数个异二聚体及其数个使用方法

数个异二聚体及其数个使用方法1.相关申请2.本技术主张2019年7月11日提交的美国专利申请案第62/872741号的优先权，其全部内容通过引用并入本文。3.序列表声明4.所述ascii文件(名称为82913sequencelist.txt)创建于2020年7月7日，包含347293字节，与本技术同时提交，通过引用并入本文。
背景技术：
：：5.在本发明的一些实施例中，本发明涉及数个异二聚体及其数个使用方法。6.双信号蛋白(dualsignalingproteins，dsp)，也称为信号转换蛋白(signal-converting-proteins，scp)，是将一i型膜蛋白的一细胞外部分(细胞外氨基末端)连接到一ii型膜蛋白的一细胞外部分(细胞外羧基末端)的双功能融合蛋白(functionalfusionproteins)，形成具有两个活性侧的一融合蛋白(多肽链)(参见例如美国专利第7569663号及第8039437号)。本领域已经公开了几种这样的dsp，包括例如pd1-4-1bbl及sirpα-4-1bbl(参见例如国际专利申请公开号wo2018/127919及wo2018/127917)。通过与其天然的相应数个配体或数个受体结合，dsp可具有靶向性及/或功能性，以具体取决于其组成而影响例如数个细胞的一信号级联、生长、存活及活性。因此，例如可以设计一dsp，使得一臂用于选择性靶向一肿瘤部位或肿瘤微环境，而另一臂用作一免疫调节剂。这种独特的dsp成分，如pd1-4-1bbl及sirpα-4-1bbl，可以促进一肿瘤部位处的适应性免疫的靶向激活。所述平台技术适用于大多数检查点标靶，在保持一良好的风险/收益比的同时，有可能提高疗效。技术实现要素：7.根据本发明的一些实施例的一方面，提供了一种异二聚体，所述异二聚体包含一二聚化部分，所述二聚化部分连接到至少一i型膜蛋白的至少一胺基酸序列并且连接到至少一ii型膜蛋白的至少一胺基酸序列，所述i型膜蛋白能够至少结合所述至少一i型膜蛋白的一天然配体或受体，所述ii型膜蛋白能够至少结合所述至少一ii型膜蛋白的一天然配体或受体。8.根据本发明的一些实施例，所述二聚化部分是一蛋白质性部分。9.根据本发明的一些实施例，所述异二聚体的所述数个单体并非共价地连接。10.根据本发明的一些实施例，所述二聚化部分是一抗体的一fc结构域或其一片段。11.根据本发明的一些实施例，至少一i型膜蛋白选自pd1、sirpα、lag3、btn3a1、cd27、cd80、cd86、eng、nlgn4x、cd84、tigit、cd40、il-8、il-10、cd164、ly6g6f、cd28、ctla4、btla、lilrb1、lilrb2、tyrobp、icos、vegfa、csf1、csf1r、vegfb、bmp2、bmp3、gdnf、pdgfc、pdgfd、，raet1e、cd155、cd166、mica、nrg1、hvem、dr3、tek、tgfb1、ly96、cd96、kit、cd244、gfer及siglec所组成的群组。12.根据本发明的一些实施例，所述至少一i型膜蛋白选自pd1、sirpα、lag3、btn3a1、cd27、cd80、cd86、eng、nlgn4x、cd84、tigit、cd40、il-8、il-10、cd164、ly6g6f、cd28、ctla4、btla、lilrb1、lilrb2、tyrobp、icos、vegfa、csf1、csf1r、vegfb、bmp2、bmp3、gdnf、pdgfc、pdgfd、raet1e、cd155、cd166、mica、nrg1、hvem、dr3、tek、tgfb1、ly96、cd96、kit、cd244及gfer所组成的群组。13.根据本发明的一些实施例，所述至少一i型膜蛋白选自pd1、sirpα、lag3、tigit、lilrb1/2、csf1、csf1r及tgfb1所组成的群组。14.根据本发明的一些实施例，所述至少一i型膜蛋白选自pd1、sirpα、tigit、lilrb2及siglec所组成的群组。15.根据本发明的一些实施例，所述至少一i型膜蛋白选自pd1及sirpα所组成的群组。16.根据本发明的一些实施例，所述至少一ii型膜蛋白选自4-1bbl、fasl、trail、tnf-α、tnf-β、ox40l、cd40l、cd27l、cd30l、rankl、tweak、april、baff、light、vegi、gitrl、edal/2、淋巴毒素α及淋巴毒素β所组成的群组。17.根据本发明的一些实施例，所述至少一ii型膜蛋白选自4-1bbl、ox40l、cd40l、light及gitrl所组成的群组。18.根据本发明的一些实施例，所述至少一ii型膜蛋白选自4-1bbl及cd40l所组成的群组。19.根据本发明的一些实施例，所述至少一ii型膜蛋白是4-1bbl。20.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白及所述ii型膜蛋白中的至少一者是一免疫调节剂。21.根据本发明的一些实施例，所述异二聚体包含一第一单体，所述第一单体包含至少一i型膜蛋白的至少一胺基酸序列及至少一ii型膜蛋白的至少一胺基酸序列。22.根据本发明的一些实施例，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含至少一ii型膜蛋白的至少一胺基酸序列，所述第二单体包含至少一i型膜蛋白的至少一胺基酸序列。23.根据本发明的一些实施例，所述至少一i型膜蛋白的至少一胺基酸序列包含所述至少一i型膜蛋白的至少两种胺基酸序列；以及所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含所述至少一i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列及所述至少一ii型膜蛋白的至少一胺基酸序列，所述第二单体包含至少一i型膜蛋白的所述至少两个胺基酸序列中的至少一者。24.根据本发明的一些实施例，所述第一单体的所述至少一i型膜蛋白的所述至少两个胺基酸序列中的所述至少一者与所述第二单体的所述i型膜蛋白的所述至少两个胺基酸序列中的所述至少一者是相同的。25.根据本发明的一些实施例，所述第一单体的所述至少一i型膜蛋白的所述至少两个胺基酸序列中的所述至少一者与所述第二单体的所述至少一i型膜蛋白的所述至少两个胺基酸序列中的所述至少一者是不同的。26.根据本发明的一些实施例，所述至少一i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列；以及所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述至少两个i型膜蛋白的所述至少两个胺基酸序列中的至少一者及所述至少一ii型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列，所述第二单体包含所述至少两个i型膜蛋白的所述至少两个胺基酸序列中的至少一者。27.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含所述i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述i型膜蛋白为pd1，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述pd1的所述至少两个胺基酸序列中的至少一者及所述4-1bbl的所述至少一胺基酸序列，所述第二单体包含所述pd1的所述至少两个胺基酸序列中的至少一者。28.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含所述i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述i型膜蛋白为lilrb2，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述lilrb2的所述至少两个胺基酸序列中的至少一者及所述4-1bbl的所述至少一胺基酸序列，所述第二单体包含所述lilrb2的所述至少两个胺基酸序列中的至少一者。29.根据本发明的一些实施例，述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含所述i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述i型膜蛋白为lilrb2，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述lilrb2的所述至少两个胺基酸序列中的至少一者及所述cd40l的所述至少一胺基酸序列，所述第二单体包含所述lilrb2的所述至少两个胺基酸序列中的至少一者。30.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含pd1及sirpα，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述sirpα的所述胺基酸序列及所述4-1bbl的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述pd1的所述胺基酸序列。31.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含pd1及sirpα，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述sirpα的所述胺基酸序列及所述cd40l的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述pd1的所述胺基酸序列。32.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含lilrb2及sirpα，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述sirpα的所述胺基酸序列及所述4-1bbl的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述lilrb2的所述胺基酸序列。33.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含lilrb2及sirpα，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述sirpα的所述胺基酸序列及所述cd40l的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述lilrb2的所述胺基酸序列。34.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含lilrb2及pd1，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述pd1的所述胺基酸序列及所述4-1bbl的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述lilrb2的所述胺基酸序列。35.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含lilrb2及pd1，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述pd1的所述胺基酸序列及所述cd40l的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述lilrb2的所述胺基酸序列。36.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含siglec及pd1，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述pd1的所述胺基酸序列及所述4-1bbl的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述siglec的所述胺基酸序列。37.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含siglec及pd1，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述pd1的所述胺基酸序列及所述cd40l的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述siglec的所述胺基酸序列。38.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含tigit及pd1，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述pd1的所述胺基酸序列及所述4-1bbl的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述tigit的所述胺基酸序列。39.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含tigit及pd1，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述pd1的所述胺基酸序列及所述cd40l的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述tigit的所述胺基酸序列。40.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含tigit及pd1，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述tigit的所述胺基酸序列及所述4-1bbl的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述pd1的所述胺基酸序列。41.根据本发明的一些实施例，所述i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列包含至少两个i型膜蛋白的至少两个胺基酸序列，所述至少两个i型膜蛋白包含tigit及pd1，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体以及一第二单体，所述第一单体包含所述tigit的所述胺基酸序列及所述cd40l的所述胺基酸序列，所述第二单体包含所述pd1的所述胺基酸序列。42.根据本发明的一些实施例，所述siglec为siglec10。43.根据本发明的一些实施例，所述至少一i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列连接到所述蛋白质性二聚化部分的一n-末端，所述至少一ii型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列连接到所述蛋白质性二聚化部分的一c-末端。44.根据本发明一些实施例的一方面，提供了一种核酸构建体或系统，所述核酸构建体或系统包含至少一多核苷酸以及一调节元件，所述至少一多核苷酸编码至少一异二聚体，所述调节元件用于指导在一宿主细胞中的所述多核苷酸的表达。45.根据本发明一些实施例的一方面，提供了一种宿主细胞，包含所述异二聚体或所述核酸构建体或系统。46.根据本发明的一些实施例的一方面，提供了一种产生一异二聚体的方法，所述方法包括以下步骤:在一宿主细胞中表达一核酸构建体或系统，所述核酸构建体或系统编码所述异二聚体。47.根据本发明的一些实施例，所述方法包括将所述二聚化部分添加到所述至少一i型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列及所述至少一ii型膜蛋白的所述至少一胺基酸序列中。48.根据本发明的一些实施例，所述方法包括以下步骤:分离所述异二聚体。49.根据本发明的一些实施例的一方面，提供了一种治疗可受益于所述异二聚体治疗的一疾病的方法，所述方法包括以下步骤:向有需要的一受试者施用所述异二聚体、编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一宿主细胞，从而治疗所述受试者的所述疾病。50.根据本发明的一些实施例的一方面，提供了一种治疗可以受益于调节数个免疫细胞的一疾病的方法，所述方法包括以下步骤:向有需要的一受试者施用所述异二聚体、编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一宿主细胞，从而治疗所述受试者的所述疾病。51.根据本发明的一些实施例，所述方法还包括以下步骤:向所述受试者施用用于治疗所述疾病的一治疗剂。52.根据本发明一些实施例的一方面，提供了所述异二聚体、编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一细胞的用途，用于治疗可受益于所述异二聚体治疗的一疾病。53.根据本发明的一些实施例的一方面，提供了所述异二聚体、编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一细胞的用途，用于治疗可受益于调节数个免疫细胞的一疾病。54.根据本发明的一些实施例，所述组合物还包含用于治疗所述疾病的一治疗剂。55.根据本发明的一些实施例，用于治疗所述疾病的所述治疗剂包括一抗体。56.根据本发明的一些实施例，所述疾病细胞表达所述i型膜蛋白的一配体或一受体。57.根据本发明的一些实施例，所述疾病细胞表达所述ii型膜蛋白的一配体或一受体。58.根据本发明的一些实施例，所述疾病是癌症。59.根据本发明的一些实施例，所述癌症选自淋巴瘤、白血病及恶性肿瘤所组成的群组。60.根据本发明的一些实施例的一方面，提供了一种调节数个免疫细胞的活性的方法，所述方法包括以下步骤:在存在异二聚体、编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一宿主细胞的情况下体外激活数个免疫细胞。61.根据本发明的一些实施例，所述活化步骤是在表达所述i型膜蛋白或所述ii型膜蛋白的一配体或一受体的数个细胞存在或在所述i型膜蛋白或所述ii型膜蛋白的外源配体或一受体存在下进行的。62.根据本发明的一些实施例，所述调节步骤是激活的。63.根据本发明的一些实施例，所述调节步骤是抑制的。64.根据本发明的一些实施例，所述免疫细胞包含数个t细胞。65.除非另有定义，否则本文使用的所有技术及/或科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文所述的方法及材料相似或等效的方法及材料可以用于本发明的实施例的实践或测试，但示例性方法及/或材料在下文描述。如有冲突，以专利说明书(包括定义)为准。此外，这些材料、方法及范例仅是说明性的，并不意味着必然是限制性的。附图说明66.本文仅以范例的方式，参考附图描述本发明的一些实施例。现在具体参考附图，需要强调的是，所示的细节是作为范例并用于数个本发明实施例的说明性讨论。在这方面，通过所附图式进行的描述使本领域技术人员清楚地知道如何实施本发明的数个实施例。67.在所述数个图式中：68.图1是一异二聚体可能排列/构象的数个非限制性范例的一示意图。69.图2显示出pd1-sc3x4-1bbl(4-1bbl胞外结构域的3个重复)异二聚体的数个示意图，在本文中称为“dsp305”(seqidno:79及81)及“dsp305_v1”(seqidno:79及83)。70.图3a至图3h展示出所述pd1-sc3x4-1bbl异二聚体dsp305(seqidno:79及81)及dsp305_v1(seqidno:79及83)的所述预测3d结构。图3a是一示意性3d模型，图3b是dsp305的一完整原子3d模型(seqidno:79及81)。pd1序列(用于“杵(knob)”及“臼(hole)”)在深灰色色带显示屏(右侧)中显示。“杵”序列的higg4在图3a的中间以白色带表示。higg4的“臼”序列在图3a的中间用灰色带表示。4-1bb-l用深灰色缎带表示(左侧)。在pd1、higg4及4-1bbl的结构元素之间，用灰色及白色的带状物表示“间隔物(spacer)”/“连接体(linker)”段。higg4fc结构域(稳定复合物)的所述数个铰链半胱氨酸残基(hingecysteineresidues)用cpk表示。图3c是一示意性3d模型，图3d是dsp305(seqidno:79及81)在其配体(pdl1及4-1bb)存在下的一全原子3d模型。不同的域由不同的色带表示，如图3a所示。此外，绑定到pd1的pdl1以灰色带状(右侧)表示，三个4-1bb域以灰色带状与4-1bbl(左侧)复合表示。图3e是示意图3d模型，图3f是dsp305_v1的完整原子3d模型(seqidno:79及83)。不同的域由不同的色带表示，如图3a所示。图3g是示意性3d模型，图3h是dsp305_v1(seqidno:79及83)在配体(pdl1及4-1bb)存在下的一全原子3d模型。不同的域由不同的色带表示，如图3a所示。此外，绑定到pd1的pdl1以灰色带状(右侧)表示，三个4-1bb域以灰色带状与4-1bbl(左侧)复合表示。71.图4是在还原及/或非还原条件下分离的dsp305及dsp305_v1的sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分析照片。图中所示的样品为粗(crude)(非纯化)或蛋白质-一种经过五天纯化的上清液。上清液来自转染了编码异二聚体的质粒的expi293f细胞，如图所示。对照sup为五天的未转染expi293f细胞上清液。72.图5显示出pd1-sirpα-sc3x4-1bbl异二聚体的数个示意图，在本文中称为“tsp111”(seqidno:85及81)、“tsp111_v1”(seqidno:89及91)及“tsp111_v2”(seqidno:85及83)。73.图6a至图6d展示出所述预测的pd1-sirpα-sc3x4-1bbl异二聚体tsp111的3d结构(seqidno:85及81)。图6a是一示意性3d模型，图6b是tsp111的一完整原子3d模型(seqidno:85及81)。pd1(在“杵”链中)显示在深灰色带状显示屏(右下侧)中。sirpa(在“臼(hole)”链中)用深灰色的缎带显示屏(右上侧)表示。“杵”序列的higg4在图中部显示为白色带。‘臼(hole)’序列的higg4在图中部显示为灰色带。4-1bbl用深灰色缎带表示(左侧)。在pd1、higg4及4-1bbl的结构元素之间，用灰色及白色的带状物表示“间隔物”/“连接体”段。higg4fc结构域(稳定复合物)的铰链半胱氨酸残基用cpk表示。图6c是一示意性3d模型，图6d是tsp111(seqidno:85及81)在其数个配体(cd47、pdl1及4-1bb)存在下的一全原子3d模型。不同的域由不同的色带表示，如图6a所示。此外，与pd1结合的pdl1用灰色条带(右下侧)表示，cd47(sirpa受体)用灰色条带(右上侧)表示，三个4-1bb受体用灰色条带与4-1bbl(左侧)复合表示。74.图7是在还原及/或非还原条件下分离的tsp111、tsp111_v1及tsp111_v2的sds-page分析照片。图中所示的样品为粗(非纯化)或蛋白质-一种经过五天纯化的上清液。上清液来自转染了编码异二聚体的质粒的expi293f细胞，如图所示。对照sup为五天的未转染expi293f细胞上清液。75.图8a至图8d证明pd1-sc3x4-1bbl异二聚体dsp305(seqidno:79及81)与其在细胞表面表达的配体结合。图8a显示出流式细胞术分析直方图，显示了dld1-pdl1细胞系上pdl1受体的表达。通过用抗pdl1抗体对dld1wt及pdl1过度表达细胞系(dld1-pdl1)进行免疫染色，然后进行流式细胞术分析，以确定pdl1的表面表达水平。gmfi值由facs检测及flowjo软件分析确定。图8b显示出流式细胞术分析直方图，显示了4-1bb受体在ht1080-4-1bb细胞系上的表达。4-1bb的表面表达水平通过使用抗4-1bb抗体对ht1080wt及4-1bb过表达细胞系进行免疫染色，然后进行流式细胞术分析来确定。gmfi值被显示出。图8c显示出流式细胞术分析，显示了dsp305(seqidno:79及81)与dld1wt及pdl1过度表达细胞系的结合。异二聚体与配体表达细胞系的结合通过使用抗-4-1bbl抗体对其4-1bbl结构域进行免疫染色来确定，随后将细胞与所示异二聚体培育，然后进行流式细胞术分析。gmfi值被显示出，并使用一graphpadprism软件来创建一结合曲线图(bindingcurvegraph)。图8d显示出流式细胞术分析，表示dsp305与ht1080wt及4-1bb过表达细胞系结合。异二聚体与细胞系的结合通过使用抗pd1抗体对其pd1结构域进行免疫染色来确定，随后将细胞与所示异二聚体培育，然后进行流式细胞术分析。gmfi值被显示出，并使用graphpadprism软件来创建一结合曲线图。76.图9a至图9d显示出所述pd1-sirpα-sc3x4-1bbl异二聚体tsp111与其在细胞表面表达的配体的结合。图9a显示出流式细胞术分析，表示tsp111与dld1wt及pdl1过度表达细胞系的结合。异二聚体与配体表达细胞系的结合通过使用抗-4-1bbl抗体对其4-1bbl结构域进行免疫染色来确定，随后将细胞与所示异二聚体培育，然后进行流式细胞术分析。gmfi值被显示出，并使用一graphpadprism软件来创建一结合曲线图。图9b显示出流式细胞术idno:138及85)。lilrb2(在“杵”链中)用深灰色缎带显示屏(右下侧)表示。sirpα(在“臼”链中)在深灰色色带显示屏(右上侧)中显示。“杵”序列的higg4在图中部显示为白色带。‘臼’序列的higg4在图中部显示为灰色带。4-1bbl用深灰色缎带表示(左侧)。在lilrb2、sirpα、higg4及4-1bbl的所述数个结构元件之间，用灰色及白色的带状物表示“间隔物”/“连接体”片段。higg4fc结构域(稳定复合物)的所述铰链半胱氨酸残基用cpk表示。83.图14a是lilrb2-sirpα-sc3xd40l异二聚体的一示意图，本文称为“tsp217”(seqidno:138及146)。84.图14b至图14c展示出pd1-sirpα-sc3xd40l异二聚体tsp217的所述预测3d结构(seqidno:138及146)。图14b是一示意性3d模型，图14c是tsp217的一全原子3d模型(seqidno:138及146)。lilrb2(在“杵”链中)用深灰色缎带显示屏(右下侧)表示。sirpα(在“臼”链中)在深灰色色带显示屏(右上侧)中显示。“杵”序列的higg4在图中部显示为白色带。‘臼’序列的higg4在图中部显示为灰色带。cd40l用深灰色缎带表示(左侧)。在lilrb2、sirpα、higg4及cd40l的结构元素之间，用灰色及白色的带状物表示“间隔物”/“连接体”片段。higg4fc结构域(稳定复合物)的所述铰链半胱氨酸残基用cpk表示。85.图15a是siglec10-pd1-sc3x4-1bbl异二聚体的一示意图，在本文中称为“tsp401”(seqidno:150及79)。86.图15b至图15c展示出siglec10-pd1-sc3x4-1bbl异二聚体“tsp401”(seqidno:150及79)的所述预测3d结构。图15b是一示意性3d模型，图15c是tsp401的一全原子3d模型(seqidno:150及79)。siglec10序列(在“杵”链中)在深灰色带状显示屏(右下方)中显示。pd1(在“臼”链中)以深灰色色带显示(右上侧)。“杵”序列的higg4在图中部显示为白色带。‘臼’序列的higg4在图中部显示为灰色带。4-1bb-l用深灰色缎带表示(左侧)。在siglec10、pd1、higg4及4-1bbl的所述数个结构元件之间，用灰色及白色的带状物表示“间隔物”/“连接体”片段。higg4fc结构域(稳定复合物)的所述铰链半胱氨酸残基用cpk表示。87.图16a是tigit-pd1-sc3x4-1bbl异二聚体的一示意图，在本文中称为“tsp501”(seqidno:152及79)。88.图16b至图16c展示出tigit-pd1-sc3x4-1bbl异二聚体“tsp501”(seqidno:152及79)的所述预测3d结构。图16b是一示意性3d模型，图16c是tsp501的一全原子3d模型(seqidno:152及79)。tigit序列(在“杵”链中)在深灰色带状显示屏(右下侧)中显示。pd1(在“臼”链中)以深灰色色带显示(右上侧)。“杵”序列的higg4在图中部显示为白色带。‘臼’序列的higg4在图中部显示为灰色带。4-1bb-l用深灰色缎带表示(左侧)。在tigit、pd1、higg4及4-1bbl的所述数个结构元件之间，用灰色及白色的带状物表示“间隔物”/“连接体”片段。higg4fc结构域(稳定复合物)的所述铰链半胱氨酸残基用cpk表示。89.图17是在还原或非还原条件下分离的tsp215、tsp215_v1、tsp214及tsp214_v1的sds-page分析照片。图中所示样品为粗(非纯化)-五天上清液。上清液来自转染了编码所示异二聚体的质粒的expi293f细胞。对照sup为五天的未转染expi293f细胞上清液。90.图18a至图18b显示出在还原(r)或非还原(nr)条件下分离的tsp112、tsp217、dsp218、tsp221、tsp222、tsp401、tsp403、tsp501及tsp503的sds-page分析照片。图中所示的样品为粗(非纯化，图18a)或蛋白质-a纯化(图18b)-五天上清液。上清液来自转染了编码所示异二聚体的质粒的expi293f细胞。对照sup为五天的未转染expi293f细胞上清液。91.图19a至图19c是tsp111蛋白印迹分析的照片。图中显示的样品为粗(非纯化)-五天上清液。上清液来自转染了编码异二聚体的质粒的expi293f细胞，如图所示。对照sup为五天的未转染expi293f细胞上清液。在非还原(nr)或还原(r)条件下，在sds-page上分离上清液，然后用抗pd1(图19a)、抗sirpα(图19b)或抗4-1bbl(图19c)抗体进行免疫印迹。92.图20a至图20c为tsp112、tsp401、tsp501及tsp221的蛋白质印迹分析照片。图中显示的样品为粗(非纯化)-五天上清液。上清液来自转染了编码所示异二聚体的质粒的expi293f细胞。在非还原(nr)或还原(r)条件下，在sds-page上分离含有约50ng异二聚体蛋白质的上清液样品，然后用抗pd1(图20a)、抗sirpα(图20b)及抗4-1bbl(图20c)抗体进行免疫印迹。93.图21a至图21c是tsp215、tsp215_v1、tsp214、tsp214_v1、tsp217及dsp218的蛋白质印迹分析照片。图中显示的样品为粗(非纯化)-五天上清液。上清液来自转染了编码所示异二聚体的质粒的expi293f细胞。对照sup为五天的未转染expi293f细胞上清液。在非还原(nr)或还原(r)条件下，在sds-page上分离含有约50ng异二聚体蛋白质的上清液样品，然后用抗-4-1bbl(图21a)、抗sirpα(图21b)及抗lilrb2(图21c)抗体进行免疫印迹。94.图22a至图22b显示出与dld1-wt阴性对照细胞系相比，tsp401(图22a)及tsp501(图22b)异二聚体的pd1臂与dld1-pdl1过度表达细胞系表面表达的配体pdl1的结合。结合通过使用抗-4-1bbl抗体对4-1bbl结构域进行免疫染色来确定，随后将细胞与指示的异二聚体培育，然后进行流式细胞术分析。95.图23显示出tsp401及tsp501与ht1080wt及4-1bb过表达细胞系的结合。所述数个异二聚体蛋白与所述数个细胞系的结合在所述数个细胞与所述异二聚体培育后通过使用抗pd1抗体对其pd1结构域进行免疫染色，然后进行流式细胞术分析来确定。96.图24显示出tsp214与ht1080过度表达的4-1bb细胞系的结合。所述数个异二聚体与受体表达细胞系的结合在所述数个细胞与所述异二聚体培育后，通过使用抗lilrb2抗体对其lilrb2结构域进行免疫染色，然后进行流式细胞术分析来确定。用抗-4-1bb阻断抗体所述数个细胞的培育，消除了tsp214与所述数个细胞的结合，显示出特异性。97.图25显示出tsp215与ht1080过度表达的4-1bb细胞系的结合。所述数个异二聚体与4-1bb及cd47表达细胞系的结合在所述数个细胞与所述异二聚体培育后通过使用抗lilrb2抗体对其lilrb2结构域进行免疫染色，然后进行流式细胞术分析来确定。对于特异性测试，在不存在或存在抗cd47阻断抗体、抗4-1bb阻断抗体或两种阻断抗体的组合的情况下来确定结合步又。98.图26a至图26b显示出pd1-sirpα-sc3xd40异二聚体tsp112与所述数个细胞表面表达的cd40的结合。图26a是一柱状图，显示出ht1080-cd40过度表达细胞系上cd40受体的表达，使用抗cd40抗体测定，然后进行流式细胞术分析。图26b显示出tsp112与ht1080过度表达的cd40细胞的结合。通过使用抗pd1抗体对其pd1结构域进行免疫染色，然后通过流式细胞术分析，在所述数个细胞与所述异二聚体培育后，确定了所述异二聚体与cd40表达细胞系的结合。99.图27a至图27c显示出pd1-tigit-sc3x4-1bbl异二聚体tsp501与所述数个细胞表面表达的cd155(pvr)的结合。图26a至图26b显示出数个直方图，表示了内源性cd155在dld1-wt细胞上的表达，而在u937细胞上没有表达，这是使用抗cd155抗体确定的，随后进行流式细胞术分析。图27c显示出tsp501与dld1-wt表达细胞结合，而与u937细胞无结合。通过使用抗-4-1bbl抗体对其4-1bbl结构域进行免疫染色，然后通过流式细胞术分析，在所述数个细胞与所述异二聚体培育后来确定结合。100.图28a至图28c显示出dsp214及tsp215异二聚体与各自对应物的同时结合。图28a至图28b显示出dsp214(图28a)及tsp215(图28b)与hla-g及41bb的结合。图28c显示出dsp215与cd47及41bb的结合。将含有异二聚体tsp214或对照上清液(图28a)或纯化的tsp215异二聚体(图28b至图28c)的上清液培养在hla-g、cd47或bsa预涂覆的96孔板中。通过与41bb生物素培育检测结合，然后根据标准elisa协议，使用板读取器在450nm处检测链霉亲和素hrp及tmb底物，参考波长为620nm。101.图29a至图29b显示出异二聚体tsp401及tsp501激活41bb介导的信号转导。图29a显示出在含有tsp401的上清液存在下，在pdl1及cd24涂层板中培养的ht10804-1bb细胞的il8分泌。图29b显示出在含有tsp501的上清液存在下，在pdl1及cd155(pvr)涂层板中培养的ht10804-1bb细胞分泌的il-8。102.图30a至图30b显示出异二聚体tsp112、tsp217及dsp218对cd40介导的信号转导的激活。图30a显示出在含有tsp112的上清液存在下，在pdl1及cd47涂层板中培养的ht1080cd40细胞的il8分泌。图30b显示出在含有tsp217或dsp218的上清液存在的情况下，在hla-g及cd47涂层板中培养的ht1080cd40细胞分泌的il8。103.图31显示出异二聚体tsp215激活41bb介导的信号转导。cho-k1-cd47与ht1080-41bb细胞在含有tsp215的上清液的连续稀释液中共同培养。104.图32显示出本发明的一些实施例所设想的异二聚体的组成及排列的数个示意图。具体实施方式105.在本发明的一些实施例中，本发明涉及数个异二聚体及其数个使用方法。106.在详细解释本发明的至少一实施例之前，应当理解，本发明的应用不一定局限于以下描述中阐述的细节或由所述数个范例所示例性示出的细节。本发明能够以各种方式实施或实现其他数个实施例。107.双信号蛋白(dualsignalingproteins，dsp)，也称为信号转换蛋白(signal-converting-proteins，scp)，是将一i型膜蛋白的一细胞外部分(细胞外氨基末端)连接到一ii型膜蛋白的一细胞外部分(细胞外羧基末端)的双功能融合蛋白，形成具有两个活性侧的一融合蛋白。108.在将本发明简化为实践的同时，本发明人现在已经生成了数个异二聚体，所述数个异二聚体包含一i型膜蛋白的一细胞外部分及一ii型膜蛋白的一细胞外部分。109.因此，根据本发明的一方面，本发明提供了一种异二聚体，所述异二聚体包含一二聚化部分，所述二聚化部分连接到至少一i型膜蛋白的至少一胺基酸序列并且连接到至少一ii型膜蛋白的至少一胺基酸序列，所述i型膜蛋白能够至少结合所述至少一i型膜蛋白的一天然配体或受体，所述ii型膜蛋白能够至少结合所述至少一ii型膜蛋白的一天然配体或受体。110.如本文所用，术语“异二聚体”(heterodimer)指由两种不同蛋白质(本文称为单体)人工附着形成的一非天然二聚体蛋白质。111.根据数个特定实施例，所述异二聚体的所述数个单体并非共价地连接。112.根据数个其他特定实施例，所述异二聚体的所述数个单体共价地连接。113.根据数个其他特定实施例，所述异二聚体的所述数个单体通过一二硫键连接。114.根据数个数个特定实施例，所述异二聚体的所述数个单体通过一二硫键连接。115.如本文所用，术语“二聚化部分”(dimerizingmoiety)指一部分(moiety)，所述部分能够连接两种不同单体以形成一异二聚体。此类二聚化部分为本领域所知，包括化学部分及蛋白质性部分(chemicalandproteinaceousmoieties)。116.所述二聚化部分连接到至少一i型膜蛋白的至少一胺基酸序列及至少一ii型膜蛋白的至少一胺基酸序列。117.根据数个数个特定实施例，所述二聚化部分直接连接到所述i型膜蛋白及/或所述ii型膜蛋白的胺基酸序列。118.根据数个特定实施例，所述二聚化部分并非直接连接到所述i型膜蛋白及/或所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列。119.根据数个特定实施例，所述二聚化部分共价地连接到所述i型膜蛋白及/或所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列。120.根据数个特定实施例，所述二聚化部分并非共价地连接到所述i型膜蛋白及/或所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列。121.根据数个特定实施例，所述二聚化部分与所述i型膜蛋白及/或所述ii型膜蛋白异源。122.根据数个特定实施例，所述二聚化部分是至少两种不同分子的一组合物。123.根据数个特定实施例，所述二聚化部分是一非蛋白质性部分(non-proteinaceousmoiety)，例如一交联剂、一有机聚合物、一合成聚合物、一小分子等。124.本领域已知许多这样的非蛋白质性部分，并且可以从例如santacruz、sigma-aldrich、proteochem等商业上获得。根据数个特定实施例，所述非蛋白质性部分是一异源双功能交联剂。数个异双功能交联剂有两个不同的反应端。一般而言，在第一步骤中，用所述杂双功能试剂的一反应基团来修饰一单体；去除所述剩余的游离试剂。在第二步骤中，将所述修饰的单体与一第二单体混合，然后使其与所述试剂的所述另一端的所述修饰的基团进行反应。最广泛使用的通过胺及巯基(amineandsulfhydrylgroups)偶联蛋白质(最不稳定的胺反应性nhs酯首先偶联，去除未偶联试剂后，与巯基进行偶联)。所述数个巯基反应基团通常为马来酰亚胺(maleimides)、吡啶基二硫化物(pyridyldisulfides)及α-卤代乙酰(alpha-halocetyls)。其他交联剂包括数个碳二亚胺(carbodiimides)，其连接在羧基(-cooh)及伯胺(-nh2)之间。另一种方法是将一单体的所述数个赖氨酸残基(lysineresidues)修饰为数个硫醇(thiols)，并通过添加马来酰亚胺基团(maleimidegroups)然后在所述数个单体之间形成数个稳定的硫酯键(thioesterbonds)来修饰第二单体。如果其中一单体含有数个天然硫醇，这些基团可以直接与连接到另一单体的马来酰亚胺反应。还存在具有一荧光活性端的数个杂双官能团交联剂(heterobifunationalcross-linkers)，例如基于双[2-(4-迭氮水杨酸酰氨基)乙基)]二硫化物(bis[2-(4-azidosalicylamido)ethyl)]disulfide，based)。当没有特定基团可用于反应时，使用光活性基团(photoreactivegroups)，这是因为光活性基团在暴露于紫外光时会发生非特异性反应。此类异双功能交联剂的数个非限制性实例包括但不限于：炔-peg4-马来酰亚胺(alkyne-peg4-maleimide)、炔-peg5-n-羟基琥珀酰亚胺酯(alkyne-peg5-n-hydroxysuccinimidylester)、马来酰亚胺-peg琥珀酰亚胺酯(maleimide-peg-succinimidylester)、迭氮-peg4-苯氧二唑甲基砜(azido-peg4-phenyloxadiazolemethylsulfone)、lc-smcc(琥珀酰亚胺-4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧基-(6-氨基丙酸))(lc-smcc(succinimidyl-4-(n-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxy-(6-amidocaproate)))，mpbh(4-(4-马来酰亚胺苯基)丁酸酰肼盐酸盐+1/2二氧六环)(mpbh(4-(4-n-maleimidophenyl)butyricacidhydrazidehydrochloride+1/2dioxane))、pdph(3-(2-吡啶基二硫代)丙酰肼)(pdph(3-(2-pyridyldithio)propionylhydrazide))、siab(n-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯)(siab(n-succinimidyl(4-iodoacetyl)aminobenzoate))、smph(琥珀酰亚胺基-6-((b-马来酰亚胺丙酰胺基)己酸)(smph(succinimidyl-6-((b-maleimidopropionamido)hexanoate))、磺基kmus(n-(κ-马来酰亚胺二甲酰氧基)磺基琥珀酰亚胺酯)(sulfo-kmus(n-(κ-maleimidoundecanoyloxy)sulfosuccinimideester))、磺基siab(磺基琥珀酰亚胺(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯)(sulfo-siab(sulfosuccinimidyl(4-iodoacetyl)aminobenzoate))、3-(马来酰亚胺)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯(3-(maleimido)propionicacidn-hydroxysuccinimideester)、甲氧羰基磺酰氯(methoxycarbonylsulfenylchloride)、炔丙基聚乙二醇酸(propargyl-peg-acid)、氨基聚乙二醇叔丁酯(amino-peg-t-butylester)、bocnh-peg5-酸(bocnh-peg5-acid)、bmph(n-(β-马来酰亚胺丙酸)肼(bmph(n-(β-maleimidopropionicacid)hydrazide)、三氟乙酸盐(trifluoroaceticacidsalt)、anb-nos、bmps、emc、gmb、lc-spdp、mbs、sba、sia、sulfo-sia、，smcc、smpb、smph、spdp、磺基-lc-spdp、磺基-mbs、磺基-sanpah、磺基-smcc。[0125]根据数个其他特定实施例，所述二聚化部分为一蛋白质性部分。[0126]根据数个特定实施例，所述二聚化部分包含亲和对多肽的数个成员，其具有针对两个不同亲和互补标记的两个不同亲和部分。此类亲和力对在本领域中是众所周知的，包括但不限于血凝素(ha)、抗ha、avitagtm、v5、myc、t7、flag、hsv、vsv-g、his、生物素、抗生物素、链霉亲和素、rhizavedin、金属亲和力标记、凝集素亲和力标记。本领域技术人员会知道选择哪个标记。[0127]根据数个特定实施例，所述二聚化部分是一抗体(例如igg、iga、igd或ige)或其一片段的一fc结构域。[0128]根据数个特定实施例，所述二聚化部分是人类igg4的一fc结构域。[0129]根据数个特定实施例，所述二聚化部分是人类igg1的一fc结构域。[0130]根据数个特定实施例，所述二聚化部分为一fc结构域单体。[0131]根据数个其他特定实施例，所述二聚化部分为一fc结构域二聚体。[0132]有许多机制可用于使用一抗体的一fc结构域生成一异二聚体，例如但不限于球形臼(knob-into-hole)或电荷对(chargepairs)(参见gunasekaran等人，j.biol。chem.。285(25)：19637(2010)，通过引用将其全部内容并入本文件)。[0133]因此，根据数个特定实施例，所述fc结构域可包含数个保守及非保守胺基酸取代(本文也称为突变)。[0134]当序列同一性百分比用于蛋白质时，人们认识到不完全相同的残基位置往往因保守的胺基酸取代而不同，胺基酸残基被具有类似化学性质(例如电荷或疏水性)的其他胺基酸残基取代，因此不会改变分子的功能性质。如果数个序列在数个保守取代中不同，则可以向上调整所述序列一致性百分比，以校正所述取代的所述保守性质。通过这种保守取代而不同的数个序列被认为具有“序列相似性”或“相似性”。进行这种调整的方法为本领域技术人员所熟知。通常，这涉及将保守取代作为一部分不匹配而非一完全不匹配(apartialratherthanafullmismatch)进行评分，从而增加所述序列一致性的百分比。因此，例如如果一相同胺基酸的一评分为1，一非保守取代的一评分为0，一保守取代的一评分在0到1之间。数个保守取代的所述评分是根据henikoffs及henikoffjg的算法计算的。[aminoacidsubstitutionmatricesfromproteinblocks.proc.natl.acad.sci.u.s.a.1992,89(22):10915-9]。[0135]下文进一步提供关于保守胺基酸及非保守胺基酸取代的附加说明。[0136]本领域已知一fc域中的这种取代。[0137]可与本发明的数个特定实施例一起使用的一代表性范例是“杵-进入-臼”(“knob-into-hole，kih”)形式。此类杵及臼突变在本领域中是众所周知的，并公开于美国专利号us8216805、shaneatwell等人j.mol.biol.(1997)270,26-35；cateret等人(proteinengineeringvol.9no.7pp.617-621,1996)；anda.margaretmerchantet.al.naturebiotechnology(1998年7月16日)，其内容通过引用完全并入本文。此外，如merchant等人naturebiotech.16:677(1998)所述，这些“杵及臼(knobsandhole)”突变可以与数个二硫键结合，使形成偏向异二聚化(heterodimerization)。[0138]因此，根据数个特定实施例，其中一种单体包含一fc结构域，所述fc结构域包含一杵突变(knobmutation)，而另一单体包含一fc结构域，所述fc结构域包含臼突变(holemutation)。[0139]从特定免疫球蛋白类及亚类中选择一特定免疫球蛋白fc结构域，并选择一第一fc变体用于杵突变，另一者用于臼突变，落入本领域技术人员的所述范围之内。可与数个特定实施例一起使用的数个取代的数个非限制性范例包括s228p、l235e、t366w、y349c、t366s、l368a、y407v及/或e356c(根据欧盟编号)(kabat、e.a.t.t.wu、m.reidmiller、h.m.perry及k.s.gottesman.1987.sequencesofproteinsofimmunologicalinterest.us.dept.ofhealthandhumanservices,bethesda)对应于seqidno:109、110或111中的所述人类igg4胺基酸序列，或l234a、l235a、y349c、t366w、t354c、d356c、t366s，l368a及/或y407v(根据欧盟编号(kabat,e.a.,t.t.wu,m.reid-miller,h.m.perryandk.s.gottesman.1987.sequencesofproteinsofimmunologicalinterest.us.dept.ofhealthandhumanservices,bethesda)与seqidno.12、13或14中的所述人类igg1胺基酸序列相对应。[0140]根据数个特定实施例，所述fc结构域包含选自seqidno:109-114的一胺基酸序列。[0141]根据一数个特定实施例，包含所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列的所述单体包含一杵突变(knobmutation)。[0142]根据一特定实施例，包含所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列的所述单体包含一臼突变(holemutation)。[0143]根据一特定实施例，包含所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列的所述单体包含一杵突变。[0144]根据一特定实施例，包含所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列的所述单体包含一臼突变。[0145]根据一特定实施例，包含所述i型膜蛋白的一胺基酸序列及所述ii型膜蛋白的一胺基酸序列的一单体包含一杵突变。[0146]根据一特定实施例，包含所述i型膜蛋白的一胺基酸序列及所述ii型膜蛋白的一胺基酸序列的一单体包含一臼突变。[0147]根据一特定特定实施例，所述二聚化部分包括一亮氨酸拉链(leucinezipper)或一螺旋(helix-loop-helix)。[0148]一些实施例的所述异二聚体包含至少一i型膜蛋白的至少一胺基酸序列及至少一ii型膜蛋白的至少一胺基酸序列。这种异二聚体可能排列的数个非限制性范例如图1所示。[0149]根据数个特定实施例，从图1的数个图组1至图组13中所示的配置中选择所述异二聚体配置，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0150]根据数个特定实施例，所述数个异二聚体中包含的每一单体包含一i型膜蛋白的一胺基酸序列及/或一ii型膜蛋白的一胺基酸序列。[0151]根据数个特定实施例，所述数个异二聚体中包含的每一单体包含一i型膜蛋白的一胺基酸序列及一ii型膜蛋白的一胺基酸序列。[0152]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含一ii型膜蛋白的一胺基酸序列，所述第二单体包含一i型膜蛋白的一胺基酸序列。[0153]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一第一单体，所述第一单体包含一i型膜蛋白的一胺基酸序列及一ii型膜蛋白的一胺基酸序列。[0154]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含一i型膜蛋白的一胺基酸序列及一ii型膜蛋白的一胺基酸序列，所述第二单体包含一i型膜蛋白的一胺基酸序列。[0155]当两个单体包含一i型膜蛋白的一胺基酸序列时，所述i型膜蛋白胺基酸序列可以相同，可以是相同的i型膜蛋白但一序列不同，或者可以是不同的i型膜蛋白。[0156]因此，根据数个特定实施例，所述第一单体的所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列与所述第二单体的所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列相同。[0157]根据数个其他特定实施例，所述第一单体的所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列与所述第二单体的所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列不同(即不同)。[0158]根据数个特定实施例，所述第一单体的所述i型膜蛋白与所述第二单体的所述i型膜蛋白不同(即不同)。[0159]当两种单体包含一ii型膜蛋白的一胺基酸序列时，所述ii型膜蛋白胺基酸序列可以相同，可以是相同的ii型膜蛋白但一序列不同，或者可以是不同的ii型膜蛋白。[0160]因此，根据数个特定实施例，所述第一单体的所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列与所述第二单体的所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列相同。[0161]根据数个其他特定实施例，所述第一单体的所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列与所述第二单体的所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列不同(即不同)。[0162]根据数个特定实施例，所述第一单体的所述ii型膜蛋白与所述第二单体的所述ii型膜蛋白不同(即不同)。[0163]根据数个特定实施例，当所述二聚化部分是一蛋白质性部分时，所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列连接到所述蛋白质二聚化部分的一n端，所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列连接到所述蛋白质二聚化部分的一c端。[0164]根据数个特定实施例，当所述二聚化部分是一蛋白质性部分时，所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列连接到所述蛋白质二聚化部分的一c端，所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列连接到所述蛋白质二聚化部分的一n端。[0165]根据数个特定实施例，当所述二聚化部分为一蛋白质二聚体部分时，所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列及所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列均连接至所述蛋白质二聚体二聚化部分的c端或n端。[0166]根据数个特定实施例，当所述二聚化部分为一蛋白质二聚体部分时，所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列及所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列均连接至所述蛋白质二聚体二聚化部分的c-末端。[0167]根据数个特定实施例，当所述二聚化部分为一蛋白质二聚体部分时，所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列及所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列均连接至所述蛋白质二聚体二聚化部分的n-末端。[0168]如本文所用，短语“一i型膜蛋白的一胺基酸序列”指i型膜蛋白的一连续胺基酸序列，其至少能够结合所述i型膜蛋白的所述天然配体或受体。[0169]根据数个特定实施例，所述胺基酸序列包含i型膜蛋白的一胞外结构域或其一功能片段。[0170]如本文所用，短语“i型膜蛋白”指具有一n端胞外结构域的一跨膜蛋白。[0171]此类i型膜蛋白的数个非限制性范例包括pd1、sirpα、lag3、btn3a1、cd27、cd80、cd86、eng、nlgn4x、cd84、tigit、cd40、il-8、il-10、cd164、ly6g6f、cd28、ctla4、btla、lilrb1、lilrb2、tyrobp、icos、vegfa、csf1、csf1r、vegfb、bmp2、bmp3、gdnf、pdgfc、pdgfd、raet1e、cd155、cd166、mica、nrg1、nrg1、hvem、dr3、tek、cdb1、tgf96、cd244gfer及siglec。[0172]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自pd1、sirpα、lag3、btn3a1、cd27、cd80、cd86、eng、nlgn4x、cd84、tigit、cd40、il-8、il-10、cd164、ly6g6f、cd28、ctla4、btla、lilrb1、lilrb2、tyrobp、icos、vegffa、csf1、csf1r、vegfb、bmp2、bmp3、gdnf、pdgfc、pdgfd、ra1e、cd155、cd166、mica、nrg1、，hvem、dr3、tek、tgfb1、ly96、cd96、kit、cd244及gfer。[0173]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自由pd1、sirpα、lag3、tigit、lilrb1、lilrb2、csf1、csf1r及tgfb1所组成的群组。[0174]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自由pd1、sirpα、tigit、lilrb2及siglec所组成的群组。[0175]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白是一免疫调节剂。[0176]如本文所用，术语“免疫调节剂”指调节一免疫细胞反应(即激活或功能)的一蛋白质。免疫调节剂可以积极调节免疫细胞的激活或功能，也可以消极调节免疫细胞的激活或功能。此类免疫调节剂为本领域所知，包括一免疫检查点蛋白、一细胞因子等。[0177]根据数个特定实施例，所述免疫调节剂是一免疫激活剂。[0178]根据其他数个特定实施例，所述免疫调节剂为一免疫抑制剂。[0179]数个i型膜蛋白免疫调节剂的数个非限制性范例包括但不限于pd1、sirpα、cd28、csf1r、il-8、il-10、ctla4、icos、cd27、cd80、cd86、siglec10及tigit。根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白包含单一i型膜蛋白。[0180]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白包含至少一i型膜蛋白。[0181]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白包含至少两个i型膜蛋白。[0182]根据数个特定实施例，从图32中示意性地示出的所述数个异二聚体中选择所述异二聚体组合物及排列，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0183]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自由pd1及sirpα所组成的群组。[0184]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白为pd1。[0185]如本文所用，术语“pd1(程序性死亡1(programmeddeath1)，也称为cd279)”指所述pdcd1基因(基因id5133)的所述多肽或一功能同源物，例如其功能片段。根据数个特定实施例，术语“pd1”指pd1多肽的一功能同源物。根据数个特定实施例，pd1是人类pd1。根据数个特定实施例，pd1蛋白质指所述人类蛋白质，如以下genbank编号np_005009中提供的。[0186]到目前为止，已经确定了pd-1的两个配体，pdl1及pdl2(也称为b7-dc)。根据一特定实施例，所述pdl1蛋白质指所述人类蛋白质，例如在以下genbank编号np_001254635及np_054862中提供。根据一特定实施例，所述pdl2蛋白质指所述人类蛋白质，例如在以下genbank编号np_079515中提供。[0187]根据数个特定实施例，pd1胺基酸序列包含seqidno:1。[0188]根据数个特定实施例，pd1胺基酸序列由seqidno:1组成。[0189]在本文中，短语“所述pdcd1基因的所述多肽的一功能同源物”或“所述pdcd1基因的所述多肽的一功能片段”是指所述多肽的一部分、一功能同源物(自然产生或合成/重组产生)及/或包含数个保守及非保守胺基酸取代的一pd1多肽，其至少保持结合pd-l1及/或pd-l2的所述全长pd1的所述活性。[0190]测试结合的数个分析在本领域是众所周知的，包括但不限于流式细胞术、biacore、生物层干涉仪分析、hplc。[0191]根据数个特定实施例，所述pd1将pd-l1与1nm-100μm、10-nm-10μm、100nm-100μm、200nm-10μm的一kd结合，如通过spr分析确定的，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0192]根据数个特定实施例，所述pd1将pdl1与通过spr分析确定的约270nm的一kd结合。[0193]根据数个特定实施例，所述pd1将pdl1与通过spr分析确定的约8μm-9μm的一kd结合。[0194]根据数个特定实施例，所述pd1包含所述pd1的一胞外结构域或其依功能片段。[0195]根据数个特定实施例，所述pd1胺基酸序列包含seqidno:5、6或7。[0196]根据数个特定实施例，所述pd1胺基酸序列由seqidno:5、6或7组成。[0197]术语“pd1”还包括具有所需活性(即结合pd-l1及/或pd-l2)的功能同源物(自然产生或合成/重组产生)。例如，此类同源物可以是至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于所述多肽seqidno:1、5、6或7；或至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，至少99％或100％相同于编码相同的所述多核苷酸序列(如下文所述)。[0198]如本文所用，“同一性”或“序列同一性”指全域同一性，即，本文所公开的整个胺基酸或核酸序列上的一同一性，而不是其数个部分上的同一性。[0199]序列同一性或同源性可以使用任何蛋白质或核酸序列比对算法来确定，如blast、clustalw及murce。[0200]所述同源物还可指一直系同源、一缺失、插入或取代变体，包括一胺基酸取代，如下文所述。[0201]根据数个特定实施例，所述pd1多肽可包含数个保守及非保守胺基酸取代。此类取代在本领域中已知，并公开于maute等人pnas,2015nov24；112(47):e6506-14；juyeon等人naturecommunications2016volume7,articlenumber:13354(doi:10.1038/ncomms13354)；及zackkm等人structure.201523(12):2341-2348(doi:10.1016/j.str.2015.09.010)，其内容通过引用完全并入本文。[0202]根据数个特定实施例，一或多个胺基酸突变位于选自v39、l40、n41、y43、r44、m45、s48、n49、q50、t51、d52、k53、a56、q63、g65、q66、v72、h82、m83、r90、y96、l97、a100、s102、l103、a104、p105、k106及a107的一胺基酸残基，对应于seqidno:6中所述的所述pd1胺基酸序列。根据数个特定实施例，一或多个胺基酸突变位于选自以下的胺基酸残基上：v39、l40、n41、y43、r44、m45、s48、n49、q50、t51、d52、k53、a56、q63、g65、q66、c68、v72、h82、m83、r90、y96、l97、a100、s102、l103、a104、p105、k106，及a107，对应于seqidno:6中所述的pd1胺基酸序列。[0203]根据数个特定实施例，从以下组中选择一或多种胺基酸变化：(1)v39h或v39r；(2)l40v或l40i；(3)n41i或n41v；(4)y43f或y43h；(5)r44y或r44l；(6)m45q、m45e、m45l或m45d；(7)s48d、s48l、s48n、s48g或s48v；(8)n49c、n49g、n49y或n49s；(9)q50k、q50e或q50h；(10)t51v、t51l或t51a；(11)d52f、d52r、d52y或d52v；(12)k53t或k53l；(13)a56s或a56l；(14)q63t、q63i、q63e、q63l或q63p；(15)g65n、g65r、g65i、g65l、g65f或g65v；(16)q66p；(17)v72i；(18)h82q；(19)m83l或m83f；(20)r90k；(21)y96f；(22)l97y、l97v或l97i；(23)a100i或a100v；(24)s102t或s102a；(25)l103i、l103y或l103f；(26)a104s、a104h或a104d；(27)p105a；(28)k106g、k106e、k106i、k106v、k106r或k106t；及(29)a107p、a107i或a107v，对应于seqidno:6中所述的pd1胺基酸序列。[0204]根据数个特定实施例，从以下组中选择一或多种胺基酸改变：(1)v39h或v39r；(2)l40v或l40i；(3)n41i或n41v；(4)y43f或y43h；(5)r44y或r44l；(6)m45q、m45e、m45l或m45d；(7)s48d、s48l、s48n、s48g或s48v；(8)n49c、n49g、n49y或n49s；(9)q50k、q50e或q50h；(10)t51v、t51l或t51a；(11)d52f、d52r、d52y或d52v；(12)k53t或k53l；(13)a56s或a56l；(14)q63t、q63i、q63e、q63l或q63p；(15)g65n、g65r、g65i、g65l、g65f或g65v；(16)q66p；(17)c68s(18)，v72i；(19)h82q；(20)m83l或m83f；(21)r90k；(22)y96f；(23)l97y、l97v或l97i；(24)a100i或a100v；(25)s102t或s102a；(26)l103i、l103y或l103f；(27)a104s、a104h或a104d；(28)p105a；(29)k106g、k106e、k106i、k106v、k106r或k106t；及(30)a107p、a107i或a107v，对应于seqidno:6中所述的pd1胺基酸序列。[0205]根据数个特定实施例，一胺基酸突变位于对应于seqidno:1中所述pd1胺基酸序列的一胺基酸残基c93处(例如，相当于对应于seqidno:6中所述pd1胺基酸序列的一胺基酸残基c68)。[0206]根据数个特定实施例，所述pd1多肽可包含对应于seqidno:1中所述pd1胺基酸序列的胺基酸残基93(例如，相当于seqidno:6中所述pd1胺基酸序列的胺基酸残基68)的一位置的一c到s胺基酸修饰。[0207]因此，根据数个特定实施例，所述pd1胺基酸序列包含seqidno:3。[0208]根据数个特定实施例，pd1胺基酸序列由seqidno:3组成。[0209]如本文所用，短语“对应于seqidno:1中所述的pd1胺基酸序列”、“对应于seqidno:1”、“对应于seqidno:6中所述的pd1胺基酸序列”或“对应于seqidno:6”，旨在包括相对于任何其他pd1胺基酸序列的所述对应胺基酸残基。[0210]关于保守胺基酸及非保守胺基酸取代的附加说明在上文及下文中进一步提供。[0211]本发明的一些实施例的所述pd1为至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于所述多肽seqidno:3、5、6、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或45；或至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于编码相同的所述多核苷酸序列，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0212]根据数个特定实施例，所述pd1胺基酸序列不包含对应于seqidno:7的任何胺基酸片段p1–l5及/或f146–v150。[0213]根据数个特定实施例，所述pd1胺基酸序列不包含对应于seqidno:7的任何胺基酸残基p1–l5及/或f146–v150。[0214]根据数个特定实施例，pd1胺基酸序列包含100个至288个胺基酸、100个至200个胺基酸、120个至180个胺基酸、120个至160、130个至170个胺基酸、130个至160、130个至150、140个至160个胺基酸、145个至155个胺基酸、123个至166个胺基酸、138个至145个胺基酸、123个至148个胺基酸、126个至148个胺基酸、123个至140个胺基酸，126个至140个胺基酸、127个至140个胺基酸、130个至140个胺基酸，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0215]根据数个特定实施例，所述pd1胺基酸序列包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列选自由seqidno:3、5、6、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43及45所组成的群组。[0216]根据数个特定实施例，所述pd1胺基酸序列由一胺基酸序列所组成，所述胺基酸序列选自由seqidno:3、5、6、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43及45所组成的群组。[0217]根据数个特定实施例，所述pd1胺基酸序列包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列选自seqidno:13及7所组成的群组。[0218]根据数个特定实施例，所述pd1胺基酸序列由一胺基酸序列所组成，所述胺基酸序列选自由seqidno:13及7所组成的群组。[0219]根据数个特定实施例，编码所述pd1胺基酸序列的所述pd1核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％与seqidno:2、4、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44或46一致，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0220]根据数个特定实施例，编码所述pd1胺基酸序列的所述pd1核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％与seqidno:14或8一致。[0221]根据数个特定实施例，编码所述pd1胺基酸序列的所述pd1核酸序列包含从seqidno:2、4、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44及46所组成的群组中选择的一核酸序列。[0222]根据数个特定实施例，编码所述pd1胺基酸序列的所述pd1核酸序列包括从seqidno:2、4、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44及46所组成的群组中选择的一核酸序列。[0223]根据数个特定实施例，编码所述pd1胺基酸序列的所述pd1核酸序列包含seqidno:14或8。[0224]根据数个特定实施例，编码所述pd1胺基酸序列的所述pd1核酸序列包含seqidno:14或8。[0225]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白为sirpα。[0226]如本文所用，术语“sirpα(信号调节蛋白α(signalregulatoryproteinalpha)，也称为cd172a)”指所述sirpa基因(基因id140885)的所述多肽或一功能同源物，例如其功能片段。根据数个特定实施例，术语“sirpα”指sirpα多肽的一功能同源物。根据数个特定实施例，sirpα是人类sirpα。根据数个特定实施例，sirpα蛋白质指所述人类蛋白质，如以下genbank编号np_001035111、np_001035112、np_001317657或np_542970中提供。[0227]根据数个特定实施例，sirpα胺基酸序列包含seqidno:69。[0228]根据数个特定实施例，sirpα胺基酸序列由seqidno:69组成。[0229]在本文中，短语“所述sirpa基因的所述多肽的功能同源物”或“所述sirp1基因的所述多肽的功能片段”是指所述多肽的一部分、一功能同源物(自然产生或合成/重组产生)及/或包含数个保守及非保守胺基酸取代的一sirpα多肽，其至少保持结合cd47的所述全长sirpα的所述活性。用于测试结合的数个分析在本领域是众所周知的，并在上文及下文中进一步描述。[0230]根据一特定实施例，所述cd47蛋白质指人类蛋白质，例如在以下genbank编号np_001768或np_942088中提供。[0231]根据数个特定实施例，所述sirpα结合cd47与通过spr确定的0.1μm-100μm、0.1μm-10μm、1μm-10μm、0.1μm-5μm或1μm-2μm的一kd，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0232]根据数个特定实施例，所述sirpα包含所述sirpα的一胞外结构域或其一功能片段。[0233]根据数个特定实施例，sirpα胺基酸序列包含seqidno:71。[0234]根据数个特定实施例，sirpα胺基酸序列由seqidno:71组成。[0235]术语“sirpα”还包括具有所需活性(即结合cd47)的数个功能同源物(自然产生或合成/重组产生)。例如，此类同源物可以是至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％至少98％、至少99％或100％相同或同源于所述多肽seqidno:69或71；或至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，至少99％或100％相同于编码相同的所述多核苷酸序列(如下文所述)。[0236]根据数个特定实施例，所述sirpα多肽可包含数个保守及非保守胺基酸取代。此类取代在本领域中已知，并公开于例如weiskopfk等人science.(2013)；341(6141):88-91，其内容通过引用完全并入本文。[0237]根据数个特定实施例，一或多个胺基酸突变位于选自以下胺基酸残基的一胺基酸残基上：l4、v6、a21、a27、i31、e47、k53、e54、h56、v63、l66、k68、v92及f96，对应于seqidno:71中所述的所述sirpα胺基酸序列。[0238]根据数个特定实施例，所述sirpα胺基酸序列包含选自l4、a27、e47及v92的一胺基酸残基处的一突变，所述胺基酸残基对应于seqidno:71中所述的sirpα胺基酸序列。[0239]根据数个特定实施例，从以下组中选择一或多个胺基酸突变：l4v或l4i、v6i或v6l、a21v、a27i或a27l、i31f或i31t、e47v或e47l、k53r、e54q、h56p或h56r、v63i、l66t或l66g、k68r、v92i及f94l或f94v，对应于seqidno:71中所述的sirpα胺基酸序列。[0240]根据数个特定实施例，所述sirpα胺基酸序列包含从与seqidno:71中所述sirpα胺基酸序列相对应的l4i、a27i、e47v及v92i所组成的群组中选择的一突变。[0241]如本文所用，短语“对应于seqidno:71中所述的sirpα胺基酸序列”或“对应于seqidno:71”旨在包括相对于任何其他sirpα胺基酸序列的所述对应胺基酸残基。[0242]根据数个特定实施例，所述sirpα胺基酸序列包含seqidno:75。[0243]根据数个特定实施例，所述sirpα胺基酸序列由seqidno:75组成。[0244]关于数个保守胺基酸及非保守胺基酸取代的附加说明在上文及下文中进一步提供。[0245]本发明一些实施例的所述sirp胺基酸序列为至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％，与多肽seqidno:71、73、75或77至少98％、至少99％或100％相同或同源；或至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于编码相同的多核苷酸序列，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0246]根据数个特定实施例，所述sirpα胺基酸序列不包含对应于seqidno:71的胺基酸片段k117–y343。[0247]根据数个特定实施例，所述sirpα胺基酸序列不包含对应于序列idno:71的任何胺基酸残基k117–y343。[0248]根据数个特定实施例，sirpα胺基酸序列包含100个至504、100个至500个胺基酸、150个至450个胺基酸、200个至400个胺基酸、250个至400个胺基酸、300个至400个胺基酸、320个至420个胺基酸、340个至350个胺基酸、300个至400个胺基酸、340个至450个胺基酸、100个至200个胺基酸、100个至150个胺基酸、100个至125个胺基酸，100个至120个胺基酸，100个至119个胺基酸，105个至119个胺基酸，110个至119个胺基酸，115个至119个胺基酸，105个至118个胺基酸，110个至118个胺基酸，115个至118个胺基酸，105个至117个胺基酸，110个至117个胺基酸，115个至117个胺基酸，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0249]根据数个特定实施例，所述sirpα胺基酸序列包含选自seqidno:71、73、75及77所组成的群组的一胺基酸序列。[0250]根据数个特定实施例，所述sirpα胺基酸序列包含seqidno:71。[0251]根据数个特定实施例，所述sirpα胺基酸序列由seqidno:71组成。[0252]根据数个特定实施例，编码所述sirpα胺基酸序列的一核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:72、74、76或78，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0253]根据数个特定实施例，编码所述sirpα胺基酸序列的一核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:72，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0254]根据数个特定实施例，编码所述sirpα胺基酸序列的所述核酸序列包含seqidno:72。[0255]根据数个特定实施例，编码所述sirpα胺基酸序列的所述核酸序列包含seqidno:72。[0256]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白为tigit。[0257]如本文所用，术语“tigit(具有ig及itim结构域的t细胞免疫受体)”指所述tigit基因(基因id201633)的所述多肽或一功能同源物，例如其功能片段。根据数个特定实施例，术语“tigit”指tigit多肽的功能同源物。根据数个特定实施例，tigit是人类tigit。根据一特定实施例，tigit蛋白质指所述人类蛋白质，例如在以下genbank编号np_776160或xp_024309156中提供。[0258]根据数个特定实施例，tigit胺基酸序列包含seqidno:160。[0259]根据数个特定实施例，tigit胺基酸序列由seqidno:160组成。[0260]在本文中，短语“所述tigit基因的所述多肽的功能同源物”或“所述tigit基因的所述多肽的功能片段”是指所述多肽的一部分、一功能同源物(自然产生或合成/重组产生)及/或包含数个保守及非保守胺基酸取代的一tigit多肽，其至少保持结合cd155(pvr)的所述全长tigit的所述活性。[0261]用于测试结合的数个分析在本领域是众所周知的，并在上文及下文中进一步描述。[0262]根据一特定实施例，所述cd155蛋白质指所述人类蛋白质，例如在以下genbank编号np_001129240、np_001129241、np_001129242、np_006496中提供。[0263]根据数个特定实施例，所述tigit将cd155与通过spr确定的0.01μm–100μm、0.1μm–100μm、0.1μm-10μm或0.1μm-5μm的一kd结合，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0264]根据数个特定实施例，所述tigit包含所述tigit的一胞外结构域或其一功能片段。[0265]根据数个特定实施例，tigit胺基酸序列包含seqidno:164。[0266]根据数个特定实施例，tigit胺基酸序列由seqidno:164组成。[0267]根据数个特定实施例，tigit胺基酸序列包含seqidno:130。[0268]根据数个特定实施例，tigit胺基酸序列由seqidno:130组成。[0269]术语“tigit”还包括具有所需活性(即结合cd155)的数个功能同源物(自然产生或合成/重组产生)。例如，此类同源物可以是至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于所述多肽seqidno:160、164或130；或至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，至少99％或100％相同于编码相同的所述多核苷酸序列(如下文所述)。[0270]根据数个特定实施例，所述tigit多肽可包含数个保守及非保守胺基酸取代。[0271]根据数个特定实施例，一或多个胺基酸突变位于选自i42及c69的一胺基酸残基处，所述胺基酸残基对应于seqidno:160中所述的tigit胺基酸序列。[0272]根据数个特定实施例，从以下组中选择一或多个胺基酸突变：i42a及c69s，其对应于seqidno:160中所述的tigit胺基酸序列。[0273]如本文所使用的，短语“对应于seqidno:160中所述的tigit胺基酸序列”或“对应于seqidno:160”旨在包括相对于任何其他tigit胺基酸序列的所述对应胺基酸残基。[0274]根据数个特定实施例，所述tigit胺基酸序列包含seqidno:132。[0275]根据数个特定实施例，所述tigit胺基酸序列由seqidno:132组成。[0276]关于数个保守胺基酸及非保守胺基酸取代的附加说明在上文及下文中进一步提供。[0277]根据数个特定实施例，tigit胺基酸序列包含100个至244个胺基酸、100个至200个胺基酸、100个至150个胺基酸、120个至140个胺基酸，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0278]根据数个特定实施例，编码所述tigit胺基酸序列的一核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:131或133。[0279]根据数个特定实施例，编码所述tigit胺基酸序列的所述核酸序列包含seqidno:133。[0280]根据数个特定实施例，编码所述tigit胺基酸序列的所述核酸序列由seqidno:133组成。[0281]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白为lilrb2。[0282]如本文所用，术语“lilrb2(白细胞免疫球蛋白样受体b亚家族成员2(leukocyteimmunoglobulin-likereceptorsubfamilybmember2))”指所述lilrb2基因(基因id10288)的所述多肽或一功能同源物，例如其功能片段。根据数个特定实施例，术语“lilrb2”指lirb2多肽的一功能同源物。根据数个特定实施例，所述lilrb2是人类lilrb2。根据数个特定实施例，lilrb2蛋白质是指所述人类蛋白质，例如在以下genbank编号np_00107447、np_001265332、np_001265333、np_001265334、np_001265335中提供。[0283]根据数个特定实施例，lilrb2胺基酸序列包含seqidno:161。[0284]根据数个特定实施例，lilrb2胺基酸序列由seqidno:161组成。[0285]在本文中，短语“所述lilrb2基因的所述多肽的功能同源物”或“所述lilrb2基因的所述多肽的功能片段”是指多肽的一部分、一功能同源物(自然产生或合成/重组产生)及/或包含数个保守及非保守胺基酸取代的lilrb2多肽，其至少保持与一主要组织相容性分子(mhc，例如hla-g)结合的所述全长lilrb2的所述活性。[0286]用于测试结合的数个分析在本领域是众所周知的，并在上文及下文中进一步描述。[0287]根据数个特定实施例，所述lilrb2将mhc(例如hla-g)与通过spr确定的0.1nm–100μm、0.1nm–10μm、1nm–1μm、1–100nm或1-10nm的一kd结合，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0288]根据数个特定实施例，所述lilrb2包含所述lilrb2的一胞外结构域或其一功能片段。[0289]根据数个特定实施例，所述lilrb2胺基酸序列包含seqidno:165。[0290]根据数个特定实施例，所述lilrb2胺基酸序列由seqidno:165组成。[0291]lilrb2的所述胞外结构域包括4个ig样结构域，称为d1–d4。[0292]因此，根据数个特定实施例，lilrb2的所述胺基酸序列包含至少一ig样结构域。[0293]根据数个特定实施例，lilrb2的所述胺基酸序列包含至少两个ig样结构域、至少三个ig样结构域或四个ig样结构域。[0294]根据数个特定实施例，lilrb2的所述胺基酸序列包含lilrb2的数个结构域d1及d2；lilrb2的数个域d1、d2及d3，数个域d1、d2及d4或lilrb2，或lilrb2的数个域d1、d2、d3及d4。[0295]根据数个特定实施例，lilrb2胺基酸序列包含seqidno:115或117。[0296]根据数个特定实施例，lilrb2胺基酸序列由seqidno:115或117组成。[0297]术语“lilrb2”还包括数个功能同源物(自然产生或合成/重组产生)，其表现出所需的活性(即结合mhc，例如hla-g)。例如，此类同源物可以是至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于所述多肽seqidno:161、165、115或117；或至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，至少99％或100％相同于编码相同的所述多核苷酸序列(如下文所述)。[0298]根据数个特定实施例，所述lilrb2多肽可包含数个保守及非保守胺基酸取代。[0299]关于数个保守胺基酸及非保守胺基酸取代的附加说明在上文及下文中进一步提供。[0300]根据数个特定实施例，lilrb2胺基酸序列包含100个至597个胺基酸、100个至500个胺基酸、100个至400个胺基酸、150个至400个胺基酸、300个至400个胺基酸、350个至400个胺基酸、150个至250个胺基酸，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0301]根据数个特定实施例，编码所述lilrb2胺基酸序列的一核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:116或118。[0302]根据数个特定实施例，编码所述lilrb2胺基酸序列的所述核酸序列包含seqidno:116。[0303]根据数个特定实施例，编码所述lilrb2胺基酸序列的所述核酸序列包含seqidno:118。[0304]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白为siglec。[0305]如本文所用，术语“siglec(唾液酸结合免疫球蛋白型凝集素(sialicacid-bindingimmunoglobulin-typelectins))”指由一siglec基因或一功能同源物(例如其功能片段)编码的所述多肽。根据数个特定实施例，术语“siglec”是指siglec多肽的一功能同源物。[0306]在本文中，短语“一siglec基因的所述多肽的功能同源物”或“一siglec基因的所述多肽的功能片段”是指所述多肽的一部分、一功能同源物(自然产生或合成/重组产生)及/或包含数个保守及非保守胺基酸取代的siglec多肽，其至少保持结合唾液酸的所述全长siglec的所述活性，更具体而言，是含唾液酸的碳水化合物(唾液聚糖)。[0307]根据数个特定实施例，所述siglec包含所述siglec的一胞外结构域或其一功能片段。[0308]siglec的所述胞外结构域包括ig样结构域。[0309]因此，根据数个特定实施例，siglec的所述胺基酸序列包含至少一ig样结构域。[0310]根据数个特定实施例，siglec是人类siglec。[0311]siglec的数个非限制性范例包括siglec-1、siglec-2、siglec-3、siglec-4、siglec-5、siglec-6、siglec-7、siglec-8、siglec-9、siglec-10、siglec-11、siglec-12、siglec-13、siglec-14、siglec-15、siglec-16、siglec-17。根据数个特定实施例，所述siglec选自siglec-2、siglec-3、siglec-4、siglec-7、siglec-9、siglec-10、siglec-12及siglec-15所组成的群组，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0312]根据一特定实施例，所述siglec为siglec-10。[0313]如本文所用，术语“siglec-10(唾液酸结合ig样凝集素10(sialicacid-bindingig-likelectin10))”指所述siglec10基因(基因id89790)的所述多肽或一功能同源物，例如其功能片段。根据数个特定实施例，siglec10蛋白质是指所述人类蛋白质，如以下genbank编号np_001164627、np_001164628、np_001164629、np_001164630、np_001164632中提供。[0314]根据数个特定实施例，siglec10胺基酸序列包含seqidno:162。[0315]根据数个特定实施例，siglec胺基酸序列由seqidno:162组成。[0316]在本文中，短语“所述siglec10基因的所述多肽的功能同源物”或“所述siglec10基因的所述多肽的功能片段”是指所述多肽的一部分、一功能同源物(自然产生或合成/重组产生)及/或包含数个保守及非保守胺基酸取代的siglec-10多肽，其至少保持cd24及/或cd52上表达的结合唾液酸的所述全长siglec-10的所述活性。[0317]用于测试结合的数个分析在本领域是众所周知的，并在上文及下文中进一步描述。[0318]根据数个特定实施例，所述siglec10将cd24或cd52与通过spr确定的1nm-100μm、0.01-100μm、0.01-10μm、0.1-10μm、0.1-5μm或0.1-1μm的一kd结合，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0319]根据数个特定实施例，siglec-10包含所述siglec-10的一胞外结构域或其一功能片段。[0320]根据数个特定实施例，siglec-10的所述胺基酸序列包含至少一ig样结构域。[0321]根据数个特定实施例，siglec-10的所述胺基酸序列包含至少两个ig样结构域。[0322]根据数个特定实施例，siglec-10胺基酸序列包含seqidno:129。[0323]根据数个特定实施例，siglec-10胺基酸序列包含seqidno:125。[0324]根据数个特定实施例，siglec-10胺基酸序列由seqidno:125组成。[0325]术语“siglec-10”还包括数个功能同源物(自然产生或合成/重组产生)，其表现出所需的活性(即，结合在cd24及/或cd52上表达的唾液酸)。例如，此类同源物可以是至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于多肽seqidno:162、129或125；或至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，至少99％或100％相同于编码相同的所述多核苷酸序列(如下文所述)。[0326]根据数个特定实施例，所述siglec-10多肽可包含数个保守及非保守胺基酸取代。[0327]根据数个特定实施例，一突变位于对应于seqidno:162中所述siglec-10胺基酸序列的一胺基酸残基c36处。[0328]根据数个特定实施例，一胺基酸突变为c36s，对应于seqidno:162中所述的siglec-10胺基酸序列。[0329]如本文所用，短语“对应于seqidno:162中所述的siglec-10胺基酸序列”或“对应于seqidno:162”旨在包括相对于任何其他siglec-10胺基酸序列的所述对应胺基酸残基。[0330]根据数个特定实施例，所述siglec-10胺基酸序列包含seqidno:127。[0331]根据数个特定实施例，所述siglec-10胺基酸序列由seqidno:127组成。[0332]关于数个保守胺基酸及非保守胺基酸取代的附加说明在上文及下文中进一步提供。[0333]根据数个特定实施例，siglec-10胺基酸序列包含100个至639个胺基酸、100个至600个胺基酸、100个至550个胺基酸、100个至300个胺基酸、100个至200个胺基酸、100个至150个胺基酸，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0334]根据数个特定实施例，编码siglec-10胺基酸序列的一核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:126或128。[0335]根据数个特定实施例，编码所述siglec-10胺基酸序列的所述核酸序列包含seqidno:128。[0336]根据数个特定实施例，编码所述siglec-10胺基酸序列的所述核酸序列由seqidno:128组成。[0337]如本文所用，短语“一ii型膜蛋白的一胺基酸序列”指一ii型膜蛋白的一连续胺基酸序列，其至少能够结合所述ii型膜蛋白的所述天然配体或受体。[0338]根据数个特定实施例，所述胺基酸序列包含所述ii型膜蛋白的一胞外结构域或其一功能片段。[0339]如本文所用，短语“ii型膜蛋白”指具有一c末端胞外结构域的一跨膜蛋白。[0340]此类ii型膜蛋白的数个非限制性范例包括4-1bbl、fasl、trail、tnf-α、tnf-β、ox40l、cd40l、cd40l、cd27l、cd30l、rankl、tweak、april、baff、light、vegi、gitrl、edal/2、淋巴毒素α及淋巴毒素β。[0341]根据数个特定实施例，所述ii型膜蛋白选自4-1bbl、ox40l、cd40l、light及gitrl所组成的群组。[0342]根据数个特定实施例，所述ii型膜蛋白是一免疫调节剂。[0343]此类免疫调节剂包括但不限于4-1bbl、tnf-α、tnf-β、ox40l、cd40l、cd27l及cd30l。[0344]根据数个特定实施例，所述ii型膜蛋白包含一单一ii型膜蛋白。[0345]根据数个特定实施例，所述ii型膜蛋白包含至少一ii型膜蛋白。[0346]根据数个特定实施例，所述ii型膜蛋白包含至少两种ii型膜蛋白。[0347]根据数个特定实施例，所述ii型膜蛋白为4-1bbl。[0348]如本文所用，术语“4-1bbl(也称为cd137l及tnfsf9)”指所述tnfsf9基因(基因id8744)的所述多肽或一功能同源物，例如其功能片段。根据数个特定实施例，术语“4-1bbl”指4-1bbl多肽的一功能同源物。根据数个特定实施例，4-1bbl为人类4-1bbl。根据数个特定实施例，4-1bbl蛋白质是指所述人类蛋白质，如以下genbank编号np_003802中提供。[0349]根据数个特定实施例，4-1bbl胺基酸序列包含seqidno:47。[0350]根据数个特定实施例，4-1bbl胺基酸序列由seqidno:47组成。[0351]在本文中，短语“tnfsf9基因的一多肽的功能同源物”或“所述tnfsf9基因的一多肽的功能片段”是指所述多肽的一部分、一功能同源物(自然产生或合成/重组产生)及/或包含数个保守及非保守胺基酸取代的一4-1bbl多肽，其保持所述全长4-1bbl的所述数个活性中的至少一者，例如(i)结合4-1bb、(ii)激活4-1bb信号通路、(iii)激活表达4-1bb的免疫细胞、(iv)形成同源三聚体。[0352]根据数个特定实施例，所述功能性4-1bbl同源物或片段能达成至少(i)。[0353]根据数个特定实施例，所述功能性4-1bbl同源物或片段能够达成(i)+(ii)、(i)+(iii)、(i)+(iv)、(i)+(ii)+(iii)、(i)+(ii)+(iv)、(i)+(ii)+(iv)、(i)+(iii)+(iv)、(ii)+(iii)+(iv)或(i)+(ii)+(iii)+(iv)。[0354]根据一特定实施例，所述4-1bb蛋白质是指所述人类蛋白质，如以下genbank编号np_001552中提供。[0355]用于测试结合的数个分析在本领域是众所周知的，并在上文及下文中进一步描述。[0356]根据数个特定实施例，所述4-1bbl与由spr确定的约0.1nm–1000nm、0.1nm–100nm、1nm-100nm或55.2nm的一kd结合，每种可能性代表所请求保护的发明的一单独实施例。[0357]确定三聚化(trimerization)的方法在本领域是众所周知的，包括但不限于native-page、sec-hplc2d凝胶、凝胶过滤、sec-mals、分析超速离心(auc)质谱(ms)、毛细管凝胶电泳(cge)。[0358]如本文所用，术语“激活”指刺激一免疫细胞(例如t细胞、b细胞、nk细胞、吞噬细胞)的所述过程，其导致细胞增殖、成熟、细胞因子产生、吞噬及/或调节或数个效应器功能(effectorfunctions)的诱导。[0359]根据数个特定实施例，激活包括共刺激。[0360]如本文所用，术语“共刺激”是指传递导致所述免疫细胞激活的一二级抗原非依赖性刺激信号(例如4-1bb信号)。[0361]根据数个特定实施例，激活步骤包括抑制导致免疫细胞激活的一抑制信号(例如pdl1信号)。[0362]确定一刺激或抑制信号的信号的数个方法在本领域中是众所周知的，也在下面的所述数个范例部分中公开，包括但不限于使用例如biacore、hplc或流式细胞术的结合分析、酶活性分析，例如激酶活性分析，以及使用pcr、西方墨点法、免疫沉淀法及免疫组织化学法等方法表达参与所述信号级联的数个分子。附加地或取代地，可以通过评估免疫细胞的激活或功能来确定信号的传递(共刺激或抑制)。评估免疫细胞活化或功能的数个方法在本领域中是众所周知的，包括但不限于增殖试验(例如cfse染色、mts、阿拉玛蓝、brdu及胸腺嘧啶核苷掺入)、细胞毒性试验(例如cfse染色、铬释放、钙调素am)、细胞因子分泌分析(例如细胞内细胞因子染色、elispot及elisa)，使用流式细胞术检测活化标记物如cd25、cd69、cd137、cd107a、pd1及cd62l的表达。[0363]根据数个特定实施例，如下文进一步描述，例如在一混合淋巴细胞反应(mlr)中，在体外或离体影响确定信号活性或激活。[0364]对于相同的培养条件，所述信号活性或免疫细胞激活或功能通常与同一物种的细胞中的信号、激活或功能相比表达，但不与异二聚体、编码相同的多核苷酸或编码相同的一宿主细胞接触；或与车辆控制装置(也称为控制装置)接触。[0365]根据数个特定实施例，4-1bbl包含所述4-1bbl的一胞外结构域或其一功能片段。[0366]根据数个特定实施例，4-1bbl胺基酸序列包含seqidno:49。[0367]根据数个特定实施例，4-1bbl胺基酸序列由seqidno:49组成。[0368]术语“4-1bbl”还包括具有所需活性(如上文所定义)的数个功能同源物(自然产生或合成/重组产生)。例如，此类同源物可以是至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于所述多肽seqidno:47或49；或至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，至少99％或100％相同于编码相同的所述多核苷酸序列(如下文所述)。[0369]根据数个特定实施例，所述4-1bbl多肽可包含数个保守胺基酸取代，如上文及下文进一步描述。[0370]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列不包含对应于seqidno:49的所述胺基酸片段a1-v6、a1-g14或a1-e23。[0371]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列不包含对应于seqidno:49的任何胺基酸残基a1-v6或a1-g14或a1-e23。[0372]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列不包含对应于seqidno:49的所述胺基酸片段g198–e205。[0373]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列不包含对应于seqidno:49的任何胺基酸残基g198–e205。[0374]如本文所用，短语“对应于seqidno:49”意欲包括相对于任何其他4-1bbl胺基酸序列的所述对应胺基酸残基。[0375]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列包含100个至254个胺基酸、150个至250个胺基酸、100个至250个胺基酸、150个至220个胺基酸、180个至220个胺基酸、180个至210个胺基酸、185个至205个胺基酸、185个至200个胺基酸、185个至199个胺基酸、170个至197个胺基酸、170个至182个胺基酸、190个至210个胺基酸，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0376]本发明的一些实施例的所述4-1bbl为至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于所述多肽seqidno:49、51、53、558、57、59、61、63或65；或至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于编码相同的所述多核苷酸序列，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0377]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列包含选自seqidno:49、51、53、55、57、59、61、63及65的一胺基酸序列。[0378]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列由选自seqidno:49、51、53、55、57、59、61、63及65所组成的群组的一胺基酸序列组成。[0379]根据数个特定实施例，编码所述4-1bbl胺基酸序列的所述核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:50、52、54、56、58、60、62、64及66，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0380]根据数个特定实施例，编码所述4-1bbl胺基酸序列的所述核酸序列包含从seqidno:50、52、54、56、58、60、62、64及66所组成的群组中选择的所述核酸序列。[0381]根据数个特定实施例，编码所述4-1bbl胺基酸序列的所述核酸序列包括从seqidno:50、52、54、56、58、60、62、64及66所组成的群组中选择的所述核酸序列。[0382]根据数个特定实施例，所述ii型膜蛋白为cd40l。[0383]如本文所用，术语“cd40l(也称为cd154)”指所述cd40lg基因(基因id959)的所述多肽或一功能同源物，例如其功能片段。根据数个特定实施例，术语“cd40l”指cd40l多肽的一功能同源物。根据数个特定实施例，cd40l是人类cd40l。根据数个特定实施例，所述cd40l蛋白质指人类蛋白质，例如在以下genbank编号np_000065中提供。[0384]根据数个特定实施例，cd40l胺基酸序列包含序列idno:163。[0385]根据数个特定实施例，cd40l胺基酸序列由序列idno:163组成。[0386]在本文中，短语“cd40lg基因的一多肽的功能同源物”或“cd40lg基因的多肽的功能片段”是指所述多肽的一部分、一功能同源物(自然产生或合成/重组产生)及/或包含数个保守及非保守胺基酸取代的一cd40l多肽，其保持所述全长cd40l的至少一活性，例如(i)结合cd40、(ii)激活cd40信号通路、(iii)激活表达cd40的免疫细胞、(iv)形成同源三聚体。[0387]根据数个特定实施例，所述功能性cd40l同源物或片段能够达成至少(i)。[0388]根据数个特定实施例，所述功能性cd40l同源物或片段能够达成(i)+(ii)、(i)+(iii)、(i)+(iv)、(i)+(ii)+(iii)、(i)+(ii)+(iv)、(i)+(ii)+(iv)、(i)+(iii)+(iv)、(ii)+(iii)+(iv)或(i)+(ii)+(iii)+(iv)。[0389]根据数个特定实施例，所述cd40蛋白质指所述人类蛋白质，如以下genbank编号np_001241、np_001289682、np_001309350、np_001309351、np_690593中提供。[0390]用于测试结合、三聚化、激活、共刺激及信号的数个分析在本领域是众所周知的，并在上文及下文中进一步描述。[0391]根据数个特定实施例，所述cd40l将cd40与通过spr确定的约0.1–1000nm、0.1–100nm、1-100nm或1-5nm的一kd结合，每种可能性代表所请求保护的发明的一单独实施例。[0392]根据数个特定实施例，cd40l包含所述cd40l的一胞外结构域或其一功能片段。[0393]根据数个特定实施例，cd40l胺基酸序列包含seqidno:122。[0394]根据数个特定实施例，cd40l胺基酸序列由seqidno:122组成。[0395]根据数个特定实施例，cd40l胺基酸序列包含seqidno:123。[0396]根据数个特定实施例，cd40l胺基酸序列由seqidno:123组成。[0397]术语“cd40l”还包括具有所需活性(如上文所定义)的数个功能同源物(自然产生或合成/重组产生)。例如，此类同源物可以是至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同或同源于所述多肽seqidno:163、122或123；或至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，至少99％或100％相同于编码相同的所述多核苷酸序列(如下文所述)。[0398]根据数个特定实施例，所述cd40l多肽可包含数个保守胺基酸取代，如上文及下文进一步描述。[0399]根据数个特定实施例，一突变位于对应于seqidno:163中所述cd40l胺基酸序列的一胺基酸残基c194处。[0400]根据数个特定实施例，一突变为c194s时，对应于seqidno:163中所述的cd40l胺基酸序列。[0401]如本文所用，短语“对应于seqidno:163中所述的cd40l胺基酸序列”或“对应于seqidno:163”旨在包括相对于任何其他cd40l胺基酸序列的对应胺基酸残基。[0402]根据数个特定实施例，所述cd40l胺基酸序列包含seqidno:119。[0403]根据数个特定实施例，所述cd40l胺基酸序列由seqidno:119组成。[0404]关于保守胺基酸及非保守胺基酸取代的附加说明在上文及下文中进一步提供。[0405]根据数个特定实施例，cd40l胺基酸序列包含100个至261个胺基酸、100个至220个胺基酸、100个至200个胺基酸、120个至160个胺基酸，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0406]根据数个特定实施例，编码所述cd40l胺基酸序列的一核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:120或124。[0407]根据数个特定实施例，编码所述cd40l胺基酸序列的所述核酸序列包含seqidno:120。[0408]根据数个特定实施例，编码所述cd40l胺基酸序列的所述核酸序列包含seqidno:120。[0409]根据数个特定实施例，包含在本文所公开的异二聚体中的一ii型膜蛋白的胺基酸序列包含一ii型膜蛋白(例如4-1bbl、cd40l)胺基酸序列的三个重复。[0410]根据数个特定实施例，所述三个重复中的每一者都能够至少结合ii型膜蛋白的一天然配体或受体。[0411]根据数个特定实施例，所述三个重复序列具有一相同的ii型膜蛋白(例如4-1bbl、cd40l)胺基酸序列。[0412]根据其他数个特定实施例，所述三个重复是不同的，即具有数个不同的ii型膜蛋白(例如4-1bbl、cd40l)胺基酸序列。[0413]根据数个其他特定实施例，三个重复序列中的两个具有相同的ii型膜蛋白(例如4-1bbl、cd40l)胺基酸序列。[0414]根据数个特定实施例，所述ii型膜蛋白胺基酸序列不包括所述ii型膜蛋白胺基酸序列的所述三个重复序列中的每一者之间的一连接体(linker)。[0415]根据数个其他特定实施例，所述ii型膜蛋白胺基酸序列包含所述ii型膜蛋白胺基酸序列的所述三个重复序列中的每一者之间的一连接体。本领域已知的任何连接体都可以与本发明的数个特定实施例一起使用。下文详细描述了可使用的连接体的数个非限制性范例。[0416]根据数个特定实施例，所述连接体是一(ggggs)x2+gggg(seqidno:96)连接体。[0417]根据数个特定实施例，所述连接体是一ggsgggg(seqidno:97)连接体。[0418]根据数个特定实施例，所述连接体是一ggsx3(seqidno:134)连接体。[0419]因此，例如，根据数个特定实施例，包含在所述异二聚体中的所述4-1bbl胺基酸序列包含所述4-1bbl胺基酸序列的三个重复。[0420]根据数个特定实施例，三个重复序列中的每一者都能够达成：(i)结合4-1bb，(ii)激活4-1bb信号通路，(iii)激活表达4-1bb的免疫细胞，(iv)形成同源三聚体。[0421]根据数个特定实施例，所述重复序列可以是本文定义的4-1bbl中的任何一者。[0422]根据数个特定实施例，所述重复序列中的至少一者包含本文公开的一4-1bbl胺基酸序列。[0423]根据数个特定实施例，所述重复序列中的至少一者由本文公开的一4-1bbl胺基酸序列组成。[0424]根据数个特定实施例，一4-1bbl胺基酸序列包含三个重复，所述三个重复包含seqidno:51的一胺基酸序列。[0425]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列包含由seqidno:51组成的胺基酸序列的三个重复。[0426]因此，根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:67。[0427]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列包含seqidno:67。[0428]根据数个特定实施例，所述4-1bbl胺基酸序列由seqidno:67组成。[0429]根据数个特定实施例，编码所述4-1bbl胺基酸序列的所述核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:68。[0430]根据数个特定实施例，所述4-1bbl核酸序列包含seqidno:68。[0431]根据数个特定实施例，所述4-1bbl核酸序列由seqidno:68组成。[0432]作为另一范例，根据数个特定实施例，包含在所述异二聚体中的所述cd40l胺基酸序列包含一cd40l胺基酸序列的三个重复。[0433]根据数个特定实施例，所述三个重复中的每一者都能够达成至少一者：(i)结合cd40，(ii)激活cd40信号通路，(iii)激活表达cd40的免疫细胞，(iv)形成一同源三聚化体(homotrimer)。[0434]根据数个特定实施例，所述重复序列可以是本文定义的任何cd40l。[0435]根据数个特定实施例，至少一重复包含本文公开的一cd40l胺基酸序列。[0436]根据数个特定实施例，至少一重复序列由本文公开的一cd40l胺基酸序列组成。[0437]根据数个特定实施例，所述cd40l胺基酸序列包含三个重复，所述三个重复包含seqidno:119的一胺基酸序列。[0438]根据数个特定实施例，cd40l胺基酸序列包含由seqidno:119组成的一胺基酸序列的三个重复。[0439]因此，根据数个特定实施例，所述cd40l胺基酸序列包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:121。[0440]根据数个特定实施例，所述cd40l胺基酸序列包含seqidno:121。[0441]根据数个特定实施例，所述cd40l胺基酸序列由seqidno:121组成。[0442]根据数个特定实施例，编码所述cd40l胺基酸序列的一核酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％，至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:166。[0443]根据数个特定实施例，所述cd40l核酸序列包含seqidno:166。[0444]根据数个特定实施例，所述cd40l核酸序列由seqidno:166组成。[0445]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白为pd1，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，且所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含pd1的一胺基酸序列及4-1bbl的一胺基酸序列，所述第二单体包含pd1的一胺基酸序列。[0446]根据数个特定实施例，所述第一单体的所述pd1的所述胺基酸及所述第二单体的所述pd1的所述胺基酸相同。[0447]根据数个特定实施例，所述第一单体的所述pd1的所述胺基酸及所述第二单体的pd1的所述胺基酸是不同的(即不同的)。[0448]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:79及8；或seqidno:79及83。[0449]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:79及81；或seqidno:79及83。[0450]根据数个特定实施例，所述异二聚体包括seqidno:79及81；或seqidno:79及83。[0451]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白为lilrb2，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，且所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含lilrb2胺基酸序列及4-1bbl胺基酸序列，所述第二单体包含lilrb2胺基酸序列。[0452]根据数个特定实施例，所述第一单体的所述lilrb2的所述胺基酸及所述第二单体的所述lilrb2的所述胺基酸相同。[0453]根据数个特定实施例，所述第一单体的所述lilrb2的所述胺基酸及所述第二单体的所述lilrb2的所述胺基酸是不同的(即不同的)。[0454]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:142及138；或seqidno:144及140。[0455]根据数个特定实施例，所述异二聚体包括seqidno:142及138；或seqidno:144及140。[0456]根据数个特定实施例，所述异二聚体包括seqidno:142及138；或seqidno:144及140。[0457]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白为lilrb2，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含lilrb2的一胺基酸序列及cd40l的一胺基酸序列，所述第二单体包含lilrb2的一胺基酸序列。[0458]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:148及138。[0459]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:148及138。[0460]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:148及138组成。[0461]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自由pd1及sirpα所组成的群组，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含sirpα的一胺基酸序列及4-1bbl的一胺基酸序列，所述第二单体包含pd1的一胺基酸序列。[0462]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:85及81；seqidno:89及91；或seqidno:85及83。[0463]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:85及81；seqidno:89及91；或seqidno:85及83。[0464]根据数个特定实施例，所述异二聚体包括seqidno:85及81；seqidno:89及91；或seqidno:85及83。[0465]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自pd1及sirpα所组成的群组，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含sirpα的一胺基酸序列及cd40l的一胺基酸序列，所述第二单体包含pd1的一胺基酸序列。[0466]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:146及81。[0467]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:146及81。[0468]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:146及81组成。[0469]根据数个特定实施例，i型膜蛋白选自lilrb2及sirpα所组成的群组，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含sirpα的一胺基酸序列及4-1bbl的一胺基酸序列，所述第二单体包含lilrb2的一胺基酸序列。[0470]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:85及138；或seqidno:85及140。[0471]根据数个特定实施例，所述异二聚体包括seqidno:85及138；或seqidno:85及140。[0472]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:85及138组成；或由seqidno:85及140组成。[0473]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自lilrb2及sirpα所组成的群组，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含sirpα的一胺基酸序列及cd40l的一胺基酸序列，所述第二单体包含lilrb2的一胺基酸序列。[0474]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:146及138。[0475]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:146及138。[0476]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:146及138组成。[0477]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自lilrb2及pd1所组成的群组，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含pd1的一胺基酸序列及4-1bbl的一胺基酸序列，所述第二单体包含lilrb2的一胺基酸序列。[0478]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:79及138。[0479]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:79及138。[0480]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:79及138组成。[0481]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自lilrb2及pd1所组成的群组，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含pd1的一胺基酸序列及cd40l的一胺基酸序列，所述第二单体包含lilrb2的一胺基酸序列。[0482]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:154及138。[0483]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:154及138。[0484]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:154及138组成。[0485]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自siglec及pd1所组成的群组，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含pd1的一胺基酸序列及4-1bbl的一胺基酸序列，所述第二单体包含siglec的一胺基酸序列。[0486]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:79及150。[0487]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:79及150。[0488]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:79及150组成。[0489]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自siglec及pd1所组成的群组，所述ii型膜蛋白为cd40l，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含pd1的一胺基酸序列及cd40l的一胺基酸序列，所述第二单体包含siglec的一胺基酸序列。[0490]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:154及150。[0491]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:154及150。[0492]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:154及150组成。[0493]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自tigit及pd1所组成的群组，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含pd1的一胺基酸序列及4-1bbl的一胺基酸序列，所述第二单体包含tigit的一胺基酸序列。[0494]根据数个特定实施例，异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:79及152。[0495]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:79及152。[0496]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:79及152组成。[0497]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自tigit及pd1所组成的群组，所述ii型膜蛋白为cd40l，且所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含pd1的一胺基酸序列及cd40l的一胺基酸序列，所述第二单体包含tigit的一胺基酸序列。[0498]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:154及152。[0499]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:154及152。[0500]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:154及152组成。[0501]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自tigit及pd1所组成的群组，所述ii型膜蛋白为4-1bbl，所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含tigit的一胺基酸序列及4-1bbl的一胺基酸序列，所述第二单体包含pd1的一胺基酸序列。[0502]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:156及81。[0503]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:156及81。[0504]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:156及81组成。[0505]根据数个特定实施例，所述i型膜蛋白选自tigit及pd1所组成的群组，所述ii型膜蛋白为cd40l，且所述异二聚体包含一第一单体及一第二单体，所述第一单体包含tigit的一胺基酸序列及cd40l的一胺基酸序列，所述第二单体包含pd1的一胺基酸序列。[0506]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含一胺基酸序列，所述胺基酸序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％，至少97％、至少98％、至少99％或100％相同于seqidno:158及81。[0507]根据数个特定实施例，所述异二聚体包含seqidno:158及81。[0508]根据数个特定实施例，所述异二聚体由seqidno:158及81组成。[0509]根据数个特定实施例，本文所公开的异二聚体是可溶的(即，未固定到一合成或天然表面)。[0510]根据数个特定实施例，本文所公开的异二聚体被固定到一合成或天然表面。[0511]根据数个特定实施例，所述异二聚体中包含的所述数个部分(moieties)的每一者可包含一连接体，所述连接体在所述数个部分之间分离，例如在所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列及所述二聚化部分之间分离，在所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列及所述二聚化部分之间，在所述ii型膜蛋白胺基酸序列的所述三个重复之间分离。[0512]根据数个其他特定实施例，所述异二聚体不包含所述i型膜蛋白的所述胺基酸序列及所述二聚化部分之间的一连接体。[0513]根据数个其他特定实施例，所述异二聚体不包含所述ii型膜蛋白的所述胺基酸序列及所述二聚化部分之间的一连接体。[0514]本领域已知的任何连接体都可以与本发明的数个特定实施例一起使用。[0515]根据数个特定实施例，所述连接体可衍生自天然存在的数个多结构域蛋白质或一经验连接体(empiricallinker)，如chichili等人(2013),proteinsci.22(2):153-167,chen等人(2013),advdrugdelivrev.65(10):1357-1369，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施例中，可以使用连接体设计数据库及数个计算机程序来设计所述连接体，如chen等人(2013),advdrugdelivrev.65(10):1357-1369及crasto等人(2000),proteineng.13(5):309-312所述，其全部内容通过引用并入本文。[0516]根据数个特定实施例，所述连接体是一合成连接体，例如peg。[0517]根据数个特定实施例，所述连接体可以是功能性的。例如，在不受限制的情况下，所述连接体可发挥作用，以改善pd1-4-1bbl融合蛋白的折迭及/或稳定性、改善表达、改善药代动力学及/或改善其生物活性。在另一范例中，所述连接体可以将pd1-4-1bbl融合蛋白靶向特定细胞类型或位置。[0518]根据数个特定实施例，所述连接体为一多肽。[0519]数个多肽连接体的数个非限制性实例包括数个连接体，所述数个连接体具有序列le,ggggs(seqidno:99)、(ggggs)n(n＝1-4)(seqidno:98)、ggggsgggg(seqidno:97)、(ggggs)x2(seqidno:100)、(ggggs)x2+gggg(seqidno:96)、(ggggs)x3(seqidno:134)、(ggggs)x4(seqidno:135)、(gly)8(seqidno:136)、(gly)6(seqidno:137)、(eaaak)n(n＝1-3)(seqidno:101)、a(eaaak)na(n＝2-5)(seqidno:102)、aeaaakeaaaka(seqidno:103)、a(eaaak)4alea(eaaak)4a(seqidno:104)、papap(seqidno:105)、kesgsvsseqlaqfrsld(seqidno:106)、egkssgsgseskst(seqidno:107)、gsagsaagsgef(seqidno:108)及(xp)n，其中x代表任何胺基酸，例如ala、lys或glu。[0520]根据数个特定实施例，所述连接体选自ggggs(seqidno:99)、(ggggs)n(n＝1-4)(seqidno:98)、ggggsgggg(seqidno:97)、(ggggs)x2(seqidno:100)、(ggggs)x2+gggg(seqidno:96)、(ggggs)x2(seqidno:100)、(ggggs)x3(seqidno:134)及(ggggs)x4(seqidno:135)所组成的群组。[0521]根据数个特定实施例，所述连接体选自ggggs(seqidno:99),(ggggs)n(n＝1-4)(seqidno:98)、ggggsgggg(seqidno:97)、(ggggs)x2(seqidno:100)、(ggggs)x2+gggg(seqidno:96)所组成的群组。[0522]根据数个特定实施例，所述连接体是(ggggs)x2+gggg(seqidno:96)。[0523]根据数个特定实施例，所述连接体是(ggs)x2(seqidno:100)。[0524]根据数个特定实施例，所述连接体是(ggggs)x3(seqidno:134)。[0525]根据数个特定实施例，所述连接体是(ggggs)x4(seqidno:135)。[0526]根据数个特定实施例，所述连接体的一长度为1个至6个胺基酸。[0527]根据数个特定实施例，所述连接体基本上由甘氨酸及/或丝氨酸残基组成(例如，约30％、或约40％、或约50％、或约60％、或约70％、或约80％、或约90％、或约95％、或约97％或100％甘氨酸及丝氨酸)。[0528]根据数个特定实施例，所述连接体是一单一胺基酸连接体。[0529]在本发明的一些实施例中，所述一种胺基酸为甘氨酸。[0530]根据数个特定实施例，所述连接体不是一抗体或其一片段的一fc结构域或一铰链区。[0531]根据数个特定实施例，相较于包含所述i型膜蛋白及所述ii型膜蛋白的相同胺基酸序列的一同型二聚体(homodimer)或包含相同胺基酸序列的数个分离单体的所述产量，所述异二聚体的所述产量高至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍。[0532]根据数个特定实施例，相较于包含所述i型膜蛋白及所述ii型膜蛋白的相同胺基酸序列的一同型二聚体或包含相同胺基酸序列的数个分离单体的聚集体的所述量，所述异二聚体的所述聚集体的所述量低至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％。[0533]根据数个特定实施例，相较于包含所述i型膜蛋白及所述ii型膜蛋白的相同胺基酸序列的一同型二聚体或包含相同胺基酸序列的数个分离单体的所述稳定性，所述异二聚体的所述稳定性高至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍。[0534]根据数个特定实施例，相较于包含所述i型膜蛋白及所述ii型膜蛋白的相同胺基酸序列的一同型二聚体或包含相同胺基酸序列的数个分离单体的所述活性，所述异二聚体的所述活性高至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍。[0535]根据数个特定实施例，相较于包含所述i型膜蛋白及所述ii型膜蛋白的相同胺基酸序列的一同型二聚体或包含相同胺基酸序列的数个分离单体的所述安全性，所述异二聚体的所述安全性高至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少5倍。[0536]由于本发明一些实施例的所述异二聚体包含一i型膜蛋白的一胺基酸序列及/或作为一免疫调节剂的一ii型膜蛋白的一胺基酸序列，所述异二聚体可用于in-vitro、ex-vivo及/或in-vivo调节数个免疫细胞的方法。[0537]因此，根据本发明的一方面，提供了一种调节数个免疫细胞的活性的方法，所述方法包括在存在所述异二聚体、编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一宿主细胞的情况下体外激活数个免疫细胞。[0538]根据其他数个特定实施例，所述调节步骤是抑制的。[0539]根据数个特定实施例，所述调节步骤是激活的。[0540]根据数个特定实施例，所述数个免疫细胞表达所述i型膜蛋白或所述ii型膜蛋白(例如4-1bb)的一配体或一受体。[0541]根据数个特定实施例，所述数个免疫细胞包括数个外周单核血细胞(pbmc)。[0542]如本文所用，术语“外周单核血细胞(pbmc)”指具有一单核的一血细胞，包括淋巴细胞、单核细胞及树突状细胞(dc)。[0543]根据数个特定实施例，所述pbmc选自由树突状细胞(dc)、t细胞、b细胞、nk细胞及nkt细胞所组成的群组。[0544]根据数个特定实施例，所述pbmc包括t细胞、b细胞、nk细胞及nkt细胞。[0545]获取pbmc的数个方法在本领域是众所周知的，例如从一受试者中抽取全血并收集在含有一抗凝剂(例如肝素或柠檬酸盐)的一容器中；以及单采术(apheresis)。接下来，根据数个特定实施例，从所述外周血纯化至少一类型的pbmc。本领域技术人员已知用于从全血中纯化pbmc的几种方法及试剂，例如白血球细胞分离(leukapheresis)、沉淀(sedimentation)、密度梯度离心(例如ficoll)、离心淘洗(centrifugalelutriation)、分馏、例如红血球细胞的化学裂解(例如通过ack)、使用数个细胞表面标记以选择数个特定细胞类型(例如使用facs分类器或磁性细胞分离技术，如可从invitrogen、stemcelltechnologies、cellpro、advancedmagnetics或miltenyibiotec等商业上可获得的技术)、以及通过数个特定抗体以根除(如杀死)或基于阴性选择的亲和纯化(如使用磁性细胞分离技术、facs分类器及/或捕获elisa标记)等方法来去除数个特定细胞类型。此等方法描述于例如thehandbookofexperimentalimmunology，第1卷至第4卷。(d.n.weir，编辑者)以及flowcytometryandcellsorting(a.radbruch，编辑者，springerverlag,2000年)。[0546]根据数个特定实施例，所述数个免疫细胞包括数个肿瘤浸润淋巴细胞(tumorinfiltratinglymphocytes)。[0547]如本文所用，术语“肿瘤浸润淋巴细胞(til)”是指在所述血流中迁移并进入肿瘤的数个单核白血球细胞。[0548]根据数个特定实施例，til选自由t细胞、b细胞、nk细胞及单核细胞所组成的群组。[0549]获取til的数个方法在本领域中是众所周知的，例如通过例如活检(biopsy)或尸检(necropsy)从一受试者获取数个肿瘤样本并制备其一单细胞悬浮液。可以任何合适的方式获得所述单细胞悬浮液，例如机械的方式(使用一gentlemacstm解离剂,miltenyibiotec,auburn,calif.来解离所述肿瘤)或酶促的方式(如胶原酶或dna酶)。接下来，可以从细胞悬浮液中纯化所述至少一类型的til。本领域技术人员已知用于纯化所需类型til的几种方法及试剂，例如，使用细胞表面标记以选择数个特定细胞类型(例如使用facs分类器或磁性细胞分离技术，例如可从invitrogen、stemcelltechnologies、cellpro、advancedmagnetics或miltenyibiotec商业上可获得)以及通过数个特定抗体根除(如杀死)或基于阴性选择的亲和纯化(如使用磁性细胞分离技术、facs分类器及/或捕获elisa标记)等方法来去除特定类型细胞。此等方法描述于例如thehandbookofexperimentalimmunology，第1卷至第4卷。(d.n.weir，编辑者)以及flowcytometryandcellsorting(a.radbruch，编辑者，springerverlag,2000年)。[0550]根据数个特定实施例，所述数个免疫细胞包括数个吞噬细胞。[0551]如本文所用，术语“吞噬细胞”指能够吞噬并包括数个专业及非专业吞噬细胞(professionalandnon-professionalphagocyticcells)的一细胞。分析吞噬作用的数个方法在本领域是众所周知的，例如包括杀灭分析、流式细胞术及/或显微镜评估(活细胞成像、荧光显微镜、共焦显微镜、电子显微镜)。根据数个特定实施例，所述数个吞噬细胞选自单核细胞、树突状细胞(dc)及粒细胞(granulocytes)所组成的群组。[0552]根据数个特定实施例，所述吞噬细胞包括粒细胞。[0553]根据数个特定实施例，所述吞噬细胞包括单核细胞。[0554]根据数个特定实施例，所述免疫细胞包括单核细胞。[0555]根据数个特定实施例，术语“单核细胞”指存在于一组织中的数个循环单核细胞及数个巨噬细胞(也称为单核吞噬细胞)。[0556]根据数个特定实施例，所述单核细胞包括巨噬细胞。通常，数个巨噬细胞的细胞表面表型包括cd14、cd40、cd11b、cd64、f4/80(小鼠)/emr1(人类)、溶菌酶m、mac-1/mac-3及cd68。[0557]根据数个特定实施例，所述单核细胞包括循环单核细胞。通常，数个循环单核细胞的数个细胞表面表型包括cd14及cd16(例如cd14++cd16-，cd14+cd16++，cd14++cd16+)。[0558]根据数个特定实施例，所述免疫细胞包括树突状细胞(dc)。[0559]如本文所用，术语“树突状细胞(dc)”指在淋巴组织或非淋巴组织中发现的数个形态相似的细胞类型的一不同群体中的任何成员。树突状细胞是一类专业的抗原提呈细胞，对hla限制性t细胞具有较高的致敏能力。树突状细胞包括例如浆细胞样树突状细胞(plasmacytoiddendriticcells)、髓样树突状细胞(myeloiddendriticcells)(包括未成熟及成熟树突状细胞)、朗格汉斯细胞(langerhanscells)、叉指细胞(interdigitatingcells)、滤泡树突状细胞(folliculardendriticcells)。树突状细胞可以通过功能或表型识别，尤其是通过细胞表面表型识别。这些细胞的特点是其独特的形态，在所述细胞表面有数个面纱状突起，表面hlaii类表达水平介于中到高水平，并能够向t细胞，尤其是幼稚t细胞提供抗原(见steinmanr等人，ann.rev.immunol.1991；9:271-196.)。通常，树突状细胞的细胞表面表型包括cdla+、cd4+、cd86+或hla-dr。树突状细胞一词包括未成熟及成熟的树突状细胞。[0560]根据数个特定实施例，所述免疫细胞包括粒细胞。[0561]如本文所用，词语“粒细胞”(granulocytes)是指多形核白血球(polymorphonuclearleukocytes)，其特征是细胞质中存在颗粒。[0562]根据数个特定实施例，所述粒细胞包括中性粒细胞。[0563]根据数个特定实施例，所述粒细胞包括肥大细胞。[0564]根据数个特定实施例，所述免疫细胞包括t细胞。[0565]如本文所用，术语“t细胞”指具有cd3+、具有cd4+或cd8+表型的t细胞受体(tcr)+的分化淋巴细胞。t细胞可以是一效应子或一调节性t细胞。[0566]如本文所用，术语“效应子t细胞(effectortcells)”指例如通过产生细胞因子激活或引导其他免疫细胞或具有细胞毒性活性(例如cd4+、th1/th2、cd8+细胞毒性t淋巴细胞)的一t细胞。[0567]如本文所用，术语“调节性t细胞(regulatorytcell)”或“treg”指负调节其他t细胞(包括效应性t细胞)以及固有免疫系统细胞的激活的一t细胞。treg细胞的特点是持续抑制效应子t细胞反应。根据数个特定实施例，所述treg是一cd4+cd25+foxp3+t细胞。[0568]根据数个特定实施例，所述t细胞为cd4+t细胞。[0569]根据其他数个特定实施例，所述t细胞为cd8+t细胞。[0570]根据数个特定实施例，所述t细胞是记忆t细胞。数个记忆t细胞的数个非限制性范例包括具有cd3+/cd4+/cd45ra-/ccr7-表型的效应子记忆cd4+t细胞、具有cd3+/cd4+/cd45ra-/ccr7+表型的中央记忆cd4+t细胞、具有cd3+/cd8+cd45ra-/ccr7-表型的效应子记忆cd8+t细胞及具有cd3+/cd8+cd45ra-/ccr7+表型的中央记忆cd8+t细胞。[0571]根据数个特定实施例，所述t细胞包括用编码一所需表达产物(expressionproductofinterest)的一核酸序列转导的工程化t细胞。[0572]根据数个特定实施例，所需表达产物为一t细胞受体(tcr)或嵌合抗原受体(car)。[0573]如本文所用，短语“使用编码一tcr的一核酸序列转导(transducedwithanucleicacidsequenceencodingatcr或transducingwithanucleicacidsequenceencodingatcr)”是指从t细胞中克隆可变α链及β链，具有针对mhc上下文中呈现的所需抗原的特异性。本领域已知使用tcr进行转换的数个方法叧于例如nicholson等人advhematol.2012；2012:404081；wangandrivièrecancergenether.2015mar；22(2):85-94)；以及lamers等人cancergenetherapy(2002)9,613–623。[0574]如本文所用，短语“使用编码一car的核酸序列转导(transducedwithanucleicacidsequenceencodingacar或transducingwithanucleicacidsequenceencodingacar)”是指编码一嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，car)的一核酸序列的克隆，其中所述car包括一抗原识别部分及一t细胞激活部分。一嵌合抗原受体(car)是一种人工构建的杂交蛋白质或多肽，包含与t细胞信号或t细胞激活域相连的一抗体的一抗原结合域(例如单链可变片段(scfv))。本领域已知使用一car进行转导的数个方法，并公开于davila等人，oncoimmunology.，2012年12月1日；1(9):1577-1583；wangandrivièrecancergenether.，2015年3月；22(2):85-94)；maus等人，blood.，2014年4月24日；123(17):2625-35；porterdlthenewenglandjournalofmedicine.，2011年,365(8):725-733；jacksonhj,natrevclinoncol.，2016年；13(6):370-383；以及globerson-levin等人，molther.，2014年；22(5):1029-1038。[0575]根据数个特定实施例，所述免疫细胞包括b细胞。[0576]如本文所用，术语“b细胞”指具有一b细胞受体(bcr)+、cd19+及/或b220+表型的一淋巴细胞。b细胞的特点是能够结合特定抗原并引发体液反应。[0577]根据数个特定实施例，所述免疫细胞包括nk细胞。[0578]如本文所用，术语“nk细胞”指具有cd16+cd56+及/或cd57+tcr-表型的分化淋巴细胞。nk的特点是能够通过激活数个特定的细胞溶解酶来结合并杀死不能表达“自身”mhc/hla抗原的细胞的能力、杀死肿瘤细胞或其他表达nk激活受体的一配体的病变细胞的能力、以及释放被称为数个细胞因子的蛋白质分子以刺激或抑制免疫反应的能力。[0579]根据数个特定实施例，所述免疫细胞包括nkt细胞。[0580]如本文所用，术语“nkt细胞”是指一特殊t细胞群，表达一半不变αβt细胞受体(semi-invariantαβt-cellreceptor)但也表达通常与nk细胞相关的多种分子标记物，例如nk1.1。nkt细胞包括nk1.1+及nk1.1.-,还有cd4+、cd4-、cd8+及cd8-细胞。nkt细胞上的所述tcr是独特的，因为它识别mhci样分子cd1d呈现的数个糖脂抗原。nkt细胞可以产生促进炎症或免疫耐受的细胞因子，因此具有保护作用或有害作用。[0581]根据数个特定实施例，所述免疫细胞从一健康受试者获得。[0582]根据数个特定实施例，所述免疫细胞从患有一病理学(例如癌症)的一受试者获得。[0583]根据数个特定实施例，调节步骤是在表达所述i型膜蛋白或所述ii型膜蛋白的一配体或一受体的数个细胞存在或在所述i型膜蛋白或所述ii型膜蛋白的外源配体或受体(例如pd-l1)存在下进行的。[0584]根据数个特定实施例，所述外源配体或受体是可溶性的。[0585]根据数个其他特定实施例，将所述外源配体或受体固定在一固体载体上。[0586]根据数个特定实施例，表达所述配体或受体的所述数个细胞包括数个病理(患病)细胞，例如癌细胞。[0587]根据数个特定实施例，所述调制步骤在一刺激剂存在下进行，所述刺激剂能够至少传递一初级激活信号[例如，所述t细胞受体(tcr)与所述抗原呈递细胞(antigenpresentingcell，apc)上的所述主要组织相容性复合物(majorhistocompatibilitycomplex，mhc)/肽复合物的连接(ligation)]，导致细胞增殖、成熟，细胞因子产生、吞噬及/或诱导免疫细胞的调节或效应子功能。根据数个特定实施例，所述刺激器试剂还可发射一次级共刺激信号。[0588]确定所述刺激剂的所述量以及所述刺激剂与所述数个免疫细胞之间的比率的数个方法完全在本领域技术人员的能力范围内，因此本文未规定。[0589]所述刺激剂可以抗原依赖或非抗原依赖(即多克隆)方式激活免疫细胞。[0590]根据数个特定实施例，刺激剂包括抗原非特异性刺激剂。[0591]本领域技术人员已知非特异性刺激器。因此，作为一非限制性范例，当免疫细胞包含t细胞时，抗原非特异性刺激剂可以是能够结合到一t细胞表面结构并诱导所述t细胞的所述多克隆刺激的一试剂，例如但不限于抗cd3抗体与一共刺激蛋白(例如抗cd28抗体)的组合。其他数个非限制性范例包括抗cd2、抗cd137、抗cd134、notch配体，例如单独或以与抗cd3的各种组合的delta样1/4、jaggedl/2。其他可诱导t细胞多克隆刺激的数个试剂包括但不限于丝裂原(mitogens)、pha、pma离子霉素、ceb及cytostim(miltenyibiotech)。根据数个特定实施例，抗原非特异性刺激物包含抗cd3及抗cd28抗体。根据数个特定实施例，t细胞刺激剂包括抗cd3及抗cd28涂层珠，例如从miltenyibiotec获得的cd3cd28macsibeads。[0592]根据数个特定实施例，所述刺激剂包括一抗原特异性刺激剂。[0593]数个抗原特异性t细胞刺激剂的数个非限制性实例包括载抗原抗原呈递细胞[apc，例如树突状细胞]及载肽重组mhc。因此，例如，t细胞刺激器可以是预先装载有所需抗原(例如肿瘤抗原)或转染有编码一所需抗原的mrna的树突状细胞。[0594]根据数个特定实施例，所述抗原为一癌症抗原。[0595]如本文所用，术语“癌症抗原”是指与一非癌症细胞相比，一癌症细胞过度表达或仅表达的一抗原。一癌抗原可以是一已知的癌抗原或一癌细胞中产生的一新的特异性抗原(即新抗原)。[0596]数个已知癌症抗原的数个非限制性实例包括mage-ai、mage-a2、mage-a3、mage-a4、mage-as、mage-a6、mage-a7、mage-as、mage-a9、mage-aio、mage-aii、mage-a12、gage-i、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage-7、gage-8、bage-1、rage-1、lb33/mum-1、prame、nag、mage-xp2(mage-b2)、mage-xp3(mage-b3)、mage-xp4(mage-b4)、mage-cl/ct7、mage-c2、ny-es0-1、lage-1、ssx-1、ssx-2(hom-mel-40)、ssx-3、ssx-4、ssx-5、scp-1及xage、黑素细胞分化抗原(melanocytedifferentiationantigens)、p53、ras、cea、muci、pmsa、psa、酪氨酸酶(tyrosinase)、melan-a、mart-i、gpl00、gp75、alphaactinin-4、bcr-abl融合蛋白、casp-8、β-catenin、cdc27、cdk4、cdkn2a、coa-l、dek-can融合蛋白、ef2、etv6-aml1融合蛋白、ldlr-岩藻糖基转移酶as融合蛋白(ldlr-fucosyltransferaseasfusionprotein)、hla-a2、hla-all、hsp70-2、kiaa0205、mart2、mum-2、and3、neo-pap、myosinclassi、os-9、pml-rarα融合蛋白、ptprk、k-ras、n-ras、磷酸丙糖异构酶、gntv、herv-k-mel、na-88、sp17及trp2-int2、(mart-i)、e2a-prl、h4-ret、igh-igk、myl-rar、爱泼斯坦巴尔病毒抗原(epsteinbarrvirusantigens)、ebna、人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，hpv)抗原e6及e7、tsp-180、mage-4、mage-5、mage-6、p185erbb2、plsoerbb-3、c-met、nm-23hl、psa、tag-72-4、ca19-9、ca72-4、cam17.1、numa、k-ras、甲胎蛋白(alpha.-fetoprotein)、13hcg、bca225、btaa、ca125、ca15-3(ca27.29\bcaa)、ca195、ca242、ca-50、cam43、cd68\kp1、c0-029、fgf-5、0250、ga733(epcam)、htgp-175、m344、ma-50、mg7-ag、mov18、nb\170k、nyco-i、rcasi、sdccag16、ta-90(mac-2结合蛋白\亲环蛋白c相关蛋白)、taal6、tag72、tlp、tps、酪氨酸酶相关蛋白、trp-1或trp-2。[0597]可能表达的其他肿瘤抗原在本领域是众所周知的(例如，参见w000/20581；cancervaccinesandimmunotherapy(2000)edsstern、beverley及carroll，剑桥大学出版社，剑桥)。这些肿瘤抗原的所述数个序列可从公共数据库中随时获得，但也可在wo1992/020356ai、wo1994/005304ai、wo1994/023031ai、wo1995/020974ai、wo1995/023874ai及wo1996/026214ai中获得。[0598]替代地，或者附加地，可以使用例如通过活检(biopsy)从所述受试者获得的数个癌细胞来识别一肿瘤抗原。[0599]因此，根据数个特定实施例，所述刺激剂包含一癌细胞。[0600]根据数个特定实施例，所述调节步骤在一抗癌剂存在下进行。[0601]根据数个特定实施例，在所述调节步骤后纯化所述免疫细胞。[0602]因此，本发明还考虑了根据本发明的所述数个方法可获得的分离免疫细胞。[0603]根据数个特定实施例，根据本发明使用及/或获得的免疫细胞可在任何阶段在液氮温度下新鲜分离、储存(例如冷冻)长时间(例如月、年)以供将来使用；及细胞系。[0604]冷冻保存方法为本领域普通技术人员所熟知，并公开于于例如在国际专利申请公开号wo2007054160及wo2001039594以及美国专利申请公开号us20149108。[0605]根据数个特定实施例，根据本发明获得的细胞可以存储在一细胞库或存储或一存储设施中。[0606]因此，本教导进一步建议将所述数个分离的免疫细胞及本发明的方法用作(但不限于)过继免疫细胞治疗疾病的一来源以及与免疫抑制及感染有关的一疾病，所述过继免疫细胞治疗可受益于调节免疫细胞，例如激活免疫细胞(例如一超增殖性疾病)。[0607]因此，根据数个特定实施例，本发明的方法包括在所述激活步骤后将免疫细胞过继转移到需要免疫细胞的一受试者。[0608]根据数个特定实施例，提供了根据本发明方法可获得的免疫细胞，用于过继细胞治疗。[0609]根据本发明的数个特定实施例使用的所述数个细胞可以是自体的或非自体的；它们可以是同基因的或非同基因的：与受试者同种或异种；每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0610]本教导还考虑本发明(例如，所述异二聚体、编码所述异二聚体的一核酸结构或系统或表达所述异二聚体的一宿主细胞)的组合物在治疗一疾病的方法中的用途，所述疾病可受益于所述异二聚体的治疗。[0611]因此，根据本发明的一方面，提供了一种治疗可受益于所述异二聚体治疗的一疾病的方法，所述方法包括向需要所述异二聚体的一受试者施加编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一宿主细胞，从而治疗所述受试者的所述疾病。[0612]根据本发明的一附加或一替代方面，提供了所述异二聚体、编码所述异二聚体的核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一细胞，用于治疗可受益于所述异二聚体治疗的一疾病。[0613]根据本发明的一附加或一替代方面，提供了一种治疗可受益于调节数个免疫细胞的一疾病的方法，所述方法包括向需要所述异二聚体的一受试者施加编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一宿主细胞，从而治疗所述受试者的所述疾病。[0614]根据本发明的一附加或一替代方面，提供了一种异二聚体、编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一宿主细胞，用于治疗可受益于调节数个免疫细胞的一疾病。[0615]术语“治疗”指抑制、预防或阻止一病理(疾病、失调或医疗状况)的发展及/或导致病理或病理症状的减轻、缓解或消退。本领域技术人员将理解，可以使用各种方法及分析来评估一病理学的所述发展，并且类似地，可以使用各种方法及分析来评估一病理学的减轻、缓解或消退。[0616]如本文所用，术语“受试者”包括哺乳动物，例如任何年龄及性别的人类。根据数个特定实施例，术语“受试者”是指患有病理学(疾病、失调或医疗状况)的一受试者。根据数个特定实施例，所述术语包括有发生病理学风险的个体。[0617]根据数个特定实施例，所述受试者患有与表达所述i型膜蛋白或所述ii型膜蛋白的一配体或一受体的数个细胞相关的一疾病。[0618]根据数个特定实施例，所述受试者患有与表达所述ii型膜蛋白(例如4-1bb、cd40)的一配体或一受体的数个细胞相关的一疾病。[0619]根据数个特定实施例，所述受试者的数个染病细胞表达了所述i型膜蛋白或所述ii型膜蛋白的一配体或一受体。[0620]根据数个特定实施例，所述受试者的数个染病细胞表达了所述i型膜蛋白(例如pdl1、唾液酸、cd155)的一配体或一受体。[0621]根据数个特定实施例，所述受试者的数个染病细胞表达了所述ii型膜蛋白的一配体或一受体。[0622]根据本发明数个特定实施例可治疗的数个疾病的数个非限制性范例包括可受益于血管生成诱导的数个疾病(例如，当所述i型膜蛋白为vegfa且所述ii型膜蛋白为tweak或april时)、可受益于抑制血管生成的数个疾病(例如，当所述i型膜蛋白为eng，所述ii型膜蛋白为fasl、trail或vegi时)，以用于诱导骨形成(例如，当所述i型膜蛋白为bmp2，所述ii型膜蛋白为tweak或april时)，以用于抑制骨形成(例如，当所述i型膜蛋白为bmp3，所述ii型膜蛋白为rnakl、fasl、trail、vegi时)，以用于肝再生(例如，当所述i型膜蛋白为gfer，所述ii型膜蛋白为tweak或april时)，以及包括可受益于调节数个免疫细胞的数个疾病(例如，当所述i型膜蛋白及所述ii型膜蛋白中至少一是免疫调节剂时)。[0623]如本文所用，短语“可受益于调节数个免疫细胞的一疾病”是指所述受试者的免疫反应活性可能足以至少改善所述疾病的数个症状或延迟数个症状出现的数个疾病，然而，无论出于何种原因，所述受试者在这样做时的免疫反应活性都不是优选的。[0624]根据数个特定实施例，所述疾病可受益于激活数个免疫细胞。[0625]可从激活免疫细胞中获益的数个疾病的数个非限制性范例包括数个过度增殖性疾病、与免疫抑制相关的数个疾病、药物引起的免疫抑制(如mtor抑制剂、钙调神经磷酸酶抑制剂、类固醇)及数个感染。[0626]根据数个特定实施例，所述疾病包括一高增殖性疾病。[0627]根据数个特定实施例，所述高增殖性疾病包括硬化(sclerosis)、纤维化(fibrosis)、特发性肺纤维化(idiopathicpulmonaryfibrosis)、银屑病(psoriasis)、系统性硬化/硬皮病(systemicsclerosis/scleroderma)、原发性胆管炎(primarybiliarycholangitis)、原发性硬化性胆管炎(primarysclerosingcholangitis)、肝纤维化(liverfibrosis)、预防辐射诱导的肺纤维化(preventionofradiation-inducedpulmonaryfibrosis)、骨髓纤维化(myelofibrosis)或腹膜后纤维化(retroperitonealfibrosis)。[0628]根据数个其他特定实施例，所述高增殖疾病包括癌症。[0629]因此，根据本发明的另一方面，提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括向一有其需要的受试者施加本文公开的所述pd1-4-1bbl融合蛋白、包含所述pd1胺基酸序列的所述分离多肽及/或包含所述4-1bbl胺基酸序列的所述分离多肽。[0630]如本文所用，癌症一词包括恶性肿瘤(malignantcancer)及恶性前癌症(pre-malignantcancers)。[0631]关于癌前(pre-malignant)或良性(benign)形式的癌症，任选地，其数个组合物及数个方法可用于防止所述恶性前癌症的所述进展朝向一恶性形式(malignantform)。[0632]可通过本发明一些实施例的所述数个方法治疗的数个癌症可以是任何固体或非固体癌症及/或癌症转移。[0633]根据数个特定实施例，所述癌症包括恶性癌症(malignantcancer)。[0634]可通过本发明一些实施例的所述数个方法治疗的数个癌症可以是任何固体或非固体癌症及/或癌症转移。癌症的数个范例包括但不限于癌症(carcinoma)、淋巴瘤(lymphoma)、母细胞瘤(blastoma)、肉瘤(sarcoma)及白血病(leukemia)。此类癌症的数个更具体范例包括鳞状细胞癌(squamouscellcancer)、肺癌(包括小细胞肺癌(small-celllungcancer)、非小细胞肺癌(non-small-celllungcancer)、肺腺癌(adenocarcinomaofthelung)及肺鳞状癌(squamouscarcinomaofthelung))、腹膜癌(canceroftheperitoneum)、肝细胞癌(hepatocellularcancer)、肠胃癌或胃癌(gastricorstomachcancer)(包括胃肠道癌(gastrointestinalcancer))、胰腺癌(pancreaticcancer)、胶质母细胞瘤(glioblastoma)、宫颈癌(cervicalcancer)、卵巢癌(ovariancancer)、肝癌(livercancer)、膀胱癌(bladdercancer)、肝癌(hepatoma)、乳腺癌(breastcancer)、结肠癌(coloncancer)、结直肠癌(colorectalcancer)、子宫内膜癌或子宫癌(endometrialoruterinecarcinoma)、唾液腺癌(salivaryglandcarcinoma)、肾癌或肾癌(kidneyorrenalcancer)、肝癌(livercancer)、前列腺癌、外阴癌(vulvalcancer)、甲状腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)及各种头颈癌(headandneckcancer)，以及b细胞淋巴瘤(b-celllymphoma)(包括低度/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(lowgrade/follicularnon-hodgkin'slymphoma)(nhl)；小淋巴细胞(smalllymphocytic，sl)非霍奇金淋巴瘤(nhl)；中级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(intermediategrade/follicularnhl)；中级弥漫性非霍奇金淋巴瘤(intermediategradediffusenhl)；高级免疫母细胞性非霍奇金淋巴瘤(highgradeimmunoblasticnhl)；伯基特淋巴瘤(burkittlymphoma)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(diffusedlargebcelllymphoma，dlbcl)、高级别淋巴母细胞性nhl(highgradelymphoblasticnhl)；高级非分裂小细胞非霍奇金淋巴瘤(high-gradesmallnon-cleavedcellnhl)；大病性非霍奇金淋巴瘤(bulkydiseasenhl)；套细胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma)；艾滋病相关淋巴瘤(aids-relatedlymphoma)；及waldenstrom巨球蛋白血症；t细胞淋巴瘤(tcelllymphoma)、霍奇金淋巴瘤(hodgkinlymphoma)、慢性淋巴细胞白血病(chroniclymphocyticleukemia，cll)；急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia，all)；急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia，aml)、急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia，apl)、毛细胞白血病(hairycellleukemia)；慢性粒细胞白血病(chronicmyeloblasticleukemia，cml)；移植后淋巴增生性疾病(post-transplantlymphoproliferativedisorder，ptld)、以及与白内障(phakomatoses)、水肿(edema)(如与脑肿瘤相关的水肿)及梅格斯综合症(meigs'syndrome)相关的异常血管增生。优选地，所述癌症选自乳腺癌、结直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌(livercancer)、胰腺癌、软组织肉瘤(soft-tissuesarcoma)、卡波西肉瘤(kaposi'ssarcoma)、类癌(carcinoidcarcinoma)、头颈癌、黑色素瘤、卵巢癌、间皮瘤(mesothelioma)及多发性骨髓瘤。可用于本发明治疗的数个癌症状况包括数个转移性癌症。[0635]根据数个特定实施例，所述癌症包括恶性前癌症(pre-malignantcancer)。[0636]恶性前癌症(或癌症前期(pre-cancers))在本领域是众所周知的特征(例如，参考bermanjj.及hensonde.，2003年classifyingtheprecancers:ametadataapproach.bmcmedinformdecismak.3:8。可通过本发明的所述方法进行治疗的恶性前癌症类别包括获得性小或微小的恶性前癌症(acquiredsmallormicroscopicpre-malignantcancers)、具有核异型性的获得性大病变(acquiredlargelesionswithnuclearatypia)、遗传性增生综合症进展为癌症的前体病变、以及获得性弥漫性增生(acquireddiffusehyperplasias)及弥漫性化生(diffusemetaplasias)。数个小或微小的恶性前癌症(smallormicroscopicpre-malignantcancers)包括子宫颈高级鳞状上皮内病变(highgradesquamousintraepitheliallesionofuterinecervix，hgsil)、肛门上皮内瘤变(analintraepithelialneoplasia，ain)、声带发育不良、异常隐窝(aberrantcrypts)(结肠性的)、前列腺上皮内瘤变(prostaticintraepithelialneoplasia，pin)。获得性大的核异型性病灶(acquiredlargelesionswithnuclearatypia)的所述范例包括管状腺瘤(tubularadenoma)、伴蛋白异常血症的血管免疫母细胞性淋巴结病(angioimmunoblasticlymphadenopathywithdysproteinemia，aild)、非典型脑膜瘤(atypicalmeningioma)、胃息肉(gastricpolyp)、大斑块性副银屑病(largeplaqueparapsoriasis)、骨髓发育不良(myelodysplasia)、原位乳头状移行细胞癌(papillarytransitionalcellcarcinomain-situ)、难治性贫血伴母细胞过多(refractoryanemiawithexcessblasts)及施奈德乳头状瘤(schneiderianpapilloma)。遗传性增生综合症进展为癌症的前体病变的数个范例包括非典型葡萄胎综合症(atypicalmolesyndrome)、c细胞腺瘤病(ccelladenomatosis)及mea。获得性弥漫性增生及弥漫性化生的数个范例包括艾滋病(aids)、非典型淋巴增生(atypicallymphoidhyperplasia)、骨佩吉特病(paget'sdiseaseofbone)、移植后淋巴增生性疾病(post-transplantlymphoproliferativedisease)及溃疡性结肠炎。[0637]根据数个特定实施例，所述癌症为急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia)、肛门癌(analcancer)、基底细胞癌(basalcellcarcinoma)、b细胞非霍奇金淋巴瘤(b-cellnon-hodgkinlymphoma)、胆管癌(bileductcancer)、膀胱癌(bladdercancer)、乳腺癌(breastcancer)、宫颈癌(cervicalcancer)、慢性淋巴细胞白血病(chroniclymphocyticleukemia，cll)、慢性髓系白血病(chronicmyelocyticleukemia，cml)、结直肠癌(colorectalcancer)、皮肤t细胞淋巴瘤(cutaneoust-celllymphoma)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(diffuselargeb-celllymphoma)、子宫内膜癌(endometrialcancer)、食管癌(esophagealcancer)、输卵管癌(fallopiantubecancer)、滤泡性淋巴瘤(follicularlymphoma)、胃癌(gastriccancer)、胃食管(gastroesophageal，ge)交界癌(junctioncarcinomas)、生殖细胞肿瘤(germcelltumors)、生殖细胞瘤(germinomatous)(精原细胞瘤(seminomatous))、生殖细胞肿瘤(germcelltumors)、多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme，gbm)、胶质肉瘤(gliosarcoma)、头颈癌、肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma)、霍奇金淋巴瘤(hodgkinlymphoma)、下咽癌(hypopharyngealcancer)、喉癌(laryngealcancer)、平滑肌肉瘤(leiomyosarcoma)、套细胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma)、黑色素瘤、默克尔细胞癌(merkelcellcarcinoma)、多发性骨髓瘤、神经内分泌肿瘤、非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkinlymphoma)、非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer)、口腔癌(oralcavity)、口咽癌(oropharyngealcancer)、骨肉瘤(osteosarcoma)、卵巢癌、胰腺癌、外周神经鞘瘤(peripheralnervesheathtumor)(神经纤维肉瘤(neurofibrosarcoma))、外周t细胞淋巴瘤(peripheralt-celllymphomas，ptcl)、腹膜癌(peritonealcancer)、前列腺癌、肾细胞癌(renalcellcarcinoma)、唾液腺癌、皮肤癌、小细胞肺癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌(squamouscellcarcinoma)、滑膜肉瘤(synovialsarcoma)、睾丸癌(testicularcancer)、胸腺癌(thymiccarcinoma)、甲状腺癌、输尿管癌、尿道癌、子宫癌、阴道癌或外阴癌。[0638]根据数个特定实施例，所述癌症为急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia)、膀胱癌、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病(chronicmyelogenousleukemia)、结直肠癌、弥漫性大b细胞淋巴瘤(diffuselargeb-celllymphoma)、上皮性卵巢癌、上皮性肿瘤、输卵管癌、滤泡性淋巴瘤、多形性胶质母细胞瘤、肝细胞癌、头颈癌、白血病、淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、鼻咽癌、非霍奇金淋巴瘤(nonhodgkinlymphoma)、非小细胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌或肾细胞癌。[0639]根据数个特定实施例，所述癌症选自淋巴瘤、白血病及癌症所组成的群组。[0640]根据数个特定实施例，所述癌症选自淋巴瘤、白血病、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌及鳞状细胞癌所组成的群组。[0641]根据数个特定实施例，所述癌症为结肠癌。[0642]根据数个特定实施例，所述癌症为卵巢癌。[0643]根据数个特定实施例，所述癌症为肺癌。[0644]根据数个特定实施例，所述癌症为头颈癌。[0645]根据数个特定实施例，所述癌症为白血病。[0646]根据数个特定实施例，所述白血病选自急性非淋巴细胞白血病(acutenonlymphocyticleukemia)、慢性淋巴细胞白血病(chroniclymphocyticleukemia)、急性粒细胞白血病(acutegranulocyticleukemia)、慢性粒细胞白血病(chronicgranulocyticleukemia)、急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia)、成人t细胞白血病(adultt-cellleukemia)、白血病性白血病(aleukemicleukemia)、一白血病性白血病(leukocythemicleukemia)、碱性粒细胞白血病(basophylicleukemia)、母细胞白血病(blastcellleukemia)、牛白血病(bovineleukemia)、慢性粒细胞白血病(chronicmyelocyticleukemia)、皮肤白血病(leukemiacutis)、胚胎白血病(embryonalleukemia)、嗜酸性白血病(eosinophilicleukemia)、罗斯白血病(ross'leukemia)、毛细胞白血病(hairy-cellleukemia)、成血细胞白血病(hemoblasticleukemia)、成血细胞白血病(hemocytoblasticleukemia)、成血细胞白血病(histiocyticleukemia)、组织细胞白血病(histiocyticleukemia)、干细胞白血病(stemcellleukemia)、急性单核细胞白血病(acutemonocyticleukemia)、白细胞减少性白血病(leukopenicleukemia)、淋巴白血病(lymphaticleukemia)、淋巴细胞白血病(lymphoblasticleukemia)、淋巴细胞白血病(lymphocyticleukemia)、淋巴细胞白血病(lymphogenousleukemia)、淋巴细胞白血病(lymphoidleukemia)、淋巴肉瘤细胞白血病(lymphosarcomacellleukemia)、肥大细胞白血病(mastcellleukemia)、巨核细胞白血病(megakaryocyticleukemia)、微髓母细胞白血病(micromyeloblasticleukemia)、单核细胞白血病(monocyticleukemia)、粒细胞白血病(myeloblasticleukemia)、粒细胞白血病(myelocyticleukemia)、粒细胞白血病(myeloidgranulocyticleukemia)、粒单核细胞白血病(myelomonocyticleukemia)、奈杰利白血病(naegelileukemia)、浆细胞白血病(plasmacellleukemia)、浆细胞白血病(plasmacyticleukemia)、早幼粒细胞白血病(promyelocyticleukemia)、里德细胞白血病(riedercellleukemia)、席林白血病(schilling'sleukemia)、干细胞白血病(stemcellleukemia)、亚白血病(subleukemicleukemia)及未分化细胞白血病(undifferentiatedcellleukemia)所组成的群组。[0647]根据数个特定实施例，所述白血病为早幼粒细胞白血病(promyelocyticleukemia)、急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia)或慢性髓系白血病(chronicmyelogenousleukemia)。[0648]根据数个特定实施例，所述癌症为淋巴瘤。[0649]根据数个特定实施例，所述淋巴瘤为b细胞淋巴瘤[0650]根据数个特定实施例，所述淋巴瘤为t细胞淋巴瘤。[0651]根据数个其他特定实施例，所述淋巴瘤为霍奇金淋巴瘤(hodgkinslymphoma)。[0652]根据数个特定实施例，所述淋巴瘤为非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkinslymphoma)。[0653]根据数个特定实施例，所述非霍奇金淋巴瘤是从以下所组成的一群组中选择的一者：侵袭性nhl、转化性nhl、惰性nhl、复发性nhl、难治性nhl、低度非霍奇金淋巴瘤(lowgradenon-hodgkin’slymphoma)、滤泡性淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、b细胞淋巴瘤、t细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(mantlecelllymphoma)、伯基特淋巴瘤(burkitt'slymphoma)、nk细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞淋巴瘤及皮肤t细胞癌，包括蕈样肉芽肿/塞兹里综合症(mycososfungoides/sezrysyndrome)。[0654]根据数个特定实施例，所述癌症为多发性骨髓瘤。[0655]根据至少一些实施例，所述多发性骨髓瘤选自以下所组成的群组:产生数个kappa型轻链及/或数个lambda型轻链的数个多发性骨髓瘤癌；侵袭性多发性骨髓瘤(aggressivemultiplemyeloma)，包括原发性浆细胞白血病(primaryplasmacellleukemia，pcl)；可发展为多发性骨髓瘤的良性浆细胞疾病(benignplasmacelldisorders)，如mgus(意义未定的单克隆丙种球蛋白病(monoclonalgammopathyofundeterminedsignificance))、waldenstrom巨球蛋白血症(wm，也称为淋巴浆细胞性淋巴瘤)；也可能发展为多发性骨髓瘤的阴燃性多发性骨髓瘤(smolderingmultiplemyeloma，smm)、惰性多发性骨髓瘤(indolentmultiplemyeloma)、恶性癌前多发性骨髓瘤；原发性淀粉样变(primaryamyloidosis)。sgranulomatosis)、大动脉炎(takayasu’sarteritis)、川崎综合症(kawasakisyndrome)(praprotniks.等人，wienklinwochenschr2000年8月25日；112(15-16)：660)、抗viii因子自身免疫性疾病(anti-factorviiiautoimmunedisease)(lacroixdesmazess.等人，seminthrombhemost.2000；26(2):157)、坏死性小血管炎(necrotizingsmallvesselvasculitis)、显微镜下多血管炎(microscopicpolyangiitis)、丘尔格及施特劳斯综合症(churgandstrausssyndrome)、pauci-免疫局灶性坏死及新月体肾炎(pauci-immunefocalnecrotizingandcrescenticglomerulonephritis)(noellh.annmedinterne，巴黎，2000年5月；151(3)：178)、抗磷脂综合症(antiphospholipidsyndrome)(flamholzr.等人，jclinapheresis1999；14(4)：171)、抗体诱导的心力衰竭(antibody-inducedheartfailure)(wallukatg.等人，amjcardiol，1999年6月17日；83(12a)：75h)、血小板减少性紫癜(thrombocytopenicpurpura)(mocciaf.annitalmedint.1999apr-jun；14(2):114；semplejw.等人，blood1996may15；87(10):4245)；自身免疫性溶血性贫血(autoimmunehemolyticanemia)(efremovdg.等人，leuklymphoma，1998年1月；28(3-4)：285；sallahs.等人，annhemal，1997年3月；74(3)：139)、查加斯病中的心脏自身免疫(cardiacautoimmunityinchagas’disease)(cunhanetoe.等人，jclininvest，1996年10月15日；98(8)：1709)及抗辅助性t淋巴细胞自身免疫(anti-helpertlymphocyteautoimmunity)(caporossiap.等人，viralimmunol，1998；11(1)：9)。[0666]数个自身免疫性类风湿性疾病的数个范例包括但不限于类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis)(krennv.等人，histolhistopathol，2000年7月；15(3)：791；tischr，mcdevittho.procnatlacadsciunitssa，1994年1月18日；91(2)：437)及强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis)(janvoswinkel等人，2001年；3(3):189).[0667]自身免疫性腺病的数个范例包括但不限于胰腺疾病、i型糖尿病、甲状腺疾病、格雷夫斯病(graves’disease)、甲状腺炎、自发性自身免疫性甲状腺炎、桥本甲状腺炎(hashimoto’sthyroiditis)、特发性粘液水肿(idiopathicmyxedema)、卵巢自身免疫(ovarianautoimmunity)、自身免疫性抗精子不育(autoimmuneanti-sperminfertility)、自身免疫性前列腺炎(autoimmuneprostatitis)及i型自身免疫性多腺体综合症(typeiautoimmunepolyglandularsyndrome)。数个疾病包括但不限于胰腺自身免疫性疾病、1型糖尿病(castanol.andeisenbarthgs.ann.rev.immunol.8:647；zimmetp.diabetesresclinpract1996年10月；34suppl:s125)、自身免疫性甲状腺疾病、格雷夫斯病(graves’disease)(orgiazzij.endocrinolmetabclinnortham2000jun；29(2):339；sakatas.等人，molcellendocrinol1993mar；92(1):77)、自发性自身免疫性甲状腺炎(braley-mullenh.andyus,jimmunol，2000年12月15日；165(12):7262)、桥本甲状腺炎(hashimoto’sthyroiditis)(toyodan.等，nipponrinsho，1999年8月；57(8)：1810)、特发性粘液水肿(idiopathicmyxedema)(mitsumat.nipponrinsho.，1999年8月；57(8):1759)；卵巢自身免疫(garzakm.等人，jreprodimmunol.，1998年2月；37(2)：87)，自身免疫抗精子不育(diekmanab.等人，amreprodimmunol.，2000年3月；自身免疫性前列腺炎(alexanderrb.等人，urology，1997年12月；50(6)：893)及i型自身免疫性多腺体综合症(harat.等人，blood.，1991年3月1日；77(5)：1127)。[0668]自身免疫性胃肠疾病的数个范例包括但不限于慢性炎症性肠道疾病(chronicinflammatoryintestinaldiseases)(garciaherolaa.等人，gastroenterolhepatol.2000jan；23(1):16)、乳糜泻(celiacdisease)(landauye.及shoenfeldy.harefuah，2000年1月16日；138(2):122)、结肠炎、回肠炎及克罗恩病(crohn’sdisease)。[0669]自身免疫性皮肤病的实例包括但不限于自身免疫性大疱性皮肤病(autoimmunebullousskindiseases)，例如但不限于寻常型天疱疮(pemphigusvulgaris)、大疱性类天疱疮(bullouspemphigoid)及落叶型天疱疮(pemphigusfoliaceus)。[0670]自身免疫性肝病的数个实例包括但不限于肝炎(hepatitis)、自身免疫性慢性活动性肝炎(francoa.等人，clinimmunolimmunopathol，1990年3月；54(3):382)、原发性胆汁性肝硬化(primarybiliarycirrhosis)(jonesde.clinsci(colch)，1996年11月；91(5):551；strassburgcp.等人，eurjgastroenterolhepatol.，1999年6月；11(6):595)及自身免疫性肝炎(mannsmp.jhepatol，2000年8月；33(2):326)。[0671]自身免疫性神经疾病的数个范例包括但不限于多发性硬化症(multiplesclerosis)(crossah.等人，jneuroimmunol，2001年1月1日；112(1-2)：1)、阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease)(oronl.等人，jneuraltransmsuppl，1997年；49；77)、重症肌无力(myastheniagravis)(infanteaj.及kraige，intrevimmunol，1999年；18(1-2)：83；oshimam.等人，eurjimmunol，1990年12月；20(12):2563)、神经病变、运动神经病变(kornbergaj.jclinneurosci.，2000年5月；7(3):191)；格林-巴利综合症及自身免疫性神经病(guillain-barresyndromeandautoimmuneneuropathies)(kusunokis.amjmedsci.，2000年4月；319(4):234)、肌无力(myasthenia)，兰伯特-伊顿肌无力综合症(lambert-eatonmyasthenicsyndrome)(takamorim.amjmedsci.，2000年4月；319(4):204)；副肿瘤性神经疾病(paraneoplasticneurologicaldiseases)、小脑萎缩(cerebellaratrophy)、副肿瘤性小脑萎缩(paraneoplasticcerebellaratrophy)及僵硬综合症(stiff-mansyndrome)(hiemstrahs.等人，procnatalacadsciunitssa，2001年3月27日；98(7)：3988)；非副肿瘤性僵硬综合症(non-paraneoplasticstiffmansyndrome)、进行性小脑萎缩(progressivecerebellaratrophies)、脑炎(encephalitis)、拉斯穆森脑炎(rasmussen’sencephalitis)、肌萎缩侧索硬化症(amyotrophiclateralsclerosis)、sydeham舞蹈病(sydehamchorea)、抽动秽语综合症(gillesdelatourettesyndrome)及自身免疫性多发性内分泌疾病(autoimmunepolyendocrinopathies)(antoinejc.及honnoratj.revneurolo(巴黎)，2000年1月；156(1):23)；免疫障碍性神经病(dysimmuneneuropathies)(nobileorazioe.等人，electroencephalogrclinneurophysiolsuppl，1999年；50:419)；获得性神经肌强直(acquiredneuromyotonia)、多发性先天性关节炎(arthrogryposismultiplexcongenita)(vincenta.等人，annnyacadsci.，1998年5月13日；神经炎、视神经炎(soderstromm.等人，jneurolneurosurgpsychiatry，1994年5月；57(5)：544)及神经退行性疾病(neurodegenerativediseases)。[0672]自身免疫性肌肉疾病的数个范例包括但不限于肌炎(nephritis)、自身免疫性肌炎及原发性干燥综合症(feiste.等人，intarchallergyimmunol，2000年9月；123(1)：hydrochloride)；双萘芬二甲磺酸盐(bisnafidedimesylate)；比泽列辛(bizelesin)；硫酸博来霉素(bleomycinsulfate)；布雷奎那钠(brequinarsodium)；溴匹明(bropirimine)；白消安(busulfan)；放线菌素(cactinomycin)；月桂酮(calusterone)；卡拉酰胺(caracemide)；卡贝默(carbetimer)；卡铂(carboplatin)；卡莫司汀(carmustine)；盐酸卡比星(carubicinhydrochloride)；卡泽莱辛(carzelesin)；头孢呋辛(cedefingol)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；环霉素(cirolemycin)；顺铂(cisplatin)；克拉屈滨(cladribine)；crisnatol甲磺酸盐；环磷酰胺(cyclophosphamide)；阿糖胞苷(cytarabine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；放线菌素(dactinomycin)；盐酸柔红霉素(daunorubicinhydrochloride)；地西他滨(decitabine)；去甲铂(dexormaplatin)；地扎鸟嘌呤(dezaguanine)；地扎鸟嘌呤甲磺酸盐(dezaguaninemesylate)；二嗪酮(diaziquone)；多西他赛(docetaxel)；阿霉素(doxorubicin)；盐酸多柔比星(doxorubicinhydrochloride)；屈洛昔芬(droloxifene)；屈洛昔芬柠檬酸盐(droloxifenecitrate)；丙酸屈莫司他酮(dromostanolonepropionate)；度唑霉素(duazomycin)；依达曲沙(edatrexate)；盐酸依氟鸟氨酸(eflornithinehydrochloride)；依沙芦星(elsamitrucin)；恩洛铂(enloplatin)；促进(enpromate)；表丙啶(epipropidine)；盐酸表柔比星(epirubicinhydrochloride)；厄布洛唑(erbulozole)；盐酸埃索比星(esorubicinhydrochloride)；雌莫司汀(estramustine)；雌莫司汀磷酸钠(estramustinephosphatesodium)；依硝唑(etanidazole)；依托泊苷(etoposide)；磷酸依托泊苷(etoposidephosphate)；依托托林(etoprine)；盐酸法曲唑(fadrozolehydrochloride)；法扎拉滨(fazarabine)；芬维a胺(fenretinide)；氟尿苷(floxuridine)；磷酸氟达拉滨(fludarabinephosphate)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；氟西他滨(flurocitabine)；磷喹酮(fosquidone)；磷霉素钠(fostriecinsodium)；吉西他滨(gemcitabine)；盐酸吉西他滨(gemcitabinehydrochloride)；羟基脲(hydroxyurea)；盐酸伊达比星(idarubicinhydrochloride)；异环磷酰胺(ifosfamide)；伊莫磷辛(ilmofosine)；干扰素alfa-2a；干扰素alfa-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素beta-ia；干扰素gamma-ib；异丙铂(iproplatin)；盐酸伊立替康(irinotecanhydrochloride)；兰瑞肽醋酸盐(lanreotideacetate)；来曲唑(letrozole)；醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)；盐酸利阿唑(liarozolehydrochloride)；洛美曲索钠(lometrexolsodium)；洛莫司汀(lomustine)；盐酸氯索蒽醌(losoxantronehydrochloride)；马索普罗考(masoprocol)；美登素(maytansine)；盐酸甲氯乙胺(mechlorethaminehydrochloride)；醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)；醋酸美仑孕酮(melengestrolacetate)；马法兰(melphalan)；梅诺加里尔(menogaril)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；甲氨蝶呤钠(methotrexatesodium)；美托品(metoprine)；梅图德帕(meturedepa)；米替度胺(mitindomide)；线粒体癌(mitocarcin)；丝裂霉素(mitocromin)；丝裂霉素(mitogillin)；丝裂霉素(mitomalcin)；丝裂霉素(mitomycin)；线粒体(mitosper)；米托坦(mitotane)；盐酸米托蒽醌(mitoxantronehydrochloride)；霉酚酸(mycophenolicacid)；诺考达唑(nocodazole)；诺加霉素(nogalamycin)；奥玛铂(ormaplatin)；奥昔兰(oxisuran)；紫杉醇(paclitaxel)；天冬酰胺(pegaspargase)；佩利霉素(peliomycin)；喷他莫司汀(pentamustine)；硫酸呱洛霉素(peplomycinsulfate)；环磷酰胺(perfosfamide)；匹泊布罗曼(pipobroman)；呱泊硫丹(piposulfan)；盐酸吡罗蒽醌(piroxantronehydrochloride)；普利霉素(plicamycin)；普洛美坦(plomestane)；聚合物钠(porfimersodium)；波非霉素(porfiromycin)；泼尼莫司汀(prednimustine)；盐酸丙卡巴肼(procarbazinehydrochloride)；嘌呤霉素(puromycin)；盐酸嘌呤霉素(puromycinhydrochloride)；吡唑啉(pyrazofurin；riboprine)；核糖核酸(rogletimide)；罗格莱胺(rogletimide)；沙芬醇(safingol)；沙芬酚盐酸盐(safingolhydrochloride)；西莫司汀(semustine)；辛曲嗪(simtrazene)；司帕膦酸钠(sparfosatesodium)；稀疏霉素(sparsomycin)；螺锗盐酸盐(spirogermaniumhydrochloride)；螺莫司汀(spiromustine)；螺铂(spiroplatin)；链霉素(streptonigrin)；链脲佐菌素(streptozocin)；磺胺嘧啶(sulofenur)；泰利霉素(talisomycin)；紫杉醇(taxol)；特可加兰钠(tecogalansodium)；替加氟(tegafur)；盐酸泰洛蒽醌(teloxantronehydrochloride)；替莫泊芬(temoporfin)；替尼泊苷(teniposide)；特罗昔隆(teroxirone)；睾酮(testolactone)；硫胺嘧啶(thiamiprine)；硫鸟嘌呤(thioguanine)；噻替帕(thiotepa)；噻唑呋喃(tiazofuirin)；替拉扎明(tirapazamine)；盐酸托泊替康(topotecanhydrochloride)；柠檬酸托瑞米芬(toremifenecitrate)；醋酸曲霉酮(trestoloneacetate)；磷酸三西立宾(triciribinephosphate)；曲美沙(trimetrexate)；曲美沙葡醣醛酸(trimetrexateglucuronate)；曲普瑞林(triptorelin)；盐酸妥布唑(tubulozolehydrochloride)；尿嘧啶芥末(uracilmustard)；乌瑞德帕(uredepa)；维普肽(vapreotide)；维替泊芬(verteporfin)；长春碱硫酸盐(vinblastinesulfate)；长春新碱硫酸盐(vincristinesulfate)；万地辛(vindesine)；硫酸长春碱(vindesinesulfate)；硫酸长春吡啶(vinepidinesulfate)；甘氨酸硫酸盐(vinglycinatesulfate)；硫酸长春新碱(vinleurosinesulfate)；酒石酸长春瑞滨(vinorelbinetartrate)；长春花碱硫酸盐(vinrosidinesulfate)；硫酸文唑烷(vinzolidinesulfate)；伏罗唑(vorozole)；泽尼铂(zeniplatin)；抑菌素(zinostatin)；盐酸佐鲁比星(zorubicinhydrochloride)。其他抗肿瘤剂包括公开于antineoplasticagents第52章(paulcalabresi及brucea.chabner)、以及goodman及gilman的“thepharmacologicalbasisoftherapeutics”，第八版，1990年，mcgraw-hill,inc.(卫生专业部(healthprofessionsdivision))。[0684]根据数个特定实施例，所述抗癌剂包含u抗体。[0685]根据数个特定实施例，所述抗体选自利妥昔单抗(rituximab)、西妥昔单抗(cetuximab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、来曲单抗(edrecolomab)、阿来单抗(alemtuzumab)、吉姆图珠单抗(gemtuzumab)、伊布单抗(ibritumomab)、帕尼单抗-贝伐单抗(panitumumabbelimumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、比伐单抗-美坦辛(bivatuzumabmertansine)、布利那单抗(blinatumomab)、布隆妥单抗(blontuvetmab)、布仑妥昔单抗-韦多汀(brentuximabvedotin)、卡妥单抗(catumaxomab)、西舒单抗(cixutumumab)、达利珠单抗(daclizumab)、阿达利单抗(adalimumab)、苯妥单抗(bezlotoxumab)、certolizumabpegol、citatuzumabbogatox、daratumummab、dinutuximab、elotuzumab，ertumaxomb、etaracizumab、gemtuzumabozogamicin、girentuximab，necitumumab、obinutuzumab、ofatumumab、pertuzumab、ramucirumab，siltuximab、tositumomab、nivolumab、彭布罗利珠单抗(pembrolizumab)、杜瓦卢马(durvalumab)、阿替唑单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)及伊普利单抗(ipilimumab)所组成的群组。[0686]根据数个特定实施例，所述抗体选自利妥昔单抗(rituximab)及西妥昔单抗(cetuximab)所组成的群组。[0687]根据数个特定实施例，所述治疗剂或抗癌剂包含imid(例如沙利度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomie)、泊马利度胺(pomalidomide))。[0688]根据数个特定实施例，所述imid选自沙利度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomie)、泊马利度胺(pomalidomide)所组成的群组。[0689]根据数个特定实施例，与本发明一些实施例的组合物组合施用的治疗剂包含一抗感染剂(例如，抗生素及抗病毒剂)。[0690]根据数个特定实施例，与本发明一些实施例的组合物组合施用的治疗剂包含所述免疫抑制剂(例如gcsf及其他骨髓刺激剂、类固醇)。[0691]根据数个特定实施例，所述组合疗法具有一相加效应。[0692]根据数个特定实施例，所述组合疗法具有一协同效应。[0693]根据本发明的另一方面，提供了一种制品，包括包装用于治疗一疾病的一治疗剂的一包装材料；以及所述异二聚体、编码所述异二聚体的一核酸构建体或系统或包含所述异二聚体的一宿主细胞。[0694]根据数个特定实施例，所述制品被鉴定用于治疗可受益于用所述异二聚体治疗的一疾病，例如可受益于调节数个免疫细胞的一疾病。[0695]根据数个特定实施例，用于治疗所述疾病的所述治疗剂；所述异二聚体、编码所述异二聚体的所述核酸构建体或系统或表达所述异二聚体的所述宿主细胞被包装在数个单独的容器中。[0696]根据数个特定实施例，用于治疗所述疾病的治疗剂；所述异二聚体、编码所述异二聚体的所述核酸构建体或系统或表达所述异二聚体的所述宿主细胞被包装在一共调配物中。[0697]根据数个特定实施例，所述异二聚体附着于或包含一异源治疗部分。所述治疗部分可以是任何分子，包括小分子化合物及多肽。[0698]可与本发明数个特定实施例一起使用的治疗部分的数个非限制性范例包括一细胞毒性部分、一毒性部分、一细胞因子部分、一免疫调节部分、一多肽、一抗体、一药物、一化学品及/或一放射性同位素。[0699]根据本发明的一些实施例，通过将编码本发明的一些实施例的所述多肽的所述多核苷酸与编码所述治疗部分的核酸序列翻译融合，使所述治疗部分结合。[0700]附加地或替代地，可以使用本领域技术人员已知的任何共轭方法，将治疗部分化学共轭(偶联)到本发明一些实施例的所述异二聚体。例如，可以使用3-(2-吡啶基二硫代)丙酸n-羟基丁二酰亚胺酯(3-(2-pyridyldithio)propionicacidester)(也称为n-丁二酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(n-succinimidyl3-propionate))(“sdpd”)(sigma，cat.编号：p-3415；例如，参见cumber等人，1985年，methodsofenzymology，112:207-224)、一戊二醛结合程序(glutaraldehydeconjugationprocedure)(参见g.t.hermanson，1996年，antibodymodificationandconjugation，inbioconjugatetechniques，圣地亚哥学术出版社)、或一碳二亚胺结合程序(carbodiimideconjugationprocedure)[参见例如j.march，advancedorganicchemistry:reaction's,mechanism,andstructure，第349-50及372-74(3版)，1985年；b.neises等人，1978年，angewchem，int.ed.engl.，17:522；a.hassner等人，1978年，tetrahedronlett.，4475；e.p.boden等人，1986年，j.org，chem.50:2394及l.j.mathias1979，synthesis561]。[0701]例如，可以使用本领域广泛采用的数个标准化学合成技术将一治疗部分连接到本发明的一些实施例的所述异二聚体上[参见例如hypertexttransferrprotocol://worldwideweb(dot)chemistry(dot)org/portal/chemistry)]，例如通过一肽键(当功能部分是一多肽时)或通过共价键与中间连接元件(例如连接肽或其他化学部分，例如有机聚合物)使用任何合适的直接或间接化学连接。数个嵌合肽可通过在所述数个肽的羧基(c)或氨基(n)端的键连接，或通过与内部化学基团(例如直链、支链或环状侧链、内部碳原子或氮原子等)的键连接。[0702]如本文所用，术语“胺基酸序列”、“蛋白质”、“肽”、“多肽”及“蛋白质性部分”在本文中互换使用，包括数个天然肽(降解产物、合成肽或重组肽)及数个拟肽体(peptidomimetics)(通常为合成肽)、以及肽类似物的类肽(peptoids)及数个半肽(semipeptoids)，其可能具有例如使肽在一身体内更稳定或更能穿透数个细胞的修饰。此类修饰包括但不限于n端修饰、c端修饰、肽键修饰、主链修饰及残基修饰。制备拟肽化合物的数个方法在本领域是众所周知的，并且例如在文献quantitativedrugdesign,c.a.ramsdengd.,chapter17.2,f.choplinpergamonpress(1992)中规定，通过引用将其并入本文，如同本文中完全阐述的一样。下文提供了这方面的更多细节。[0703]所述肽内的数个肽键(-co-nh-)可例如被n-甲基化酰胺键(-n(ch3)-co-)、酯键(-c(＝o)-o-)、酮亚甲基键(-co-ch2-)、亚砜基甲基键(-s(＝o)-ch2-)、α-aza键(-nh-n(r)-co-)取代，其中r为任何烷基(例如甲基)、胺键(-ch2-nh-)、硫化物键(-ch2-s-)、乙烯键(-ch2-ch2-)、羟基乙烯键(-ch(oh)-ch2-)、硫酰胺键(-cs-nh-)、烯烃双键(-ch＝ch-)、氟化烯烃双键(-cf＝ch-)、逆酰胺键(-nh-co-)、肽衍生物(-n(r)-ch2-co-)，其中r是自然存在于碳原子上的“正常”侧链。[0704]这些修饰可以发生在所述肽链上的任何键上，甚至可以同时发生在几个(2-3)键上。[0705]天然芳香族胺基酸trp、tyr及phe可被非天然芳香族胺基酸取代，例如1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylicacid)(tic)、萘丙氨酸(naphthylalanine)、phe的环甲基化衍生物、phe或o-甲基-tyr的卤代衍生物。[0706]本发明的一些实施例的所述数个肽还可包括一或多种经修饰的胺基酸或一或多种非胺基酸单体(例如脂肪酸、复合碳水化合物等)。[0707]术语“胺基酸”或“数个胺基酸”被理解为包括20种天然存在的胺基酸；这些胺基酸通常在体内进行转译后修饰，例如，包括羟脯氨酸(hydroxyproline)、磷酸丝氨酸(phosphoserine)及磷酸苏氨酸(phosphothreonine)；以及其他不寻常的胺基酸，包括但不限于2-氨基己二酸(2-aminoadipicacid)、羟基赖氨酸(hydroxylysine)、异桥糖酸(isodesmosine)、缬氨酸(nor-valine)、亮氨酸(nor-leucine)及鸟氨酸(ornithine)。此外，术语“胺基酸”包括d-及l-胺基酸。[0708]下面的表1及表2列出了天然存在的胺基酸(表1)及非常规或修饰的胺基酸(例如，合成的，表2)，它们可以与本发明的一些实施例一起使用。[0709]表1[0710][0711][0712]表2[0713][0714][0715][0716][0717][0718][0719][0720][0721][0722][0723][0724][0725]本发明的一些实施例的所述数个肽优选地以一线性形式使用，尽管将理解，在环化不会严重干扰肽特性的情况下，也可以使用所述肽的环形式。[0726]由于本发明的异二聚体优选地用于要求异二聚体为可溶性形式的疗法中，因此本发明的一些实施例的肽包括一或多种非天然或天然极性胺基酸，包括但不限于丝氨酸及苏氨酸，由于其含羟基的侧链能够增加肽的溶解性。[0727]本发明的肽的胺基酸可以保守地或非保守地被取代。[0728]本文使用的术语“保守取代”是指用一天然或非天然存在的胺基酸或具有类似立体特性的拟肽取代肽中天然序列中存在的胺基酸。如果要取代的天然胺基酸的所述侧链是极性或疏水性的，则保守取代应使用一天然胺基酸、一非天然存在的胺基酸、或具有极性或疏水性的一拟肽部分(除了具有与被取代胺基酸侧链相同的空间特性)。[0729]由于天然胺基酸通常根据其性质进行分组，考虑到根据本发明，用空间相似的非带电胺基酸取代带电胺基酸被认为是保守取代，可以容易地确定由天然存在的胺基酸进行的保守取代。[0730]为了通过非天然胺基酸产生保守取代，也可以使用本领域众所周知的胺基酸类似物(合成胺基酸)。天然胺基酸的一拟肽体在熟练从业者已知的文献中有很好的记载。[0731]当影响保守取代时，所述取代胺基酸应在所述侧链中具有与所述原始胺基酸相同或相似的官能团。[0732]提供功能相似的胺基酸的保守取代表是本领域熟知的。关于哪些胺基酸变化可能是表型沉默的指导也可以在bowie等人，1990年，science247：13061310中找到。这种保守修饰的数个变体是除了而不是排除多态性变体、种间同源物及等位基因。典型的保守取代包括但不限于：1)丙氨酸(a)、甘氨酸(g)；2)天冬氨酸(d)、谷氨酸(e)；3)天冬酰胺(n)、谷氨酰胺(q)；4)精氨酸(r)、赖氨酸(k)；5)异亮氨酸(i)、亮氨酸(l)、蛋氨酸(m)、缬氨酸(v)；6)苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)、色氨酸(w)；7)丝氨酸(s)、苏氨酸(t)；及8)半胱氨酸(c)、甲硫氨酸(m)(参见，例如，creighton,proteins(1984))。胺基酸可以根据与侧链相关的性质进行取代，例如，具有极性侧链的胺基酸可以被取代，例如丝氨酸(s)及苏氨酸(t)；基于侧链电荷的胺基酸，例如精氨酸(r)及组氨酸(h)；及具有疏水侧链的胺基酸，例如缬氨酸(v)及亮氨酸(l)。正如所指出的，变化通常具有较小的性质，例如不会显着影响蛋白质折迭或活性的保守胺基酸取代。[0733]如本文所用的短语“非保守取代”是指将存在于亲本序列中的胺基酸取代为具有不同电化学及/或空间特性的另一天然或非天然存在的胺基酸。因此，取代胺基酸的所述侧链可以显着大于(或小于)被取代的天然胺基酸的侧链及/或可以具有与被取代的胺基酸具有显着不同电子特性的官能团。这种类型的非保守取代的数个范例包括用苯丙氨酸(phenylalanine)或环己基甲基甘氨酸(cycohexylmethylglycine)取代丙氨酸(alanine)、用异亮氨酸(isoleucine)取代甘氨酸(glycine)、或用nhch[(ch2)5cooh]co取代天冬氨酸(asparticacid)。落入本发明范围内的那些非保守取代是仍然构成具有抗菌特性的肽的那些。[0734]本发明的所述数个肽的所述n及c末端可以被官能团保护。合适的官能团描述于green及wuts，“protectinggroupsinorganicsynthesis”，johnwileyandsons，chapter5and7,1991，其教示通过引用并入本文。优选的保护基团是促进与其连接的化合物转运到细胞中的那些，例如，通过降低化合物的亲水性及增加化合物的亲油性。[0735]根据数个特定实施例，一或多种胺基酸可以通过例如添加一官能团来修饰(概念上视为“化学修饰的”)。例如，天然序列中出现的侧链胺基酸残基可以任选地被修饰，尽管如下文所述，所述蛋白质的其他部分可以任选地被修饰，除了或代替侧链胺基酸残基。如果遵循化学合成过程，例如通过添加一化学修饰的胺基酸，则可以在分子合成期间任选地进行修饰。然而，当胺基酸已经存在于所述分子中时，对胺基酸进行化学修饰(“原位”修饰)也是可能的。举例而言，可以通过基因合成、位点指引(site-directed)(例如，基于pcr)或随机诱变(randommutagenesis)(例如，ems)通过外切核酸酶缺失、通过化学修饰或通过融合编码异源结构域或结合的多核苷酸序列来引入对所述肽或蛋白质的修饰。[0736]如本文所用，术语“化学修饰”在提及一肽时是指通过天然过程如加工或其他转译后修饰或通过本领域熟知的化学修饰技术来修饰至少一胺基酸残基。非限制性示例性修饰类型包括羧甲基化、乙酰化、酰化、磷酸化、糖基化、酰胺化、adp-核糖基化、脂肪酰化、法呢基、异法呢基、碳水化合物基团、脂肪酸基团的添加(additionoffarnesylgroup,anisofarnesylgroup,acarbohydrategroup,afattyacidgroup)、用于缀合、功能化、gpi锚形成的一连接体(alinkerforconjugation,functionalization,gpianchorformation)、一脂质或脂质衍生物的共价连接(covalentattachmentofalipidorlipidderivative)、甲基化、十四烷基化、聚乙二醇化、异戊二烯化、磷酸化、泛素化或任何类似的过程及已知的保护/封闭基团。醚键可以任选地用于将丝氨酸(serine)或苏氨酸羟基(threoninehydroxyl)连接到一糖的羟基上。酰胺键(amidebonds)可任选用于将谷氨酸或天冬氨酸羧基连接到一糖上的一氨基上(garg及jeanloz，advancesincarbohydratechemistryandbiochemistry，第43卷，academicpress(1985)；kunz，ang.chem.int.ed.english26:294-308(1987))。还可以任选地在胺基酸及碳水化合物之间形成缩醛及缩酮键(acetalandketalbonds)。脂肪酸酰基衍生物可以任选地例如通过一游离氨基(例如赖氨酸)的酰化来制备(toth等人，peptides:chemistry,structureandbiology,rivierandmarshal,eds.,escompubl.,leiden,1078-1079(1990))。[0737]根据数个特定实施例，所述数个修饰包括向肽添加一环烷部分，如pct申请案wo2006/050262中所述，所述申请案通过引用并入本文，如同在本文中完整阐述一样。这些部分被设计用于与生物分子一起使用并且可以任选地用于赋予蛋白质各种特性。[0738]此外，任选地，可以修饰所述肽上的任何点。例如，可以任选地进行蛋白质上糖基化部分的聚乙二醇化，如pct申请案wo2006/050247中所述，所述申请案通过引用并入本文，如同在本文中完整阐述一样。一或多个聚乙二醇(peg)基团可任选地添加至o-连接及/或n-连接糖基化。peg基团可以任选地是支链的或直链的。任选地，任何类型的水溶性聚合物可以通过一糖基连接体连接到一蛋白质上的一糖基化位点。[0739]“peg化蛋白质”是指一蛋白质或具有生物活性的其一片段，其具有与蛋白质的胺基酸残基共价地结合的聚乙二醇(peg)部分。[0740]“聚乙二醇”或“peg”是指一聚亚烷基二醇化合物(polyalkyleneglycolcompound)或其一衍生物，具有或不具有偶联剂或具有偶联或活化部分(例如，具有硫醇、三氟甲磺酸酯、三甲苯磺酸酯(tresylate)、氮丙啶(azirdine)、环氧乙烷，或优选具有一马来酰亚胺部分(maleimidemoiety))。例如马来酰亚胺单甲氧基peg的化合物是本发明的示例性或活化的peg化合物。其它聚亚烷基二醇化合物，例如聚丙二醇，可用于本发明。其他合适的聚亚烷基二醇化合物包括但不限于以下类型的带电或中性聚合物：葡聚醣(dextran)、结肠酸(colominicacids)或其他基于碳水化合物的聚合物、胺基酸聚合物及生物素衍生物。[0741]根据数个特定实施例，所述肽被修饰以具有一改变的糖基化模式(即，从原始或天然糖基化模式改变)。如本文所用，“改变的”是指缺失一或多个碳水化合物部分及/或具有添加至原始蛋白质的至少一糖基化位点。[0742]蛋白质的糖基化通常是n-连接或o-连接的。n-连接是指碳水化合物部分连接到一天冬酰胺残基的所述侧链。所述数个三肽序列、天冬酰胺-x-丝氨酸(asparagine-x-serine)及天冬酰胺-x-苏氨酸(asparagine-x-threonine)(其中x是除脯氨酸之外的任何胺基酸)是所述碳水化合物部分酶促连接到天冬酰胺侧链的识别序列。因此，一多肽中这些三肽序列中任一者的存在产生了潜在的糖基化位点。o-连接糖基化是指糖n-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一者与羟基胺基酸连接，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可以使用5-羟基脯氨酸(5-hydroxyproline)或5-羟基赖氨酸(5-hydroxylysine)。[0743]通过改变所述肽的所述胺基酸序列，使其包含一或多个上述三肽序列(用于n-连接糖基化位点)，可以方便地将数个糖基化位点添加到一肽中。也可通过在原始肽序列中添加或取代一或多个丝氨酸或苏氨酸残基(用于o-连接糖基化位点)来进行改变。所述肽的胺基酸序列也可以通过在所述dna水平上引入改变而改变。[0744]增加所述肽上碳水化合物部分数量的另一方法是通过糖苷(glycosides)的化学或酶偶联(与所述肽的所述胺基酸残基)。根据所使用的偶联模式，所述数个糖可连接到(a)精氨酸及组氨酸，(b)游离羧基，(c)游离巯基，如半胱氨酸，(d)游离羟基，如丝氨酸、苏氨酸或羟脯氨酸，(e)芳香残基，如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸，或(f)谷氨酰胺的酰胺基。这些方法如wo87/05330、aplin及wriston、crccrit.rev.biochem.,22:259-306(1981)中所述。[0745]一肽上存在的任何碳水化合物部分的去除可以通过化学地、酶促地完成或在dna水平上引入数个变化来完成。化学脱糖需要将所述肽暴露于三氟甲基磺酸(trifluoromethanesulfonicacid)或一等效化合物中。这种处理会导致除连接糖(n-乙酰氨基葡萄糖(n-acetylglucosamine)或n-乙酰半乳糖胺(n-acetylgalactosamine))外的大部分或所有糖被切割，而使所述胺基酸序列保持完整。[0746]化学去糖基化描述于hakimuddin等人,arch.biochem.biophys.,259:52(1987)；及edge等人.,anal.biochem.,118:131(1981)。可以通过使用多种糖苷内切酶及外切糖苷酶来酶切数个肽上的数个碳水化合物部分，如于thotakura等人,meth.enzymol.,138:350(1987)中所述。[0747]根据数个特定实施例，所述肽包含一可检测标签。如本文所用，在一实施例中，术语“可检测标签”是指技术熟练的从业者使用现有技术可以检测到的任何部分。可检测的标签可以是数个肽序列。可选地，所述可检测标签可通过化学试剂或酶手段(例如蛋白质水解)去除。本发明的一些实施例的数个可检测标签可用于所述肽的纯化。例如，术语“可检测标签”包括甲壳素结合蛋白(cbp)-标签、麦芽糖结合蛋白(mbp)-标签、谷胱甘肽-s-转移酶(gst)-标签、聚(his)-标签、flag标签、表位标签(epitopetags)，例如v5标签、c-myc标签及ha标签，以及荧光标签，例如绿色荧光蛋白(gfp)、红色荧光蛋白(rfp)，黄色荧光蛋白(yfp)、蓝色荧光蛋白(bfp)及青色荧光蛋白(cfp)；以及这些标签的衍生物，或本领域已知的任何标签。术语“可检测标签”(detectabletag)还包括术语“可检测标记”(detectablemarker)。[0748]根据数个特定实施例，所述肽包含附在其n-末端的一可检测标签(例如聚(his)-标签)。[0749]根据数个特定实施例，所述肽包含附着到其c-末端的一可检测标签(例如聚(his)-标签)。[0750]根据数个特定实施例，所述肽的n-末端不包含一可检测标签(例如聚(his)-标签)。[0751]根据数个特定实施例，所述肽的c-末端不包含一可检测标签(例如聚(his)-标签)。[0752]根据数个特定实施例，所述肽融合到一可切割部分(cleavablemoiety)。因此，例如，为了促进恢复，所表达的编码序列可以被设计成编码本发明的一些实施例的所述肽及融合的可切割部分。在一实施例中，所述肽设计成使得其易于通过亲和层析分离；例如，通过固定在特定于可切割部分的一管柱上。在一实施例中，在所述肽及所述可切割部分之间设计一切割位点，并且可通过使用在所述位点特异性切割所述融合蛋白的一适当酶或试剂处理从色谱管柱释放所述肽[例如，参见booth等人,immunol.lett.19:65-70(1988)；及gardella等人,j.biol.chem.265:15854-15859(1990)]。根据数个特定实施例，所述肽为一分离肽。[0753]包含本发明的一些实施例中的相同实施例的所述数个肽及数个异二聚体可以通过肽合成领域的技术人员已知的任何技术来合成及纯化，例如但不限于数个固相及重组技术。[0754]对于固相肽合成，可在以下文献j.m.stewartandj.d.young,solidphasepeptidesynthesis,w.h.freemanco.(sanfrancisco),1963andj.meienhofer,hormonalproteinsandpeptides,vol.2,p.46,academicpress(newyork),1973中找到。关于经典溶液合成，参见文献g.schroderandk.lupke,thepeptides,vol.1,academicpress(newyork),1965。[0755]一般而言，这些方法包括将一或多个胺基酸或适当保护的胺基酸顺序添加到一生长的肽链中。通常，所述第一胺基酸的氨基或羧基受合适的一保护基保护。然后，在适于形成酰胺键的条件下，通过添加序列中具有适当保护的互补(氨基或羧基)基团的下一胺基酸，将所述受保护或衍生的胺基酸连接到惰性固体载体上或在溶液中使用。然后从新添加的胺基酸残基中去除保护基，然后添加下一胺基酸(适当保护)，依此类推。在所有所需的胺基酸以正确的顺序连接后，按顺序或同时移除任何剩余的保护基团(及任何固体载体)，以提供最终的肽化合物。通过对所述一般程序的简单修改，可以一次向一生长链中添加超过一个的胺基酸，例如，通过(在不使手性中心外消旋的条件(conditionswhichdonotracemizechiralcenters)下)将一受保护的三肽与一适当保护的二肽偶联，在脱保护后形成一五肽等。肽合成的进一步描述在美国专利案第6472505号。[0756]制备本发明一些实施例的肽化合物的一优选方法涉及固相肽合成。[0757]anderssonbiopolymers2000；55(3):227-50描述了大规模肽合成。[0758]根据数个特定实施例，使用体外表达系统合成肽。这种体外合成方法(invitrosynthesismethods)在本领域中是众所周知的并且系统的组分是可商购的。[0759]根据数个特定实施例，所述肽或包含它们的异二聚体是通过重组dna技术产生的。“重组”肽或蛋白质是指通过重组dna技术产生的肽或蛋白质；即，由编码所需肽或蛋白质的外源dna构建体转化的细胞产生。[0760]因此，根据本发明的另一方面，提供了一种核酸构建体或系统，其包含至少一编码异二聚体的多核苷酸，以及用于指导所述多核苷酸在一宿主细胞中表达的调节元件。[0761]根据数个特定实施例，所述多核苷酸至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源于如在seqidno：80及82或seqidno：80及84所示的核酸序列，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0762]根据数个特定实施例，所述多核苷酸至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源于如在seqidno:86及82、seqidno:90及92或seqidno:86及84所示的核酸序列，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0763]根据数个特定实施例，所述多核苷酸包含seqidno：80及82或seqidno：80及84，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0764]根据数个特定实施例，所述多核苷酸包含seqidno：86及82、seqidno：90及92或seqidno：86及84，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0765]根据数个特定实施例，所述多核苷酸至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源于如在seqidno:147及82、seqidno:143及139、、seqidno:145及141、seqidno:86及139、seqidno:86及141、seqidno:147及139、seqidno:no:149及139、seqidno:80及139、seqidno:155及139、seqidno:80及151、seqidno:155及151、seqidno:80及153、seqidno:157及82、seqidno:155及153或seqidno:159及82所示的核酸序列，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0766]根据数个特定实施例，所述多核苷酸包含在seqidno:147及82、seqidno:143及139、seqidno:145及141、seqidno:86及139、seqidno:86及141、seqidno:86及141idno:147及139、seqidno:149及139、seqidno:80及139、seqidno:155及139、seqidno:80及151、seqidno:155及151、seqidnoseqidno：80及153、seqidno：157及82、seqidno：155及153或seqidno：159及82中，每种可能性代表本发明的一单独实施例。[0767]如本文所用，术语“多核苷酸”指以一rna序列、一互补多核苷酸序列(cdna)、一基因组多核苷酸序列及/或一复合多核苷酸序列(例如，上述组合)的形式分离及提供的一单链或双链核酸序列。[0768]根据数个特定实施例，本文公开的任何多核苷酸及核酸序列可包含数个保守的核酸取代。数个保守修饰的多核苷酸是指编码相同或基本相同胺基酸序列的核酸，或在核酸不编码一胺基酸序列的情况下，指基本相同或相关(例如，自然连续)序列。由于遗传密码的退化性，大量功能相同的核酸编码大多数蛋白质。例如，密码子gca、gcc、gcg及gcu都编码胺基酸丙氨酸(alanine)。因此，在一丙氨酸由一密码子指定的每个位置，所述密码子可以被改变为所述的另一相应密码子，而不改变编码的多肽。这种核酸变异是“沉默变异”，这是保守修饰的多核苷酸的一种。根据数个特定实施例，本文所述的编码多肽的任何多核苷酸及核酸序列也描述核酸的沉默变体。技术人员会认识到，在某些情况下，核酸中的每个密码子(除了通常为蛋氨酸(methionine)唯一密码子的aug及通常为色氨酸(tryptophan)唯一密码子的tgg)都可以被修饰以产生功能相同的分子。因此，编码一多肽的一多核苷酸的沉默变体隐含在所述序列中，所述序列与表达产物有关。[0769]为了在哺乳动物细胞中表达一外源性多肽，优选将编码所述多肽的一多核苷酸序列连接到适于哺乳动物细胞表达的一核酸构建体中。这种核酸构建体包括一启动子序列，用于以一组成性或可诱导的方式在细胞中指导多核苷酸序列的转录。[0770]根据数个特定实施例，所述调节元件是一异源调节元件。[0771]本发明的一些实施例的所述核酸构建体(在本文中也称为一“表达载体”)包括使所述载体适于原核生物、真核生物或优选两者(例如穿梭载体)中的复制及整合的数个附加序列。此外，一典型的克隆载体还可以包含一转录及转译起始序列、一转录及转译终止子以及一多聚腺苷酸化信号。举例来说，此类构造通常将包括一5'ltr、一trna结合位点、一包装信号、第二链dna合成的一起源、以及一3'ltr或其一部分。[0772]本发明的一些实施例的所述核酸构建物通常包括用于从放置所述肽的一宿主细胞分泌所述肽的一信号序列。优选地，用于此目的的信号序列是哺乳动物信号序列或本发明一些实施例的多肽变体的信号序列。[0773]数个真核启动子通常包含两种识别序列、所述tata盒及上游启动子元件。所述tata盒位于所述转录起始位点上游25个至30个碱基对，被认为参与引导rna聚合酶开始rna合成。其他上游启动子元件决定转录启动的速率。[0774]优选地，本发明一些实施例的所述核酸构建体所使用的启动子在转化的特定细胞群中是活性的。细胞类型特异性及/或组织特异性启动子的数个范例包括数个启动子，例如肝特异性白蛋白[pinkert等人，(1987)genesdev.1:268-277]、淋巴特异性启动子[calame等人，(1988)(1988)adv.immunol.43:235-275]；尤其是t细胞受体的启动子[winoto等人，(1989)emboj.8:729-733]及免疫球蛋白；[banerji等人，(1983)cell33729-740]、神经元特异性启动子，如神经丝启动子[byrne等人，(1989)proc.natl.acad.sci.usa86:5473-5477]、胰腺特异性启动子[edlunch等人，(1985)science230:912-916]或乳腺特异性启动子，如乳清启动子(美国专利案第4873316号及欧洲申请案公开案第264166号)。[0775]数个增强子元件可以从连接的同源或异源启动子刺激多达1000倍的转录。当增强子位于转录起始位点的下游或上游时，增强子是激活的。许多来源于病毒的增强子元件具有一广泛的宿主范围，并在多种组织中具有活性。例如，所述sv40早期基因增强子适用于多种细胞类型。适用于本发明一些实施例的其他增强子/启动子组合包括衍生自多瘤病毒、人或鼠巨细胞病毒(cmv)、来自各种逆转录病毒(例如鼠白血病病毒、鼠肉瘤病毒及hiv)的长期重复序列的增强子/启动子组合。参见enhancersandeukaryoticexpression,coldspringharborpress,coldspringharbor,n.y.1983，通过引用并入本文。[0776]在表达载体的构建中，所述启动子优选定位在与异源转录起始点的距离与其在自然环境中与转录起始点的距离大致相同的位置。然而，如本领域所知，可以在不损失启动子功能的情况下调节所述距离中的一些变化。[0777]还可以将多聚腺苷酸化序列添加到[表达载体中，以提高mrna转译的效率。准确有效的多聚腺苷酸化需要两个不同的序列元件：位于多聚腺苷酸化位点下游的富含gu或u的序列及位于上游11个至30个核苷酸的高度保守的六个核苷酸序列aaaa。适用于本发明一些实施例的终止及聚腺苷酸化信号包括衍生自sv40的信号。[0778]除了已经描述的元件外，本发明的一些实施例的表达载体通常可包含旨在提高克隆核酸的表达水平或促进携带重组dna的细胞的鉴定的其他专门元件。例如，许多动物病毒含有dna序列，可以促进病毒基因组在允许细胞类型中的额外染色体复制。携带这些病毒复制子的质粒，只要由携带在质粒上或所述宿主细胞的所述基因组中的基因提供所述数个适当的因子，就可以在上位体(episomally)复制。[0779]所述载体可能包括也可能不包括一真核复制子(eukaryoticreplicon)。如果存在真核复制子，则所述载体可在真核细胞中使用适当的选择标记进行扩增。如果所述载体不包含真核复制子，则不可能进行上位体扩增。相反地，重组dna整合到所述工程细胞的所述基因组中，所述启动子在所述工程细胞的所述基因组中指导所需核酸的表达。[0780]本发明的一些实施例的表达载体可进一步包括数个额外的多核苷酸序列，其允许例如从单一mrna转译多个蛋白质，例如一内部核糖体进入位点(internalribosomeentrysite，ires)及用于启动子嵌合多肽的基因组整合的序列。[0781]因此，根据数个特定实施例，包含在所述异二聚体中的两种单体均由单一结构表达。[0782]根据数个其他特定实施例，包含在所述异二聚体中的每一单体由不同的结构表达。uses,butterworths,bostonmass.(1988)andgilboa等人[biotechniques4(6):504-512,1986]，并包括例如稳定或瞬时转染、脂质体感染、电穿孔及重组病毒载体感染。此外，请参见美国专利案第5464764号及第5487992号用于数个正负选择方法。[0789]通过病毒感染引入核酸比其他方法(如脂质体感染及电穿孔)具有一些优势，因为由于病毒的传染性，可以获得更高的转染效率。[0790]目前首选的体内核酸转移技术包括用病毒或非病毒构建物转染，例如腺病毒、慢病毒、单纯疱疹病毒i型或腺相关病毒(aav)及脂质系统。用于脂质介导的基因转移的有用脂质为例如dotma、dope及dcchol[tonkinson等人cancerinvestigation,14(1):54-65(1996)]。用于基因治疗的最优选建构体是病毒，最优选为腺病毒、aav、慢病毒或反转录病毒。例如反转录病毒构建体的病毒构建体包括至少一转录启动子/增强子或位点定义元件，或通过例如交替剪接、核rna输出或信使的转译后修饰等其他手段控制基因表达的其他元件。这种载体结构还包括包装信号、长末端重复序列(ltr)或其部分，以及适用于所用病毒的正链及负链引物结合位点，除非它已经存在于病毒结构中。此外，这种建构体通常包括用于从放置所述肽的宿主细胞分泌所述肽的信号序列。优选地，用于此目的的信号序列是哺乳动物信号序列或本发明一些实施例的多肽变体的信号序列。任选地，所述建构体还可以包括指示多聚腺苷酸化的信号、以及一或多个限制位点及转译终止序列。举例来说，此类建构体通常将包括一5'ltr、一trna结合位点、一包装信号、一第二链dna合成的一起源、以及3'ltr或其一部分。可以使用其他非病毒载体，例如阳离子脂质、聚赖氨酸及树状大分子(dendrimers)。[0791]如前所述，除了包含用于插入的编码序列的转录及转译的必要元件外，本发明的一些实施例的表达构建物还可以包括经设计以增强所表达的单体或异二聚体的稳定性、产生、纯化、产率或毒性的序列。例如，包含本发明一些实施例的单体或异二聚体及异源蛋白质的融合蛋白或可切割融合蛋白的表达可被工程化。可以设计这样的融合蛋白，使得可以通过亲和层析容易地分离融合蛋白；例如，通过固定在异源蛋白质的特定管柱上。如果在本发明的一些实施例的单体或异二聚体及异源蛋白质之间工程化了切割位点，则可通过用适当的酶或试剂处理破坏切割位点来从色谱管柱释放所述单体或异二聚体[例如，参见booth等人immunol.lett.19:65-70；及gardella等人,(1990)j.biol.chem.265:15854-15859]。[0792]本发明还涉及包含本文所述组合物的细胞。[0793]因此，根据本发明的一方面，提供了一种包含所述异二聚体或核酸构建体或系统的一宿主细胞。[0794]如上所述，多种原核或真核细胞可用作宿主表达系统，以表达本发明一些实施例的异二聚体。这些包括但不限于微生物，例如用含有编码序列的重组噬菌体dna、质粒dna或粘粒dna表达载体转化的细菌；用含有编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母；感染重组病毒表达载体(如花椰菜花叶病毒(cauliflowermosaicvirus)、camv、烟草花叶病毒(tobaccomosaicvirus)、tmv)或用含有编码序列的重组质粒表达载体(如ti质粒)转化的植物细胞系统。哺乳动物表达系统也可用于表达本发明一些实施例的所述多肽。[0795]细菌构建体的数个范例包括大肠杆菌表达载体的pet系列[studier等人，(1990)methodsinenzymol.185:60-89)。[0796]可与本发明的教导一起使用的真核细胞的实例包括但不限于哺乳动物细胞、真菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、藻类细胞或植物细胞。[0797]在酵母中，可以使用含有组成型或诱导型启动子的许多载体，如美国专利中所披露。申请编号：5932447。或者，可以使用载体促进外源dna序列整合到酵母染色体中。[0798]在使用植物表达载体的情况下，编码序列的表达可由多个启动子驱动。例如，camv的35srna及19srna启动子等病毒启动子[brisson等人，(1984)nature310:511-514]、或tmv的外壳蛋白启动子[takamatsu等人，(1987)emboj.6:307-311]可以使用。或者，例如rubisco的小亚基[coruzzi等人，(1984)emboj.3:1671-1680及brogli等人，(1984)science224:838-843]的植物启动子或例如大豆hsp17.5-e或hsp17.3-b[gurley等人，(1986)，mol.cell.biol.6:559-565]的热休克促进剂可以被使用。这些构建体可以使用ti质粒、ri质粒、植物病毒载体、直接dna转化、微量注射、电穿孔及本领域技术人员熟知的其他技术引入植物细胞。例如，参见weissbach&weissbach，1988，methodsforplantmolecularbiology,academicpress,ny,sectionviii,pp421-463。[0799]本发明的一些实施例也可以使用本领域公知的其他表达系统，例如昆虫及哺乳动物宿主细胞系统。[0800]根据数个特定实施例，所述细胞为一哺乳动物细胞。[0801]根据数个特定实施例，所述细胞是一人类细胞。[0802]根据数个特定实施例，所述细胞为一细胞系。[0803]根据另一数个特定实施例，所述细胞是一主细胞。[0804]所述细胞可以来自合适的组织，包括但不限于血液、肌肉、神经、大脑、心脏、肺、肝脏、胰腺、脾脏、胸腺、食道、胃、肠、肾、睾丸、卵巢、头发、皮肤、骨、乳房、子宫、膀胱、脊髓或各种体液。这些细胞可能来自任何发育阶段(包括胚胎、胎儿及成人阶段)以及发育起源(即外胚层、中胚层及内胚层起源)。[0805]哺乳动物细胞的数个非限制性范例包括由sv40转化的猴肾cv1系(cos，例如cos-7、atcccrl1651)；人类胚胎肾系(hek293或hek293细胞亚克隆，用于悬浮培养生长，graham等人，j.genvirol.，36:591977)；幼仓鼠肾细胞(bhk，atccccl10)；小鼠支持细胞(tm4，mather，biol.reprod.，23:243-2511980)；猴肾细胞(cv1atccccl70)；非洲绿猴肾细胞(vero-76，atcccrl-1587)；人宫颈癌细胞(hela，atcc-ccl2)；nih3t3，jurkat，犬肾细胞(mdck，atccccl34)；水牛-大鼠肝细胞(brl3a，atcccrl1442)；人肺细胞(w138，atccccl75)；人肝细胞(hepg2，hb8065)；小鼠乳腺肿瘤(mmt060562，atccccl51)；tri细胞(mather等人，annalsn.y.acad.sci.,383:44-681982)；mrc5细胞；fs4细胞；以及一人肝癌细胞系(hepg2)、per.c6、k562及中国仓鼠卵巢细胞(cho)。[0806]根据本发明的一些实施例，哺乳动物细胞选自中国仓鼠卵巢(cho)，hek293，per.c6、ht1080、ns0、sp2/0、bhk、namalwa、cos、hela及vero细胞所组成的群组。[0807]根据本发明的一些实施例，所述宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(cho)、per.c6或一293(例如expi293f)细胞。[0808]根据本发明的另一方面，提供了一种制备一异二聚体的方法，所述方法包括在一宿主细胞中表达所述核酸构建体或系统。[0809]根据数个特定实施例，所述产物包括在哺乳动物细胞中表达并在32℃至37℃、5％至10％co2下培养5天至13天。[0810]可用于本发明数个特定实施例的制备条件的数个非限制性范例在下面的范例部分中公开。[0811]因此，例如，编码所述异二聚体的一表达载体在一哺乳动物细胞中表达，例如expi293f或expicho细胞。然后，根据expi293f或expicho细胞制造商说明书(thermo)，将转导的细胞在32℃–37℃的5％–10％co2的细胞特异性培养基中培养，并在培养至少5天后，从上清液中收集蛋白质并纯化。[0812]根据数个特定实施例，所述培养物以分批、分批、补料分批或灌注模式操作。[0813]根据数个特定实施例，所述培养物在补料分批条件下操作。[0814]根据数个特定实施例，所述培养步骤在36.5℃下进行。[0815]根据数个特定实施例，所述培养步骤在36.5℃时生效，温度变化至32℃。这种温度变化可以在到达固定相之前减缓了细胞代谢。[0816]根据数个特定实施例，所述方法包括将二聚化部分添加到所表达的胺基酸序列，即添加到所述i型膜蛋白的胺基酸序列及所述ii型膜蛋白的胺基酸序列。[0817]根据数个特定实施例，所述方法包括分离所述异二聚体。[0818]根据数个特定实施例，在培养中的适当时间后影响重组异二聚体的回收。根据数个特定实施例，回收重组异二聚体指收集含有异二聚体的整个培养基，且无需暗示额外的分离或纯化步骤。根据数个特定实施例，本发明的一些实施例的异二聚体可使用多种标准蛋白质纯化技术进行纯化，例如但不限于亲和层析(affinitychromatography)、离子交换层析(ionexchangechromatography)、过滤、电泳、疏水作用层析(hydrophobicinteractionchromatography)、凝胶过滤层析(gelfiltrationchromatography)、反相色谱法(reversephasechromatography)、刀豆球蛋白a色谱法(concanavalinachromatography)、混合模式色谱法(mixmodechromatography)、金属亲和色谱法(metalaffinitychromatography)、凝集素亲和色谱法(lectinsaffinitychromatography)、色谱聚焦法(chromatofocusing)及差异增溶法(differentialsolubilization)。[0819]根据数个特定实施例，在制备步骤及纯化步骤后，可在体内或体外分析异二聚体的治疗效果。此类方法为本领域所知，并包括例如细胞活力、转基因小鼠的存活及激活标记物的表达。[0820]本发明的一些实施例的组合物(例如，所述异二聚体、编码所述异二聚体的核酸构建体或系统及/或细胞)可施加于一生物体本身，或施加于与适当载体或赋形剂混合的药物组合物中。[0821]因此，在一些实施例中，本发明的特征在于包含治疗有效量的本文所公开的组合物的药物组合物。[0822]在此，术语“活性成分”指对生物效应负责的组合物(例如，本文所述的异二聚体、核酸结构或系统及/或细胞)。[0823]在此，术语“赋形剂”指添加到药物组合物中以进一步促进活性成分施用的惰性物质。赋形剂的数个范例(但不限于)包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖及类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油及聚乙二醇。[0824]在下文中，可互换使用的短语“生理上可接受的载体”及“医药上可接受的载体”是指不会对生物体造成显着刺激且不会消除所施用化合物的生物活性及性质的载体或稀释剂。这些短语中包括一种佐剂。[0825]如本文所用，“医药上可接受的载体”包括生理上相容的任何及所有溶剂、分散介质、涂料、抗菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂等。优选地，所述载体适合于静脉、肌肉内、皮下、肠外、脊髓或表皮给药(例如，通过注射或输注)。根据给药途径，活性化合物可包括一或多种医药上可接受的盐。“医药上可接受的盐”是指保留母体化合物所需生物活性且不会产生任何不希望的毒理学效应的盐(参见berge，s.m.，等人，(1977)j.pharm).sci.66:1-19)。此类盐的数个实例包括酸加成盐及碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸的盐(例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、磷等)以及衍生自无毒有机酸的盐(例如脂肪族单羧酸及二羧酸(aliphaticmono-anddicarboxylicacids)、苯基取代烷酸(phenyl-substitutedalkanoicacids)、羟基烷酸(hydroxyalkanoicacids)、芳香酸、脂肪族及芳香族磺酸等)。碱加成盐包括来自碱土金属的盐(例如钠、钾、镁、钙等)以及来自无毒有机胺的盐(例如n，n’‑二苯并乙基二胺(n,n'-dibenzylethylenediamine)、n-甲基葡萄糖胺(n-methylglucamine)、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、胆碱(choline)、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因(procaine)等)。[0826]根据本发明的至少一些实施例的药物组合物还可包括一医药上可接受的抗氧化剂。医药上可接受的抗氧化剂的数个实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸(ascorbicacid)、半胱氨酸盐酸盐(cysteinehydrochloride)、硫酸氢钠(sodiumbisulfate)、焦亚硫酸钠(sodiummetabisulfite)、亚硫酸钠(sodiumsulfite)等；(2)油溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸棕榈酸酯(ascorbylpalmitate)、丁基羟基苯甲醚(butylatedhydroxyanisole，bha)、丁基羟基甲苯(butylatedhydroxytoluene，bht)、卵磷脂(lecithin)、没食子酸丙酯(propylgallate)、α-生育酚(alpha-tocopherol)等；及(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid，edta)、山梨醇(sorbitol)、酒石酸(tartaricacid)、磷酸等。根据本发明的至少一些实施例的药物组合物还可包括添加剂，例如洗涤剂及增溶剂(例如tween20(聚山梨酯-20)、tween80(聚山梨酯-80))及防腐剂(例如硫柳醇、苯甲醇)以及填充剂(例如乳糖、甘露醇)。[0827]可用于根据本发明至少一些实施例的药物组合物中的合适水性及非水性载体的所述范例包括水、各种缓冲液含量的缓冲盐水(例如，tris-hcl、醋酸盐、磷酸盐)、ph值及离子强度、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其适当混合物、植物油(例如橄榄油)及可注射有机酯(例如油酸乙酯)。[0828]例如，可以通过使用涂层材料(如卵磷脂)、在分散的情况下保持所需的粒径，以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。[0829]这些组合物还可包含助剂(adjuvants)，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂及分散剂。可通过上述灭菌程序以及通过加入各种抗菌剂及抗真菌剂(例如，尼泊金酯(paraben)、氯丁醇(chlorobutanol,)、苯酚山梨酸(phenolsorbicacid)等)来确保防止微生物的存在。还可以期望将等渗剂(例如糖、氯化钠等)包含到组合物中。此外，可注射药物形式的延长吸收可通过加入延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝(aluminummonostearate)及明胶)来实现。[0830]医药上可接受的载体包括无菌水溶液或分散体及无菌粉末，用于即席制备无菌注射溶液或分散体。本领域已知将此类介质及试剂用于医药活性物质。除任何常规介质或试剂与活性化合物不相容外，预期其在根据本发明至少一些实施例的药物组合物中的用途。还可将补充活性化合物并入组合物中。[0831]治疗性组合物通常必须在制造及储存条件下为无菌且稳定的。所述组合物可以配制成溶液、微乳、脂质体或其他适合高药物浓度的有序结构。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液体聚乙二醇等)及其适当混合物的溶剂或分散介质。例如，可以通过使用例如卵磷脂的涂层、在分散的情况下保持所需的粒径以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。在许多情况下，最好在组合物中包括等渗剂(isotonicagents)，例如糖、多元醇(例如甘露醇、山梨醇或氯化钠)。可注射组合物的延长吸收可通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸盐及明胶)来实现。无菌可注射溶液的制备方法是，根据需要将所需量的活性化合物与上述一或多种成分的适当溶剂混合，然后进行灭菌微滤。通常，通过将活性化合物加入含有基本分散介质及上述成分所需的其他成分的无菌载体中来制备分散体(dispersions)。对于用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末，优选的制备方法是真空干燥及冷冻干燥(冻干(lyophilization))，其产生活性成分粉末以及来自先前无菌过滤溶液的任何额外所需成分。[0832]无菌可注射溶液的制备方法是，根据需要将所需量的活性化合物与上述一或多种成分的适当溶剂混合，然后进行灭菌微滤。通常，通过将活性化合物加入含有基本分散介质及上述成分所需的其他成分的无菌载体中来制备分散体。对于用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末，优选的制备方法是真空干燥及冷冻干燥(冻干(lyophilization))，其产生活性成分粉末以及来自先前无菌过滤溶液的任何额外所需成分。[0833]活性成分的数量可以与载体材料组合产生单一剂型，将根据被治疗对象及特定的给药方式而有所不同。可与载体材料结合以产生单一剂型的活性成分的量通常为产生治疗效果的组合物的量。通常，在100％中与医药上可接受的载体组合，所述量将在活性成分的约0.01％到约99％之间，最好在活性成分的约0.1％到约70％之间，最好在活性成分的约1％到约30％之间。[0834]调整剂量方案，以提供最佳预期反应(例如一治疗反应)。例如，可给药一次单剂量，可随时间分几次给药，或可根据治疗情况的紧急情况按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠外组合物尤其有利，以便于给药及剂量均匀性。本文所使用的剂量单位形式是指适合作为待治疗受试者的单一剂量的物理离散单位；每个单元包含预定量的活性化合物，其经计算可产生与所需药物载体相关的预期治疗效果。根据本发明的至少一些实施例的剂量单位形式的说明书直接依赖于(a)活性化合物的独特特性及要达到的特定治疗效果，以及(b)合成此类活性化合物以治疗个体敏感性的技术固有的局限性。[0835]药物的配方及给药技术可以在文献“remington’spharmaceuticalsciences,”mackpublishingco.,easton,pa,latestedition中找到，通过引用并入本文。[0836]本发明的一些实施例的药物组合物可以通过本领域众所周知的方法来制造，例如通过常规的混合、溶解、造粒(granulating)、制备凝胶、征税、乳化、封装、包埋或冻干(lyophilizing)方法。[0837]本发明的组合物可以使用本领域已知的多种方法中的一或多种通过一或多种给药途径给药。如本领域技术人员将理解的，给药的路线及/或模式将根据期望的结果而变化。根据本发明的至少一些实施例的治疗剂的优选给药途径包括血管内递送(intravasculardelivery)(例如注射或输注)、静脉内(intravenous)、肌肉内(intramuscular)、皮内(intradermal)、腹腔内(intraperitoneal)、皮下(subcutaneous)、脊柱(spinal)、口腔、肠道、直肠、肺(例如吸入)、鼻、局部(topical)(包括经皮(transdermal)、口腔(buccal)及舌下(sublingual))、膀胱内(intravesical)、玻璃体腔内(intravitreal)、腹腔内(intraperitoneal)、阴道、脑内给药(例如脑室内(ntra-cerebroventricular)、脑内(intra-cerebral)及对流增强扩散(convectionenhanceddiffusion))、中枢神经系统传递(cnsdelivery)(例如鞘内(intrathecal)、脊髓周围(perispinal)及脊髓内(intra-spinal))或肠外(parenteral)(包括皮下(subcutaneous)、肌肉内(intramuscular)、腹腔内(intraperitoneal)、静脉内(intravenous)及皮内(intradermal))、经皮(transdermal)(被动或使用离子导入或电穿孔)、跨粘膜(transmucosal)(例如舌下给药、鼻、阴道、直肠或舌下给药)、给药或通过一植入物给药、或其他非肠道给药途径(例如通过注射或输注)、或本领域已知的其他给药途径及/或给药形式。本文使用的“肠外给药(parenteraladministration)”一词是指除肠内及局部给药以外的给药方式，通常通过注射，包括但不限于静脉注射(intravenous)、肌肉注射(intramuscular)、动脉内(intraarterial)、鞘内(intrathecal)、囊内(intracapsular)、眶内(intraorbital)、心内(intracardiac)、皮内(intradermal)、腹腔内(intraperitoneal)、经气管(transtracheal)、皮下(subcutaneous)、皮下注射(subcuticular)、关节内注射(intraarticular)、包膜下注射(subcapsular)、蛛网膜下腔注射(subarachnoid)、椎管内注射(intraspinal)、硬膜外注射(epidural)及胸骨内(intrasternal)注射、或使用可生物降解的插入物，并可配制成适合每种给药途径的剂型。在数个特定实施例中，根据本发明至少一些实施例的蛋白质、治疗剂或药物组合物可经腹腔内或静脉内给药。[0838]根据数个特定实施例，本文所公开的组合物通过肠外注射在水溶液中给药。配方也可以是悬浮液或乳液的形式。一般而言，提供用于肠外注射的药物组合物，包括本文所述组合物的有效量，并且任选地包括医药上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂及/或载体。此类组合物任选地包括一或多种用于以下用途的物质：稀释剂、无菌水、各种缓冲液含量(例如tris-hcl、醋酸盐、磷酸盐)、ph值及离子强度的缓冲盐水；以及洗涤剂及增溶剂等添加剂(如tween20(聚山梨酯-20)、tween80(聚山梨酯-80))、抗氧化剂(例如，水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、焦亚硫酸钠、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基苯甲醚(bha)、丁基羟基甲苯(bht)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚；以及金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(edta)、山梨醇、酒石酸、磷酸)、防腐剂(如硫柳醇、苯甲醇)及填充剂(如乳糖、甘露醇)。非水溶剂或载体的数个范例包括乙醇、丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油及玉米油)、明胶及可注射有机酯(如油酸乙酯)。制剂可在使用前立即冷冻干燥(冻干)或真空干燥并重新溶解/再悬浮。可通过例如通过保持细菌的过滤器过滤、通过将杀菌剂加入组合物、通过辐射组合物或通过加热组合物来对制剂进行灭菌。[0839]本文公开的各种组合物(例如多肽)可局部应用。局部给药对大多数肽制剂不起作用，尽管它可以有效，尤其是当应用于肺、鼻、口腔(舌下、口腔)、阴道或直肠粘膜时。[0840]本发明的组合物可在吸入的同时输送至肺部，并在以气溶胶或喷雾干燥的颗粒(空气动力学直径小于约5微米)输送时穿过肺上皮衬里进入血流。可以使用设计用于治疗产品肺部输送的各种机械装置，包括但不限于喷雾器、计量吸入器及粉末吸入器，所有这些都是本领域技术人员所熟悉的。商用设备的一些具体范例是ultravent雾化器(mallinckrodtinc.，密苏里州圣路易斯)；acornii雾化器(marquestmedicalproducts,englewood,colo.)；ventolin计量吸入器(glaxoinc.,researchtrianglepark,n.c.)；以及spinhaler粉末吸入器(fisonscorp.，bedford,mass.)。nektar、alkermes及mannkind都有可吸入的胰岛素粉制剂，这些制剂已获得批准，或正在临床试验中，所述技术可应用于本文所述的制剂。[0841]用于粘膜给药的制剂通常为喷雾干燥的药物颗粒，可并入片剂、凝胶、胶囊、悬浮液或乳剂中。标准药用辅料可从任何配方中获得。口服制剂可以是口香糖、凝胶条、片剂或含片。[0842]也可以制备透皮制剂。它们通常是药膏、乳液、喷雾剂或贴片，所有这些都可以使用标准技术来制备。透皮制剂需要加入渗透促进剂。本发明的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可以改变，以获得有效的活性成分的量，以实现对特定患者、组合物及给药方式的期望治疗反应，而不对患者有毒。所选剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所用本发明特定组合物的活性、给药途径、给药时间、所用特定化合物的排泄率、治疗持续时间、其他药物、与所使用的特定成分、年龄、性别、体重、状况、一般健康状况及被治疗患者的既往病史以及医学领域众所周知的类似因素结合使用的化合物及/或材料。[0843]根据数个特定实施例，以治疗有效量向受试者施用本文公开的组合物。如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”指足以治疗、抑制或缓解所治疗疾病的一或多个症状或以其他方式提供期望的药理学及/或生理学效果的剂量。治疗有效量的测定完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是根据本文提供的详细公开。[0844]对于本发明方法中使用的任何制剂，可通过体外及细胞培养分析初步估计治疗有效量或剂量。例如，可以在动物模型中配制剂量，以达到所需的浓度或滴度。这些信息可用于更准确地确定人体的有效剂量。本文所述活性成分的毒性及治疗效果可通过体外、细胞培养或实验动物中的标准药物程序确定。从这些体外及细胞培养试验以及动物研究中获得的数据可用于制定用于人体的一系列剂量。剂量可能因使用的剂型及使用的给药途径而异。具体的配方、给药途径及剂量可由个别医生根据患者的情况选择。(例如，参见fingl等人，1975年，发表在"thepharmacologicalbasisoftherapeutics"第1章第1页中)。[0845]剂量及间隔可单独调整，以提供足以诱导或抑制生物效应的活性成分水平(最低有效浓度，mec)。每种制剂的mec会有所不同，但可以根据体外数据进行估计。达到mec所需的剂量将取决于个体特征及给药途径。检测分析可用于测定血浆浓度。[0846]根据待治疗疾病的严重程度及反应性，可以单次或多次给药，疗程从几天持续到几周，或者直到治愈或疾病状态减轻。[0847]当然，服用成分的量将取决于治疗对象、痛苦的严重程度、服用方式、处方医生的判断等。[0848]在某些实施例中，局部施用所述组合物(例如，异二聚体、核酸构建物或系统或细胞)，例如通过直接注射到待处理部位。通常，注射导致组合物的局部浓度增加，其大于通过全身给药可实现的浓度。所述异二聚体组合物可与如上所述的一底物结合，以通过减少多肽从待处理部位的被动扩散来协助产生一增加的多肽组合物的局部浓度。[0849]本发明的药物组合物可与本领域已知的医疗设备一起施用。例如，在可选实施例中，根据本发明的至少一些实施例的药物组合物可以使用针头皮下注射装置施用，例如美国专利案第5399163号；第5,383,851号；第5,312,335号；第5,064,413号；第4,941,880号；第4,790,824号；或第4596556号中公开的装置。在本发明中有用的已知植入物及模块的数个范例包括：美国专利案第4487603号，公开了一种可植入式微量输液泵，用于以受控速率分配药物；美国专利案第4486194号，公开了一种通过皮肤给药的治疗装置；美国专利案第4447233号，公开了一种用于以精确输注速率输送药物的药物输注泵；美国专利案第4447224号，公开了一种用于连续给药的可变流量植入式输液器；美国专利案第4439196号，其公开了一种具有多室的腔室的渗透性药物递送系统；还有美国专利案第4475196号，公开了一种渗透性药物递送系统。这些专利通过引用并入本文。本领域技术人员已知许多其他此类植入物、递送系统及模块。[0850]活性化合物可以用保护化合物不被快速释放的载体制备，例如一控制释放制剂，包括植入物、透皮贴片及微胶囊递送系统。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，如乙烯-醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚正交酯及聚乳酸。制备此类制剂的许多方法已获得专利或为本领域技术人员所熟知。参见例如sustainedandcontrolledreleasedrugdeliverysystems,j.r.robinson,ed.,marceldekker,inc.,newyork,1978。[0851]在植入一聚合物装置(杆(rod)、柱(cylinder)、膜(film)、盘(disk))或注射(微粒)后，可以制备用于系统性长期释放的控制释放聚合物装置。所述底物可以是微球等微粒的形式，其中肽分散在固体聚合物底物或微胶囊中，其中核心由不同于聚合物壳的材料制成，并且肽分散或悬浮在核心中，核心可以是液体或固体。除非本文明确规定，否则微粒、微球及微胶囊可互换使用。或者，所述聚合物可以浇铸(cast)为纳米到四厘米的薄片或薄膜、通过研磨或其他标准技术产生的粉末，甚至是凝胶，例如水凝胶。[0852]不可生物降解或可生物降解底物可用于递送本文所公开的活性剂，尽管可生物降解底物是优选的。这些可能是天然或合成聚合物，但由于降解及释放曲线的更好表征，合成聚合物是首选。根据需要释放的时间段选择聚合物。在某些情况下，线性释放可能最有用，但在其他情况下，脉冲释放或“批量释放”可能提供更有效的结果。聚合物可以是水凝胶的形式(通常吸收高达约90重量％的水)，并且可以任选地与多价离子或聚合物交联。[0853]所述底物可以通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取及本领域技术人员已知的其他方法形成。生物可降解微球可以使用为制备药物递送用微球而开发的任何方法制备，例如描述于mathiowitzandlanger,j.controlledrelease,5:13-22(1987)；mathiowitz等人,reactivepolymers,6:275-283(1987)；及mathiowitz等人,j.applpolymerscl,35:755-774(1988)。[0854]这些装置可以被配制成局部释放，用于治疗植入或注射区域——通常会提供远低于全身治疗剂量的剂量——或全身释放。它们可以被植入或注射到皮下、肌肉、脂肪或被吞咽。[0855]在某些实施例中，为了确保根据本发明至少一些实施例的治疗性化合物穿过bbb(如果需要)，它们可以例如在脂质体中配制。有关脂质体的制造方法，请参见例如美国专利案第4522811号；第5,374,548号；及第5399331号。脂质体可包含一或多个选择性运输到特定细胞或器官中的部分，从而增强靶向药物递送(例如参见v.v.ranade(1989)j.clin.pharmacol.29:685)。示例性靶向部分包括叶酸或生物素(例如，参见美国专利案第5416016号，low等人)；甘露糖苷(umezawa等人，biochem.biophys.res.commun.153:1038)；抗体(p.g.bloeman等人，febslett.357:140；m.owais等人，(1995)antimicrob.agentschemother.39:180)；表面活性蛋白a受体(briscoe等人，(1995)am.jphysiol.1233:134)；p120(schreier等人，(1994)j.biol.chem.269:9090)；另见k.keinanen；m.l.laukkanen(1994)febslett.346:123；j.j.killion；i.j.fidler(1994)immunomethods4:273。[0856]如果需要，本发明的一些实施例的组合物可以在一包装或一分配器装置中呈现，例如一fda批准的试剂盒，其可以包含一或多种含有活性成分的单位剂型。例如，所述包装可以包括金属或塑料箔，例如泡罩包装。包装或分配器装置可附有使用说明。包装或分配器也可通过与容器相关的通知进行调节，通知的格式由管制药品制造、使用或销售的政府机构规定，所述通知反映了所述机构对成分或人类或兽医管理形式的批准。例如，此类通知可能是美国食品及药物管理局批准的处方药标签或批准的产品说明书。还可以制备包含在兼容药物载体中配制的本发明制剂的组合物，将其放置在适当的容器中，并对其进行标记，以处理指示的条件，如上文所述。[0857]如本文所用，术语“大约”指±10％。[0858]术语“包括”、“包含”、“具有”及其共轭词表示“包括但不限于”。[0859]术语“由…所组成”是指“包括并限于”。[0860]术语“基本上包括”指所述组合物、方法或结构可包括附加成分、步骤及/或部分，但前提是附加成分、步骤及/或部分不会实质性改变所要求的组合物、方法或结构的基本及新颖特征。[0861]如本文所用，单数形式“一”及“所述”包括复数引用，除非上下文另有明确规定。例如，术语“化合物”或“至少一化合物”可包括多种化合物，包括其数个混合物。[0862]在本技术中，本发明的各种实施例可以范围格式呈现。应当理解，范围格式的描述仅仅是为了方便及简洁，不应被解释为对本发明范围的不灵活限制。因此，范围的描述应被视为已经明确地公开了所述范围内所有可能的子范围以及单一数值。例如，诸如从1到6的范围的描述应被视为具有具体公开的子范围(诸如从1到3、从1到4、从1到5、从2到4、从2到6、从3到6等)以及所述范围内的单一数字(例如，1、2、3、4、5及6)。这适用于任何范围的宽度。[0863]每当本文指示数字范围时，其意指包括指示范围内的任何引用数字(分数或整数)。短语“在第一指示数字及第二指示数字之间的范围”及“从第一指示数字”到“第二指示数字之间的范围”在本文中可交换地使用，并且意味着包括第一及第二指示数字以及它们之间的所有小数及整数。[0864]如本文所用，术语“方法”是指完成给定任务的方式、方法、技术及程序，包括但不限于化学、药理学、生物学、生物化学及医学领域的从业者已知的或从已知的方式、方法、技术及程序发展而来的那些方式、方法、技术及程序。[0865]当参考特定序列表时，所述参考还应理解为包括基本上与其互补序列对应的序列，包括由例如测序错误、克隆错误或导致碱基取代的其他改变引起的微小序列变化、碱基缺失或碱基添加，前提是此类变异的频率小于1/50核苷酸，或者小于1/100核苷酸，或者小于1/200核苷酸，或者小于1/500核苷酸，或者小于1/1000核苷酸，小于1/5000核苷酸，或者小于1/10000核苷酸。[0866]数个范例[0867]现在参考以下数个范例，其与上述描述一起以非限制性方式示出本发明的一些实施例。[0868]通常，本文使用的命名法及本发明中使用的实验室程序包括分子、生物化学、微生物及重组dna技术。这些技术在文献中有详尽的解释。例如，参见"molecularcloning:alaboratorymanual"sambrook等人,(1989)；"currentprotocolsinmolecularbiology"volumesi-iiiausubel,r.m.,ed.(1994)；ausubel等人,"currentprotocolsinmolecularbiology",johnwileyandsons,baltimore,maryland(1989)；perbal,"apracticalguidetomolecularcloning",johnwiley&sons,newyork(1988)；watson等人,"recombinantdna",scientificamericanbooks,newyork；birren等人(eds)"genomeanalysis:alaboratorymanualseries",vols.1-4,coldspringharborlaboratorypress,newyork(1998)；美国专利案第4,666,828号；第4,683,202号；第4,801,531号；第5,192,659号及第5,272,057号中规定的方法；"cellbiology:alaboratoryhandbook",volumesi-iiicellis,j.e.,ed.(1994)；"cultureofanimalcells-amanualofbasictechnique"byfreshney,wiley-liss,n.y.(1994),thirdedition；"currentprotocolsinimmunology"volumesi-iiicoliganj.e.,ed.(1994)；stites等人(eds),"basicandclinicalimmunology"(8thedition),appleton&lange,norwalk,ct(1994)；mishellandshiigi(eds),"selectedmethodsincellularimmunology",w.h.freemanandco.,newyork(1980)；可用的免疫测定在专利和科学文献中有广泛的描述，参见例如美国专利案第3,791,932号；第3,839,153号；第3,850,752号；第3,850,578号；第3,853,987号；第3,867,517号；第3,879,262号；第3,901,654号；第3,935,074号；第3,984,533号；第3,996,345号；第4,034,074号；第4,098,876号；第4,879,219号；第5,011,771号及第5,281,521号；"oligonucleotidesynthesis"gait,m.j.,ed.(1984)；“nucleicacidhybridization"hames,b.d.,andhigginss.j.,eds.(1985)；"transcriptionandtranslation"hames,b.d.,andhigginss.j.,eds.(1984)；"animalcellculture"freshney,r.i.,ed.(1986)；"immobilizedcellsandenzymes"irlpress,(1986)；"apracticalguidetomolecularcloning"perbal,b.,(1984)and"methodsinenzymology"vol.1-317,academicpress；"pcrprotocols:aguidetomethodsandapplications",academicpress,sandiego,ca(1990)；marshak等人,"strategiesforproteinpurificationandcharacterization-alaboratorycoursemanual"cshlpress(1996)；所有这些内容均以引用的方式并入本文件，如同本文件中完全阐述的一样。本文件中还提供了其他一般参考资料。其中的程序被认为是本领域公知的，并且是为了方便读者而提供的。此处包含的所有信息通过引用并入本文。[0869]范例1[0870]包含两个或三个通过fc连接的蛋白质的异二聚体的数个选择变体-蛋白质(selectionvariantsofheterodimers-proteinscontainingtwoorthreeproteinslinkedbyfc)[0871]异二聚体-蛋白质的结构分析，包含以下成分：[0872]pd1的细胞外结构域(ecd)及由fc链连接的4-1bbl(在本文中称为“sc3x4-1bbl”)的ecd的3个重复组成的一单链(在本文中称为“dsp305”，seqidno:79及81)；[0873]由fc链连接的pd1、sirpα及sc3x4-1bbl的数个ecd的数个组合(在本文中称为“tsp111”，seqidno:85及81)，包括n端信号肽(seqidno:95)及含有higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”(knobintohole)；[0874]由fc链连接的pd1、sirpa及sc3xd40l的数个ecd的数个组合(在本文中称为“tsp112”，seqidno:81及146)，包括n端信号肽(seqidno:95)及包含higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”；[0875]通过fc链连接的lilrb2、sirpa及sc3x4-1bbl的数个ecd的数个组合(在本文中称为“tsp215”，seqidno:138及85)，包括n端信号肽(seqidno:95)及包含higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”；[0876]由fc链连接的lilrb2、sirpa及sc3xd40l的数个ecd的数个组合(本文称为“tsp217”，seqidno:138及146)，包括n端信号肽(seqidno:95)及含有higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”；[0877]由fc链连接的siglec10、sirpa及sc3x4-1bbl的数个ecd的数个组合(本文称为“tsp401”，seqidno:150及79)，包括n端信号肽(seqidno:95)及含有higg4的fc的“杵进入臼”(seqidno:110及111)；[0878]由fc链连接的tigit、pd1及sc3x4-1bbl的数个ecd的数个组合(在本文中称为“tsp501”，seqidno:152及79)，包括n端信号肽(seqidno:95)及包含higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”；[0879]通过fc链连接的lilrb2、pd1及3xscd40l的数个ecd的数个组合(在本文中称为“tsp222”，seqidno:138及154)；包含n端信号肽(seqidno:95)及含有higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”；[0880]由fc链连接的siglec10、pd1及3xscd40l的ecd的组合(在本文中称为“tsp403”，seqidno:150及154)，包括n端信号肽(seqidno:95)及包含higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”；[0881]tigit、pd1及3xscd40l的数个ecd的数个组合，通过fc链连接(在本文中称为“tsp503”，seqidno:152及154)，包括n端信号肽(seqidno:95)及包含higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”；[0882]由fc链连接的pd1、tigit及3xsc4-1bbl的数个ecd的数个组合(在本文中称为“tsp501v1”，seqidno:81及156)，包括n端信号肽(seqidno:95)及包含higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”；或[0883]由fc链连接的pd1、tigit及3xscd40l的ecd的组合(在本文中称为“tsp503v1”，seqidno:81及158)，包括n端信号肽(seqidno:95)及含有higg4的fc(seqidno:110及111)的“杵进入臼”；[0884]作用以优化以下参数：[0885]折迭-适当折迭，以便与数个靶结合，最大限度地减少潜在的干扰；[0886]完整性-无暴露的蛋白水解位点；[0887]在哺乳动物表达系统中高表达；及[0888]低免疫原性。[0889]根据一同源x射线结构，对每个零件进行同源建模。对于pd1–pdbid：3rrq、5ggr、5ggs、5jxe及4zqk用作数个模板。对于higg4–pdbid：4c54、4c55、5w5m及5w5n用作数个模板。对于41bb-l–pdbid：6cpr、6a3v及6cu0用作数个模板。对于sirpα-pdb-id的2uv3、2wng、4cmm、6bit、2jjs及2jjt用作数个模板。数个连接体段使用charmm中的回路建模进行建模，主要是为了避免结构冲突，并对可能的“间隔”长度进行合理的估计。对于cd40l–pdbid：1aly、1i8r、3lkj及3qd6用作数个模板。对于lilrb2–pdbid：2gw5、4lla、2dyp及6bcp用作数个模板。对于siglec10–同源物的pdbid：siglec82n7a及2n7b用作数个模板。对于tigit–pdbid：3qoh、3rq3、3ucr、3udw及5v52用作数个模板。[0890]图3及图6表示为pd1-fc-sc3x4-1bbl(图3)或sirpa-pd1-fc-sc3x4-1bbl(图6)异二聚体识别的所述数个结构域及数个片段生成的数个3d模型，包括或不包括其数个配体(cd47、pdl1及4-1bb)。图12a至图16c表示为pd1-sirpa-fc-sc3xd40l(图12a至图12c)、lilrb2-fc-sc3x4-1bbl(图13a至图13c)、lilrb2-sirpa-fc-sc3xd40l(图14a至图14c)、siglec10-pd1-fc-sc3x4-1bbl(图15a至图15c)或tigit-pd1-fc-sc3x4-1bbl(图16a至图16c)异二聚体所识别的所述数个结构域及数个片段生成的所述数个异二聚体及所述数个3d模型的示意图。所述分析预测可能与所述数个配体结合，不同结构域之间没有干扰。所述结构分析还表示出，sc3x4-1bbl中3个重复的4-1bbl胺基酸序列之间的一内部(ggggs)x2+gggggg(seqidno:96)连接子及sc3xd40l中3个重复的cd40l胺基酸序列之间的一内部(ggggggs)x3(seqidno:136)连接子将促进这种结合。[0891]范例2[0892]异二聚体的制备[0893]为了比较功能分析及生产评估，使用“杵(knob)”进入“臼(hole)”方法(例如在美国专利案us8216805中描述)生产了几种异二聚体，即：pd1-fc-3xsc4-1bbl异二聚体，本文称为“dsp305”(seqidno:79及81)及“dsp305_v1”(seqidno:79及83)；pd1-sirpa-fc-3xsc4-1bbl异二聚体在本文中称为“tsp111”(seqidno：85及81)、“tsp111_v1”(seqidno：89及91)及“tsp111_v2”(seqidno：85及83)；一pdl-sirpa-fc-3xsccd40l异二聚体，本文称为“tsp112”(seqidno：81及146)；lilrb2-pd1-fc-3xsc4-1bbl异二聚体在本文中称为“dsp214”(seqidno：138及142)及“dsp214v1”(seqidno：140及144)；lilrb2-sirpα-fc-3xsc4-1bbl异二聚体，本文称为“tsp215”(seqidno：138及85)及“tsp215v1”(seqidno：140及85)；lilrb2-sirpa-fc-3xsccd40l异二聚体在本文中称为“tsp217”(seqidno:138及146)、2xlilrb2-fc-3xsccd40l异二聚体在本文中称为“dsp218”(seqidno:138及148)；lilrb2-pd1-fc-3x4-1bbl异二聚体，本文称为“tsp221”(seqidno：138及79)；lilrb2-pd1-fc-3xsccd40l异二聚体在本文中称为“tsp222”(seqidno：138及154)，siglec10-fc-pd1-3xsc-4-1bbl异二聚体在本文中称为“tsp401”(seqidno:150及79)；siglec10-pd1-fc-3xsccd40l异二聚体在本文中称为“tsp403”(seqidno：150及154)、tigit-fc-pd1-3xsc-4-1bbl异二聚体在本文中称为“tsp501”(seqidno:152及79)及tigit-pd1-fc-3xsccd40l异二聚体在本文中称为“tsp503”(seqidno:152及154)。一些制备的异二聚体的示意图显示在图2、图5、图12a、图13a、图14a、图15a、图16a及图32中。[0894]在用dsp305、dsp305_v1、tsp111、tsp111_v1、tsp111_v2、tsp112、dsp214、dsp214_v1、tsp215、tsp215_v1、tsp217、dsp218、tsp221、tsp222、tsp401、tsp403、tsp501或tsp503的编码序列克隆的pcdna3.4表达载体转染的expi293f细胞中进行生产。使用ecori及hindiii或xbai及ecorv限制酶将序列克隆到所述载体中，并添加kozak序列及人工信号肽(mespaqllfllllwlpdgvha,seqidno:95)。从细胞培养的上清液中收集所述蛋白质，在某些情况下，使用蛋白质a(pa)porosmabcapturea树脂或阴离子交换hightrapqff树脂通过一步纯化来纯化蛋白质。[0895]通过sds-page来验证所述制备。具体而言，将来自每个样品的35μl上清液或3μgpa纯化蛋白与含有或不含β-巯基乙醇(分别为还原和非还原条件)的上样缓冲液混合，在95℃下加热5分钟，然后在8％或4％至20％梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳sds-page。根据制造商的说明，凝胶上的蛋白质迁移通过e-stain机器(genscript)可视化。[0896]如图4、图7及图17至图18b所示，在非还原条件下观察到高比例的预期异二聚体分子量形式的蛋白质，并且在还原条件下证实了两个亚基的表达。sds-page仅检测到少量的异构体(包含两个“杵”或两个“臼”片段的二聚化体)。[0897]以同样的方式，几种其他异二聚体(即本文称为“tsp501v1”(seqidno：81及156)的pd1-tigit-3xsc4-1bbl异二聚体及本文称为“tsp503v1”的pd1-tigit-3xsccd40l异二聚体”(seqidnos:81及158))根据上述来制备及分析。[0898]根据下文各自的范例3至范例13进一步分析所有制备的异二聚体。[0899]范例3[0900]所述异二聚体包含所有域[0901]材料-如上文范例2所述制备的异二聚体。[0902]对于西方墨点法分析(westernblotanalysis)：spectrabr蛋白标记(thermofisherscientific，目录号26634)或3色extrarange蛋白质标记(genscript，目录号pm2800)、laemmeli上样缓冲液(biorad，目录号161-0747)或样品缓冲液(genscript，目录号m00676)、8％或4％至20％聚丙烯酰胺凝胶(biorad目录号556-8094或genscript目录号m00662或m00656)、抗人4-1bbl(biovision,5369-100)、pd1(cellsignaling，目录号86163)、抗人pd1(genscript，目录号a01829-40)、生物素化兔抗人sirpα(lsbio目录号ls-c370337)、抗人lilrb2(r&dsystems目录号mab2078)、抗人sirpa(目录号ls-c370337))、链霉亲和素-hrp(pierce目录号ts21126)、抗人siglec10(r&dsystems目录号af2130)、抗人tigit(mybiosource目录号mbs9217285、抗人cd40l(mybiosource目录号mbs840387)、二级山羊抗兔igg(h+l)-hrp偶联物(r&dsystems，目录号170-6515)、山羊抗小鼠igghrp-偶联物(bio-rad，目录号170-6516)及eclpluswesternblotting底物(pierce，目录号32132)。[0903]对于三明治法elisa：抗4-1bbl抗体(从匹配对中捕获抗体；abnova#h00008744-ap41)或抗cd40l、抗pd1生物素化抗体、抗人sirp(目录号ls-c370337)、抗-humansiglec10(r&dsystems目录号af2130)，anti-humantigit(mybiosource目录号mbs9217285，anti-humancd40l(mybiosource目录号mbs840387)，streptavidinprotein，hrp(#21126，thermoscientific)，tmb底物(1-steptmultratmb-elisa底物溶液，thermoscientific#34028)。[0904]方法[0905]西方墨点法分析-所述制备的异二聚体(每泳道50ng至500ng)在还原或非还原条件下(分别在含有或不含β-巯基乙醇的上样缓冲液中)处理，在95℃下加热5分钟，然后在8％或4–20％梯度sds-page。随后，将蛋白质转移到pvdf膜上并与初抗一起培育一小时或过夜，抗人4-1bbl、抗pd1、抗sirp、抗人lilrb2、抗人siglec10、抗人tigit或抗人cd40l然后与一hrp偶联的二抗培育一小时。在ecl开发之后检测到信号。[0906]三明治法elisa(sandwichelisa)-使用抗4-1bbl或抗cd40l捕获抗体(pbs中2.5μg/ml)涂覆数个板并在封闭溶液(pbs，1％bsa，0.005％tween)中封闭。根据制造商的建议，将所述制备的异二聚体在封闭溶液中连续稀释，然后在涂覆板上培育2小时，然后与一检测抗体(例如抗pd1或抗sirp生物素化抗体)一起培育，随后用链霉亲和素-hrp及tmb进行检测基板。使用板读数器(thermoscientific，multiscanfc)在450nm处分析数个板，在620nm处进行参照。[0907]结果[0908]所述制备的异二聚体包含其所有结构域，即：tsp111包含pd1、sirpα及4-1bbl结构域(图19a至图19c)；tsp112包含pd1及sirpα结构域(图20a至图20b)；tsp401包含4-1bbl及pd1结构域(图20a及图20c)；tsp501包含4-1bbl及pd1结构域(图20a及图20c)；tsp221包含一4-1bbl结构域(图20c)；dsp214包含lilrb2及4-1bbl域(图21a及图21c)；dsp214v1包含一4-1bbl域(图21a)；tsp215含有lilrb2、sirpα及4-1bbl结构域(图21a至图21c)；tsp215v1包含sirpα、4-1bbl结构域(图21a至图21b)；tsp217包含一lilrb2结构域(图21c)；dsp218包含一lilrb2域(图21c)。[0909]范例4[0910]所述异二聚体结合它们在细胞表面表达的对应配体/受体。[0911]所述pd1部分与pdl1的结合分析[0912]使用过表达pdl1的dld1-pdl1细胞系确定包含pd1结构域及4-1bbl结构域的数个异二聚体(例如pd1-4-3xsc1bbl、sirpα-pd1-3xsc4-1bbl异二聚体)的所述pd1结构域与人pdl1的结合。dld1-wt细胞可作为对照，因为它表达低水平的内源性pdl1(图8a)。将细胞与含有异二聚体的不同稀释度的上清液一起培育，然后用偶联的抗4-1bbl抗体进行免疫染色。通过流式细胞术分析结合步骤。[0913]材料-包含一pd1结构域及一4-1bbl结构域的数个异二聚体，如上文范例2所述来制备。dld1-wt及dld1-pdl1细胞系(hendriks等人，2016年)、抗人类cd47(inhibrx样,genscript)、af647抗人类cd47(inhibrx样,genscript)、apc抗人类cd274(biolegend,目录号329708)、apc小鼠igg、k同种型对照(biolegend，目录号400122)、apc抗4-1bbl(biolegend，目录号311506)。[0914]方法-将细胞与所制备的含有异二聚体的上清液的系列稀释液在4℃下培育20分钟，然后用针对4-1bbl的偶联抗体进行免疫染色，并通过流式细胞术进行分析。在某些情况下，细胞在与上清液培育之前先与抗cd47阻断剂抗体进行预培育。[0915]结果–如图8a所示，与表现出pdl1低内源性表达的dld1wt细胞相比，在dld1-pdl1过表达细胞上观察到一高水平的pdl1膜表达。[0916]如图8c所示，dsp305(seqidno：79及81)以剂量依赖性方式结合过表达dld1pdl1的细胞。1bbl结构域的异二聚体(例如sirpα-pd1-3xsc4-1bbl异二聚体)的一sirpα结构域与人cd47的结合。cho-k1wt细胞用作一阴性对照。将细胞与含有异二聚体的不同稀释度的上清液一起培育，然后用偶联的抗4-1bbl抗体进行免疫染色。通过流式细胞术分析结合。材料-tsp111(seqidno:85及81)、tsp111_v1(seqidno:89及91)及tsp111_v2(seqidno:85及83)，如上文范例2所述制备。cho-k1及cho-k1-cd47细胞、抗人cd47阻断剂ab(inhibrx样genscript)、af647标记的抗人cd47、apc标记的小鼠igg1、k同种型对照(biolegend，目录号400122)、apc抗4-1bbl(biolegend，目录号311506)。[0932]方法-将细胞与所制备的含有异二聚体的上清液的系列稀释液在4℃下培育20分钟，然后用针对4-1bbl的抗体进行免疫染色并通过流式细胞术进行分析。在某些情况下，细胞在与异二聚体培育之前先与一抗cd47阻断剂抗体进行预培育。[0933]结果–如图9c所示，与cho-k1wt细胞相比，在cho-k1cd47过表达细胞的表面上观察到cd47的膜表达。[0934]如图9d所示，tsp111(seqidno：85及81)结合cho-k1-cd47，而不是结合cho-k1wt细胞。与抗cd47阻断剂抗体预培育完全消除了tsp111与cho-k1-cd47细胞的结合。总之，这些结果表明tsp111的sirp臂与其配体(cd47)结合。[0935]所述cd40l部分与cd40的结合分析[0936]使用过表达cd40的一ht1080-cd40细胞系测定包含一cd40l结构域及pd1结构域的数个异二聚体(例如sirpα-pd1-3xsccd40l异二聚体)的所述cd40l结构域与人cd40的结合。ht1080wt细胞作为一阴性对照，因为它们不表达内源性cd40。将细胞与含有异二聚体的不同稀释度的上清液一起培育，然后用缀合的抗pd-1抗体进行免疫染色。通过流式细胞术分析结合。[0937]材料-包含一cd40l结构域及一pd1结构域的数个异二聚体(例如tsp112)如上文范例2中所制备。ht1080wt及ht1080-cd40细胞系(wyzgol等人，2009年)、apc抗人cd40抗体(biolegend，目录号313008)、apc小鼠igg1、k同种型对照(biolegend，目录号400120)、apc标记的抗pd1抗体(biolegend，目录号329908)。[0938]方法-将细胞与所制备的含有异二聚体的上清液的系列稀释液在4℃下培育20分钟，然后用针对pd-1的偶联抗体进行免疫染色，并通过流式细胞术进行分析。[0939]结果-如图26a所示，与ht1080wt细胞相比，在ht1080-cd40过表达细胞上观察到一高水平的cd40膜表达，而ht1080wt细胞没有表现出cd40的内源性表达。[0940]如图26b所示，tsp112(seqidno：81及146)以一剂量依赖性方式结合ht1080-cd40过表达细胞。[0941]所述tigit部分与cd155(pvr)的结合分析[0942]使用内源性表达cd155的一dld-1wt细胞系测定包含一tigit结构域及一4-1bbl结构域的异二聚体(例如tigit-fc-pd1-3xsc-4-1bbl异二聚体)的一tigit结构域与人cd155的结合。u937细胞作为一阴性对照，因为它们不表达内源性cd155。将细胞与含有异二聚体的不同稀释度的上清液一起培育，然后用偶联的抗4-1bbl抗体进行免疫染色。通过流式细胞术分析结合。[0943]材料-包含一tigit结构域及一4-1bbl结构域的异二聚体(例如tsp501)如上文范例2中所述来制备。dld1-wt细胞系(atcc,ccl-221)、u937(atcc,crl-3253)、apc抗人cd155抗体(biolegend,目录号337618)、apcmouseigg1、k同种型对照(biolegend,目录号400120)、apc抗4-1bbl抗体(biolegend，目录号311506)。[0944]方法-将细胞与所制备的含有异二聚体的上清液的系列稀释液在4℃下培育20分钟，然后用针对4-1bbl的偶联抗体进行免疫染色，并通过流式细胞术进行分析。[0945]结果–如图27a至图27b所示，与同种型对照抗体相比，在dld-1wt细胞上观察到高水平的cd155膜表达，而u937细胞不表达cd155(图27b)。[0946]如图27c所示，tsp501(seqidno：152及79)以一剂量依赖性方式结合dld-1wt细胞并且不结合u937细胞。[0947]异二聚体与其人、小鼠及食蟹猴对应物的结合[0948]异二聚体与其相关反配体/受体的结合由表面等离子共振(spr)测定法确定。[0949]材料-如上文范例2所述制备的异二聚体。s系列传感器芯片cm5(ge，目录号br100530)、抗体捕获试剂盒、阴性对照蛋白、人pdl1-hfc(r&d，目录号156-b7-100)、人cd47-hfc(r&d，目录号4670-cd-050)、小鼠cd47-hfc(r&d,目录号1866-cd-050)、食蟹猴cd47-hfc(acrobiosystems,目录号cd7-c5252)、人4-1bb-hfc(lsbio,目录号ls-g4041-100)、小鼠4-1bb-hfc(r&d,目录号937-4b-050)、食蟹猴4-1bb-hfc(r&d,目录号9324-4b-100)、小鼠pdl1、食蟹猴pdl1。[0950]方法–使用biacoret100生物传感器(gehealthcare)进行spr分析。使用制造商推荐的标准胺偶联方案，将捕获试剂盒中的抗体与芯片(fc1-4)的所有四个流动通道偶联。作为一非限制性实例，对于sirpα-pd1-3xsc4-1bbl异二聚体，pdl1、cd47及4-1bb与芯片的结合在hbs-ep+运行缓冲液(10mmhepesph7.3、150mmnacl、3mmedta、0.05％tween20)：将阴性对照蛋白加载到参考通道fc1上，而fc2-4加载人、小鼠及食蟹猴pdl1蛋白。所述芯片自动再生后，芯片在fc1通道上重新加载阴性对照蛋白，在fc2-4通道上重新加载人、小鼠及食蟹猴4-1bb。芯片自动再生后，芯片在fc1通道上重新加载阴性对照蛋白，在fc2-4通道上加载人、小鼠及食蟹猴cd47。在对应物结合之后，sirpα-pd1-3xsc4-1bbl-变体分析物通过所有四个通道。以50μl/min的流速使用不同浓度的“sirpα-pd1-3xsc4-1bbl分析物”反复重复所述过程。在每个循环结束时注入3mmgcl2溶液(45秒，20μl/分钟)，通过去除捕获的分子来再生活性表面。结合参数使用biaevaluation软件v.3.0.2(gehealthcare)中的kinetic1:1结合模型进行评估。对于pd1-3xsc4-1bbl，应用相同的程序，但没有cd47。以同样的方式，使用来自人食蟹猴及小鼠来源的相关反配体/受体重组蛋白研究每个异二聚体。[0951]范例5[0952]异二聚体同时结合其对应配体/受体[0953]所述数个异二聚体与其对应配体/受体的结合(例如，在pd1-4-3xsc1bbl及sirpα-pd1-3xsc4-1bbl异二聚体的情况下，pd1与pdl1、4-1bbl与4-1bb及sirpα与cd47的结合；在lilrb2-sirpα-3xsc4-1bbl异二聚体的情况下，4-1bbl与4-1bb、lilrb2与hla-g及sirpα与cd47的结合)通过基于一三明治法elisa(sandwichelisa)的测定法进行测试。所述测定还用于比较异二聚体蛋白的不同变体的所述数个功能特性。[0954]材料-如上文范例2所述制备的异二聚体。人重组pdl1(genscript)、人重组cd47(genscript)、人重组hla-g(abcam)、生物素偶联人重组4-1bb蛋白(biotin-conjugatedhumanrecombinant4-1bbprotein)(genscript)、兔抗人sirpα抗体(抗药物抗体dsp107)、hrp偶联链霉亲和素蛋白(hrp-conjugatedstreptavidinprotein)(目录号21126，thermoscientific)、tmb-elisa底物溶液(tmb-elisasubstratesolution)(sigma，目录号t0440)及tmb终止溶液(tmbstopsolution)(southernbiotech，目录号0412-01)。[0955]方法-96孔板通过在4℃下与一重组cd47蛋白、pdl1蛋白、hla-g蛋白或等摩尔量的两种蛋白的一混合物一起培育过夜来预涂覆(pre-coated)。在封闭及洗涤后，将含有所制备的pd1-4-3xsc1bbl、sirpα-pd1-3xsc4-1bbl、2xlilrb2-3xsc4-1bbl或lilrb2-sirpα-3xsc4-1bbl异二聚体的连续稀释的上清液添加到相关的预涂覆孔中。在额外的洗涤步骤之后，添加生物素化的4-1bb(biotinylated4-1bb)或兔抗-抗-sirpα抗体(rabbitanti-anti-sirpαantibody)并使其分别与所述异二聚体的4-1bbl臂或sirpα臂结合。再次洗涤所述数个板并加入链霉亲和素-hrp(streptavidin-hrp)或山羊抗兔igg抗体-hrp(goatanti-rabbitiggantibody-hrp)。根据标准elisa协议使用一板读数器(thermoscientific，multiscanfc)，使用一tmb底物进行检测。[0956]结果-如图10a所示，dsp305(seqidno：79及81)以一浓度依赖性方式与pdl1涂层板结合。[0957]如图10b所示，tsp111(seqidno：85及81)以一浓度依赖性方式结合cd47及pdl1涂覆的板，并且还结合用cd47及pdl1的一混合物涂覆的板。有趣的是，与混合蛋白涂覆板的结合更高，表示出当涉及双臂(sirpα及pd1)时结合更强。对照上清液不与任何涂覆板结合。[0958]如图28a所示，通过41bb-生物素以一剂量依赖性方式检测到dsp214(seqidno：138及142)与hla-g的结合，表示出lilrb2及4-1bbl臂能够结合它们的靶标。阴性对照上清液未观察到结合。[0959]如图28b至图28c所示，通过41bb-生物素以一剂量依赖性方式检测到tsp215(seqidno：138及85)与hla-g或cd47的结合，表示出lilrb2、sirpα及41bbl臂结合他们的目标。没有检测到与仅涂有bsa的对照板的结合。[0960]范例6[0961]异二聚体激活4-1bb或cd40[0962]4-1bb受体的激活[0963]通过所制备的包含一4-1bbl结构域的异二聚体(例如pd1-4-3xsc1bbl、sirpα-pd1-3xsc4-1bbl、siglec10-fc-pd1-3xsc-4-1bbl及tigit-fc-pd1-3xsc-4-1bbl异二聚体)激活所述4-1bb受体介导的信号转导，此是使用4-bbl过表达ht1080细胞系(ht1080-4-1bb)测定的。在所述4-1bbl与这些细胞表面的4-1bb受体结合后，一信号通路被激活，导致il8的分泌(wyzgol等人，2009年，thejournalofimmunology)。为此，将所述数个细胞在含有所述数个异二聚体的连续稀释的上清液中培育过夜。所述培育在所述数个96孔板预涂覆相关蛋白，例如cd47、pdl1、cd24、cd155或等摩尔浓度的两种相关蛋白的一混合物。激活的ht1080-4-1bb细胞向培养基的il8分泌通过以下方法测定elisa。[0964]材料-包含如上文范例2中所述制备的4-1bbl结构域的异二聚体。人重组pdl1(genscript)、人重组cd47(genscript)、人重组pdl1-fc标记(acrobiosystem,目录号pd1-h5258)、人重组cd24-his标记(acrobiosystem,目录号cd4-h52h3)、人重组cd155his标记(acrobiosystem,目录号cd5-h5223)、ht1080-4-1bb细胞、il-8elisa试剂盒(biolegend,目录号431507)、dmem(biologicalindustries,目录号01-055-1a)、rpmi(生物工业,目录号01-100-1a)、fbs(gibco,目录号10270106)、抗4-1bb抗体(biolegend,目录号359810)、同型igg1、k(biolegend,目录号400122)。[0965]方法–所述数个96孔板通过在4℃下与重组cd47或pdl1或dsp305及tsp111等摩尔量的两种蛋白质的混合物在4℃下培育过夜进行预涂覆；带有用于tsp401的pdl1及cd24；或用于tsp501的pdl1及cd155。在洗涤步骤之后，含有产生的pd1-4-3xsc1bbl、sirpα-pd1-3xsc4-1bbl、siglec10-fc-pd1-3xsc-4-1bbl或tigit-fc-pd1-3xsc-4-1bbl异二聚体的连续稀释的上清液被添加到相关的预涂覆孔中，在37℃下培育1小时，然后在37℃下添加ht10804-1bb细胞(每孔10000个)24小时。培育后，根据制造商的方案，通过il8elisa试剂盒测定上清液中的il8浓度。使用一板读数器(thermoscientific，multiscanfc)在450nm处分析上清液的il-8浓度，在540nm处进行参考。ht10804-1bb细胞上4-1bb受体的表达通过用抗4-1bb抗体对细胞进行免疫染色来确定，并通过流式细胞术进行分析。[0966]结果-如图8b所示，ht1080-4-1bb细胞确实表达了高水平的相关受体4-1bb。如图11a至图11c及图29a至图29b上清液所示，含有dsp305seqidno：79及81)、tsp111(seqidno：85及81)、tsp111_v1(seqidno：89及91)或tsp111_v2(seqidno:85及83)、tsp401(seqidno:150及79)或tsp501(seqidno:152及79)能够以一剂量依赖性方式触发信号传导，导致ht1080-41bb细胞分泌il8。[0967]当ht1080-41bb细胞在来自未转染的expi293f细胞的对照上清液存在下培育时，未观察到il8分泌。[0968]有趣的是，当细胞及测试的sirpα-pd1-3xsc4-1bbl异二聚体在涂有cd47及pd1重组蛋白混合物的数个板中培育时，il8分泌水平更高，这表示出当双臂(sirpα及pd1)参与其中。[0969]cd40受体的激活[0970]使用过表达cd40的ht1080细胞确定由制备的包含一cd40l结构域的异二聚体(例如pd1-sirpα-fc-3xsccd40l、lilrb2-sirpα-fc-3xsccd40l及lilrb2-fc-3xsccd40l异二聚体)对所述cd40受体介导的信号转导的激活线(ht1080-cd40)。在cd40l与这些细胞表面的所述cd40受体结合后，信号通路被激活，导致il8的分泌(wyzgol等人，2009年，thejournalofimmunology)。为此，将所述数个细胞在含有所述数个异二聚体的连续稀释的上清液存在下培育过夜。所述培育在预涂覆相关蛋白质的数个96孔板中进行，例如cd47、pdl1、hla-g或两种相关蛋白的组合。通过elisa确定从活化的ht1080-cd40细胞向培养基的il8分泌。[0971]材料-如上文范例2所述制备的异二聚体。人重组cd47(acro，目录号cd7-h5227)，人重组pdl1-fc标记(acrobiosystem，目录号pd1-h5258)，人重组hla-g(abcam，目录号ab225660)，ht1080-cd40细胞，il-8elisa试剂盒(biolegend，目录号431507)，dmem(biologicalindustries，目录号01-055-1a)，rpmi(biologicalindustries，目录号01-100-1a)，fbs(gibco，目录号10270106)，抗cd40抗体(biolegend，目录号313008)，同种型igg1，k(biolegend，目录号400120)。[0972]方法-数个96孔板通过在4℃下与重组cd47或用于tsp111的pdl1培育过夜来预涂覆；tsp217的hla-g或cd47；或hla-g用于dsp218。在洗涤步骤之后，将含有制备的pd1-sirpα-fc-3xsccd40l、lilrb2-sirpα-fc-3xsccd40l或lilrb2-fc-3xsccd40l异二聚体的连续稀释的上清液加入到相关的预涂覆孔中，在37℃培育1小时随后在37℃下添加ht1080cd40细胞(每孔10000个)24小时。培育后，根据制造商的方案，通过il8elisa试剂盒测定上清液中的il8浓度。使用一板读数器(thermoscientific，multiscanfc)在450nm处分析上清液的il8浓度，在540nm处进行参考。ht1080cd40细胞上cd40受体的表达通过用抗cd40抗体对细胞进行免疫染色来确定，并通过流式细胞术进行分析。[0973]结果-如图26a所示，ht1080-cd40细胞确实表达高水平的相关受体cd40。如图30a至图30b所示，含有tsp112(seqidno:81及146)、tsp217(seqidno:138及146)或dsp218(seqidno:138及148)的上清液能够在剂量依赖性方式，导致ht1080-cd40细胞分泌il8。[0974]范例7[0975]所述数个异二聚体对阻断配体-受体结合的影响[0976]所述数个异二聚体旨在阻断数个靶细胞上表达的内源性配体/受体与天然受体/配体的相互作用。[0977]因此，例如，所述相关异二聚体(例如pd1-4-3xsc1bbl或sirpα-pd1-3xsc4-1bbl异二聚体)的pd1部分旨在阻断t细胞上表达的内源性pd1与肿瘤细胞上表达的pdl1的相互作用。为此，评估了所制备的异二聚体作为这种相互作用的阻断剂的有效性。用重组人pdl1将数个板(acrobiosystems，目录号ep101)涂覆过夜。随后，洗涤数个板并与不同浓度的制备的异二聚体(例如pd1-4-3xsc1bbl或sirpα-pd1-3xsc4-1bbl)或阳性对照抗pd1抗体一起培育1小时。添加生物素化的pd1，然后再培育1小时。培育后，洗涤所述板并根据标准elisa方案用链霉亲和素-hrp及tmb底物(tmbsubstrate)印迹(blotted)。使用一板读数器(thermoscientific,multiscanfc)在450nm处分析板，在620nm处进行参考。[0978]以一类似的方式，研究所述数个相关异二聚体的所述阻断活性以评估它们阻断cd155-tigit、siglec10-cd24、lilrb2-hla-g、cd47-sirpα、4-1bbl-4-1bb及/或lilrb2-hla-g结合的有效性。[0979]范例8[0980]包含4-1bbl或cd40l结构域的数个异二聚体对pbmc或t细胞的激活[0981]t细胞的激活需要两个信号：t细胞受体(tcr)与所述抗原呈递细胞(antigenpresentingcell，apc)上的所述主要组织相容性复合物(majorhistocompatibilitycomplex，mhc)/肽复合物的连接及在t细胞与所述抗原呈递细胞(apc)上的所述数个相应配体上的数个共刺激受体的交联。4-1bb是一种t细胞共刺激受体，它与4-1bbl连接后可促进cd8+及cd4+t细胞的扩增、存活、分化及细胞因子表达。cd40及cd40l是在促炎免疫反应中起关键作用的共刺激分子。主要由活化的cd4+t细胞表达，cd40l与抗原呈递细胞(apc)上的cd40结合，从而诱导apc活化。反过来，apc会引发细胞毒性t淋巴细胞。[0982]本领域已知多种方法来确定t细胞的活化，包括但不限于：[0983]t细胞表面活化标记物的表达(例如：cd25、cd69、cd62l、cd137、cd107a、pd1等)。通过用特异性抗体染色细胞及流式细胞术分析(facs)来测试激活标记物的表达。[0984]炎性细胞因子的分泌(例如：il2、il6、il8、infγ等)。通过elisa测试炎性细胞因子的分泌。[0985]增殖，通过用cfse(羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(carboxyfluoresceinsuccinimidylester))或其他细胞增殖染料预染色t细胞并通过facs确定的cfse稀释确定细胞偏差来测量。还使用一incucyte机器超时拍照并使用一特定软件分析照片来确定增殖。[0986]杀死一靶细胞，例如通过使用calcine-am试剂预标记癌细胞并使用发光板读数器测量calcine释放到培养基中来测量癌细胞。所述杀死步骤也由incucyte机器使用标记的靶细胞及半胱天冬酶敏感荧光底物(caspasesensitiveflorescentsubstrate)确定。[0987]范例9[0988]异二聚体的体内(in-vivo)抗肿瘤作用[0989]三种不同的体内小鼠模型用于测试制备的异二聚体(例如pd1-4-3xsc1bbl及sirpα-pd1-3xsc4-1bbl)治疗癌症的功效：[0990]1、nsg小鼠接种人干细胞(nsgmiceinoculatedwithhumanstemcells)或人pbmcs或固定化人pbmcs(immobilizedhumanpbmcs)及人肿瘤细胞。在所述模型中，所述异二聚体与相关的人类反受体/配体(例如pdl1，在肿瘤及免疫细胞上表达)以及与在数个人类免疫细胞上表达的4-1bb或cd40相互作用。[0991]2、接种人肿瘤细胞的裸scid小鼠。在所述模型中，所述相关异二聚体与小鼠及人cd47(在所述数个肿瘤细胞上表达)相互作用，并测试了所述异二聚体对小鼠巨噬细胞活性的影响。[0992]3、nsg小鼠接种人干细胞及人肿瘤细胞。在所述模型中，所述异二聚体与肿瘤及/或数个免疫细胞上表达的所述相关反受体/配体相互作用。例如，对于sirpα-pd1-3xsc4-1bbl，所述异二聚体与小鼠及人类cd47(在肿瘤及免疫细胞上表达)以及人类t细胞上的4-1bb相互作用。测试了所述异二聚体对所述数个免疫细胞及肿瘤生长的影响。[0993]4、c57bl/6-人-4-1bb敲入小鼠(57bl/6–human-4-1bbknock-inmice)接种mc38小鼠结肠癌或其他癌细胞系或过表达人类相关对应物(例如pdl1及/或cd47)的癌细胞系。在所述模型中，所述小鼠4-1bb胞外结构域被人4-1bb的胞外结构域取代，因此所述异二聚体可以与小鼠t细胞上表达的人4-1bb相互作用。所述异二聚体与小鼠及在肿瘤细胞上表达的人pdl1及/或cd47相互作用。[0994]5、表达受试异二聚体的所述取代蛋白(surrogateprotein)的数个同基因小鼠肿瘤模型(syngeneicmousetumormodels)。例如，在所述模型中，当测试包含一pd1结构域的一异二聚体时，所述异二聚体与所述数个肿瘤细胞上的小鼠pdl1相互作用。[0995]在所有模型中，小鼠都通过静脉内(intravenously，iv)、腹膜内(intraperitoneally，ip)、皮下(subcutaneously，sc)或原位(orthotopically)接种肿瘤细胞。一旦肿瘤可触及(～80mm3)，用不同剂量及不同方案制备的异二聚体(例如4-3xsc1bbl及sirpα-pd1-3xsc4-1bbl异二聚体)，小鼠接受iv、ip、sc或原位治疗。[0996]跟踪小鼠的体重及临床症状。每周用一卡尺测量几次肿瘤；根据下式计算肿瘤体积：v＝长度x宽度2/2。小鼠体重常规测量。通过整个实验监测肿瘤生长及存活。[0997]通过切除肿瘤或引流淋巴结、消化及使用特异性抗体染色及流式细胞术分析的免疫表型来测试肿瘤中免疫细胞的浸润及亚型。附加地或替代地，免疫细胞的浸润或肿瘤的坏死等级通过切除肿瘤、石蜡包埋及切片以用特异性抗体进行免疫组织化学染色来确定。[0998]在牺牲时，收获小鼠器官并嵌入石蜡块中用于h&e及ihc染色。[0999]根据数个常规程序，在不同时间点从小鼠身上采集血样，用于以下测试：pk分析、血浆中的细胞因子测量、循环中血细胞亚群的facs分析、血液学测试、血清化学测试、抗药物-抗体(ada)分析及中及抗体分析(nab)。[1000]范例10[1001]lilrb2-sirpα-3xsc4-1bbl异二聚体在ht1080-41bb及cho-cd47细胞共培养物中激活4-1bb[1002]材料-tsp215如上文范例2所述制备。ht1080-41bb细胞、cho-k1-cd47细胞、il-8elisa试剂盒(biolegend，目录号431507)、dmem(biologicalindustries，目录号01-055-1a)、fbs(rhenium，目录号10270106)、apc抗-41bb(biolegend，目录号309810)、apc抗cd47抗体(biolegend，目录号343124)、apc同种型igg1(biolegend，目录号400120)。[1003]方法-将数个cho-k1-cd47细胞接种在数个96孔板中。将含有所述异二聚体的连续稀释的上清液在37℃下加入细胞中1小时，然后加入ht1080-41bb细胞并在37℃下培育过夜。根据制造商的方案，通过il8elisa试剂盒测定上清液中的il8浓度。使用板读数器(thermoscientific，multiscanfc)在450nm处分析上清液的il8浓度，在540nm处进行参考。通过用抗cd47及抗41bb抗体进行免疫染色测定cd47表达及4-1bb受体及细胞系上的表达。通过流式细胞术进行分析。[1004]结果-使用过表达ht1080细胞系(ht1080-41bb)的4-bbl确定所制备的lilrb2-sirpα-3xsc4-1bbl异二聚体tsp215对一4-1bb受体介导的信号转导的激活。在4-1bbl与这些细胞表面的所述4-1bb受体结合后，依赖于交联的信号通路被激活，导致il8的分泌(wyzgol等人，2009年，thejournalofimmunology)。为了通过sirpα臂提供交联，将过表达cd47(cho-k1-cd47)的cho-k1细胞接种在96孔板中。在顶部添加tsp215的系列稀释液，然后添加ht1080-41bb细胞。在过夜共培育后测定对于所述培养基的从激活的ht1080-4-1bb细胞的il8分泌。[1005]如图31所示，tsp215以一剂量依赖性方式触发il8释放，表示出它在通过cd47交联后激活41bb/41bbl轴。[1006]范例11[1007]lilrb2臂对相关异二聚体的影响[1008]m-csf依赖性巨噬细胞成熟[1009]所述数个异二聚体的所述lilrb2臂旨在通过竞争及阻断它们的相互作用来阻断由肿瘤或免疫细胞上表达的hla-g诱导的对apc(如巨噬细胞及树突状细胞)上表达的内源性lilrb2的免疫抑制信号。m1样巨噬细胞显示出抗肿瘤活性，而m2巨噬细胞据报导可促进肿瘤进展。在m-csf依赖性巨噬细胞成熟期间用拮抗性抗体阻断lilrb2可导致一更圆且紧密粘附的m1样(抗肿瘤)表型，具有cd14及cd163表达较低的情况。在用lps刺激制备的巨噬细胞后，检测到促炎细胞因子tnfα的分泌增加及抗炎il-10的分泌减少。[1010]为此，使用基于流式细胞术的cd14及cd163检测以及通过在lps预处理巨噬细胞刺激后测量tnfα及il-10释放来评估制备的lilrb2异二聚体对m-csf依赖性巨噬细胞成熟的影响。[1011]材料-如上文范例2所述制备的异二聚体、cd14或cd33磁性微珠(miltenyibiotec目录号130-045-501或目录号130-045-501)、rpmi1640(biologicalindustries，目录号01-100-1a)、fcs(gibco,目录号12657-029,m-csf(r&dsystems,目录号216-mc)、triple(thermofisherscientific,目录号12604-013)、lps(sigma-aldrich目录号l1668-5mg)、il-4(r&dsystems，目录号204-il)、pe抗人cd14抗体(biolegend，目录号367104)、fitc抗人cd163抗体(biolegend，目录号333618，il-10elisa(invitrogen，目录号88-7106)、infαelisa(invitrogen,目录号88-7346)。[1012]方法-通过密度梯度离心法从健康志愿者的血液样本中分离pbmc，然后用氯化铵裂解红血球(ammoniumchloridelysisoferythrocytes)。[1013]对于所述测定，从分离的pbmc中进一步富集单核细胞(例如，通过使用cd14或cd33磁性微珠的macs分选)。每孔20000个单核细胞接种在48孔板中，并在rpmi1640培养基+10％fcs中分化为巨噬细胞(m0)，辅以m-csf(50ng/ml)，在存在或不存在产生的异二聚体的情况下5天至7天。部分巨噬细胞用triple分离，并对cd14及cd163表达进行染色。另一部分用lps(50ng/ml)及il-4(25ng/ml)刺激过夜，并通过elisa测量上清液中il-10及inf-α的释放。[1014]范例12[1015]包含一sirpα或lilrb2结构域的所述数个异二聚体对数个巨噬细胞及数个多形核细胞的影响[1016]如前所述，所述数个异二聚体的sirpα部分旨在阻断由表达cd47的肿瘤细胞诱导的“不要吃我(don’teatme)”信号，通过竞争及阻断apc(如巨噬细胞及粒细胞)上表达的内源性sirpα。具有内源性sirpα的肿瘤细胞上的cd47。这种“不要吃我(don’teatme)”信号的阻塞会诱导肿瘤细胞吞噬作用。[1017]所述异二聚体的lilrb2部分旨在通过竞争及阻断hla-g在肿瘤或免疫细胞上的相互作用，阻断肿瘤或免疫细胞上表达的hla-g诱导的对apc(如巨噬细胞及dc)上表达的内源性lilrb2的免疫抑制信号。具有内源性lilrb2的免疫细胞。hla-g“不要吃我信号(don’teatmesignal)”的这种阻断诱导肿瘤细胞吞噬作用并阻止免疫细胞之间的抑制性hla-g-lilrb2信号传导，进而增强吞噬作用。[1018]使用基于流式细胞术的测定法或荧光显微镜评估制备的数个sirpα异二聚体对数个人巨噬细胞或数个多形核细胞(polymorphonuclearcells，pmns)吞噬肿瘤细胞的影响以及数个lilrb2异二聚体对数个人巨噬细胞或数个dc吞噬肿瘤细胞的影响。[1019]材料-如上文范例2所述制备的异二聚体。cd14磁性微珠(miltenyibiotec目录号130-045-501)，rpmi1640(biologicalindustries，目录号01-100-1a)，fcs(gibco，目录号12657-029)，m-csf(r&dsystems，目录号216-mc),gm-csf(r&dsystems,目录号7954-gm/cf),lps(sigma-aldrich目录号l1668-5mg),inf-γ(mbl,目录号jm-4116-100),il-4(r&dsystems，目录号204-il)，celltracetmcfse细胞增殖试剂盒(invitrogen，目录号c34554)，percp/cy5.5抗人cd11b抗体(biolegend，目录号301328)，pecy7抗人hla-dr抗体(biolegend，目录号361708)，apc抗人cd47抗体(biolegend，目录号323124)，fitc抗人hla-g抗体(abcam，目录号ab239334)，利妥昔单抗(rituximab)，西妥昔单抗(cetuximab)，源自不同的人癌细胞系癌症类型如淋巴瘤(例如sudhl6、ramos)及来自实体瘤(例如dld-1-结肠癌、a549-肺癌及mdamb231-三阴性乳腺癌)、过表达hla-g的癌细胞系及不表达的细胞阴性对照。[1020]方法-通过密度梯度离心法从健康志愿者的血液样本中分离多形核细胞(pmn)及pbmc，然后用氯化铵裂解红血球。对于pmn测定，癌细胞用细胞膜或细胞质染料标记并与分离的pmn混合。用制备的异二聚体单独或与治疗性抗体(例如利妥昔单抗或西妥昔单抗)组合处理混合培养物。接下来，通过流式细胞术分析pmn对癌细胞的吞噬作用。[1021]对于巨噬细胞测定，数个单核细胞从分离的pbmc中进一步富集(例如，使用cd14磁性微珠通过macs分选)。单核细胞在补充有gm-csf(50ng/ml)及m-csf(50ng/ml)的rpmi1640培养基+10％fcs中分化成巨噬细胞(m0)7天。为了产生1型巨噬细胞(m1)，m0细胞由lps及ifn-γ引导(primed)额外24小时。在补充有50ng/mlgm-csf及20ng/mlil-4的rpmi1640培养基+10％fcs中，单核细胞分化为单核细胞衍生的dc7天。癌细胞用细胞膜或细胞质染料标记，并与分离的及体外分化的i型巨噬细胞(m1)或dc混合。用制备的异二聚体单独或与治疗性抗体组合处理混合培养物。培育后，未吞噬的肿瘤细胞被洗掉，巨噬细胞用与癌细胞不同颜色的抗cd11b抗体(m1)或抗hla-dr抗体(dc)染色。通过流式细胞术分析巨噬细胞或dc对癌细胞的吞噬作用。在其他实验中，incucyte对吞噬作用的评估如下：来自各种癌细胞系的肿瘤细胞用细胞质染料预染色，巨噬细胞或dc分别用抗人cd11b抗体或抗hla-dr抗体染色(不同颜色比细胞质染料)。共培养染色的肿瘤细胞及巨噬细胞，并通过荧光显微镜拍摄图像。吞噬作用被量化为巨噬细胞或对肿瘤细胞吞噬(混合信号)呈阳性的dc在总巨噬细胞(单一信号)中的比例。[1022]范例13[1023]包含一tigit结构域的所述异二聚体的数个nk细胞细胞毒活性[1024]自然杀伤(nk)细胞诱导直接的细胞毒性或细胞因子/趋化因子的分泌，而不会将特定抗原识别为b细胞及t细胞。nk细胞毒性在针对感染细胞、恶性肿瘤及应激细胞的免疫反应中起重要作用，并涉及多种疾病的病理过程。[1025]本领域已知的许多测定法用于确定所制备的异二聚体对nk活化的影响，包括但不限于：[1026]细胞毒性试验-nk细胞(效应细胞)在共培养试验中杀死靶细胞。通过流式细胞术分析(facs)分析杀灭百分比。将靶细胞置于96孔板中，并与预先标记的原代nk细胞以不同的效应-靶(e:t)比率培育。nk细胞在测定前用1000u/mlil2培育48小时。4小时及24小时后，收集细胞并通过流式细胞术进行分析。从没有nk细胞的培养物中回收的靶细胞数量用作参考。[1027]细胞毒性试验-nk细胞(效应细胞)在共培养试验中杀死靶细胞。杀伤百分比由incucyte机器使用标记的靶细胞及半胱天冬酶敏感的荧光底物确定。[1028]炎性细胞因子的分泌：原代nk细胞被各种靶细胞以不同比例刺激24小时。无细胞培养上清液中干扰素γ(ifn-γ)及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)的水平通过elisa或流式微珠阵列(cba)测定。[1029]尽管已经结合其数个特定实施例描述了本发明，但显然许多取代、修改及变化对于本领域技术人员来说将是显而易见的。因此，旨在涵盖落入所附权利要求的精神及广泛范围内的所有这些取代、修改及变化。[1030]本说明书中提及的所有出版物、专利案及专利申请案在此通过引用整体并入本说明书中，其程度如同每个单独的出版物、专利案或专利申请案被具体且单独地指示通过引用并入本文一样。此外，本技术中任何参考文献的引用或标识不应被解释为承认此类参考文献可用作本发明的现有技术。就使用章节标题而言，它们不应被解释为必然限制。此外，本技术的任何优先权文件在此通过引用的方式整体并入本文。当前第1页12当前第1页12