酚类化合物的固定的制作方法

1.本公开涉及一种固定具有等于或大于500g/mol分子量的酚类化合物的方法。


背景技术：

2.由于存在少量氧化产物，许多酚类化合物呈黄棕色。因此，如果酚类化合物例如在药物化合物的合成中作为副产物产生，由于酚类化合物的氧化产物将导致反应混合物呈黄棕色。
3.通常可以通过标准纯化方法诸如提取、反相色谱法、正相硅胶色谱法、蒸馏或分离结晶，从反应混合物中除去酚类化合物。
4.然而，取决于酚类化合物的性质和/或混合物中其他化合物的性质，纯化方法的选择也许受到限制。
5.如果待纯化的化合物对水分敏感，在水解条件下进行的纯化方法诸如提取或反相色谱法不能用于从混合物中除去酚类化合物，因为对水分敏感的化合物会水解。如果待纯化的化合物含有与硅胶的表面硅烷醇反应的基团诸如比如乙氧基甲硅烷基，则正相硅胶色谱法是不合适的。
6.具有高分子量诸如≥500g/mol的酚无法通过蒸馏除去，即使在减压下蒸馏也无法除去。此外，如果反应混合物含有具有分子量分布的产物诸如比如聚合产物，无法使用分级结晶来纯化。
7.可以通过将酚固定到各种活化树脂上来纯化含有低至中等分子量，即≤500g/mol的酚的混合物，比如在j.comb.chem.2000,2(1),48-65中，描述了雌二醇(mw 282.38g/mol)衍生物的酚官能团附着到聚苯乙烯树脂上。
8.然而，随着待除去的酚的分子量增加，酚附着到活化树脂上变得更加困难。众所周知，为了固定较大的分子，如酶，需要专门的大孔树脂，对于这些，只有最基本的表面官能团是可用的(比如www.sigma.aldrich.com产品号564095-(氨甲基)聚苯乙烯)。
9.本公开的目的是克服这些问题。


技术实现要素：

10.根据第一方面，通过如权利要求1所限定的方法，全部或至少部分地实现了上述和其他目的。根据该权利要求，上述目的通过一种固定具有≥500g/mol分子量(mw)的酚类化合物的方法来实现，其中所述方法包括以下步骤：通过使酚类化合物经受碱而离子化酚类化合物，并在搅动下使离子化的酚类化合物与包括
–
c(＝o)-chxch2r功能团(functionality)的交联树脂接触，其中x选自由br、cl、i、cn、oms、ots或otf组成的组，且r为h、ch3或具有1至8个碳原子的支链或非支链烷基。
11.酚类化合物可为具有特定分子结构，并因此具有特定分子量，即不具有分子量分布的酚类化合物。替代地，酚类化合物可为包括聚合部分，即具有许多单体的部分的酚类化合物。聚合部分中单体的数量在不同的单个分子之间可以不同。因此，包括聚合部分的酚类
化合物可以具有分子量分布，而不是特定的分子量。
12.如技术人员所理解的，具有特定分子结构的酚类化合物的分子量是基于酚类化合物的原子数和原子性质计算的分子量。它可以通过比如质谱法(ms)来测量。
13.根据一个实施方式，本文所用的包括聚合部分的酚类化合物的分子量是指重均分子量(也称为质均摩尔质量或重均摩尔质量)。如技术人员所理解的，可以通过例如凝胶过滤法或尺寸排阻色谱法(sec)来测定重均分子量。
14.根据一个实施方式，根据iso 16014-1：2019和iso 16014-5：2019(“使用尺寸排阻色谱法测定聚合物的平均分子量和分子量分布”)测定重均分子量。
15.根据另一个实施方式，根据iso 16014-1：2019与iso 16014-2：2019至iso 16014-4：2019中的任何一个的结合来测定重均分子量。
16.根据又一个实施方式，重均分子量通过sec来测定，并使用液相色谱-质谱分析法(lc-ms)或高效液相色谱法(hplc)来验证。优选地，hplc方法如本文所述。
17.这样的方法可用于除去不能用传统方法诸如提取、反相色谱法、正相硅胶色谱法、蒸馏或分级结晶从混合物中除去的酚类化合物。此外，甚至在对水分敏感的化合物存在下也可以使用这样的方法。重要的是，具有至多5000g/mol，诸如≥500g/mol、≥1000g/mol、≥1500g/mol、≥2000g/mol、≥2500g/mol、≥3000g/mol、≥3500g/mol、≥4000g/mol、≥4500g/mol的高分子量的酚类化合物可以用树脂清除并因此从混合物中除去。
18.该方法可用于从包括对水分敏感的化合物的混合物中除去具有≥500g/mol的mw的酚类化合物。
19.该方法可用于从混合物中除去具有≥500g/mol的mw的酚类化合物，该混合物包括含有至少一个烷氧基甲硅烷基团的化合物，即所谓的烷氧基硅烷。烷氧基硅烷基团可为乙氧基甲硅烷基。
20.该方法的另一个优点为可以水解并从混合物中除去掩蔽的酚，比如由水解敏感的硅烷保护的酚。
21.搅动可以以多种方式，例如振动、机械搅动、机械搅拌或通过用惰性气体鼓泡或液体流动通过树脂床引起的搅动来实现。树脂在有机溶剂中溶胀后，通常非常脆弱，因此非研磨性搅拌是必要的。因此，在振动器中以中等速度(320rpm)振动是有用的，尤其是在小规模的情况下。用钝的搅拌桨叶进行温和的机械搅拌也是有用的，尤其是对于较大规模的搅拌。也可以使用通过氮气鼓泡引起的搅动。
22.在一个实施方式中，酚类化合物具有≥750g/mol的mw，优选≥1000g/mol的mw。
23.酚类化合物可以具有≤5000g/mol的mw。
24.酚类化合物可以具有≤4000g/mol的mw。
25.酚类化合物可以具有≤3000g/mol的mw。
26.根据一个实施方式，所述酚类化合物具有≤2000g/mol的mw。
27.交联树脂可为交联聚合物树脂。
28.交联聚合物树脂可为与所需溶剂相容的任何聚合物，诸如聚苯乙烯树脂、聚酰胺树脂或丙烯酰胺-peg共聚物。
29.在
–
c(＝o)-chxch2r功能团中，r优选为具有1至8个碳原子的支链或非支链烷基，诸如比如甲基或乙基。甚至更优选地，r为甲基。
30.根据一个实施方式，
–
c(＝o)-chxch2r功能团为α-卤代酮基团。
31.优选地，在α-卤代酮基团中，x为br或cl。甚至更优选地，x为br。
32.优选地，在α-卤代酮基团中，r为具有1至8个碳原子的支链或非支链烷基，例如比如甲基或乙基。甚至更优选地，r为甲基。
33.α-卤代酮基团可为α-溴代酮，诸如
[0034][0035]
优选地，α-卤代酮基团为
[0036][0037]
根据一个实施方式，所述交联树脂为交联聚合物树脂，包括以下功能团
[0038]
这种树脂也称为溴化wang(brominated wang)。
[0039]
碱可以可溶于溶剂。
[0040]
碱可以不可溶于溶剂。
[0041]
碱可为溶剂的相应碱。
[0042]
根据另一个实施方式，所述碱选自由碱金属氢化物、碱土金属氢化物、空间位阻醇盐、强脒碱、酰胺碱和磷腈碱组成的组。
[0043]
碱金属氢化物可为氢化钠、氢化锂和氢化钾。
[0044]
碱土金属氢化物可为氢化钙。
[0045]
空间位阻醇盐可为叔丁醇盐。
[0046]
强脒碱可为四甲基胍、dbu或dbn。
[0047]
酰胺碱可为lda、litmp、lihmds或khmds。
[0048]
磷腈碱可为叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦。可以在树脂存在下直接使用非常非亲核的碱诸如膦腈碱。
[0049]
如果亲核取代对包括酚类化合物的混合物中的化合物，诸如乙氧基硅烷中的亲电官能团的净效应为零，比如乙醇盐由乙醇盐取代或甲醇盐由甲醇盐取代，则可以使用亲核碱诸如naoet、naome或naoipr。
[0050]
具体地，所述碱选自由空间位阻醇盐、naoet、naome、naoipr、nah、lih、kh和cah2组成的组。
[0051]
空间位阻醇盐可为如叔丁氧基醇盐或另一种具有至多8个碳原子的空间位阻醇
盐。
[0052]
烷氧基碱可为naoet、naome或naoipr。
[0053]
优选地，该碱选自naoet或nah。
[0054]
碱可以相对于酚类化合物的量以1-10当量、或1-7当量、或1-3当量、或1-1.2当量的量存在。
[0055]
–
c(＝o)-chxch2r基团可以相对于酚类化合物的量以1-10当量、或1-7当量、或1-3当量、或1-1.2当量的量存在。
[0056]
在一个具体的实施方式中，联接基团为
[0057]
且碱为naoet。
[0058]
在另一个具体实施方式中，联接基团为
[0059]
且碱为nah。
[0060]
根据另一个实施方式，在碱和溶剂的存在下进行所述接触步骤。
[0061]
根据又一个实施方式，所述溶剂选自由thf、mtbe、二噁烷、环戊基甲基醚、二丁基醚、甲苯、二氯甲烷、dmf、nmp和mecn组成的组。
[0062]
溶剂可为两种或更多种溶剂的混合物。
[0063]
溶剂可为thf、甲苯、二氯甲烷或mtbe。
[0064]
溶剂可为thf或甲苯。
[0065]
在一个具体的实施方式中，α-卤代酮基团为
[0066]
碱为naoet且溶剂为甲苯。
[0067]
在另一个具体实施方式中，α-卤代酮基团为
[0068]
碱为nah且溶剂为甲苯。
[0069]
在一个具体的实施方式中，α-卤代酮基团为
[0070]
碱为naoet且溶剂为thf。
[0071]
在另一个具体实施方式中，α-卤代酮基团为
[0072]
碱为nah且溶剂为thf。
[0073]
在另一个具体实施方式中，α-卤代酮基团为
[0074]
碱为naoet且溶剂为mtbe。
[0075]
根据一个实施方式，所述交联树脂在给定溶剂中具有1-5.5的溶胀因子。高溶胀因子使酚类化合物更容易接近(＝o)-chxch2r基团，且因此固定化需要的时间更短。
[0076]
溶剂可适用于大规模固相合成。这样的溶剂的示例为thf、mtbe、二噁烷、环戊基甲基醚、二丁基醚、甲苯、二氯甲烷、dmf、nmp和mecn。
[0077]
树脂珠大小可为100-400目，诸如100-200目或200-400目，诸如170目，诸如120目。优选地，珠大小为100-200目或200-400目。
[0078]
在第一次使用树脂之前，可以对其进行清洗以除去具有潜在毒性的化合物。洗涤树脂的步骤必须在不钝化或物理破坏树脂的情况下进行。树脂在有机溶剂中溶胀后，通常非常脆弱，因此非研磨性搅拌是必要的。这可以如上所述来实现。在振动器中以中等速度(320rpm)振动在小规模上是有用的。对于较大规模，用钝搅拌桨叶进行温和的机械搅拌是有用的。通过氮气鼓泡搅动也可以是有用的。
[0079]
用于洗涤树脂的溶剂可以选自由thf、甲苯、二丁醚、环戊基甲基醚、二噁烷、dmf、nmp、dcm、mecn组成的组。这样的溶剂不会明显降解树脂。适用于洗涤树脂的溶剂的具体示例是醚诸如甲氧基叔丁基醚。
[0080]
可以通过将树脂反复浸泡在多批新鲜溶剂中，或者更有效地，通过在soxhlet装置中对树脂进行连续提取来实现树脂的有效洗涤。
[0081]
因此，在本发明的一个实施方式中，在使用树脂前进行soxhlet提取。
[0082]
可通过光解，优选在350nm下实现清除的酚类化合物的洗脱。
[0083]
根据第二方面，提供了根据本公开的方法用于从混合物中除去具有≥500g/mol的mw的酚类化合物的用途。
[0084]
根据第三方面，提供了一种从包括具有至少一个烷氧基硅烷基团的化合物的组合物中除去具有≥500g/mol的mw的酚类化合物的方法，其中烷氧基硅烷基团为-sir1r2r3；并且其中r1为-o(ch2)
x-ch3，其中x＝0至7；r2与r1或oh相同；r3与r1或oh相同；其中该方法包括以下步骤：通过使酚类化合物经受碱而离子化酚类化合物；并在搅动下使离子化的酚类化合物与包括
–
c(＝o)-chxch2r功能团的交联树脂接触，其中x选自由br、cl、i、cn、oms、ots或otf组成的组，且r为h、ch3或具有1至8个碳原子的支链或非支链烷基。树脂和碱的性质可以如上所述。
[0085]
该树脂可以包括如上所述的α-卤代酮基团。
[0086]
接触步骤可以在碱和溶剂的存在下进行。碱和溶剂的性质可以如上所述。
[0087]
碱可为烷氧基碱。
[0088]
根据一个实施方式，碱为ch
3-(ch2)
y-o-y；其中y＝0至7，其中y＝x；且y为na、k、li。
[0089]
在一个实施方式中，x为1，即r1为
–
o-ch
2-ch3，r2与r1或oh相同，且r3与r1或oh相同。
[0090]
使用上述方法来从包括具有至少一个烷氧基硅烷基团的化合物的混合物中除去酚类化合物的另一个优点是，也除去了硅烷水解产物，产生相当纯的产物，硅烷水解产物大概是在前面的氢化硅烷化反应的处理过程中由水分暴露而形成的，并且影响最终产物的纯度。当生产用于药物用途的材料时，这是一个优点。
[0091]
根据第四方面，提供了根据本公开的方法用于从包括具有至少一个烷氧基硅烷基团的化合物的组合物中除去具有≥500g/mol的mw的酚类化合物的用途。
[0092]
根据第五方面，提供了一种产品，从该产品中，已通过根据本公开的方法除去了至少一种具有≥500g/mol的mw的酚类化合物。
[0093]
本发明的其他目的、特征和优点将从以下详细公开内容、所附权利要求以及附图中显现出来。说明的是，本发明涉及所有可能的特征组合。
[0094]
通常，权利要求中使用的所有术语将根据它们在本技术领域中的普通含义来解释，除非本文中另有明确定义。所有提及的“一/一种/该[溶剂、碱、步骤等]”应被公开解释为指所述溶剂、碱、步骤等的至少一种情况，除非另有明确说明。除非明确说明，否则本文公开的任何方法的步骤不必按照所公开的确切顺序来执行。
[0095]
如本文所用，术语“包括”及该术语的变体不旨在排除其他添加剂、成分、整数或步骤。
[0096]
定义和缩写
[0097]
如本文所用，术语“烷氧基”指式-or，其中r为c
1-8
烷基，比如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、异戊氧基等。根据本发明的烷氧基可以任选地被取代。
[0098]
如本文所用，术语“凝胶”是指交联聚合物，其中共价网络贯穿整个物体。网络聚合物是凝胶的同义词。
[0099]
如本文所用，术语“低级烷基”是指具有1-8个碳原子的烷基。
[0100]
酚(或酚类化合物)是羟基苯的俗名，或者从更广泛的意义上说，是任何含有羟基取代的芳环的化合物。
[0101]
如本文所用，术语“分子量”是指具有特定分子结构的化合物的分子量，或者是指包括聚合部分的化合物的重均分子量，也称为质均摩尔质量或重均摩尔质量，其中聚合部分中的单体数量在不同的单个分子之间变化。因此，具有特定分子结构的酚类化合物的分子量是基于酚类化合物的原子数和原子性质计算的分子量，或者是通过例如质谱法测量的分子量。包括聚合部分的酚类化合物的分子量是指重均分子量，也称为质均摩尔质量或重均摩尔质量，其可以通过例如凝胶过滤法或尺寸排阻色谱法(sec)来测定。更具体地，重均分子量可以根据iso 16014-1：2019和iso 16014-5：2019(“使用尺寸排阻色谱法测定聚合物的平均分子量和分子量分布”)来测定，或者可以根据iso 16014-1：2019与iso 16014-2：2019到iso 16014-4：2019中的任何一个的结合来测定。替代性地，重均分子量可通过sec来测定，并使用液相色谱-质谱法(lc-ms)或高效液相色谱法(hplc)来验证。优选地，hplc方法如本文所述。
[0102]
如本文所用，术语“树脂”被定义为不溶性有机材料。
[0103]
溴化wang树脂：溴化α-甲基苯酰基聚苯乙烯树脂。
[0104]
dbu为二氮杂双环十一碳烯(1,8-二氮杂双环[5,4,0]十一碳-7-烯)的缩写。
[0105]
dcm为二氯甲烷的缩写。
[0106]
dmf为二甲基甲酰胺的缩写。
[0107]
dvb为二乙烯基苯的缩写。
[0108]
etoh为乙醇的缩写。
[0109]
karstedt催化剂为衍生自含有二硅氧烷的二乙烯基的有机铂催化剂，并广泛用于氢化硅烷化催化(us3775452)。
[0110]
khmds为六甲基二硅基胺基钾的缩写。
[0111]
lda为二异丙基氨基锂的缩写。
[0112]
lihmds为六甲基二硅基胺基锂的缩写。
[0113]
litmp为2,2,6,6-四甲基哌啶锂的缩写。
[0114]
功能团：将反应性基材，比如酚锚定到聚合物载体上。
[0115]
mecn为乙腈的缩写。
[0116]
meoh为甲醇的缩写。
[0117]
mtbe为甲基叔丁基醚的缩写。
[0118]
nmp为1-甲基-2-吡咯烷酮的缩写。
[0119]
oms为甲基磺酰-氧基(sufonato-oxy)的缩写。
[0120]
ots为对甲苯磺酰-氧基的缩写。
[0121]
otf为三氟甲基磺酰-氧基的缩写。
[0122]
聚乙二醇化：用聚合环氧乙烷进行烷基化。
[0123]
peg为聚乙二醇的缩写。
[0124]
ppoa为(4-丙酰苯氧基)乙酸的缩写。
[0125]
清除：从反应混合物中除去不期望的杂质。
[0126]
thf为四氢呋喃的缩写。
[0127]“％a/a”按照色谱图中代表特定化合物的峰面积除以所有峰的总面积来计算。在本公开中，色谱图在220nm的波长下获得。
附图说明
[0128]
进一步的目的、特征和优点将从下面参照附图进行的详细描述中显现出来，在附图中：
[0129]
图1示出了包括化合物1和酚2的粗材料的杂质分布的色谱图(方案1，hplc方法1)。峰下的数字对应于方案1至4中的数字。
[0130]
图2示出了在根据本公开的方法过程中，当所有隐藏的酚(4)已经通过乙醇盐的亲核攻击而释放(即转化为酚2)时，图1的材料的色谱图(hplc方法1)。峰下的数字对应于以下方案1至4中的数字。
[0131]
图3示出了在已根据本发明除去材料中存在的酚之后，图1的材料的色谱图(hplc方法1)。峰下的数字对应于以下方案1至4中的数字。
具体实施方式
[0132]
wo2018/130713a1公开了许多用在用作药物产品的涂层纳米材料中的化合物。这样的涂层材料的一个示例为化合物1。1由具有约平均750g/mol的分子量分布的甲氧基peg产生。最常见的聚合度为16，且在1中可以检测到聚合度为9-25的类似物。因此，在本公开中，化合物1被解释为具有9-25个，诸如10-22个，诸如12-20个，诸如14-18个，诸如15-17个(-ch
2-ch
2-o-)-单元。这同样适用于化合物2、3、4、5、6、7和13。含有聚合部分，即peg部分的这些化合物(1、2、3、4、5、6、7和13)的分子量为重均分子量，也称为质均摩尔质量或重均摩尔质量。
[0133]
当大规模生产涂层材料1(方案1，mw＝1267.7g/mol)时，有时会遇到产品呈棕色。棕色可以追溯到酚类杂质(2)的存在，发现该杂质在产品中有时数量相当大。在图1的色谱图中，示出了具有结构分配的粗材料的杂质分布。在铂催化剂诸如karstedt催化剂存在下进行的氢化硅烷化反应总是产生期望氢化硅烷化和还原到烷烃的混合物。在双键可以迁移的情况下，通常在某种程度上也会遇到这种情况(j.polym.sci.,part a:polym.chem.,2018,56,527-536)。在这种情况下，双键迁移产生对水解敏感的乙烯基醚(3，方案1)，并随后释放出酚，这反过来会导致产物呈深棕色。这对于药物产品来说是不可取的。众所周知，酚在氧化条件下可以形成黑色的高分子量聚合物，即称为酚偶联的反应(比如j.org.chem.,1973,(5)97-134,j.org.chem.,2019,84(4),1677-1686)。1的敏感性使得使用标准纯化方法诸如在水解条件下进行的提取或反相色谱法行不通。因为1的乙氧基甲硅烷基与硅胶的表面硅烷醇反应，所以正相硅胶色谱法也不适合。此外，高分子量使得蒸馏，即使在减压下蒸馏也是不可以的，并且对于包括具有聚合部分的化合物的混合物，分子量的分布使得使用分级结晶进行纯化行不通。
[0134][0135]
大量的反应性树脂可用于固相肽合成的大且扩展的领域。然而，化合物2具有1063.4g/mol的分子量，这已经大到足以阻止或显著减缓在网络聚合物(凝胶/树脂)中的扩散。文献中的普遍观点为分子量高于500g/mol的化合物开始变得难以固定在树脂上。尽管
有这种普遍接受的偏见，我们对市售树脂(表1)进行了初步筛选。对市售树脂(表2)的初步筛选表明，其中一些树脂潜在地可用于固定具有≥500g/mol的mw的酚类化合物和/或用于从包括具有至少一个烷氧基硅烷基团的化合物的组合物中除去具有≥500g/mol的mw的酚类化合物。
[0136]
表1.使用的树脂和碱。dvb为二乙烯基苯。
[0137]
[0138]
[0139][0140]
混合物中酚类化合物的初始量为5.4％a/a(220nm)，且化合物1和5之间的比(％a/a(220nm)∶％a/a(220nm))为3.66。发现当在碱的存在下于溶剂中搅动粗1混合物(图1)时，通过隐藏的酚4(图1)的水解使酚2的量增加到17％a/a(220nm)(图2)。“％a/a”按照色谱图中代表特定化合物的峰面积除以所有峰的总面积来计算。在这种情况下，色谱图在220nm的波长下获得。
[0141]
我们发现merrifield肽树脂(实验1，表2)、溴化wang(实验3，表2)、tentagel r br(实验4，表2)、tentagel s br(实验5，表2)和磺酰氯树脂(实验2，表2)降低了酚2的浓度，但也导致1的显著降解，如1/5的比的降低所表明(表2)。1的降解表明所用的树脂不适合作为水解敏感反应混合物中的酚清除剂树脂。
[0142]
实验表明，溴化ppoa(溴化[4-丙酰苯氧基]-乙酸)树脂(实验6，表2)和溴化wang(实验7，表2)可用于固定具有≥500g/mol的分子量的酚类化合物，因为在实验结束时化合物1和5之间的比大于2.0。
[0143]
溴化ppoa树脂和溴化wang中的功能团共享相同的亲电功能团(甲基取代的α-溴酮，表1)，但不同之处在于联接基团与聚合物载体的连接(c-c对酰胺/醚键)。仲酰胺功能团易受去质子化/亲核进攻的影响，并且醚键改变了α-溴酮上的电子密度。令人惊讶地，溴化wang树脂(实验7，表2)仅在两小时内从双峰混合物中除去了酚2，且1没有任何降解；而溴化ppoa(实验6，表2)降低了酚2的总浓度，但也导致了1的显著降解。令人惊讶地，上述结果表明，具有表1所示结构的以溴化wang的名称销售的树脂可用于清除由水解敏感基材组成的反应混合物中mw≥500的酚。因此，选择该树脂进行进一步评价(表3)。
[0144]
表2.用于固定酚2的树脂。在包括1和酚类化合物的同一批粗材料上进行实验。溶剂为thf。在室温下进行实验。在第e栏所示时间(时间2)后报告第f-i栏中的结果。树脂和基质的量以相对于酚2的％a/a(220nm)表示(方案1)。示出了除去酚后的酚含量(表示为总混合物的％a/a(220nm))。左和右肩对应4(图1)。还示出了化合物1和5之间的比(％a/a(220nm)：％a/a(220nm))。
[0145][0146]
具体地，分子量高于500g/mol的酚的固定与本发明相关。如果分子量为5000g/mol或更大，反应时间变得非常长(下面的实施例5)，并且超出了本发明的范围。对于介于500g/mol和2000g/mol之间且包括500g/mol和2000g/mol的分子量，本方法特别有用。
[0147]
合成并研究了另外两种高分子量酚(分别为方案2和3的化合物10和12)。
[0148][0149]
方案2.酚10的合成
[0150][0151]
方案3.酚12的合成
[0152]
结果是，在不到24小时(下面的实施例1c)内将具有约2000g/mol(2kda)的分子量(重均分子量，也称为质均摩尔质量或重均摩尔质量)的酚10固定并从溶液中除去，这被认为是有用的。而在一周(室温下，乙醇钠(naoet)和在thf中的溴化wang)后，具有约5000g/mol(5kda)的分子量(重均分子量，也称为质均摩尔质量或重均摩尔质量)的酚12不受影响。因此，本方法对固定和除去分子量小于5000g/mol(5kda)的酚是有用的。
[0153]
由于化合物1中的乙氧基对根据本发明的方法中使用的碱的亲核进攻敏感，因此所用碱的选择很重要。相关的树脂对亲核试剂都有反应性，并且大多数碱也是亲核的。这引起了两个问题：i，活化树脂通过与碱直接反应而降解的可能性；和ii，化合物1和/或5通过与亲核试剂反应而降解，烷氧基硅烷为最敏感的基团。为了避免第一个问题，重要的是使用足够强的碱，这样在加入反应性树脂之前的第一步中，通过使酚与碱接触而可以将基本上所有的酚去质子化。
[0154][0155]
方案4.使用乙醇钠交换1中的硅烷乙氧基，没有产生净效应。
[0156]
已证明目前情况下(当组合物包括乙氧基硅烷时)的最佳选择为使用乙醇钠，乙醇钠具有许多优点。i，它是廉价的并且可以高质量获得；ii，它可以与硅烷反应，但是净效应为零，因为仅仅是相同基团的交换(方案4)；iii，它足够强以基本上完全将酚去质子化，因此树脂可以在之后加入，这样最小化了树脂降解的风险。
[0157]
尽管大规模用于从酚2中纯化1最实用的碱为乙醇钠(表3)，但许多其它碱也是合适的。碱诸如碱金属氢化物，如氢化钠、氢化锂和氢化钾是有用的。也可想到使用碱土金属氢化物诸如氢化钙。空间位阻醇盐诸如叔丁醇盐也是可想到的。强脒碱如四甲基胍、dbu或dbn，酰胺碱诸如lda、lihmds或khmds，磷腈碱诸如叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦也可
是有用的。可以想到在树脂存在下直接使用非常非亲核的碱，诸如膦腈碱。
[0158]
表3.酚稀释度、溶剂、碱、碱当量数、树脂当量数和反应时间的影响的研究。对包括1和酚类化合物的同一批原材料进行实验。在第6栏中所示的时间(时间2)后报告第h-k栏中的结果。树脂(溴化wang)和碱的量表示为相对于酚2的分子当量。示出了除去酚后的酚含量(表示为总混合物的％a/a(220nm))。左右肩对应隐藏的酚4(图2)。还示出了化合物1和5之间的比(％a/a(220nm)：％a/a(220nm))。
[0159][0160]
发现碱可以相对于酚类化合物的量以低至1.2(实验13)和高至5.9当量(实验7)的量存在。
[0161]
还发现树脂的功能团，即
[0162]
可以相对于酚类化合物的量以低至1.5当(实验13)和高至7.6当量(实验7)的量存在。
[0163]
酚的pka值通常从8-11(在水中)变化，因此为了将酚去质子化至99％或更高，对于给定的酚，两个或更多pka单位的差异是合适的。例如，1,3,5-三羟基苯具有8.45的pka值，因此在这种情况下合适的碱将具有10.45或更高的pka值。虽然在不同的溶剂中pka值不同，但是这个简单的规则对于本领域技术人员选择碱应该是有用的。
[0164]
我们还发现，在图1所示的反应混合物的纯化过程中，从通过质谱鉴定为二聚体或三聚体的一些产物中逐渐释放出更多的酚。推测，酚被甲硅烷基掩蔽，并通过亲核试剂如乙醇盐的亲核攻击逐渐释放出来。如果向反应混合物中加入乙醇钠，然后搅拌一段时间，诸如1、2、6、12、24、48小时，则被掩蔽的酚杂质会释放出来，并易于通过树脂除去(图2)。这在图2中可以看出，与图1中的相应峰相比，标为2(酚)的峰增高，且标为4(被掩蔽的酚)的峰降低。
[0165]
在下面的实施例4中，示出了最初的酚浓度如何是5％，以及在用乙醇钠释放掩蔽的酚级分后，它上升到17％。经溴化wang树脂处理后，酚含量降至1％(图3)。这在图3中可以看出，与图1和2中的相应峰相比，标为2(酚)的峰降低了。
[0166]
为了利用树脂来纯化用于临床用途的化合物，必须小心地洗涤树脂以除去具有潜在毒性的化合物，且不使其失活或物理破坏它。树脂在有机溶剂中溶胀后，通常非常脆弱，因此非研磨性搅拌是必要的。这可以通过多种方式实现。我们发现在振动器中以中等速度(320rpm)振动在小规模上是有用的。对于较大规模，用钝搅拌桨叶进行温和的机械搅拌是有用的。通过氮气鼓泡搅动也是有用的。发现用于洗涤的最佳溶剂为醚诸如甲氧基叔丁基醚，醚是有效的，且不会明显降解树脂。通过用多批新鲜溶剂反复浸泡树脂(实施例5)或更有效地通过在soxhlet装置中对树脂进行连续提取(实施例4)，可以实现树脂的有效洗涤。适用于洗涤树脂的其它溶剂为甲苯、二丁基醚、环戊基甲基醚、二噁烷、dmf、dcm、mecn。
[0167]
实施方式列表
[0168]
在本发明的一个实施方式中，使用包括以下功能团
[0169]
的溴化wang树脂来固定含有化合物1的反应混合物中的酚2。
[0170]
在本发明的一个实施方式中，使用溴化wang树脂来固定含有化合物1的反应混合物中的酚2，使得该溶液中的2的浓度变得小于1的浓度的5％。
[0171]
在本发明的一个实施方式中，使用溴化wang树脂来固定含有化合物1的反应混合物中的酚2，使得该溶液中的2的浓度变得小于1的浓度的2％。
[0172]
在本发明的一个实施方式中，使用溴化wang树脂来固定含有化合物1的反应混合物中的酚2，使得该溶液中的2的浓度变得小于1的浓度的1％。
[0173]
在本发明的一个实施方式中，使用溴化wang树脂来固定含有化合物1的反应混合
物中的酚2，使得该溶液中2的浓度小于1的浓度的0.1％。
[0174]
在本发明的一个实施方式中，使用溴化wang树脂来从溶液中固定和/或除去分子量为2000g/mol(2kda)的酚至90％或99％或接近100％的程度。
[0175]
在本发明的一个实施方式中，使用溴化wang树脂来从溶液中固定和/或除去分子量在500g/mol(0.5kda)至4000g/mol(4kda)之间的酚，和然后在与树脂结合的同时通过化学反应进一步修饰酚，并最后通过化学反应诸如光化学反应从树脂中释放产物。
[0176]
在本发明的一个实施方式中，使用可溶性强碱将具有500g/mol(0.5kda)至4000g/mol(4kda)之间的分子量的酚去质子化，随后将其与溴化wang树脂接触以固定含有化合物1的反应混合物或组合物中的酚2。
[0177]
在本发明的一个实施方式中，使用可溶性强碱将酚2去质子化，然后将其与溴化wang树脂接触，以固定含有化合物1的反应混合物或组合物中的酚2。
[0178]
在本发明的一个实施方式中，使用乙醇钠将酚2去质子化，然后将其与溴化wang树脂接触，以固定含有化合物1的反应混合物或组合物中的酚2。
[0179]
在本发明的一个实施方式中，使用氢化钠将酚2去质子化，随后将其与溴化wang树脂接触，以固定含有化合物1的反应混合物或组合物中的酚2。
[0180]
在本发明的一个实施方式中，溴化wang树脂在使用前于soxhlet提取器中用甲氧基叔丁基醚洗涤48小时。
[0181]
在本发明的一个实施方式中，溴化wang树脂在使用前用几份甲氧基叔丁基醚洗涤。
[0182]
实验
[0183]
通用信息
[0184]
除非另有说明，材料、试剂和溶剂从商业来源获得并且未经进一步纯化而使用。在varian unity inova 400mhz上记录nmr光谱(cdcl3)，并报告相对于氘化溶剂的残留溶剂峰的化学位移。在hewlett packard series 1100上进行hplc，该仪器配有利用40℃的烘箱温度以1ml/min洗脱的agilent poroshell 120ec-c18 4.6x 50mm柱、在220nm处记录的dad检测器和elsd检测器。
[0185]
hplc方法
[0186]
方法1：
[0187][0188]
方法2：
[0189][0190]
实施例1：较高分子量的酚
[0191]
实施例1a：9的合成(方案2)
[0192]
在真空下于55℃加热mpeg2000 ots(1.64g 0.75mmol)过夜。在0℃下，向8(302mg，1.5mmol)在thf(4ml)中的溶液中加入nah(44mg，1.6mmol)，并在0℃下搅拌混合物。35分钟后，使混合物达到室温，加入溶解在thf中的上述mpeg2000-ots(2ml)，并在50℃下加热混合物。4天后，通过在室温下加入meoh(2ml)来猝灭反应。搅拌混合物4小时，然后蒸发挥发物。将粗材料置于chcl3(100ml)中，加入mgso4(6.4g)并在室温下搅拌混合物。2小时后，滤出固体并蒸发挥发物。将粗产物溶解在最小量的ch2cl2中，通过在0℃下缓慢加入et2o沉淀，离心(3200rpm)10分钟并倾析。用et2o洗涤固体，离心并倾析，重复三次。在真空下干燥产物，产生9(1.399g，0.65mmol，86％)。
[0193]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.45-7.29(m,5h),6.93-6.82(m,4h),5.02(s,2h),4.08(t,j＝4.6hz,2h),3.82(t,4.6hz,3h),3.65(bs,208h),3.57-3.52(m,1h),3.49-3.45(m,1h),3.39(s,3h)。注意！mpeg2000-oh为杂质。
[0194]
实施例1b：10的合成(方案2)
[0195]
向在thf(20ml，n2鼓泡5分钟)中的苄基保护的酚9(1.399g，0.65mmol)中加入10％pd/c(0.073g)。在3次真空/n2循环后，进行3次真空/h2循环。在室温下，在h2气氛(气球)下搅拌混合物。在16小时后，进行3次真空/n2循环，滤出固体并蒸发挥发物。将粗产物溶解在最小量的ch2cl2中，通过缓慢加入et2o沉淀出，离心(3200rpm，5℃)10分钟并倾析。用et2o洗涤固体，离心并倾析2次。在真空下干燥产物，产生10(1.112g，0.53mmol，81％)。hplc/nmr分析表明产品被mpeg-oh污染。
[0196]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝6.83-6.73(m,4h),6.08(bs,1h),4.08(t,j＝4.6hz,2h),3.83(t,4.6hz,3h),3.65(bs,287h),3.58-3.52(m,2h),3.49-3.45(m,1h),3.38(s,3h)。注意！mpeg2000-oh为杂质。
[0197]
实施例1c：10在溴化wang树脂上的加载(方案2)
[0198]
在4ml mtbe中溶胀/洗涤溴化wang树脂(0.663g，0.73mmol)3
×
20分钟，然后用4ml thf溶胀/洗涤3
×
20分钟。向在thf(4ml)中的酚10(486mg，0.24mmol)中加入naoet(41mg，0.56mmol)，在室温下于n2气氛下搅拌混合物。1小时后，一次性加入上述溶胀/洗涤的树脂，并在黑暗中于n2气氛下搅拌混合物。通过hplc(方法2)监控反应进程。22小时后，通过hplc未能检测到10(在溶液中)。再搅动一天后，滤出树脂，用thf(5ml)洗涤3
×
5分钟，蒸发集中
的级分，产生0.1g非紫外活性物质(未反应的mpeg2000-oh)。
[0199]
实施例1d：11的合成(方案3)
[0200]
将mpeg5000 ots(5g，0.97mmol)溶解在甲苯(50ml)中，并在dean-stark装置上回流加热。3小时后，将溶液冷却至室温，并蒸发挥发物。在室温下，向8(391mg，1.9mmol)在thf(10ml)中的溶液中加入nah(60mg，1mmol)，并在室温下搅拌混合物。35分钟后，加入溶解在thf中的上述mpeg5000 ots(15ml)，并在50℃下加热混合物。7天后，通过在室温下加入meoh(10ml)来淬灭反应。搅拌混合物4小时，然后蒸发挥发物。将粗材料置于chcl3(100ml)中，加入mgso4(6.5g)并在室温下搅拌混合物。1小时45分钟后，滤出固体，并蒸发挥发物。将粗产物置于ch2cl2(100ml)中，加入mgso4(6.3g)并在室温下搅拌混合物。3.5小时后，滤出固体并蒸发挥发物。将粗产物溶解在最小量的ch2cl2中，通过缓慢加入et2o沉淀，离心(3200rpm)10分钟并倾析。用et2o洗涤固体，离心并倾析，重复三次。在真空下干燥产物，得到11(3.873g，0.74mmol，76％)
[0201]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.45-7.29(m,5h),6.93-6.80(m,4h),5.01(s,2h),4.08(t,j＝4.6hz,2h),3.82(m,4h),3.74-3.52(bs,513h),3.49-3.44(m,2h),3.39(s,3h)。注意！mpeg5000-oh为杂质。
[0202]
实施例1e：12的合成(方案3)
[0203]
向在甲酸(10ml)和二噁烷(6ml)中的苄基保护的酚11(1.020g，0.19mmol)中加入10％pd/c(0.115g)。将混合物回流加热。21.5小时后，将混合物冷却至室温，通过双层玻璃微纤维过滤器和mgso4垫过滤并蒸发挥发物。将粗产物溶解在甲苯(10ml)中并蒸发。将粗产物溶解在最小量的ch2cl2中，通过缓慢加入et2o沉淀，离心(3200rpm，5℃)10分钟。用et2o洗涤固体，离心并倾析，重复三次。在真空下干燥固体，以三个循环从甲苯中蒸发，产生12(669mg，0.13mmol，68％)。
[0204]1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ＝6.82-6.72(m,4h),6.12(bs,1h),4.08(t,j＝4.6hz,2h),3.81(t,4.6hz,2h),3.77-3.55(bs,598h),3.49-3.44(m,3h),3.39(s,3h)。mpeg5000-oh为杂质。
[0205]
实施例1f：12在溴化wang树脂上的加载(方案3)
[0206]
在4ml thf中溶胀/洗涤溴化wang树脂(0.214g，0.235mmol)3
×
20分钟。向在thf(5ml)中的酚12(0.398g，0.078mmol)中加入naoet(0.014g，0.180mmol)，并在室温下于n2气氛下搅拌混合物。1.5小时后，一次性加入上述溶胀/洗涤的树脂，并在黑暗中于n2气氛下搅动混合物。通过hplc(方法2)监控反应进程。7天后，通过hplc未能检测到uv活性酚峰的减少，表明12没有加载在溴化wang树脂上。
[0207]
实施例2：通用步骤，表2：用于固定酚类的树脂
[0208]
向在指定溶剂中含有2的反应混合物中加入指定的碱。用n2吹扫并在室温下搅动混合物。在指定的时间(时间1)后，一次性加入亲电树脂，用n2吹扫，避光并搅动。通过hplc(方法1)监控反应，并在指定时间(时间2)后报告结果。
[0209]
注意！当量数基于1混合物中17mol％的酚。
[0210]
实施例3：通用步骤，表3：稀释度、溶剂、碱、碱当量数、树脂当量数和反应时间的研究
[0211]
注意！在实验7和10中，没有溶胀/洗涤树脂。在实验20中，将树脂进行soxhlet提
取、干燥和再次溶胀。在实验21中，将树脂进行soxhlet提取并加入到反应混合物中，而没有任何进一步附加的溶胀/洗涤。将树脂在指定的溶剂中溶胀/洗涤3
×
20分钟。向在指定溶剂中含有2的反应混合物中加入指定的碱，用n2吹扫并搅动/搅拌。在指定时间(时间1)后，一次性加入溶胀/洗涤/soxhlet提取的树脂，用n2吹扫，避光并搅动/搅拌。通过hplc(方法1)监控反应，并将指定时间(时间2)后的结果报告在表3中。
[0212]
实施例4：小规模清除(实验21，表3)
[0213]
在soxhlet装置中，使用mtbe(60ml)作为溶剂溶胀/洗涤溴化wang树脂(1.283g，1.17mmol)超过48小时。
[0214]
在配有机械搅拌的三颈圆底烧瓶中，将包括1的混合物(5.001g，0.8mmol总酚(2))溶解在mtbe(33ml)中。加入naoet(77mg，1.08mmol)并在n2气氛下搅拌混合物。70分钟后，所有掩蔽的酚已经转化为酚(2)(17％，图2)，并且一次性加入上述溶胀/洗涤的溴化wang树脂。在n2气氛下，轻轻搅拌混合物并避光。22小时后，酚(2)含量为1％(图3)，使树脂沉降，用滤棒除去液体。用mtbe(24ml)洗涤树脂3次，合并滤液，通过玻璃纤维过滤器过滤并蒸发，产生纯化的双峰(dipod)混合物(3.6g，基于除去94％酚(2)后计算的产率为86％)。
[0215]
实施例5：大规模清除(实验23，表3)
[0216]
在n2气氛下，于避光的配有机械搅拌(聚四氟乙烯涂覆的双月桨叶搅拌器，100rpm)的5l烧瓶中用mtbe(2.7l)分批溶胀/洗涤溴化wang树脂(351g，386mmol)，直到通过hplc/重量分析不能检测到树脂可提取物/可滤出物并且通过nmr不能检测到低聚苯乙烯。取出32g溶胀/洗涤的树脂，并且不用于随后的清除步骤。注意！蒸馏洗涤中的溶剂，并在随后的洗涤中重复使用。在配有机械搅拌(聚四氟乙烯涂覆的双月桨叶搅拌器，100rpm)的10l duran瓶中，将方案1中描述的反应混合物(1048g，165mmol杂质)溶解在mtbe(6.5l)中。在3次真空/氮气循环后，加入naoet(18.8g，271mmol)并在室温下于n2气氛下搅拌(175rpm)混合物65分钟，之后酚(2)含量为19％。经由套管真空转移将上述溶胀/洗涤的树脂一次性加入到混合物中。将混合物避光并在n2的气氛下轻轻搅拌(100rpm)。17.5小时后，酚含量为1％，用滤棒除去液体，用mtbe(1.8l，每循环30分钟)洗涤树脂2次。合并级分，通过双玻璃纤维过滤器过滤并蒸发，产生纯化的双峰混合物(788g，基于除去94％酚(2)计算的产率为89％)。