入活化剂反应的温度为10～30℃，反应的时间为8～24小时；
[0014]
优选地，在加入活化剂前还包括冷却的步骤，所述冷却的温度为-2～2℃，优选为0℃；
[0015]
优选地，在浓缩前还包括过滤的步骤。
[0016]
进一步的，所述浓缩包括减压浓缩，优选压力为-0.09～-0.1mpa；
[0017]
优选地，加乙腈溶解后置于2～10℃至结晶析出；
[0018]
优选地，结晶析出后还包括过滤的步骤；
[0019]
优选地，将分离出的结晶进行干燥处理，得到z-pglu-his-pro-nh2；
[0020]
优选地，干燥前还包括将析出的结晶使用乙腈进行清洗的步骤。
[0021]
进一步的，所述制备z-pglu-onb的步骤包括：
[0022]
取z-pglu和honb，加入二氧六环和四氢呋喃，进行活化酯反应，将反应产物以乙酸乙酯溶解后，再依次使用khco3溶液和nacl溶液清洗，有机相使用无水na2so4干燥，过滤后滤液减压蒸干后加入石油醚重结晶，得到所述z-pglu-onb；
[0023]
优选地，使用8％～10％的khco3溶液和5％～10％的nacl溶液清洗，优选使用10％的khco3溶液和10％的nacl溶液；
[0024]
优选地，所述清洗的次数至少为三次；
[0025]
优选地，所述干燥的时间为8～24小时。
[0026]
进一步的，取z-pglu和honb加入二氧六环和四氢呋喃混合溶解后在0～5℃条件下加入活化剂进行活化酯反应，反应后过滤，固体用四氢呋喃清洗，将清洗液合并滤液减压浓缩至干，得到反应产物；
[0027]
优选地，所述活化剂包括dcci；
[0028]
优选地，所述活化酯反应的时间为3～5小时，温度为2～10℃。
[0029]
进一步的，所述制备z-pglu-his-oh的步骤包括：
[0030]
将z-pglu-onb的乙腈溶液与l-his-ok的水溶液混合后搅拌，tlc监控z-plglu-onb点消失后减压浓缩，在0～5℃条件下调节ph至5.5～6.5然后静置8～24小时后过滤，固体去除cl-及his后干燥，得到所述z-pglu-his-oh。
[0031]
进一步的，所述搅拌的温度为25～35℃，时间为20～25小时；
[0032]
优选地，所述减压浓缩的压力为-0.09～-0.1mpa，温度为35～45℃；
[0033]
优选地，使用1.5～2.5mol/l的hcl调节ph；
[0034]
优选地，所述静置的温度为2～10℃；
[0035]
优选地，通过冰纯化水洗涤去除cl-及his。
[0036]
进一步的，所述氢解z-pglu-his-pro-nh2的步骤包括：
[0037]
向z-pglu-his-pro-nh2的溶液中通h2，用tlc检测至反应完全后过滤，减压浓缩至
干，得到所述促甲状腺素释放激素；
[0038]
优选地，向z-pglu-his-pro-nh2的溶液中加入钯炭后再通h2；
[0039]
优选地，所述z-pglu-his-pro-nh2的溶液温度为25～35℃；
[0040]
优选地，所述h2通入的时间为20～25小时；
[0041]
优选地，减压浓缩至干后还包括以无水乙醚研成粉的步骤，得到所述促甲状腺素释放激素。
[0042]
进一步的，在氢解z-pglu-his-pro-nh2后还包括除菌和冻干的步骤；
[0043]
优选地，所述除菌包括将浓度为10％～12％的促甲状腺素释放激素溶液通过0.22μm滤膜过滤；
[0044]
优选地，所述冻干的预冻温度≤—35℃，干燥温度为30～40℃，真空度≤30pa，保温时间为6-8小时。
[0045]
此外，本发明还提供了上述的促甲状腺素释放激素的制备方法在制备促甲状腺素释放激素可药用盐中的应用。
[0046]
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0047]
本发明提供的促甲状腺素释放激素的制备方法，在制备z-pglu-his-pro-nh2的步骤中，使用乙腈溶解浓缩产物，低温放置后即有结晶析出，避免现有技术中惯用的采用两次乙醚沉淀后再重结晶的方式，工序周期短。并且，使用少量的乙腈溶解，避免使用低闪点的乙醚等试剂。一般区即可进行，对厂房无特殊要求。无安全风险，可工业化。
具体实施方式
[0048]
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0049]
除另有说明，本发明中所使用的术语具有如下含义：
[0050]
术语“pro-nh”指的是脯氨酸；
[0051]
术语“dmf”指的是二甲基酰胺；
[0052]
术语“honb”指的是n-羟基-5-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺；
[0053]
术语“dcci”指的是二环己基碳二亚胺；
[0054]
术语“z-pglu”指的是苄氧羰酰-焦谷氨酸；
[0055]
术语“tlc”指的是薄层色谱。
[0056]
需要说明的是，如无特殊说明，在本发明中涉及的百分比均为质量百分比。
[0057]
根据本发明的第一个方面，提供了一种促甲状腺素释放激素的制备方法，所述制备方法依次包括制备z-pglu-onb、制备z-pglu-his-oh、制备z-pglu-his-pro-nh2和氢解z-pglu-his-pro-nh2，得到所述促甲状腺素释放激素；
[0058]
其中，制备z-pglu-his-pro-nh2的步骤包括：
[0059]
向z-pglu-his-oh和pro-nh的混合溶液中加入活化剂反应后浓缩至干，浓缩产物加乙腈溶解后结晶析出，得到所述z-pglu-his-pro-nh2。
[0060]
本发明在制备z-pglu-his-pro-nh2的步骤中，使用乙腈溶解浓缩产物，能够起到
调节ph的作用，低温放置后即有结晶析出，即使用乙腈溶解后，通过其自身的ph调节及温度的调节，能够在乙腈中实现沉淀的同时快速结晶，避免现有技术中惯用的采用两次乙醚沉淀后再重结晶的方式，工序周期短。并且，使用少量的乙腈溶解，避免使用低闪点的乙醚等试剂。一般区即可进行，对厂房无特殊要求。无安全风险，可工业化。
[0061]
需要说明的是，在本发明中，制备z-pglu-onb、制备z-pglu-his-oh和氢解z-pglu-his-pro-nh2可选择本领域的常规方法也可以选择其他能够实现的方法，凡是能够制备得到相应产物的方法均可，本发明对此不做限定。
[0062]
作为优选，在制备z-pglu-his-pro-nh2的步骤中，将pro-nh的dmf溶液加入z-pglu-his-oh的dmf溶液中，得到所述z-pglu-his-oh和pro-nh的混合溶液。
[0063]
优选地，所述活化剂包括honb和dcci，优选在所述z-pglu-his-oh和pro-nh的混合溶液中先加入honb，然后在搅拌下滴加dcci。
[0064]
以honb和dcci作为活化剂，能够有效提高肽的连接效率。在搅拌条件下滴加dcci能够进一步使反应更加充分。
[0065]
优选地，加入活化剂反应的温度为10～30℃，例如可以为，但不限于10℃、15℃、20℃、25℃或30℃，反应的时间为8～24小时，例如可以为，但不限于8小时、10小时、12小时、15小时、18小时、20小时或24小时。
[0066]
加入活化剂反应后采用减压浓缩的方式浓缩至干，减压浓缩的压力条件优选为-0.09～-0.1mpa。
[0067]
作为优选，在加乙腈溶解后，采用低温析出的方式析出结晶，其温度为2～10℃，例如可以为，但不限于2℃、5℃、8℃或10℃。其工艺简单，且试剂安全。析出后，采用过滤的方式分离收集结晶。
[0068]
为了进一步提高纯度，保证产品质量，在过滤后还包括使用乙腈对结晶进行清洗的步骤。清洗后，对结晶进行干燥处理，得到z-pglu-his-pro-nh2。
[0069]
在一些优选的实施方式中，制备z-pglu-onb的步骤包括：
[0070]
取z-pglu和honb，加入二氧六环和四氢呋喃，进行活化酯反应，将反应产物以乙酸乙酯溶解后，再依次使用khco3溶液和nacl溶液清洗，有机相使用无水na2so4干燥，过滤后滤液减压蒸干后加入石油醚重结晶，得到所述z-pglu-onb。
[0071]
用乙酸乙酯溶解后，khco3溶液可以有效去除有机相中的酸性杂质；nacl溶液能够去除有机相中的水分。再加入中性的na2so4进一步去除微量的水。可有效提高后期结晶收率。
[0072]
当使用8％～10％的khco3溶液和5％～10％的nacl溶液、优选使用10％的khco3溶液和10％的nacl溶液进行清洗时，除杂效果更好。
[0073]
本实施方式对清洗的次数不做限定，清洗次数越多除杂效果越好，考虑到成本问题，优选清洗的次数为三次。
[0074]
所述干燥的时间为8～24小时，例如可以为，但不限于8小时、10小时、12小时、15小时、18小时、20小时或24小时。
[0075]
在一些优选的实施方式中，制备z-pglu-his-oh的步骤包括：
[0076]
将z-pglu-onb的乙腈溶液与l-his-ok的水溶液混合后搅拌，tlc监控z-plglu-onb点消失后减压浓缩，在0～5℃条件下调节ph至5.5～6.5然后静置8～24小时后过滤，固体去
除cl-及his后干燥，得到所述z-pglu-his-oh。
[0077]
选择tlc监控反应，反应更彻底，残留物与杂质减少，产率升高。
[0078]
需要说明的是，其中，l-his-ok为l-his的水溶液加入khco3搅拌使溶得到。
[0079]
在本发明提供的制备z-pglu-his-oh的步骤中，后期采用了大量的纯化水对产物充分去除了cl-及his杂质，使下一步形成z-pglu-his-pro-nh2的反应率大幅度提高，目标肽含量提高。减压浓缩前所得的反应液，进行了过滤操作，去除了主要的杂质dcu。少量的乙腈溶解后，乙腈溶解液中目标肽浓度和纯度较高，达到了采用结晶工艺的基本要求。
[0080]
在一些优选的实施方式中，氢解z-pglu-his-pro-nh2的步骤包括：
[0081]
向z-pglu-his-pro-nh2的溶液中通h2，用tlc检测至反应完全后过滤，减压浓缩至干，得到所述促甲状腺素释放激素。
[0082]
为了进一步提高反应效率，向z-pglu-his-pro-nh2的溶液中加入钯炭后再通h2，钯炭作为催化剂能够有效促进本实施方式中的氢解反应。
[0083]
在一些优选的实施方式中，在氢解z-pglu-his-pro-nh2后还包括除菌和冻干的步骤。添加除菌和冻干的精制步骤，使得到的普罗瑞林冻干制品具有更长的保质期限，便于应用和保存。
[0084]
优选地，所述除菌包括将浓度为10％～12％的促甲状腺素释放激素溶液通过0.22μm滤膜过滤；
[0085]
优选地，所述冻干的预冻温度≤—35℃，干燥温度为30～40℃，真空度≤30pa，保温时间为6-8小时。
[0086]
具体地，本发明提供的促甲状腺素释放激素的制备方法包括如下步骤：
[0087]
工序1：z-pglu-onb的制备
[0088]
称取z-pglu、honb、加入二氧六环和四氢呋喃，进行活化酯反应。
[0089]
先搅拌至溶，在冰浴冷却下滴加dcci的thf溶液，反应4小时左右，2～10℃静置8-24小时，过滤，四氢呋喃洗，滤液40℃左右减压浓缩至干，残留物以乙酸乙酯溶解，用10％khco3溶液及10％nacl溶液各洗三次，有机相用无水na2so4干燥8～24小时，过滤。乙酸乙酯洗，滤液40℃，-0.09mpa～-0.1mpa减压蒸干，加入石油醚搅匀后放置于2～10℃冰箱，等结晶析出后，过滤收集结晶，干燥后可得产物1。
[0090]
工序2：接二肽
[0091]
称取l-his，用水溶解，再加khco3搅拌使溶。
[0092]
另取工序1的产物z-pglu-onb，先溶于乙腈中后，加入上述l-his-ok水溶液中，30℃左右搅拌24小时，tlc监控z-plglu-onb点消失后，在40℃，-0.09mpa～-0.1mpa条件下，减压浓缩至小体积，在冰浴冷却下用2mol/l hcl调ph至6左右，2～10℃放置8～24小时后过滤，产品用冰纯化水洗至无cl-及his，置p2o5干燥器中干燥，得产物2。
[0093]
工序3：接三肽——制备z-pglu-his-pro-nh2[0094]
先称取工序2：z-pglu-his-oh，用dmf溶解。
[0095]
另取pro-nh用dmf溶解后倒入上述溶液中，冰浴冷却至0℃后加honb/dmf，搅拌下滴加dcci/dmf溶液，10～30℃，反应8～24小时，过滤，溶液70℃减压浓缩(-0.09～-0.1mpa)至干，加乙腈溶解，放置2-10℃冰箱，结晶析出。过滤，乙腈洗，结晶置p2o5真空干燥器中干燥，得产物3。
[0096]
工序4：氢解制备pglu-his-pro-nh2[0097]
称取工序3产物：z-pglu-his-pro-nh2，加入甲醇搅拌，溶解后加入钯炭，在30℃水浴中通h2约24h，用tlc检测至反应完全，过滤，甲醇洗，40℃，-0.09mpa～-0.1mpa减压浓缩至干，以无水乙醚研成粉，得普罗瑞林(促甲状腺素释放激素，trh)中间体。
[0098]
工序5：精制
[0099]
上述产物进入洁净区，加注射用水溶解浓度为10％～12％，溶液用0.22μm滤膜过滤，进行冷冻干燥，预冻温度≤-35℃，干燥温度30℃～40℃，真空度≤30pa，保温时间6-8小时，冻干后得普罗瑞林冻干制品。
[0100]
当应用上述具体的制备方法制备促甲状腺素释放激素时，以pro-nh2计，为67mol/批。
[0101]
实施例1对z-pglu-onb的制备进行参数优化与筛选
[0102][0102]
得到中间产物，用乙酸乙酯溶解。
[0103]
实验1：4％khco3溶液及5％nacl溶液各洗三次，na2so4干燥8～24小时，过滤，再用乙酸乙酯洗，石油醚重结晶。
[0104]
实验2：4％khco3溶液及10％nacl溶液各洗三次，na2so4干燥8～24小时，过滤，再用乙酸乙酯洗，石油醚重结晶。
[0105]
实验3：8％khco3溶液及5％nacl溶液各洗三次，na2so4干燥8～24小时，过滤，再用乙酸乙酯洗，石油醚重结晶。
[0106]
实验4：8％khco3溶液及10％nacl溶液各洗三次，na2so4干燥8～24小时，过滤，再用乙酸乙酯洗，石油醚重结晶。
[0107]
实验5：10％khco3溶液及5％nacl溶液各洗三次，na2so4干燥8～24小时，过滤，再用乙酸乙酯洗，石油醚重结晶。
[0108]
实验6：10％khco3溶液及10％nacl溶液各洗三次，na2so4干燥8～24小时，过滤，再用乙酸乙酯洗，石油醚重结晶。
[0109]
实验7：得到中间产物，直接过滤，再用乙酸乙酯洗，石油醚重结晶。
[0110]
对上述各实验进行参数实验数据对比，结果如下表所示：
[0111]
[0112][0113]
从上述结果中可以看出，本发明的提供的试验方法(实验1-6)在过滤得到滤液后，在40℃左右减压浓缩至干，将残留物以乙酸乙酯溶解，添加了条件：用10％khco3溶液及10％nacl溶液各洗三次，之后再将有机相用无水na2so4干燥8～24小时，过滤后，用乙酸乙酯洗，将滤液在40℃，-0.09mpa～-0.1mpa条件下减压蒸干，加入石油醚搅匀后放置于2～10℃冰箱，等结晶析出后，过滤收集结晶，干燥收集产物，与传统工艺(实验7)相比明显使收率上升。
[0114]
实施例2对接二肽工序进行监控反应
[0115][0116]
实验8：称取l-his 19.43克，用325ml水溶解，再加khco
3 14.54克搅拌使溶。
[0117]
取实验7所得产物z-pglu-onb 46克，溶于380ml乙腈中，加入上述l-his-ok水溶液中，30℃搅拌24小时，tlc监控z-pglu-onb点消失后，在40℃，-0.09mpa～-0.1mpa条件下，减压浓缩至小体积，在冰浴冷却下用2mol/l hcl调ph至6左右，2～10℃放置8～24小时后过滤，产品用冰纯化水洗至无cl-及his，置p2o5干燥器中干燥，得产物48.4克，收率为73％。
[0118]
实验9：称取l-his 10克，用162ml水溶解，再加khco
3 7.2克搅拌使溶。
[0119]
取实验6所得产物z-pglu-onb 20克，溶于190ml乙腈中，加入上述l-his-ok水溶液中，30℃搅拌24小时，tlc监控z-pglu-onb点消失后，在40℃，-0.09mpa～-0.1mpa条件下，减压浓缩至小体积，在冰浴冷却下用2mol/l hcl调ph至6左右，2～10℃放置8～24小时后过滤，产品用冰纯化水洗至无cl-及his，置p2o5干燥器中干燥，得产物31克，收率为92％。
[0120]
实验10：称取l-his 10克，用62ml水溶解，再加khco
3 7.2克搅拌使溶。
[0121]
取实验6所得产物z-pglu-onb 20克，溶于190ml乙腈中，加入上述l-his-ok水溶液中，30℃搅拌24小时，停止反应，在40℃，-0.09mpa～-0.1mpa条件下，减压浓缩至小体积，在冰浴冷却下用2mol/l hcl调ph至6左右，2～10℃放置8～24小时后过滤，产品用冰纯化水洗至无cl-及his，置p2o5干燥器中干燥，得产物26克，收率为77.1％。
[0122]
实施例3制备z-pglu-his-pro-nh2的过程
[0123][0124]
先称取z-pglu-his-oh 42克，用150ml dmf溶解。另取pro-nh13.4克用50ml dmf溶解后倒入上述溶液中，冰浴冷却至0℃后加honb/dmf，搅拌下滴加dcci/dmf溶液，10～30℃，反应24小时。
[0125]
溶液70℃减压浓缩(-0.09～-0.1mpa)至干：
[0126]
实验11：取上述反应液三分之一，过滤，浓缩至干，加乙腈30ml溶解，放置2-10℃冰箱过夜，结晶析出。过滤，取乙腈20ml洗，结晶置p2o5真空干燥器中干燥，得产物16.2克，收率
98.2％。用工时3个工作日。
[0127]
工序工时浓缩-结晶1个工作日过滤1个工作日真空干燥1个工作日
[0128]
实验12：取上述反应液三分之一，过滤，取40ml dmf洗三次，在搅拌下将滤液滴加到2500ml乙醚中，立即出现白色浑浊.加完后搅拌10min，析出白色固体，静置，过夜倾去上清液，残留物溶于380ml乙醇，滤去不溶物，在搅拌下将溶液滴加到2500ml乙醚中，加完后搅10min，静置过夜,过滤得白色粉末状固体，用无水乙醇重结晶，真空干燥的产物11克，收率66.7％。用工时4个工作日。
[0129]
工序工时过滤-第一次乙醚沉淀-静止过夜1个工作日乙醇溶解-第二次乙醚沉淀-静止过夜1个工作日过滤-重结晶(过夜)1个工作日过滤-真空干燥1个工作日
[0130]
实验13：称取z-pglu-his 14克，溶解于无水dmf中，冷却到-15℃,加入固体cdi，保持-10℃并搅拌30分钟。然后加入3.6克pro-nh2，10℃搅拌1小时，然后自然升温至室温，搅拌5小时。搅拌下将反应溶液倒入2l乙醚中，静置48小时，将上清液倾去，然后加入1.2l无水乙醇并微热至75℃使瓶壁上的残余物溶解，再在充分搅拌下将2l异丙醚缓慢倒入该乙醇溶液中，产生大量白色粉末状固体，室温下持续搅拌2小时，抽滤，用无水乙醚洗白色粉末3次，每次200ml，真空干燥可得产物15.7克，收率95％。用工时5.5个工作日。
[0131]
工序工时搅拌反应5小时1个工作日静置48小时2个工作日无水乙醇并微热至75℃使瓶壁上的残余物溶解-沉淀1个工作日抽滤-洗涤0.5个工作日真空干燥1个工作日
[0132]
对上述各实验过程的实验数据对比，结果如下表所示：
[0133]
[0134][0135]
从上述结果中可以看出，实验11提供的制备工艺相对于实验12收率明显提高。相对于实验13，虽然收率没有明显提高，但是明显简化了生产操作步骤(主要步骤只有一步重结晶，避免了繁琐的2步沉淀法)，缩短了制备周期，且使用的溶剂种类和用量也明显减少(实验11只是使用了300ml dmf和约100ml乙腈，实验13使用了60ml dmf，约2600ml乙醚，约2000ml异丙醚，1.2l无水乙醇。产生总有机废液约5.8l，是实验11的14倍)。实验13采用将无水乙醇加热至75℃进行溶解再异丙醚等长时间搅拌沉淀，乙醇和异丙醚在温度较高的状态下混合，易产生可燃气体，安全隐患极大。由于采用醚类进行沉淀，产生的沉淀物颗粒细，过滤困难，需要较长时间(约2小时)进行抽滤。实验11在此步采用少量有机试剂和安全的结晶工艺，避免了大量的有机废液的产生，有机溶剂加热等危险复杂的操作工艺步骤，且工艺简化，生产周期短，同时保障了质量和收率，适合工业化生产。
[0136]
实施例4氢解z-pglu-his-pro-nh2[0137]
实验14：加入甲醇搅拌，溶解后加入钯炭，在30℃水浴中通h2约24h，用tlc检测至反应完全，过滤，甲醇洗，40℃，-0.09mpa～-0.1mpa减压浓缩至干，以无水乙醚研成粉，得普罗瑞林(trh)中间体。冻干：在洁净环境中，加注射用水溶解中间体，浓度为10％～12％，溶液用0.22μm滤膜过滤，进行冷冻干燥，预冻温度≤—35℃，干燥温度30℃～40℃，真空度≤30pa，保温时间6-8小时，冻干后得普罗瑞林冻干制品。
[0138]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。