新型交联海藻酸的制作方法

1.本发明涉及新型海藻酸衍生物、新型交联海藻酸、新型交联海藻酸结构体以及它们的制造方法等。


背景技术：

2.海藻酸是从巨藻（lessonia）、巨囊藻（macrocystis）、海带（laminaria）、泡叶藻（ascophyllum）、丛梗藻（durvillaea）、褐藻苷苔(ecklonia cava)、黑海带（
アラメ
）、昆布等天然褐藻类的细胞壁中提取的高分子酸性多糖分子，是β-d-甘露糖醛酸( m成分)和作为其c-5差向异构体的α-l-古罗糖醛酸( g成分)这2种糖醛酸1-4键合而成的直链状的杂聚物。具体而言，其化学结构是由甘露糖醛酸的均聚物嵌段( mm )、古罗糖醛酸的均聚物嵌段( gg )、以及甘露糖醛酸和古罗糖醛酸无规排列而得到的嵌段(mg)以任意的排列和比例复杂地进行键合而得的嵌段共聚物。海藻酸在医疗、生物技术、化妆品、纤维、造纸、食品等领域中被广泛利用。
3.海藻酸的1价盐的海藻酸碱金属盐类(例如海藻酸钠等)为水溶性的，但2价盐的海藻酸碱土金属盐类(例如海藻酸钙等)具有通过金属离子交联而凝胶化(不溶化)的性质，利用该性质进行了改变或成形为适于各种用途的物质的尝试。
4.为了探索多糖类(例如透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸等)改变或成形为各种材料的可能性和其物性(例如强度、溶胀性等)的改良，迄今进行了各种例如关于通过共价键交联而得的交联多糖的研究等。
5.作为获得交联多糖的方法，具体而言，已知(1)使用甲醛等醛交联剂的交联法(专利文献1：国际公开第2011/028031号小册子)、(2)利用多糖中的羧基和羟基的自交联法(专利文献2：国际公开第89/10941号小册子)、(3)使用同双官能性交联剂(二环氧化物、二乙烯基砜、二胺或二酰肼等)或异双官能性交联剂(表卤代醇等)的交联法(专利文献3：国际公开第2009/073437号小册子)。
6.此外，已知(4)通过导入了光反应性基团(肉桂酸、取代肉桂酸、丙烯酸、马来酸、富马酸、呋喃基丙烯酸、噻吩丙烯酸、亚肉桂基乙酸、山梨酸、胸腺嘧啶或香豆素等)后进行光照射的交联法(专利文献4、5：国际公开第2005/026214号小册子、日本特开平9-87236号公报)、和(5)导入了硫醇基的多糖彼此以二硫键进行交联的交联法和通过使用导入了硫醇基的多糖类和导入了马来酰亚胺基的多糖类进行迈克尔加成反应的交联法(专利文献6：国际公开第2008/071058号小册子)等。
7.进而，作为通过共价键使多糖类交联的方法，已知(6)通过使用导入了炔基的多糖类和导入了叠氮基的多糖类进行huisgen（huisgen）反应(1,3-偶极加成环化反应)的交联法。
8.将多糖类通过huisgen反应交联得到的交联多糖在(i)国际公开第2008/031525号小册子(专利文献7)、(ii)国际公开第2012/165462号小册子(专利文献8)、(iii)国际公开第2015/020206号小册子(专利文献9)、(iv)中国专利申请公开第106140040号说明书(专利
文献10)和(v)国际公开第2019/240219号小册子(专利文献13)等中公开。
9.但是，(i)专利文献7涉及交联多糖，其中，通过使第1多糖为透明质酸、第2多糖为选自软骨素、硫酸化皮肤素、海藻酸或其盐等中的多糖，使在各多糖中介由连接基团而导入的链状炔基和叠氮基在铜催化剂存在下进行huisgen反应而得到，没有公开后述新型交联海藻酸。
10.此外，(ii)专利文献8涉及交联多糖，其中，通过使第1多糖和第2多糖为选自透明质酸、羧甲基葡聚糖、纤维素衍生物和壳聚糖中的多糖(第1多糖和第2多糖可以为同种，也可以为不同种)，使在各多糖中介由连接基(多糖与连接基以酯键键合)而导入的环状炔基和叠氮基进行huisgen反应而得到，没有公开后述新型交联海藻酸。
11.此外，(iii)专利文献9涉及交联多糖，其中，通过使第1多糖为透明质酸、第2多糖为硫酸软骨素，使在各多糖中介由连接基而导入的环状炔基和叠氮基进行huisgen反应而得到，没有公开后述新型交联海藻酸。
12.此外，(iv)专利文献10涉及交联多糖，其中，通过使第1多糖为壳聚糖、第2多糖为海藻酸钠，使在各多糖中介由连接基团(多糖与连接基团以酯键键合)而导入的环状炔基和叠氮基进行huisgen反应而得到，没有公开后述新型交联海藻酸。
13.此外，国际公开第2016/019391号小册子(专利文献11)和国际公开第2017/165389号小册子(专利文献12)中记载了在侧链上导入叠氮基的海藻酸，但是没有公开由在侧链上导入炔基的海藻酸形成的交联海藻酸结构体，其使用目的也与本技术发明不同。
14.进而，非专利文献1记载了在侧链导入了环辛炔侧链的支链型海藻酸(balg-dbco)，但其是由海藻酸和支链型聚乙二醇(4-arm peg-nh2)合成的支链型海藻酸(branched alginic acid：balg)与氨基化环辛炔(dbco-peg-amine)反应而得到的，与后述新型海藻酸衍生物的结构不同，其使用目的也不同。
15.现有技术文献专利文献专利文献1: 国际公开第2011/028031号小册子专利文献2: 国际公开第89/10941号小册子专利文献3: 国际公开第2009/073437号小册子专利文献4: 国际公开第2005/026214号小册子专利文献5: 日本特开平9-87236号公报专利文献6: 国际公开第2008/071058号小册子专利文献7: 国际公开第2008/031525号小册子专利文献8: 国际公开第2012/165462号小册子专利文献9: 国际公开第2015/020206号小册子专利文献10: 中国发明申请公开第106140040号说明书专利文献11: 国际公开第2016/019391号小册子专利文献12: 国际公开第2017/165389号小册子专利文献13: 国际公开第2019/240219号小册子。
16.非专利文献非专利文献1: nat commun.9(1)，p2195-，2018年。


技术实现要素：

17.发明要解决的课题在前述状况下，需要新型海藻酸衍生物、由该新型海藻酸衍生物形成的新型交联海藻酸、交联海藻酸结构体和它们的制造方法。
18.解决课题的手段本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果分别发现了式(i)或式(ii)所示的新型海藻酸衍生物。进而，使用通过使式(i)和式(ii)的新型海藻酸衍生物进行huisgen反应而得到的新型交联海藻酸，成形作为1种交联海藻酸结构体的珠(含色素的珠)时，发现该珠具有高稳定性，并且与以往的凝胶相比，能够制备具有与目标相应的透过率的凝胶等，从而完成了本发明。
19.在此提供的新型海藻酸衍生物(式(i)和式(ii))例如可用于形成化学交联，即，导入可用于形成化学交联的反应性基团或该反应性基团的互补的反应性基团。
20.前述化学交联形成例如可利用基于huisgen反应(1,3-偶极加成环化反应)的交联反应进行，例如可在式(i)和式(ii)的海藻酸衍生物间进行，或例如可在式(i)的海藻酸衍生物和具有叠氮基的其他分子间进行，或可在式(ii)的海藻酸衍生物和具有炔基的其他分子间进行。
21.基于末端炔基和末端叠氮基的huisgen反应由于一般需要100℃ 以上的加热，因此在生物体分子的化学修饰中使用本反应是不适合的。但是，该反应中通过使铜催化剂(例如，cu(i))共存，发现了在室温下以几乎100%的收率形成环化加成体(三唑环)的反应条件(angew.chem.int.ed.engl.,41,p2596-2599,2002年；j.org.chem.,67,p3057-3064,2002年)，能利用于生物体分子的化学修饰。另一方面，要利用前述在铜催化剂存在下的huisgen反应得到交联海藻酸时，有该交联海藻酸中残留微量的铜催化剂的可能性，有在交联海藻酸或交联海藻酸结构体中发生源自铜的细胞毒性的担忧。
22.优选方式中，为了避免交联海藻酸中源自铜的细胞毒性的发生，利用不需要铜催化剂的huisgen反应，得到交联海藻酸。具体而言，通过在导入海藻酸衍生物的炔基中使用环辛炔衍生物(高张力的环状炔基)，不需要在100℃以上的高温条件和铜催化剂即可进行反应。因此，优选方式的新型交联海藻酸不含铜催化剂，因此即使成型最终形体物(交联海藻酸结构体)的情况下，也不表现源自铜的毒性，从该观点考虑是优异的。
23.在此，提供以下的方式所示的在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团导入环状炔基或叠氮基得到的式(i)或式(ii)的海藻酸衍生物、使用式(i)和式(ii)的海藻酸衍生物进行huisgen反应(1,3-偶极加成环化反应)得到的新型交联海藻酸、交联海藻酸结构体、以及前述各海藻酸衍生物、交联海藻酸和交联海藻酸结构体的制造方法。即，作为示例的方式可以为以下的〔1〕~〔23〕。
24.〔1〕交联海藻酸，其是使用在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团(-l
1-)导入环状炔基(akn)得到的下式(i)表示的海藻酸衍生物、和在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团(-l
2-)导入叠氮基得到的下式(ii)表示的海藻酸衍生物实施交联反应得到的，[化1]
[式(i)中，akn、-l
1-、-nhco-和(alg)与后述第1方式中的定义相同]。
[0025]
[化2][式(ii)中，-l
2-、-nhco-和(alg)与后述的第1方式中的定义相同]。
[0026]
〔1-ia〕前述〔1〕中所述的式(i)表示的海藻酸衍生物，其中，akn-l
1-nh2基(akn和-l
1-与后述的第1方式中的定义相同)的导入率为0.1%~30%。
[0027]
〔1-ib〕前述〔1〕中所述的式(i)表示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量为10万da~300万da。
[0028]
〔1-iia〕前述〔1〕中所述的式(ii)表示的海藻酸衍生物，其中，n
3-l
2-nh2基(-l
2-与后述的第1方式中的定义相同)的导入率为0.1%~30%。
[0029]
〔1-iib〕前述〔1〕中所述的式(ii)表示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量为10万da~300万da。
[0030]
〔2〕下式(i)表示的海藻酸衍生物，其是在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团(-l
1-)导入环状炔基(akn)得到的，[化3][式(i)中，(alg)、-l
1-、akn的定义与后述的第2方式中的定义相同]。
[0031]
〔3〕前述〔2〕所述的式(i)表示的海藻酸衍生物，其中，akn-l
1-nh2基(akn和-l
1-与后述的第3方式中的定义相同)的导入率为0.1%~30%。
[0032]
〔4〕前述〔2〕所述的式(i)表示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量为10万da~300万da。
[0033]
〔5〕下式(ii)表示的海藻酸衍生物，其是在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团(-l
2-)导入叠氮基得到的，[化4]
[式(ii)中，(alg)、-l
2-的定义与后述第5方式中的定义相同]。
[0034]
〔6〕前述〔5〕所述的式(ii)表示的海藻酸衍生物，其中，n
3-l
2-nh2基(-l
2-与后述的第6方式中的定义相同)的导入率为0.1%~30%。
[0035]
〔7〕前述〔5〕所述的式(ii)表示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量为10万da~300万da。
[0036]
〔8〕前述〔1〕所述的交联海藻酸，其中，第1海藻酸的任意羧基与第2海藻酸的任意羧基介由下式(iii-l)键合，[化5][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得到的酰胺键；-l
1-、-l
2-和x与后述第8方式中的定义相同]。
[0037]
〔8a〕交联海藻酸，其中，第1海藻酸的任意羧基与第2海藻酸的任意羧基介由下式(iii-l)键合，[化6][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺键；-l
1-、-l
2-和x与后述的第8a方式中的定义相同]。
[0038]
〔8-1〕前述〔1〕或〔8a〕所述的交联海藻酸，其中，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联和利用2价金属离子而部分地形成的离子交联作为交联。
[0039]
〔8-2〕前述〔1〕或〔8a〕所述的交联海藻酸，其中，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联作为交联。
[0040]
〔8-3-1〕前述〔8-1〕中，2价金属离子为选自钙离子、镁离子、钡离子、锶离子和锌离子中的离子。
[0041]
〔8-3-2〕前述〔8-1〕中，2价金属离子的供给源为选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液、氯化钡水溶液等中的水溶液。
[0042]
〔9〕制造交联海藻酸的方法，其包含将前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物混合而进行交联反应(huisgen反应)，由此得到前述〔1〕或〔8a〕所述的交联海藻酸。
[0043]
〔9-1〕制造交联海藻酸的方法，其包含将前述〔1〕所述的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液加入前述〔1〕中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液进行交联反应(huisgen反应)，由此得到前述〔1〕或〔8a〕所述的交联海藻酸。
[0044]
〔9-2〕制造交联海藻酸的方法，其包含将前述〔1〕中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液加入前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液进行交联反应
(huisgen反应)，由此得到前述〔1〕或〔8a〕所述的交联海藻酸。
[0045]
〔10〕制造交联海藻酸的方法，其包含得到前述〔1〕或〔8a〕所述的交联海藻酸，使用前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物进行huisgen反应(交联反应)形成的化学交联为下式(iii-l)的结构，[化7][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-、-l
1-以及-l
2-与后述的第10方式中的定义相同]。
[0046]
〔11〕交联海藻酸结构体，其是将混合前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物得到的海藻酸衍生物的混合溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中得到的。
[0047]
〔11-1〕交联海藻酸结构体，其是将前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中，将所得到的凝胶加入前述〔1〕中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应得到的。
[0048]
〔11-2〕交联海藻酸结构体，其是将前述〔1〕中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中，将所得到的凝胶加入前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应得到的。
[0049]
〔12-1〕前述〔11〕~〔11-2〕中任一项所述的交联海藻酸结构体，其中，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联和利用2价金属离子而部分地形成的离子交联作为交联。
[0050]
〔12-2〕前述〔11〕~〔11-2〕中任一项所述的交联海藻酸结构体，其中，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联作为交联。
[0051]
〔12-3-1〕前述〔12-1〕中，2价金属离子为选自钙离子、镁离子、钡离子、锶离子和锌离子中的离子。
[0052]
〔12-3-2〕前述〔12-1〕中，2价金属离子的供给源为选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液、氯化钡水溶液等中的水溶液。
[0053]
〔13-1〕交联海藻酸结构体，其是将前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物进行利用2价金属离子的离子交联和利用huisgen反应的化学交联得到的，具有内容物的保持性。
[0054]
〔13-2〕交联海藻酸结构体，其是将前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物进行利用huisgen反应的化学交联得到的，具有内容物的保持性。
[0055]
〔13-3-1〕前述〔13-1〕中，2价金属离子为选自钙离子、镁离子、钡离子、锶离子和锌离子中的离子。
[0056]
〔13-3-2〕前述〔13-1〕中，2价金属离子的供给源为选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液、氯化钡水溶液等中的水溶液。
[0057]
〔14〕前述〔11〕~〔13-2〕所述的交联海藻酸结构体，其中，使用前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物通过进行huisgen反应形成的化学交联为下式(iii-l)的结构，[化8][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-、-l
1-以及-l
2-与后述的第14方式中的定义相同]。
[0058]
〔15〕制造交联海藻酸结构体的方法，其中，将混合前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物得到的海藻酸衍生物的混合溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中实施交联反应得到交联海藻酸结构体。
[0059]
〔15-1〕制造交联海藻酸结构体的方法，其中，将前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中，将所得到的凝胶加入前述〔1〕中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应得到交联海藻酸结构体。
[0060]
〔15-2〕制造交联海藻酸结构体的方法，其中，将前述〔1〕中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中，将所得到的凝胶加入前述〔1〕中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应得到交联海藻酸结构体。
[0061]
〔16-1〕前述〔15〕~〔15-2〕中任一项所述的制造交联海藻酸结构体的方法，其中，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联和利用2价金属离子而部分地形成的离子交联作为交联。
[0062]
〔16-2〕前述〔15〕~〔15-2〕中任一项所述的制造交联海藻酸结构体的方法，其中，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联作为交联。
[0063]
〔16-3-1〕前述〔16-1〕中，2价金属离子为选自钙离子、镁离子、钡离子、锶离子和锌离子中的离子。
[0064]
〔16-3-2〕前述〔16-1〕中，2价金属离子的供给源为选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液、氯化钡水溶液等中的水溶液。
[0065]
〔17〕前述〔15〕~〔16-2〕中任一项所述的制造交联海藻酸结构体的方法，其中，使用前述〔1〕的任一项中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物进行huisgen反应形成的化学交联为下式(iii-l)的结构，[化9][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-、-l
1-以及-l
2-与后述的第17方式中的定义相同]。
[0066]
〔18〕前述〔11〕~〔14〕中任一项所述的交联海藻酸结构体，其为珠或近球形的凝胶。
[0067]
〔19〕医疗用材料，其含有前述〔11〕~〔14〕中任一项所述的交联海藻酸结构体。
[0068]
〔20〕前述〔19〕所述的医疗用材料，其为珠或近球形的凝胶。
[0069]
〔21〕前述〔1〕或〔8a〕所述的交联海藻酸、前述〔2〕或前述〔5〕所述的海藻酸衍生物或前述〔11〕~〔14〕中任一项所述的交联海藻酸结构体，其具有生物适应性。
[0070]
〔22〕下式(am-1)表示的氨基化合物、或其制药学上允许的盐或它们的溶剂化物：[化10][式(am-1)中，-l
1-和akn的定义与后述的第22方式中的定义相同]。
[0071]
〔23〕下式(am-2)表示的氨基化合物、或其制药学上允许的盐或它们的溶剂化物:[化11][式(ii)中，-l
2-的定义选自后述的第23方式中的-l
2-的定义]。
[0072]
发明效果本发明提供例如可用于化学交联形成的新型海藻酸衍生物、新型交联海藻酸、新型交联海藻酸结构体等。
[0073]
有利的是，海藻酸衍生物导入了生物体中没有的反应基团，因此即使未反应的基团残留，也没有与细胞等生物体成分进行交联反应的可能性，对生物体来说安全性是可期待的。另外，有利的是，交联反应不使用金属催化剂，在常温下反应结束，因此可安全地、容易地使用。
[0074]
一些方式的交联海藻酸通过huisgen反应(1,3-偶极加成环化反应)进行化学交联。交联可将化学交联与利用2价金属金离子(例如钙离子)的离子交联组合使用，通过调整反应条件，优选其稳定性与非交联海藻酸或非化学交联海藻酸(例如进行了钙离子交联的交联海藻酸)比较得到了改善。另外，优选可调整交联体的凝胶物性，也可调整物质透过性。本发明至少具有这些效果的1种以上。
附图说明
[0075]
[图1] 显示交联海藻酸结构体的凝胶稳定性的评价的图。
[0076]
[图2] 显示交联海藻酸结构体的edta下的凝胶稳定性的评价的图。
[0077]
[图3] 显示交联海藻酸结构体的凝胶稳定性的评价的图。
[0078]
[图4] 显示交联海藻酸结构体的edta下的凝胶稳定性的评价的图。
[0079]
[图5] 显示交联海藻酸结构体的凝胶稳定性的评价的图。
[0080]
[图6] 显示交联海藻酸结构体的edta下的凝胶稳定性的评价的图。
[0081]
[图7] 显示交联海藻酸结构体的凝胶透过率的评价的图。
[0082]
[图8] 显示交联海藻酸结构体的凝胶透过率的评价的图。
[0083]
[图9] 显示交联海藻酸衍生物的凝胶生物适应性评价的图。
具体实施方式
[0084]
[具体方式]可包括以下的方式[1]~[23]。
[0085]
[1]第1方式如下。使用在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团(-l
1-)导入环状炔基(akn)得到的下式(i)表示的海藻酸衍生物、和在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价连接基团(-l
2-)导入叠氮基得到的下式(ii)表示的海藻酸衍生物实施交联反应得到的交联海藻酸。
[0086]
[式(i)表示的海藻酸衍生物]下式(i)表示的海藻酸衍生物，[化12][式(i)中，(alg)表示海藻酸；-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺键；-l
1-表示选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表1-1]
。
[0087]
[表1-2]
。
[0088]
akn表示选自下表中记载的部分结构式[各式中虚线右侧不包括在内]中的环状炔基][表2]
。
[0089]
[式(ii)表示的海藻酸衍生物]下式(ii)表示的海藻酸衍生物，[化13](式(ii)中，(alg)表示海藻酸；-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺键；-l
2-表示选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团]。
[0090]
[表3-1]
。
[0091]
[表3-2]
(其中，使用式(i)表示的海藻酸衍生物中-l
1-为选自(l1-1)、(l1-2a)、(l1-2b)、(l1-11)或(l1-12)中的任意1种连接基团的衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物中-l
2-为(l2-10)的连接基团的衍生物实施交联反应得到的交联海藻酸除外)。
[0092]
[1-1-1]前述方式[1]的式(i)中，-l
1-优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表4-1]
。
[0093]
[表4-2]
(其中，实施交联反应时，使用-l
2-为选自(l2-10)、(l2-10-p1)、(l2-10-p2)或(l2-10-x)中任意1种连接基团的式(ii)表示的海藻酸衍生物时，前述表中的-l
1-中的(l1-1)、(l1-2a)、(l1-2b)、(l1-11)和(l1-12-p1)的连接基团不包括在优选方式中)。
[0094]
[1-1-2]前述方式[1]的式(i)中，-l
1-更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表5-1]
。
[0095]
[表5-2]
(其中，实施交联反应时，使用-l
2-为选自(l2-10)、(l2-10-p1)、(l2-10-p2)或(l2-10-x)中的任意1种连接基团的式(ii)表示的海藻酸衍生物时，前述表中的-l
1-中的(l1-1-1)、(l1-2a-1)、(l1-2b-1)、(l1-11-1)和(l1-12-p2)的连接基团不包括在更优选的方式中)。
[0096]
[1-1-3]前述方式[1]的式(i)中，-l
1-更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表6-1]
。
[0097]
[表6-2]
(其中，实施交联反应时，使用-l
2-为选自(l2-10)、(l2-10-p1)、(l2-10-p2)或(l2-10-x)中的任意1种连接基团的式(ii)表示的海藻酸衍生物时，前述表中的-l
1-中的(l1-1-x)、(l1-2-x)、(l1-11-x)和(l1-12-x)的连接基团不包括在更优选的方式中)。
[0098]
[1-2-1]前述方式[1]的式(i)中，akn优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中虚线右侧不包括在内]中的环状炔基，[表7]。
[0099]
[1-2-2]前述方式[1]的式(i)中，akn更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中虚线右侧不包括在内]中的环状炔基，[表8]。
[0100]
[1-2-3]前述方式[1]的式(i)中，akn更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中虚线右侧不包括在内]中的环状炔基，[表9]。
[0101]
[1-3-1]前述方式[1]的式(ii)中，-l
2-优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，
[表10](其中，实施交联反应时，使用-l
1-为选自(l1-1)、(l1-2a)、(l1-2b)、(l1-11)、(l1-12)、(l1-1-1)、(l1-2a-1)、(l1-2b-1)、(l1-11-1)、(l1-12-p1)、(l1-1-x)、(l1-2-x)、(l1-11-x)或(l1-12-x)中的任意1种连接基团的式(i)表示的海藻酸衍生物时，前述表中的-l
2-中，(l2-10-p1)的连接基团不包括在优选的方式中)。
[0102]
[1-3-2]前述方式[1]的式(ii)中，-l
2-更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表11]
(其中，实施交联反应时，使用-l
1-为选自(l1-1)、(l1-2a)、(l1-2b)、(l1-11)、(l1-12)、(l1-1-1)、(l1-2a-1)、(l1-2b-1)、(l1-11-1)、(l1-12-p1)、(l1-1-x)、(l1-2-x)、(l1-11-x)或(l1-12-x)中的任意1种连接基团的式(i)表示的海藻酸衍生物时，前述表中的-l
2-中，(l2-10-p2)的连接基团不包括在更优选的方式中)。
[0103]
[1-3-3]前述方式[1]的式(ii)中，-l
2-更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表12]
(其中，实施交联反应时，使用-l
1-为选自(l1-1)、(l1-2a)、(l1-2b)、(l1-11)、(l1-12)、(l1-1-1)、(l1-2a-1)、(l1-2b-1)、(l1-11-1)、(l1-12-p1)、(l1-1-x)、(l1-2-x)、(l1-11-x)或(l1-12-x)中的任意1种连接基团的式(i)表示的海藻酸衍生物时，前述表中的-l
2-中，(l2-10-x)的连接基团不包括在更优选的方式中)。
[0104]
[1-4-1]前述方式[1]的式(i)中，akn和-l
1-的组合优选为选自下表中的部分结构所示，[表13]
(表中的akn、-l
1-的各式如前述方式[1]所记载的)(其中，进行交联反应时，实施交联反应时，使用-l
2-为选自(l2-10)、(l2-10-p1)、(l2-10-p2)或(l2-10-x)中的任意1种连接基团的式(ii)表示的海藻酸衍生物时，前述表中的-l 1-中，(l1-1)、(l1-2a)、(l1-2b)、(l1-11)和(l1-12)的连接基团不包括在优选的方式中)。
[0105]
[1-4-2]前述方式[1]的式(i)中，akn和-l
1-的组合更优选如选自下表的式中的部分结构所示，[表14]
(表中的akn、-l
1-的各式如前述方式[1-1]中所记载的)(其中，实施交联反应时，使用-l
2-为选自(l2-10)、(l2-10-p1)、(l2-10-p2)或(l2-10-x)中的任意1种连接基团的式(ii)表示的海藻酸衍生物时，前述表中的-l
1-中，(l1-1-1)、(l1-2a-1)、(l1-2b-1)、(l1-11-1)和(l1-12-p1)的连接基团不包括在更优选的方式中)。
[0106]
[1-4-3]前述方式[1]的式(i)中，akn和-l
1-的组合更优选如选自下表的式中的部分结构所示，[表15](表中的akn、-l
1-的各式如前述方式[1-1]中所记载的)(其中，实施交联反应时，使用-l
2-为选自(l2-10)、(l2-10-p1)、(l2-10-p2)或(l2-10-x)中的任意1种连接基团的式(ii)表示的海藻酸衍生物时，前述表中的-l
1-中，(l1-1-x)、(l1-2-x)、(l1-11-x)和(l1-12-x)的连接基团不包括在更优选的方式中)。
[0107]
[1-4-4]前述方式[1]的式(i)中，akn和-l
2-的组合特别优选如选自下述部分结构式中的部分结构所示，[化14]
(其中，实施交联反应时，使用-l
2-为选自(l2-10)、(l2-10-p1)、(l2-10-p2)或(l2-10-x)中的任意1种连接基团的式(ii)表示的海藻酸衍生物时，选自下述部分结构式中的部分结构不包括在特别优选的方式中，[化15])。
[0108]
[1-ia]第1-ia的方式如下。前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物，其中，akn-l
1-nh2基(akn和-l
1-与前述方式[1]中的定义相同)的导入率为约0.1%~约30%。
[0109]
[1-ia-1]前述方式[1―ia]中，akn-l
1-nh 2
基的导入率优选为约1.0%~约20%；更优选为约2.0~10%。
[0110]
[1-ib]第1-ib的方式如下。前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量为约10万da~约300万da。
[0111]
[1-ib-1]前述方式[1-ib]中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量优选为约30万da~约250万da，更优选为约50万da~约100万da。
[0112]
[1-ic]第1-ic的方式如下。前述方式[1]中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物，其中，n
3-l
2-nh2基(-l
2-与前述方式[1]中的定义相同)的导入率为约0.1%~约30%。
[0113]
[1-ic-1]前述方式[1-ic]中，n
3-l 2-nh 2
基的导入率优选为约1.0%~约20%；更优选为约2.0~10%。
[0114]
[1-id]第1-id的方式如下。前述方式[1]中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量为约10万da~约300万da。
[0115]
[1-id-1]前述方式[1-id]中，式(ii)的海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量优选为约30万da~约250万da，更优选为约50万da~约100万da。
[0116]
通过前述方式[1]的优选方式进一步适当组合akn、-l
1-和-l
2-的定义，可任意形成前述方式[1]的交联海藻酸的优选方式。
[0117]
[2]第2方式如下。下式(i)表示的海藻酸衍生物，其是在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团(-l
1-)导入环状炔基(akn)得到的，[化16]
[式(i)中，(alg)表示海藻酸；-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺键；-l
1-表示选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表16-1]。
[0118]
[表16-2]
。
[0119]
akn表示选自下表中记载的部分结构式[各式中虚线右侧不包括在内]中的环状炔基]。
[0120]
[表17]
。
[0121]
[2-1]前述方式[2]的式(i)中，-l
1-优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表18-1]
。
[0122]
[表18-2]
。
[0123]
更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表19-1]
。
[0124]
[表19-2]
。
[0125]
更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表20-1]。
[0126]
[表20-2]
。
[0127]
[2-2]前述方式[2]的式(i)中，akn优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中虚线右侧不包括在]中的环状炔基，[表21]。
[0128]
更优选为选自下表记载的部分结构式[各式中虚线右侧不包括在内]中的环状炔基，[表22]
。
[0129]
更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中虚线右侧不包括在内]中的环状炔基，[表23]。
[0130]
[2-3]前述方式[2]的式(i)中，akn和-l
1-的组合优选如选自下表中的部分结构所示(表中的akn、-l
1-的各式如前述方式[2]所记载的)；[表24]
。
[0131]
更优选akn-l
1-的组合如选自下表的式中的部分结构所示：[表25](表中的akn、-l
1-的各式如前述方式[2-1]和[2-2]中所记载的)；更优选akn-l 1-的组合如选自下表的式中的部分结构所示：[表26]
(表中的akn、-l
1-的各式如前述方式[2-1]和[2-2]中所记载的)；特别优选akn-l
1-的组合如选自下述部分结构式中的部分结构所示：[化17]通过前述方式[2]的优选方式进一步适当组合akn和-l
1-的定义，可任意形成前述方式[2]的前述式(i)表示的海藻酸衍生物的优选方式。
[0132]
[3]第3方式如下。前述方式[2]所述的式(i)的海藻酸衍生物，其中，akn-l
1-nh2基(akn和-l
1-与前述方式[2]中记载的定义相同)的导入率为约0.1%~约30%。
[0133]
[3-1]前述方式[3]中，akn-l
1-nh2基的导入率优选为约1.0%~约20%；更优选为约2.0~10%。
[0134]
[4]第4方式如下。前述方式[2]所示的式(i)的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量为约10万da~约300万da。
[0135]
[4-1]前述方式[4]中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量优选为约30万da~约250万da，更优选为约50万da~约100万da。
[0136]
[5]第5方式如下。下式(ii)表示的海藻酸衍生物，其是在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团(-l
2-)导入叠氮基得到的，[化18][式(ii)中，(alg)表示海藻酸；-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺键；-l
2-表示选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团]，[表27-1]
。
[0137]
[表27-2]
。
[0138]
[5-1]前述方式[5]的前述式(ii)的海藻酸衍生物中，-l
2-优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团；[表28]
。
[0139]
更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团；[表29]
。
[0140]
更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团，[表30]
。
[0141]
[5a]第5a的方式如下。下式(ii)表示的海藻酸衍生物，其是在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团(-l
2-)导入叠氮基得到的，[化19][式(ii)中，(alg)表示海藻酸；-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺键；-l
2-表示选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团]，[表31-1]
。
[0142]
[表31-2]
。
[0143]
[5a-1]前述方式[5a]的前述式(ii)的海藻酸衍生物中，-l
2-优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团；[表32]。
[0144]
更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团；[表33]
。
[0145]
更优选为选自下表中记载的部分结构式[各式中两端的虚线外侧不包括在内]中的连接基团；[表34]。
[0146]
[6]第6方式如下。前述方式[5]或方式[5a]所述的式(ii)的海藻酸衍生物，其中，n
3-l
2-nh2基(-l
2-与前述方式[5]中记载的定义相同)的导入率为约0.1%~约30%。
[0147]
[6-1]前述方式[6]中，n
3-l
2-nh2基的导入率优选为约1.0%~约20%；更优选为约2.0~10%。
[0148]
[7]第7方式如下。前述方式[5]或方式[5a]中所述的式(ii)的海藻酸衍生物，其中，海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量为约10万da~约300万da。
[0149]
[7-1]前述方式[7]中，式(ii)的海藻酸衍生物的通过凝胶过滤色谱法测定的重均分子量优选为约30万da~约250万da，更优选为约50万da~约100万da。
[0150]
[8]第8方式如下。前述方式[1]所述的交联海藻酸，其中，第1海藻酸的任意羧基与第2海藻酸的任意羧基介由下式(iii-l)键合，[化20][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺键；-l
1-与前述方式[1]中的定义相同；-l
2-与前述方式[1]中的定义相同；x为选自下表中记载的部分结构式中的环状基团(各式中两端的虚线外侧不包括在内)，[表35-1]
。
[0151]
[表35-2]
(其中，式(iii-l)中，-l
1-为选自(l1-1)、(l1-2a)、(l1-2b)、(l1-11)或(l1-12)中的任意1种连接基团时，对应的-l
2-中，(l2-10)的连接基团除外)。
[0152]
[8a]第8a方式如下。交联海藻酸，其中，第1海藻酸的任意羧基与第2海藻酸的任意羧基介由下式(iii-l)键合，[化21][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺
键；-l
1-与前述方式[1]中的定义相同；-l
2-与前述方式[1]中的定义相同；x与前述方式[8]中的定义相同]。
[0153]
(其中，式(iii-l)中，-l
1-为选自(l1-1)、(l1-2a)、(l1-2b)、(l1-11)或(l1-12)中的任意1种连接基团时，对应的-l
2-中，(l2-10)的连接基团除外)。
[0154]
[8-1-1]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，优选-l
1-与选自前述方式[1-1-1]中记载的表示-l
1-的式中的连接基团相同。
[0155]
[8-1-2]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，更优选-l
1-与选自前述方式[1-1-2]中记载的表示-l
1-的式中的连接基团相同。
[0156]
[8-1-3]前述方式[8]或[8a]的式(iii-l)中，更优选的-l
1-与选自前述方式[1-1-3]中记载的表示-l
1-的式中的连接基团相同。
[0157]
[8-2-1]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，优选的-l
2-与选自前述方式[1-2-1]中记载的表示-l
2-的式中的连接基团相同。
[0158]
[8-2-2]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，更优选的-l
2-与选自前述方式[1-2-2]中记载的表示-l
2-的式中的连接基团相同。
[0159]
[8-2-3]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，更优选的-l
2-与选自前述方式[1-2-3]中记载的表示-l
2-的式中的连接基团相同。
[0160]
[8-3-1]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，x优选为选自前述方式[8]中记载的部分结构式(tz-1)、式(tz-2)、式(tz-3)、式(tz-4)、式(tz-5)、式(tz-6)、式(tz-10)、式(tz-1-r)、式(tz-2-r)、式(tz-3-r)、式(tz-4-r)、式(tz-5-r)、式(tz-6-r)和式(tz-10-r)中的环状基团。
[0161]
[8-3-2]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，x更优选为选自部分结构式(tz-2)、式(tz-3)、式(tz-6)、式(tz-10)、式(tz-2-r)、式(tz-3-r)、式(tz-6-r)和式(tz-10-r)中的环状基团。
[0162]
[8-3-3]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，x更优选为选自部分结构式(tz-2)、式(tz-6)、式(tz-2-r)和式(tz-6-r)中的环状基团。
[0163]
[8-4-1]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，优选-l
2-x-l
1-的组合如选自下表的式中的部分结构所示，[表36-1]
。
[0164]
[表36-2]
(表中的-l
1-和-l
2-如前述方式[1]中所记载的；-x-如前述方式[8]中所记载的)(其中，前述表中，-l
1-为选自(l1-1)、(l1-2a)、(l1-2b)、(l1-11)或(l1-12)中的任意1种连接基团时，对应的-l
2-中(l2-10-p1)的连接基团除外)。
[0165]
[8-4-2]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，更优选-l
2-x-l
1-的组合如选自下表的式中的部分结构所示，[表37-1]
。
[0166]
[表37-2]
(表中的-l
1-和-l
2-如前述方式[1]中所记载的；-x-如前述方式[8]中所记载的)(其中，前述表中，-l
1-为选自(l1-1-1)、(l1-2a-1)、(l1-2b-1)、(l1-11-1)或(l1-12-p1)中的任意1种连接基团时，对应的-l
2-中(l2-10-p2)的连接基团除外)。
[0167]
[8-4-3]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，更优选-l
2-x-l
1-的组合如选自下表的式中的部分结果所示，[表38](表中的-l
1-和-l
2-如前述方式[1]中所记载的；-x-如前述方式[8]中所记载的)(其中，前述表中，-l
1-为选自(l1-1-x)、(l1-2-x)、(l1-11-x)或(l1-12-x)中的任意1种连接基团时，对应的-l
2-中，(l2-10-x)的连接基团除外)。
[0168]
[8-4-4]前述方式[8]或方式[8a]的式(iii-l)中，特别优选-l
2-x-l
1-的组合如选自下述部分结构式[式中两端的虚线外侧不包括在内]中的部分结构式所示，[化22]
[0169]
[8-5-1]前述方式[1]或方式[8a]记载的交联海藻酸中，交联为利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联和利用2价金属离子部分地形成的离子交联。
[0170]
[8-5-2]前述方式[1]或方式[8a]记载的交联海藻酸中，交联为利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联。
[0171]
[8-5-3]前述方式[8-5-1]中，2价金属离子优选为选自钙离子、镁离子、钡离子、锶离子或锌离子中的2价金属离子；更优选为钙离子或钡离子；进一步优选为钙离子。
[0172]
[8-5-4]前述方式[8-5-1]中，用于离子交联形成的2价金属离子可优选以选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液和氯化钡水溶液中的水溶液为供给源；更优
选为氯化钙水溶液或氯化钡水溶液；进一步优选为氯化钙水溶液。
[0173]
通过方式[8]的优选方式进一步适当组合-l
1-、-l
2-和x的定义，可任意形成前述方式[8]的交联海藻酸的优选方式。
[0174]
通过方式[8a]的优选方式进一步适当组合-l
1-、-l
2-和x的定义，可任意形成前述方式[8a]的交联海藻酸的优选方式。
[0175]
[9]第9方式如下。制造交联海藻酸的方法，包括通过将前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物混合而进行交联反应(huisgen反应)，得到前述方式[1]或方式[8a]所述的交联海藻酸。
[0176]
[9-1]第9-1的方式如下。制造交联海藻酸的方法，包括通过将前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液加入前述方式[1]中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液进行交联反应(huisgen反应)，得到前述方式[1]或方式[8a]所述的交联海藻酸。
[0177]
[9-2]第9-2的方式如下。制造交联海藻酸的方法，包括通过将前述方式[1]中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液加入前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液进行交联反应(huisgen反应)，得到前述方式[1]或方式[8a]所述的交联海藻酸。
[0178]
[10] 制造前述方式[1]或方式[8a]记载的交联海藻酸的方法，其中，通过使用前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物进行huisgen反应(交联反应)所形成的化学交联为下式(iii-l)的结构:[化23][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-、x、-l
1-以及-l
2-与前述方式[8]中的定义相同]。
[0179]
[11]第11的方式如下。交联海藻酸结构体，其是将混合前述[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物得到的海藻酸衍生物的混合溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中得到的。
[0180]
[11-1]第11-1的方式如下。交联海藻酸结构体，其是将前述[1]的任意1项中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中，将所得到的凝胶加入前述[1]中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应得到的。
[0181]
[11-2]第11-2的方式如下。交联海藻酸结构体，其是将前述[1]中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中，将所得到的凝胶加入前述[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应得到的。
[0182]
[12-1]第12-1的方式如下。前述方式[11]~[11-2]中任1项所述的交联海藻酸结构体，其中，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联和利用2价金属离子而部分地形成的离子交联作为交联。
[0183]
[12-2]第12-2的方式如下。前述方式[11]~[11-2]中任1项所述的交联海藻酸结构体，其中，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联作为交联。
[0184]
[12-3-1]前述方式[12-1]中，2价金属离子优选为选自钙离子、镁离子、钡离子、锶
离子或锌离子中的2价金属离子；更优选为钙离子或钡离子；进一步优选为钙离子。
[0185]
[12-3-2]前述方式[12-1]中，用于离子交联形成的2价金属离子可优选以选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液和氯化钡水溶液中的水溶液为供给源；更优选为氯化钙水溶液或氯化钡水溶液；进一步优选为氯化钙水溶液。
[0186]
[13]第13的方式如下。交联海藻酸结构体，其是将前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物进行利用2价金属离子的离子交联和/或利用huisgen反应的化学交联得到的，具有内容物的保持性。
[0187]
[13-1-1]前述方式[13]中，2价金属离子优选为选自钙离子、镁离子、钡离子、锶离子或锌离子中的2价金属离子；更优选为钙离子或钡离子；进一步优选为钙离子。
[0188]
[13-1-2]前述方式[13]中，用于离子交联形成中的2价金属离子可优选以选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液和氯化钡水溶液中的水溶液为供给源；更优选为氯化钙水溶液或氯化钡水溶液；进一步优选为氯化钙水溶液。
[0189]
[14]第14的方式如下。前述方式[11]~[13]中任1向所述的交联海藻酸结构体，其中，使用前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物进行huisgen反应形成的化学交联为下式(iii-l)的结构，[化24][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-、x、-l
1-以及-l
2-与前述方式[8]中的定义相同]。
[0190]
[15]第15的方式如下。制造交联海藻酸结构体的方法，其中，交联海藻酸结构体是将混合前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物得到的海藻酸衍生物的混合溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中，实施交联反应得到的。
[0191]
[15-1]第15-1的方式如下。制造交联海藻酸结构体的方法，其中，交联海藻酸结构体是将前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中，将所得到的凝胶加入前述方式[1]中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应得到的。
[0192]
[15-2]第15-2的方式如下。制造交联海藻酸结构体的方法，其中，交联海藻酸结构体是将前述方式[1]中记载的式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液滴加到含有2价金属离子的溶液中，将所得到的凝胶加入前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液中实施交联反应得到的。
[0193]
[16-1]第16-1的方式如下。前述方式[15]~[15-2]中任意1项所述的制造交联海藻酸结构体的方法，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联和利用2价金属离子而部分地形成的离子交联作为交联。
[0194]
[16-2]第16-2的方式如下。前述方式[15]~[15-2]中任意1项所述的制造交联海藻酸结构体的方法，其中，包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联作为交联。
[0195]
[16-3-1]前述方式[16-1]中，2价金属离子优选为选自钙离子、镁离子、钡离子、锶
离子或锌离子中的2价金属离子；更优选为钙离子或钡离子；进一步优选为钙离子。
[0196]
[16-3-2]前述方式[16-1]中，用于离子交联形成中的2价金属离子可优选以选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液和氯化钡水溶液中的水溶液为供给源；更优选为氯化钙水溶液或氯化钡水溶液；进一步优选为氯化钙水溶液。
[0197]
[17]第17的方式如下。前述方式[15]~[16-2]中任一项所述的制造交联海藻酸结构体的方法，其中，通过使用前述方式[1]中记载的式(i)表示的海藻酸衍生物和式(ii)表示的海藻酸衍生物进行huisgen反应形成的化学交联为下式(iii-l)的结构:[化25][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-、x、-l
1-以及-l
2-与前述方式[8]中的定义相同]。
[0198]
[18]第18的方式如下。前述方式[11]~[14]中任一项所述的交联海藻酸结构体，其为珠或近球形的凝胶。
[0199]
[19]第19的方式如下。医疗用材料，其包含前述方式[11]~[14]中任一项所述的交联海藻酸结构体。
[0200]
[20]第20的方式如下。前述方式[19]所述的医疗用材料，其为珠或近球形的凝胶。
[0201]
[21]第21的方式如下。前述方式[1]或方式[8a]所述的交联海藻酸、前述方式[2]或前述方式[5]所述的海藻酸衍生物、或前述方式[11]~[14]中任一项所述的交联海藻酸结构体，其具有生物适应性。
[0202]
[22]第22的方式如下。下式(am-1)表示的氨基化合物、或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物:[化26][式(am-1)中，-l
1-和akn的定义与前述方式[2]中记载的定义相同]。其中，下表的氨基化合物或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物除外。
[0203]
[表39]
。
[0204]
[22-1]氨基化合物、或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物，其中，前述方式[22]的式(am-1)表示的化合物优选-l
1-与前述方式[2-1]中记载的优选的-l
1-的定义相同，akn与前述方式[2-2]中记载的优选的akn的定义相同。其中，下表的氨基化合物或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物除外。
[0205]
[表40]。
[0206]
[22-2]氨基化合物、或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物，其中，前述方式[22]的式(am-1)表示的化合物更优选-l
1-与述方式[2-1]中记载的更优选的-l
1-的定义相同，akn与述方式[2-2]中记载的更优选的akn的定义相同。其中，下表的氨基化合物或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物除外。
[0207]
[表41]
。
[0208]
[22-3]氨基化合物、或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物，其中，前述方式[22]的式(am-1)表示的化合物更优选-l
1-与述方式[2-1]中记载的更优选的-l
1-的定义相同，akn与前述方式[2-2]中记载的更优选的akn的定义相同。其中，下表的氨基化合物或其制药学上允许的盐、或它们溶剂化物除外。
[0209]
[表42]。
[0210]
[22-4]前述方式[22]的前述式(am-1)表示的化合物特别优选为选自下式中的氨基化合物、或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物。
[0211]
[化27]。
[0212]
[23]第23的方式如下。下式(am-2)表示的氨基化合物、或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物，[化28][式(am-2)中，-l
2-的定义与前述方式[5]中记载的(l2-2a)、(l2-2b-a)、(l2-3)、(l2-4)、(l2-5a)、(l2-5b)、(l2-6a)、(l2-6b)、(l2-7a)、(l2-7b)、(l2-8a)、(l2-8b)、(l2-9a)和(l2-9b)的定义相同]。其中，下表的氨基化合物或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物除外。
[0213]
[表43]。
[0214]
[23-1]氨基化合物、或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物，其中，前述方式[23]的式(am-2)表示的化合物优选-l
2-与前述方式[5-1]中记载的(l2-2a)、(l2-2b-a)、(l2-3)、(l2-4-p1)、(l2-5a-p1)和(l2-5b-p1)的定义相同。其中，下表的氨基化合物或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物除外。
[0215]
[表44]
。
[0216]
[23-2]氨基化合物、或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物，其中，前述方式[23]的式(am-2)表示的化合物更优选-l
2-与前述方式[5-1]中记载的(l2-2a-1)、(l2-2b-b)、(l2-3-1)、(l2-4-p2)、(l2-5a-p2)、和(l2-5b-p2)的定义相同。其中，下表的氨基化合物或其制药学上允许的盐或它们的溶剂化物除外。
[0217]
[表45]
。
[0218]
[23-3]前述方式[23]的前述式(am-2)表示的化合物更优选为选自下式中的氨基化合物、或其制药学上允许的盐、或它们的溶剂化物:[化29]。
[0219]
本说明书中只要没有特别说明，在引用上位方式时，也包括该方式的下位方式。例如引用方式[1]时，也包括方式[1]的下位方式。
[0220]
以下对各方式进行详细说明。
[0221]
1.海藻酸本说明书中，记载为海藻酸时，是指选自海藻酸、海藻酸酯和它们的盐(例如海藻酸钠)中的至少1种海藻酸(有时称为“海藻酸类”)。所使用的海藻酸可以源自天然，也可以为合成物，优选源自天然。优选使用的海藻酸类为由巨藻、巨囊藻、海带、泡叶藻、丛梗藻、褐藻苷苔、黑海带、昆布等褐藻类提取的生物体内吸收性的多糖类，是d-甘露糖醛酸(m)和l-古罗糖醛酸(g)这2种糖醛酸聚合为直链状得到的聚合物。更具体而言，是d-甘露糖醛酸的均聚物级分(mm级分)、l-古罗糖醛酸的均聚物级分(gg级分)、和d-甘露糖醛酸与l-古罗糖醛酸无规排列而得到的级分(m/g级分)任意键合而得到的嵌段共聚物。
[0222]
海藻酸是由褐藻类的海藻提取、纯化而制造的天然多糖类的一种，是d-甘露糖醛
酸(m)与l-古罗糖醛酸(g)聚合得到的聚合物。海藻酸的d-甘露糖醛酸与l-古罗糖醛酸的构成比(m/g比)、即凝胶强度主要因海藻等的来源生物的种类而不同，另外，受该生物的生长场所、季节的影响，m/g比处于约0.2的高g型至m/g比为约5的高m型的大范围中。海藻酸的物理化学性质因海藻酸的m/g比、m与g的排列方式等而不同，另外优选的用途有时不同。海藻酸类的凝胶化能力和所生成的凝胶的性质受m/g比的影响，已知一般g比率高的情况下凝胶强度高。m/g比另外对凝胶的硬度、脆度、吸水性、柔软性等也有影响。因此，本发明中使用的海藻酸可以根据其最终使用用途使用适当的m/g比、适当的粘度的海藻酸。
[0223]
海藻酸的工业制造方法有酸法和钙法等，本发明中可使用通过任意的制造方法制造的海藻酸。优选通过纯化，由hplc法得到的定量值为80~120质量%的范围的海藻酸，更优选在90~110质量%的范围的海藻酸，进一步优选在95~105质量%的范围的海藻酸。本发明中，将由hplc法得到的定量值在前述的范围的海藻酸称为高纯度海藻酸。本发明中使用的海藻酸或其盐优选为高纯度海藻酸。作为市售品，例如可购入(株)kimica销售的kimica海藻酸系列，优选购入高纯度食品
･
医药品用级别的海藻酸使用。也可将市售品进一步适当纯化使用。例如，优选进行低内毒素处理。纯化法、低内毒素处理方法例如可采用日本特开2007-75425号公报中记载的方法。
[0224]
作为本发明中使用的“海藻酸”中的海藻酸的盐，为“海藻酸的1价金属盐”，是将海藻酸的d-甘露糖醛酸或l-古罗糖醛酸的羧酸的氢离子与na+、k+等1价金属离子进行离子交换制造的盐。作为海藻酸的1价金属盐，具体可列举海藻酸钠、海藻酸钾等，特别优选海藻酸钠。
[0225]
本说明书中，有时将海藻酸记做(alg)，将海藻酸的任意1个羧基记做-cooh，将海藻酸表述为(alg)-cooh。
[0226]
本发明中使用的海藻酸可以根据其最终的使用用途使用适当的重均分子量的海藻酸。例如，优选使用重均分子量为1万~1,000万的海藻酸，更优选为10万以上500万以下，进一步优选为15万以上300万以下。
[0227]
一些方式中，海藻酸为海藻酸钠。海藻酸钠可使用市售品的海藻酸钠。在此，后述的实施例中，海藻酸钠使用下表记载的a-1、a-2、a-3、b-1、b-2和b-3的海藻酸钠(经销商 持田制药株式会社)。各海藻酸钠的1w/w%的水溶液的粘度、重均分子量和m/g等如下表所示。
[0228]
[表46]
。
[0229]
前述海藻酸钠a-1、a-2、a-3、b-1、b-2和b-3的各物性值通过下述的各种方法测定。测定方法不限于该方法，根据测定方法的不同，各物性值有时与上述不同。
[0230]
[海藻酸钠的粘度测定]根据日本药典(第16版)的粘度测定法，使用旋转粘度计法(锥板型旋转粘度计)测定。具体的测定条件如以下所示。试样溶液的制备使用milliq水进行。测定仪器使用锥板型旋转粘度计(粘度粘弹性测定装置
レオストレス
rs600(thermo haake gmbh)传感器：35/1)。转速在1w/w%海藻酸钠溶液测定时为1rpm。读取时间设为测定2分钟、从开始1分钟至2分钟的平均值。将3次测定的平均值作为测定值。测定温度设为20℃。
[0231]
[海藻酸钠的重均分子量测定](1)通过凝胶渗透色谱(gpc)和(2)gpc-mals的2种测定方法测定。测定条件如下。
[0232]
[前处理方法]在样品中加入洗脱液溶解后，用0.45μm膜过滤器过滤后作为测定溶液。
[0233]
(1)凝胶渗透色谱(gpc)测定[测定条件(相对分子量分布测定)]柱:tskgel gmpw-xl
×
2+g2500pw-xl(7.8mm i.d.
×
300mm
×
3根)洗脱液:200mm硝酸钠水溶液流量:1.0ml/min浓度:0.05%检测器:ri检测器柱温度:40℃注入量:200μl分子量标准:标准普鲁兰多糖、葡萄糖。
[0234]
(2)gpc-mals测定[折射率增量(dn/dc)测定(测定条件)]差示折射率计:optilab t-rex测定波长:658nm测定温度:40℃
溶剂:200mm硝酸钠水溶液样品浓度:0.5~2.5mg/ml(5浓度)[测定条件(绝对分子量分布测定)]柱:tskgel gmpw-xl
×
2+g2500pw-xl(7.8mm i.d.
×
300mm
×
3本)洗脱液:200mm硝酸钠水溶液流量:1.0ml/min浓度:0.05%检测器:ri检测器、光散射检测器(mals)柱温度:40℃注入量:200μl。
[0235]
本说明书中，对于海藻酸、海藻酸衍生物、交联海藻酸和交联海藻酸的分子量，单位有时为da(道尔顿)。
[0236]
海藻酸类的d-甘露糖醛酸和l-古罗糖醛酸的构成比(m/g比)主要根据海藻等的来源生物的种类而不同，此外，受到该生物的生长场所、季节的影响，处于m/g比为约0.2的高g型至m/g比为约5的高m型的大范围。海藻酸类的凝胶化能力和所生成的凝胶的性质受m/g比的影响，一般已知g比率高时凝胶强度变高。m/g比另外对凝胶的硬度、脆度、吸水性、柔软性等也有影响。所使用的海藻酸类和/或其盐的m/g比通常为0.1~4.0，某方式中，为0.1~3.0，某方式中为0.1~2.0，某方式中为0.5~1.8，某方式中为0.8~1.2。另外，别的方式中为0.1~0.5。
[0237]
另外，本发明中使用的海藻酸可以根据其最终使用用途使用适当的粘度、适当的m/g比的海藻酸。
[0238]
本说明书中，使用“~”表示的数值范围表示包含“~”前后记载的数值分别作为最小值和最大值的范围。
[0239]
本说明书中，所使用的“海藻酸酯”、“海藻酸盐”没有特别限定，为了与交联剂反应，需要不具有阻碍交联反应的官能团。作为海藻酸酯，优选举出海藻酸丙二醇酯等。
[0240]
本说明书中，作为海藻酸盐，可举出例如海藻酸的1价盐、海藻酸的2价盐。作为海藻酸的1价盐，优选举出海藻酸钠、海藻酸钾、海藻酸铵等，更优选为海藻酸钠或海藻酸钾，特别优选为海藻酸钠。作为海藻酸的2价盐，优选举出海藻酸钙、海藻酸镁、海藻酸钡、海藻酸锶等。
[0241]
海藻酸为高分子多糖类，难以正确地确定分子量，一般重均分子量为1000~1000万、优选为1万~800万、更优选为2万~300万的范围。源自天然物的高分子物质的分子量测定中，已知根据测定方法不同会产生值的差异。
[0242]
本说明书中，特定本发明的海藻酸衍生物或海藻酸或其盐的分子量的情况下，只要没有特别说明，则为通过尺寸排阻色谱(sec)算出的重均分子量。作为本发明中使用的海藻酸或其盐，优选根据其最终使用用途使用适当的分量分布的物质。
[0243]
例如，后述实施例中记载的凝胶渗透色谱(gpc)或凝胶过滤色谱(这些也总称为尺寸排阻色谱(sec))的测定条件下，优选为10万~500万，更优选为15万~300万。另外，某方式中，为50万~300万的范围，更优选为100万~250万，进一步优选为100万~200万的范围。
[0244]
另外，例如可通过gpc-mals(sec-mals)法测定绝对重均分子量。通过gpc-mals法
测定的重均分子量(绝对分子量)优选为1万以上、更优选为5万以上、进一步优选为6万以上，另外优选为100万以下、更优选为80万以下、进一步优选为70万以下、特别优选为50万以下。其优选范围为1万~100万，更优选为5万~80万，进一步优选为6万~50万。
[0245]
通常，通过使用上述的sec、sec-mals的方法算出高分子多糖类的分子量时，产生约10%~约30%的测定误差。例如，如果为50万则值在35万~65万的范围变动，如果为100万则值在70万~130万程度的范围变动。本说明书中，分子量测定的记载中，记载“约”时，包括该数值的
±
10%的值、某方式中包括该数值的
±
20%的值。
[0246]
在此，一般源自天然物的高分子物质不具有单一的分子量，为具有各种分子量的分子的集合体，因此测定具有一定幅度的分子量分布。代表性测定方法为凝胶过滤色谱。作为通过凝胶过滤色谱得到的分子量分布的代表性信息，可列举重均分子量(mw)、数平均分子量(mn)、分散比(mw/mn)。
[0247]
重视分子量大的高分子对平均分子量的贡献的是重均分子量，如下式表示。
[0248]
mw=σ(wimi)/w=σ(himi)/σ(hi)数平均分子量将高分子的总重量除以高分子的总数算出。
[0249]
mn=w/σni=σ(mini)/σni=σ(hi)/σ(hi/mi)在此，w为高分子的总重量，wi为第i个高分子的重量，mi为第i个的洗脱时间下的分子量，ni为分子量mi的个数，hi为第i个的洗脱时间下的高度。
[0250]
已知源自天然物的高分子物质的分子量测定因测定方法的不同值产生不同(透明质酸的例子：chikako yomota et.al. bull.natl.health sci.， vol.117， pp135-139(1999)、chikako yomota et.al. bull.natl.inst. health sci.， vol.121， pp30-33(2003))。对于海藻酸的分子量测定，有记载由固有粘度(intrinsic viscosity)算出的方法、通过sec-malls(size exclusion chromatography with multiple angle laser light scattering detection)算出的方法的文献(astm f2064-00(2006)，astm international发行)。本发明中，重均分子量按照上述文献所述的常规方法，例如尺寸排阻色谱(sec)测定分子量，可使用通过以普鲁兰多糖作为标准物质的校准曲线算出的值。
[0251]
另外，本发明中，重均分子量可以为按照上述文献所示的常规方法、通过例如尺寸排阻色谱(sec)―mals测定的绝对分子量。
[0252]
海藻酸类的分子量测定可按照常规方法测定。
[0253]
本说明书中，特定海藻酸或其盐的分子量时，只要没有特别说明，为通过凝胶过滤色谱算出的重均分子量。分子量测定中使用凝胶过滤色谱时的代表性条件可采用例如后述的本实施例的条件。柱例如可使用superose6 increase10/300 gl柱(ge healthcare science公司)，作为展开溶剂，例如可使用包含0.15mol/l nacl的10mmol/l磷酸缓冲液(ph7.4)，作为分子量标准，可以使用蓝色葡聚糖、甲状腺球蛋白、铁蛋白、醛缩酶、伴白蛋白、卵白蛋白、核糖核酸酶a和抑肽酶。
[0254]
本说明书中使用的海藻酸的粘度没有特别限定，以1w/w%的海藻酸类的水溶液测定粘度时，优选为10mpa
･
s~1000mpa
･
s，更优选为50mpa
･
s~800mpa
･
s。
[0255]
海藻酸的水溶液的粘度的测定可以根据常规方法测定。例如，可以使用旋转粘度计法的同轴双筒型旋转粘度计、单筒型旋转粘度计（brookfield型粘度计)、圆锥-平板型旋转粘度计(锥板型粘度计)等测定。期望根据日本药典(第16版)的粘度测定法。更优选使用
锥板型粘度计。
[0256]
海藻酸类由褐藻类提取而得，最初分子量大、粘度高，但在利用热的干燥、纯化等过程中，分子量变小，粘度变低。通过制造步骤的温度等条件管理、作为原料的褐藻类的选择、制造步骤中的分子量的分级等方法可制造分子量不同的海藻酸类。进一步，通过与具有不同分子量或者粘度的其他批次的海藻酸类混合，也能形成具有目标分子量的海藻酸类。
[0257]
本说明书中使用的海藻酸在一些方式中为未经低内毒素处理的海藻酸，或在另一些方式中，为经低内毒素处理的海藻酸。低内毒素是指内毒素水平低至实质上不引发炎症或发热的程度。更优选期望为经低内毒素处理的海藻酸类。
[0258]
低内毒素处理可以通过公知的方法或基于其的方法进行。例如，可以通过纯化透明质酸钠的菅等的方法(例如参照日本特开平9-324001号公报等)、纯化β1,3-葡聚糖的吉田等的方法(例如参照日本特开平8-269102号公报等)、纯化海藻酸盐、结冷胶等生物体高分子盐的威廉等的方法(例如参照特表2002-530440号公报等)、纯化多糖的詹姆斯等的方法(例如参照国际公开第93/13136号小册子等)、路易斯等的方法(例如参照美国专利第5589591号说明书等)、纯化海藻酸盐的赫尔曼弗兰克等的方法(例如参照appl microbiol biotechnol (1994) 40：638-643等)等或基于它们的的方法而实施。低内毒素处理不限于它们，可以通过洗涤、利用过滤器(除去内毒素的过滤器、带电过滤器等)的过滤、超滤、使用柱(内毒素吸附亲和柱、凝胶过滤柱、利用离子交换树脂的柱等)的纯化、在疏水性物质、树脂或活性炭等上的吸附、有机溶剂处理(利用有机溶剂的提取、添加有机溶剂导致的析出
・
沉降等)、表面活性剂处理(例如参照日本特开2005-036036号公报等)等公知的方法、或者适当组合它们而实施。在这些处理的步骤中可以适当组合离心分离等公知的方法。期望根据海藻酸的种类而适当选择。
[0259]
内毒素水平可利用公知的方法确认，例如，可以通过利用鲎试剂(lal)的方法、使用
エンドスペシー
(注册商标)es-24s set(生化学工业株式会公司)的方法等测定。
[0260]
所使用的内毒素的处理方法没有特别限定，作为其结果，进行利用鲎试剂(lal)的内毒素测定时，海藻酸类的内毒素含量优选为500内毒素单位(eu)/g以下，进一步优选为100eu/g以下，尤其优选为50eu/g以下，特别优选为30eu/g以下。本发明中，“实质上不含内毒素”是指通过日局内毒素试验测定的内毒素值在前述的数值范围。经低内毒素处理的海藻酸钠可得到例如sea matrix(注册商标)(持田制药株式会社)、pronova
tm up lvg(fmcbiopolymer)等市售品。
[0261]
2.海藻酸衍生物本说明书中提供新型海藻酸衍生物。本说明书中，作为海藻酸衍生物，为在海藻酸的任意1个以上羧基上介由酰胺键和2价的连接基团导入了huisgen反应中的反应性基团或该反应性基团的互补的反应性基团的海藻酸衍生物。
[0262]
更具体地，为下式(i)表示的海藻酸衍生物，[化30]
l
1-nh-基作为互补的反应性基团。
[0269]
本说明书中，反应性基团或互补的反应性基团的导入率分别为0.1%~30%或1%~30%，优选为2%~20%，更优选为3%~10%。
[0270]
前述反应性基团或互补的反应性基团的导入率是将作为海藻酸类的重复单元的糖醛酸单糖单元中的导入了各反应性基团的糖醛酸单糖单元的数以百分数表示的值。本说明书中，只要没有特别限定，海藻酸衍生物(式(i)或式(ii))中的反应性基团或互补的反应性基团的导入率所用的%指mol%。各反应性基团或互补的反应性基团的导入率可利用后述实施例中记载的方法求出。
[0271]
本说明书中，式(i)中的环状炔基(akn)和式(ii)中的叠氮基可通过huisgen反应形成三唑环，由此形成交联。
[0272]
3.huisgen反应huisgen反应(1,3-偶极加成环化反应)为具有如下述式所示的末端叠氮基和末端炔基的化合物间的缩合反应。反应结果具有可收率良好地得到二取代1,2,3-三唑环，且不生成多余的副产物的特征。认为该反应可生成1,4-或1,5-二取代三唑环，可通过使用铜催化剂而位置选择性地得到三唑环。
[0273]
[化33]此外，wittig和krebs报告了不使用铜催化剂的huisgen反应。即，仅混合环辛炔和苯基叠氮化物而得到环化加成体的反应(下式中，r3=苯基)。本反应由于环辛炔的三键张力较大，因此通过与苯基叠氮化物反应消除张力成为驱动力，反应自发地进行，因此不需要催化剂。
[0274]
[化34]如以上那样，huisgen反应可使用具有取代的伯叠氮基、仲叠氮基、叔叠氮基、芳族叠氮基等的叠氮化合物、和具有作为叠氮基的互补的反应性基团的末端或环状炔基的化合物。此外，huisgen反应中，由于几乎仅叠氮基和炔基反应，反应基质中可取代各种官能团(例如酯基、羧基、烯基、羟基、氨基等)。
[0275]
一些方式中，为了不生成不期望的副产物、且避免铜催化剂产生的细胞毒性而不使用铜催化剂，为了在短时间、容易且高效地在海藻酸分子间形成基于1,2,3-三唑环的交联，作为huisgen反应的炔基，例如使用前述方式[1]所述的环状炔基(环辛基)。
[0276]
优选方式的海藻酸衍生物的交联方法中，该反应(huisgen反应)中几乎不形成不
期望的副产物。此时，在使用海藻酸的新型方式的生物适应性材料的制备、和海藻酸水凝胶的形成中，能导入各种生物活性分子，此外，利用重建手术用或基因疗法用的海藻酸水凝胶能导入细胞物质。
[0277]
4.交联海藻酸交联海藻酸有(i)介由2价金属离子键而得的交联海藻酸、(ii)介由化学键而得的交联海藻酸、或(iii)介由2价金属离子键和化学键二者而得的交联海藻酸。任何交联海藻酸均具有由凝胶状形成半固体、有时形成海绵样形态的特性。
[0278]
介由2价金属离子键而得的交联海藻酸以超高速进行反应，是可逆的，与此相对，介由化学键而得的交联海藻酸在比较温和的条件缓慢进行反应，是不可逆的。交联海藻酸的物性可通过例如改变所使用的包含2价金属离子的水溶液(例如氯化钙水溶液)的浓度、或导入海藻酸的反应性基团的导入率等方法而调整。
[0279]
通过利用前述交联反应能制成各种海藻酸结构体。例如，利用离子交联反应，可由海藻酸溶液瞬时制成特定的结构体，为了该结构体的结构强化(例如，长期稳定性的获得等)，可利用基于化学键的交联反应。另外，例如，在介由2价金属离子键和化学键二者的交联海藻酸结构体中，利用离子交联导入的2价金属离子可逆地释放，也能制作仅残留基于化学键的交联的结构体。
[0280]
某方式的交联海藻酸可通过混合前述式(i)和前述式(ii)的海藻酸衍生物进行huisgen反应而得到。
[0281]
某方式的交联海藻酸通过化学交联(基于由炔基和叠氮基形成的三唑环的交联)而形成三维网眼结构。优选的海藻酸衍生物为交联后的交联海藻酸的稳定性得到改善的物质。
[0282]
一些方式的交联海藻酸为第1海藻酸的任意羧基和第2海藻酸的任意羧基间介由下述式(iii-l):[化35][式(iii-l)中，两端的-conh-和-nhco-表示介由海藻酸的任意羧基而得到的酰胺键；-l
1-、-l
2-和x与前述第8方式中的定义相同]进行酰胺键合而得到的交联海藻酸。
[0283]
一些方式中，制备交联海藻酸时的式(i)的海藻酸衍生物与式(ii)的海藻酸衍生物的混合比以式(i)的衍生物与式(ii)衍生物的重量比计，例如为1~1.5：1、优选为1.2~1.5：1、或1~1.2：1、更优选为1：1。
[0284]
一些方式中，制备交联海藻酸时的式(ii)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的混合比以式(ii)的衍生物与式(i)衍生物的重量比计，例如为1~4.0：1、优选为1.5~4.0：1、或1.2~1.5：1、或1~1.2：1、更优选为1：1。
[0285]
一些方式中，制备交联海藻酸时的式(i)的海藻酸衍生物与式(ii)的海藻酸衍生物的混合比更优选为以式(i)的海藻酸衍生物与式(ii)的海藻酸衍生物的反应性基团的导入率(mol%)比计，例如为1~1.5：1、优选为1.2~1.5：1、或1~1.2：1、更优选为1：1。
[0286]
一些方式中，制备交联海藻酸时的式(ii)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的混合比更优选为以式(ii)的海藻酸衍生物与式(i)的海藻酸衍生物的反应性基团的导入率(mol%)比计，例如为1~4.0：1、优选为1.5~4.0：1、或1.2~1.5：1、或1~1.2：1、更优选为1：1应予说明，前述混合比中，也可分别将式(i)的海藻酸衍生物替换为式(ii)的海藻酸衍生物，将式(ii)的海藻酸衍生物替换为式(i)的衍生物。
[0287]
交联海藻酸不需要海藻酸的构成单元的全部羧基具有上述式(iii-l)的交联。交联海藻酸中的上述式(iii-l)所示的交联的导入率(也称为交联率)例如为约0.1~约80%、约0.3~约60%、约0.5~约30%或约1.0~约10%的范围。
[0288]
用于得到交联海藻酸的huisgen反应中的式(i)或式(ii)的海藻酸衍生物的浓度通常为约1~约500mg/ml，优选为约5~约100mg/ml的范围。
[0289]
huisgen反应的反应温度通常外温为约4~约60℃，优选外温为约15~约40℃的范围。
[0290]
用于形成交联海藻酸(水凝胶)的搅拌时间例如为约几秒~约24小时、几秒~约12小时、几秒~约30分钟、或几秒~约10分钟。
[0291]
huisgen反应中使用的反应溶剂或反应溶液没有特别限定，例如可列举自来水、纯水(例如蒸馏水、离子交换水、ro水、ro-edi水等)、超纯水、细胞培养用培养基、磷酸缓冲生理食盐水(pbs)和生理食盐水等，优选为超纯水。
[0292]
一些方式的交联海藻酸为包含利用huisgen反应形成的基于三唑环的化学交联和利用2价金属离子而部分地形成的离子交联作为交联的交联海藻酸。
[0293]
5.交联海藻酸结构体交联海藻酸结构体可通过包含使用前述式(i)的海藻酸衍生物和式(ii)的海藻酸衍生物实施交联反应的方法得到。
[0294]
本说明书中，“实施交联反应”或“进行交联反应”是指使用前述式(i)的海藻酸衍生物和前述式(ii)的海藻酸衍生物进行huisgen反应，由此在该式(i)的海藻酸衍生物和式(ii)的海藻酸衍生物间形成化学交联(化学键)、或者、通过使前述式(i)的海藻酸衍生物和前述式(ii)的海藻酸衍生物与2价的金属离子共存，由此在该式(i)的海藻酸衍生物和/或式(ii)的海藻酸衍生物的各衍生物间形成离子交联(离子键)、或形成利用前述huisgen反应的化学交联和利用2价的金属离子的离子交联二者。
[0295]
交联海藻酸结构体可通过例如以下的方法制备，但不限于这些。
[0296]
[混和法]通过将混合前述式(i)的海藻酸衍生物和前述式(ii)的海藻酸衍生物得到的海藻酸衍生物的混合溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中，可得到形成化学交联(通过huisgen反应基于由炔基和叠氮基形成的三唑环的交联)和离子交联(通过2价金属离子而部分地形成的交联)的特定结构体即交联海藻酸结构体。
[0297]
[涂布法]将包含前述式(i)的海藻酸衍生物的溶液滴加在包含2价金属离子的溶液中等而得到部分地进行交联的特定结构体。通过将前述得到的例如凝胶等结构体添加在包含前述式(ii)的海藻酸衍生物的溶液中，通过在前述结构体的表面等进一步实施交联反应
(huisgen反应)，可得到交联海藻酸结构体。应予说明，该方法也可分别将式(i)的海藻酸衍生物替换为式(ii)的海藻酸衍生物、将式(ii)的海藻酸衍生物替换为式(i)的海藻酸衍生物而实施。
[0298]
作为前述方法中使用的2价金属离子，没有特别限定，可列举例如选自钙离子、镁离子、钡离子、锶离子、锌离子等中的2价金属离子；优选为钙离子或钡离子；更优选为钙离子。
[0299]
作为前述方法中使用的含有2价金属离子的溶液，没有特别限定，可列举例如选自氯化钙水溶液、碳酸钙水溶液、葡萄糖酸钙水溶液或氯化钡水溶液等中的水溶液，优选为氯化钙水溶液或氯化钡水溶液；更优选为氯化钙水溶液。
[0300]
作为前述方法中使用的含有2价金属离子的溶液的2价金属离子浓度没有特别限定，可列举例如约1mm~约1m，优选为约5mm~约500mm，更优选为约10mm~约300mm。
[0301]
前述方法中使用的溶剂或溶液没有特别限定，可列举例如自来水、纯水(例如蒸馏水、离子交换水、ro水、ro-edi水等)、超纯水、细胞培养用培养基、磷酸缓冲生理食盐水(pbs)和生理食盐水等，优选为超纯水。
[0302]
作为特定的交联海藻酸结构体，可举出例如纤维状结构体、纤维、珠、凝胶、近球形的凝胶等。优选的交联海藻酸结构体为稳定性得到改善的物质。而且，交联海藻酸结构体可具有在其内部保持内容物的能力(内容物保持性)。
[0303]
海藻酸凝胶的物性可通过硬度、弹性、排斥力、断裂力、破裂时应力等物性值调节。
[0304]
6.海藻酸衍生物、交联海藻酸结构体的生物适应性本说明书中，海藻酸衍生物、交联海藻酸或交联海藻酸结构体具有生物适应性。本说明书中，生物适应性是将不引起生物体用材料(在此是指使用式(i)或式(ii)表示的海藻酸衍生物和使用该两海藻酸衍生物制造的交联海藻酸或交联海藻酸结构体)与生物体间的相互作用、与前述生体用材料相邻的组织的局部反应、或全身反应等反应的性质称为具有生物适应性(biocompatibility)。
[0305]
本说明书中，关于海藻酸衍生物、交联海藻酸或交联海藻酸结构体的生物适应性，可通过后述的涉及生物适应性的实施例确认。
[0306]
7.交联海藻酸结构体的稳定性交联海藻酸结构体的稳定性可通过例如测定凝胶稳定性确认，透过性可通过测定凝胶透过率等确认。
[0307]
[凝胶稳定性的测定法]向加入容器中的交联海藻酸结构体凝胶添加磷酸缓冲生理食盐水(pbs)，测定溶出到pbs中的海藻酸的浓度(μg/ml)。由测定的海藻酸浓度算出溶出海藻酸量，除以由分解交联海藻酸结构体凝胶得到的总海藻酸浓度算出的总海藻酸量，将所得到的值用百分率表示的值作为崩解率。凝胶稳定性具体可通过后述的实施例中记载的方法求得。
[0308]
本说明书中，交联海藻酸结构体的凝胶崩解率优选为0%~约90%，更优选为0%~约70%，进一步优选为0%~约50%。对于交联海藻酸结构体的稳定性，漏出到水溶液中的海藻酸的浓度越低，即凝胶崩解率越低，则稳定性越高。
[0309]
[凝胶透过率的测定法]制作内包了荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的交联海藻酸结构体凝胶，在加入容器的
前述凝胶中添加生理食盐水，测定漏出到生理食盐水中的葡聚糖浓度。用由测定的葡聚糖浓度算出的葡聚糖量除以由分解内包了荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的交联海藻酸结构体凝胶得到的总葡聚糖浓度算出的总葡聚糖量，将所得的值用百分率表示的值为凝胶透过率。凝胶透过率具体而言可通过后述的实施例中记载的方法求得。
[0310]
交联海藻酸添加生理食盐水24小时后的凝胶透过率例如在内包分子量约200万的葡聚糖时优选为0%~约90%，更优选为0%~约70%，进一步优选为0%~约50%。另外，内包分子量约15万的葡聚糖时，例如，如果该交联海藻酸结构体凝胶的使用目的为蛋白质、抗体的释放
･
产生，优选为约1%~约100%，更优选为约10%~约100%，进一步优选为约30%~约100%。另外，如果使用目的为免疫屏障，则优选为0%~约90%，更优选为0%~约70%，进一步优选为0%~约50%。
[0311]
对于交联海藻酸结构体的透过性，透过率越低表示内容物、凝胶外物质的透过性越低，透过率越高，表示内容物、凝胶外物质的透过性越高。
[0312]
凝胶的透过率可通过所使用的海藻酸的分子量、浓度、导入海藻酸的反应性基团的种类、导入率、凝胶化所使用的2价金属离子的种类、浓度、或者这些的组合调整。
[0313]
[内包了内容物的交联海藻酸结构体凝胶的制备方法]例如，作为内容物内包了荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的交联海藻酸结构体凝胶可通过以下的方法制备。
[0314]
(1)混合式(i)表示的海藻酸衍生物的溶液和荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖溶液。
[0315]
(2)在(1)中得到的混合溶液中混合式(ii)表示的海藻酸衍生物的溶液。
[0316]
(将(1)的式(i)变更为式(ii)时，(2)的式(ii)变更为式(i))(3)将(2)中得到的混合溶液滴加到含有钙离子的溶液中，所得到的凝胶在溶液中形成化学交联和离子交联，由此得到内包荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的交联海藻酸结构体凝胶。
[0317]
本说明书中的记载中记载“约”时，没有特别说明的情况下，也包括该数値的
±
20%、优选该数值的
±
10%的值。
[0318]
8.海藻酸衍生物的合成方法本说明书中，式(i)或式(ii)表示的海藻酸衍生物可分别使h2n-l
1-akn(式中，l1和akn与前述方式[1]中的定义相同)所示的胺衍生物(am-1)、或h2n-l
2-n3(式中，l2与前述方式[4]中的定义相同)所示的胺衍生物(am-2)与海藻酸类的任意羧基通过使用缩合剂的缩合反应而制造。
[0319]
[化36]
。
[0320]
[式(i)的海藻酸衍生物的制造方法]使用0.5重量%~1重量%的海藻酸水溶液和式(am-1)所示的胺，根据文献公知的方法，例如“实验化学讲座 第5版 16、有机化合物的合成iv、羧酸和衍生物、酯类、p35-70、酰胺和酰亚胺、p118-154、氨基酸
・
肽、p258-283、2007年、丸善”等记载的方法，在选自1,3-二环己基碳二亚胺(dcc)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(wsc
・
hcl)、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(bop试剂)、双(2-氧代-3-噁唑烷基)次磷酰氯(bop-cl)、2-氯-1,3-二甲基咪唑啉鎓六氟磷酸盐(cip)、或4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)等中的缩合剂存在下，在选自海藻酸不析出程度的四氢呋喃、1,4-二噁烷等醚系溶剂、甲醇、乙醇、2-丙醇等醇系溶剂、n,n-二甲基甲酰胺等极性溶剂等中的溶剂和水的混合溶剂中，在碳酸氢钠、碳酸钠等无机碱、或三乙基胺、吡啶等有机碱的存在下或非存在下，在0℃至50℃间的温度下进行缩合反应，由此可制造式(i)的海藻酸衍生物。
[0321]
[式(ii)的海藻酸衍生物的制造方法]使用0.5重量%~1重量%的海藻酸水溶液和式(am-2)表示的胺，按照前述[式(i)的海藻酸衍生物的制造方法]进行反应，由此可制造式(ii)的海藻酸衍生物。
[0322]
前述式(i)的海藻酸衍生物或式(ii)的海藻酸衍生物的制造方法中，式(am-1)或式(am-2)的胺的导入率可考虑该胺的性质等，适当选择并组合下述(i)~(v)等的反应条件来调节。(i)缩合剂的等量的增减、(ii)反应温度的上升
･
下降、(iii)反应时间的延长
･
缩短、(iv)反应基质的海藻酸的浓度的调整、(v)为了提高式(am-1)或式(am-2)的胺的溶解度添加混合在水中的有机溶剂等。
[0323]
以下说明式(am-1)或式(am-2)表示的胺中更具体的胺的制造方法。
[0324]
要说明的是，以下的各制造方法中，m1、n1、m2a、n2a、p2a、m2b、n2b、p2b、m3、n3、p3、m4a、n4a、m4b、n4b、m5a、n5a、p5a、q5a、m5b、n5b、p5b、q5b、m6a、n6a、p6a、m6b、n6b、p6b、m7、n7、m8a、n8a、m8b、n8b、m9a、n9a、p9a、m9b、n9b、p9b、m10、n10、p10、m11、m12、n12、p12、x1、x2、x2a、y2a、x2b、y2b、x3、y3、x4、y4、z4、x5a、y5a、x5b、y5b、x6a、y6a、z6a、v6a、x6b、y6b、z6b、v6b、x7a、y7a、z7a、x7b、y7b、z7b、x8a、y8a、z8a、x8b、y8b、z8b、x9a、y9a、z9a、x9b、y9b、z9b、x10和y10的定义为与前述方式[1]中的记载相同的定义；p1为选自-c(o)o-tertbu基、-c(o)o-bn基、-c(o)ch3基、-c(o)cf3基、-so2ph、-so2phme基、-so2ph(no2)基等中的氨基的保护基团；e=卤素原子(氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等)、-ots基、-oms基等离去基团。
[0325]
另外，以下的各制造方法中，保护基团p1的保护
･
脱保护可按照文献公知的方法，例如《protective groups in organic synthesis 4thedition，第4版、2007年、john wiley & sons)greene等人》的书中记载的脱保护的方法进行保护
･
脱保护。
[0326]
[制造方法am-a] 式(am-1-b1)表示的胺的制造方法:[化37]使用式(sm-b1)的化合物和式(rg-b1)的化合物[式(sm-b1)的化合物和式(rg-b1)的化合物为市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，进行与前述[式(i)的海藻酸衍生物的制造方法]同样的缩合反应，接着将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-1-b1)表示的胺化合物或其盐。
[0327]
[制造方法am-b] 式(am-1-b2a)和式(am-1-b2b)表示的胺的制造方法:[化38]使用式(sm-b2a)的化合物和式(rg-b2a)的化合物[式(sm-b2a)的化合物和式(rg-b2b)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，与[制造方法am-a]同样地反应，可制造式(am-1-b2a)表示的胺化合物或其盐。同样地，使用式(sm-b2b)的化合物和式(rg-b2b)的化合物[式(sm-b2b)的化合物和式(rg-b2b)的化合物为市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]同样地进行反应，由此可制造式(am-1-b2b)表示的胺化合物或其盐。
[0328]
[制造方法am-c] 式(am-1-b3)表示的胺的制造方法:[化39]
b5a)、式(rg-b5a)、式(rg-b5a-1)、式(rg-b5a-2)、式(sm-b5b)、式(rg-b5b)、式(rg-b5b-1)和式(rg-b5b-2)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物。
[0330]
[制造方法am-e]式(am-1-b6a)和式(am-1-b6b)表示的胺的制造方法:[化41]通过按照上述合成路线进行反应(各步骤的反应按照[制造方法am-a]中记载的反应)，可制造式(am-1-b6a)和式(am-1-b6b)表示的胺化合物或其盐。上述路线中，式(sm-b6a)、式(rg-b6a)、式(sm-b6b)和式(rg-b6b)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物。
[0331]
[制造方法am-f]式(am-1-b10)表示的胺的制造方法:[化42]通过按照上述合成路线进行反应(各步骤的反应按照[制造方法am-a]中记载的反应)，可制造式(am-1-b10)表示的胺化合物或其盐。上述路线中，式(sm-b10)、式(rg-b10)、式(rg-b10-1)和式(rg-b10-2)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物。
[0332]
[制造方法am-g] 式(am-1-b4a)和式(am-1-b4b)表示的胺的制造方法:[化43]
使用式(sm-b4)的化合物和式(rg-b4a)的化合物[式(sm-b4)的化合物和式(rg-b4a)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，按照文献公知的方法，例如《journal of the american chemical society,126(46),p15046-15047、2004年》等中记载的方法， 《步骤1a》在三氟甲磺酸银、agclo4等试剂存在下，在甲苯、二氯甲烷等不参与反应的溶剂中反应，由此得到式(im-b4a-1)的化合物， 《步骤2a》接着使用氢化钠、naome等的碱进行脱溴化反应，由此得到式(im-b4a-2)的化合物，《步骤3a》进一步将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-1-b4a)表示的胺化合物或其盐。
[0333]
同样地，使用式(rg-b4b)代替式(rg-b4a)，按照上述路线进行反应，由此可制造式(am-1-b4b)表示的胺化合物或其盐。
[0334]
[制造方法am-h]式(am-1-b8a)和式(am-1-b8b)表示的胺的制造方法:[化44]通过按照上述合成路线进行反应(各步骤的反应按照[制造方法am-a]中记载的反应)，可制造式(am-1-b8a)和式(am-1-b8b)表示的胺化合物或其盐。上述路线中，式(sm-b8a)或式(sm-b8b)是市售化合物或可按照[制造方法am-g]中记载的反应制造的化合物，式(rg-b8a)或式(rg-b8b)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物。
[0335]
[制造方法am-j]式(am-1-b7)表示的胺的制造方法:[化45]
使用式(sm-b7)的化合物和式(rg-b7)的化合物[式(sm-b7)的化合物和式(rg-b7)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，进行与前述[式(i)的海藻酸衍生物的制造方法]同样的缩合反应，接着将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-1-b7)表示的胺化合物或其盐。
[0336]
[制造方法am-j-2]式(am-1-b7)表示的胺的制造方法:[化46]使用式(sm-b7)的化合物和式(rg-b7-2)的化合物[式(sm-b7)的化合物和式(rg-b7-2)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，进行与前述[式(i)的海藻酸衍生物的制造方法]同样的缩合反应(《步骤1》和《步骤2》)，接着将保护基团p1脱保护，接着使用式(rg-b7-3)的化合物(是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物)，进行与前述《步骤1》同样的缩合反应，接着将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-1-b7)表示的胺化合物或其盐。
[0337]
[制造方法am-k]式(am-1-b9a)和式(am-1-b9b)表示的胺的制造方法:[化47]通过按照上述合成路线进行反应(各步骤的反应按照[制造方法am-j]中记载的反
应)，可制造式(am-1-b9a)和式(am-1-b9b)表示的胺化合物或其盐。上述路线中，式(sm-b7)、式(rg-b9a)或式(rg-b9b)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物。
[0338]
[制造方法am-l]式(am-2-z1)表示的胺的制造方法:[化48]使用式(sm-z1)的化合物[式(sm-z1)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，按照文献公知的方法，例如《organometallics，29(23)，p6619-6622；2010年》等中记载的方法，在二甲基亚砜等不参与反应的溶剂中与nan3反应，导入叠氮基后，将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-2-z1)表示的胺化合物或其盐。
[0339]
要说明的是，式(am-2-z1)表示的胺化合物或其盐可作为市售化合物得到。
[0340]
[制造方法am-m]式(am-2-z2a)和式(am-2-z2b)表示的胺的制造方法:[化49]使用式(sm-z2a)的化合物或式(sm-z2b)的化合物[式(sm-z2a)的化合物和式(sm-z2b)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，与[制造方法am-l]同样地与nan3反应，导入叠氮基后，将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-2-z2a)或式(am-2-z2b)表示的胺化合物或其盐。要说明的是，式(am-2-z2a)或式(am-2-z2b)表示的胺化合物或其盐可作为市售化合物得到。
[0341]
[制造方法am-n]式(am-2-z3)表示的胺的制造方法:[化50]使用式(sm-z3)的化合物和式(rg-z3)的化合物[式(sm-z3)的化合物和式(rg-z3)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]的化合物，进行与前述[式(i)的海藻酸衍生物的制造方法]同样的缩合反应，接着将保护基团p1脱
保护，由此可制造式(am-2-z3)表示的胺化合物或其盐。
[0342]
[制造方法am-o]式(am-2-z4)表示的胺的制造方法:[化51]使用式(sm-z4)的化合物和式(rg-z4)的化合物[式(sm-z4)的化合物和式(rg-z4)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，进行与前述[式(i)的海藻酸衍生物的製法]同样的缩合反应，接着将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-2-z4)表示的胺化合物或其盐。
[0343]
[制造方法am-p]式(am-2-z5a)和式(am-2-z5b)表示的胺的制造方法:[化52]使用式(sm-z5a)的化合物和式(rg-z5a)的化合物[式(sm-z5a)的化合物和式(rg-z5a)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，在氢化钠、碳酸钾等碱存在下，在四氢呋喃、n,n-二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜等不参与反应的溶剂中进行反应，由此得到导入了侧链的化合物。接着，将保护基团p1进行脱保护，由此可制造式(am-2-z5a)表示的胺化合物或其盐。
[0344]
同样地，使用式(sm-z5b)的化合物和式(rg-z5b)的化合物[式(sm-z5b)的化合物和式(rg-z5b)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]同样地进行反应，由此可制造式(am-2-z5b)表示的胺化合物或其盐。
[0345]
式(am-2-z6a)、式 (am-2-z6b)、式(am-2-z7a)、式 (am-2-z7b)、式 (am-2-z8a)、式(am-2-z8b)、式(am-2-z9a)和式(am-2-z9b)表示的氨基化合物或它们的盐可按照前述[制造方法am-a]~[制造方法am-p]通过下述路线所示的制造方法制造。
[0346]
[化53]
[化54][化55][化56]。
[0347]
[制造方法am-q]式(am-2-z10)表示的胺的制造方法:[化57]
《步骤1》 使用式(sm-q)的化合物[式(sm-q)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]和式(rg-q1)的化合物[式(rg-q1)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，按照文献公知的方法，例如《european journal of organic chemistry， 2014(6)， p1280-1286； 2014年》等中记载的方法，在(i)pph3和n2(co2chme2)2试剂存在下，在四氢呋喃等不参与反应的溶剂中进行光延反应，接着在氢氧化钠等碱存在下，在甲醇、乙醇、四氢呋喃、水等不参与反应的溶剂或它们的混合溶剂中，进行酯基的水解，由此可制造式(im-q1)表示的化合物。
[0348]
《步骤2》 使用[制造方法am-q]《步骤1》中得到的式(im-q1)的化合物和式(rg-q2)的化合物[式(rg-q2)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]的化合物，进行与前述[式(i)的海藻酸衍生物的制造方法]同样的缩合反应，由此得到缩合体，接着将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-2-z10)表示的胺化合物或其盐。
[0349]
[制造方法am-r]式(am-1-b10)表示的胺的制造方法:[化58]《步骤1》 使用式(sm-r)的化合物[式(sm-r)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，按照文献公知的方法，例如《faming zhuanli shenqing， 104529898， 22 apr 2015年》等中记载的方法，(i)在吡啶等碱存在下，在乙醇等的不参与反应的溶剂中，与h2noh-hcl反应，形成肟，接着(ii)与p2o5在甲磺酸中与五氧化二磷反应，进行贝克曼重排，形成8元环内酰胺，接着(iii)在二乙基醚等不参与反应的溶剂中，使用bh3、lialh4等还原剂进行酰胺基的还原，由此可制造式(im-r1)表示的化合物。
[0350]
《步骤2》 使用[制造方法am-r]《步骤1》中得到的式(im-r1)的化合物和式(rg-r1)的化合物[式(rg-r1)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，进行与前述[式(i)的海藻酸衍生物的制造方法]同样的缩合反应，得到缩合体，接着加成溴后，使用tert-buok进行脱溴化反应，形成炔基，接着将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-1-b10)表示的胺化合物或其盐。
[0351]
[制造方法am-s]式(am-2-z11)表示的胺的制造方法:[化59]
使用式(sm-s)的化合物和式(rg-s1)的化合物[式(sm-s)的化合物和式(rg-s1)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，进行与前述[式(i)的海藻酸衍生物的制造方法]同样的缩合反应，接着将保护基团p1脱保护，由此可制造式(am-2-z11)表示的化合物或其盐。
[0352]
[制造方法am-t]式(am-1-t1)和式(am-1-t2)表示的胺的制造方法:[化60]《步骤1》 使用式(sm-t)的化合物和式(rg-t-1)的化合物[式(sm-t)的化合物和式(rg-t-1)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，按照文献公知的方法、例如wo2004/035017等中记载的反应，进行格氏反应，接着进行氧化反应，由此得到式(im-t-1)的化合物。
[0353]
《步骤2》 将式(im-t-1)的化合物的羰基保护后(例如缩醛基等)，在环辛烯环上加成溴后，使用tert-buok等碱进行脱溴化反应，接着将羰基的保护基团和保护基团p1脱保护，由此制造式(am-1-t1)表示的胺或其盐。
[0354]
《步骤3》 使用式(am-1-t1)的胺或其盐和式(rg-t-2)的化合物[式(rg-t-2)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]进行缩合反应，将保护基团p1脱保护，由此制造式(am-1-t2)表示的胺或其盐。
[0355]
[制造方法am-u]式(am-1-u1)和式(am-1-u2)表示的胺的制造方法:[化61]
在前述[制造方法am-t]中，将式(sm-t)的化合物替换为式(sm-u)的化合物[式(sm-u)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，按照[制造方法am-t]中记载的方法进行反应，由此可制造式(am-1-u1)和式(am-1-u2)表示的胺或其盐。
[0356]
将前述[制造方法am-t]和[制造方法am-u]的《步骤1》中使用的醛替换为下式(rg-t-3)或式(rg-t-4)的醛[式(rg-t-3)的化合物和式(rg-t-4)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，由此制造具有对应的连接基团的胺或其盐。
[0357]
[化62]。
[0358]
[制造方法am-v]式(am-1-v1)和式(am-1-v2)表示的胺的制造方法:[化63]《步骤1》 使用式(sm-v)的化合物[式(sm-v)的化合物是市售化合物或可按照文献公知的方法例如、bioorganic & medicinal chemistry，23(22)，p7150-7157，2015年等中记载的方法制造]，按照常规方法转化为酰氯后，使用式(rg-v-1)的化合物[式(rg-v-1)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]进行格氏反应，接着将保护基团p1脱保护，由此制造式(am-1-v1)表示的胺或其盐。
[0359]
《步骤2》 使用式(am-1-v1)的胺或其盐和式(rg-t-1)的化合物进行缩合反应，将保护基团p1脱保护，由此制造式(am-1-v2)表示的胺或其盐。
[0360]
将前述[制造方法am-v]的《步骤1》中使用的化合物替换为下式的化合物[各化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造]进行反应，由此制造具有对应的连接基团的胺或其盐。
[0361]
[化64]。
[0362]
[制造方法am-w]式(am-1-w1)和式(am-1-w2)表示的胺的制造方法:[化65]
前述[制造方法am-v]中，将式(sm-v)的化合物替换为式(sm-w)的化合物[式(sm-w)的化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造的化合物]，按照[制造方法am-v]中记载的方法进行反应，由此可制造式(am-1-w1)和式(am-1-w2)表示的胺或其盐。
[0363]
将前述[制造方法am-w]的《步骤1》中使用的化合物替换为下式的化合物[各化合物是市售化合物或可由市售化合物通过文献公知的制造方法制造]进行反应，由此可制造具有对应的连接基团的胺或其盐。
[0364]
[化66]对于用于制造式(i)或式(ii)表示的海藻酸衍生物的导入了炔基的胺(akn-l
1-nh2)或导入了叠氮基的胺(n
3-l
2-nh2)，将前述[制造方法am-a]~[制造方法am-p]等中记载的各反应、文献公知的方法、例如《实验化学讲座 第5版、各本、2007年、丸善》、《comprehensive organic transformations， a guide to functional group preparations， 3rd edition (edited by richard c. larock)， 2018年》、《strategic applications of named reactions in organic synthesis， (edited by laszlo kurti， barbara czako)， academic press， 2005年》等中记载的方法适当组合，可制造所需的胺。
[0365]
本说明书中，式(am-1)或式(am-2)表示的胺化合物(包括各自的式的下位的式)有时形成制药上允许的盐(例如酸加成盐)。作为所述盐，只要是制药上允许的盐则没有特别限定，可列举例如与无机酸的盐、与有机酸的盐、与酸性氨基酸的盐等。作为与无机酸的盐的合适例子，可列举例如与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸、磷酸等的盐。作为与有机酸的盐的合适的例子，可列举例如与甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、庚酸、癸酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、乳酸、山梨酸、扁桃酸等脂肪族单羧酸等的盐，与草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苹果酸、酒石酸等脂肪族二羧酸的盐；与柠檬酸等脂肪族三羧酸的盐；与苯甲酸、水杨酸等芳香族单羧酸的盐；与邻苯二甲酸等芳香族二羧酸的盐；与肉桂酸、乙醇酸、丙酮酸、肉铁质酸、水杨酸、n-乙酰基半胱氨酸等有机羧酸的盐、与甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等有机磺酸的盐；与天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸类的酸加成盐。作为与酸性氨基酸的盐的合适例子，可列举例如与天冬氨酸、谷氨酸等的盐。其中，优选药学上允许的盐。
[0366]
前述盐按照常规方法例如将本发明的化合物和含有适量的酸或碱的溶液混合形成目标盐后分离过滤，或者蒸馏除去该混合溶剂，由此可得到。关于盐的综述，出版了handbook of pharmaceutical salts:properties， selection， and use、stahl&wermuth(wiley-vch、2002)，该书中有详细记载。
[0367]
本说明书中，式(am-1)或式(am-2)表示的胺化合物(也包括各自的式的下位的式)
或其盐可与水、乙醇、甘油等溶剂形成溶剂化物。
[0368]
本说明书中，没有特别说明的情况下，在环状基团上取代可变取代基时，表示该可变取代基不键合在环状基团的特定的碳原子上。例如，下式a中的可变取代基rs表示可取代在该式a中的碳原子i、ii、iii、iv或v的任意1个上。
[0369]
[化67]本说明书中，式(i)或式(ii)表示的化学修饰海藻酸衍生物中的连接基团(-l
1-或-l
2-)中，存在手性碳时，也包括其各光学异构体。
[0370]
例如，式(i)中的-l
1-为式(l1-8a)，为m8a=2、n8a=1、r1=me的情况的下式(l1-8a-m)(式中虚线两侧不包括在内)时，[化68]r1基取代的碳的立体构型为s体的下式(l1-8a-m-s)和苄基取代的碳的立体构型为r体的下式(l1-8a-m-r)(任意式中虚线两外侧不包括在内)表示的连接基团也包括在内:[化69]式(i)或式(ii)表示的化学修饰海藻酸衍生物中的连接基团(-l
1-或-l
2-)中，存在手性碳时(为光学活性体时)，在合成对应于式(i)或式(ii)的胺衍生物(am-1)的步骤中，由其外消旋体通过通常的光学拆分方法(分离方法)，可分离为各光学活性体，或者在合成对应式(i)的胺衍生物即式(am-1)或式(am-2)的步骤中，通过使用手性合成可选择性合成光学异构体的一种，可合成各光学活性体。
[0371]
9.海藻酸衍生物、交联海藻酸结构体的用途海藻酸衍生物在食品、医疗、化妆品、纤维、制纸等广泛的领域中可代替以往的海
藻酸进行使用。海藻酸衍生物或光交联海藻酸结构体的优选用途具体可列举创伤覆盖材料、术后防粘连材料、药物缓释用基材、细胞培养用基材、细胞移植用基材等医疗用材料。
[0372]
作为用作医疗用材料时的交联海藻酸结构体的形状，可列举管状、纤维状、纤维、珠、凝胶、近球形的凝胶等，优选制成珠、凝胶或近球形的凝胶，更优选制成近球形的凝胶。
[0373]
要说明的是，本说明书中记载的所有的文献和刊物无论其目的如何，通过参照将其全文引入本说明书中。
[0374]
并且，本发明的目的、特征、优点及其构思通过本说明书的记载，对于本领域技术人员来说是显而易见的，根据本说明书的记载，只要是本领域技术人员，就能够容易地实施本发明。用于实施发明的最佳方式以及具体的实施例等表示本发明的优选实施方式，是为了例示或者说明而示出的，本发明不限于它们。对于本领域技术人员来说显而易见的是，在本说明书公开的本发明的意图和范围内，基于本说明书的记载可以进行各种修改。
实施例
[0375]
以下，为了更详细地说明本发明，列举实施例、试验例，这些例子仅仅是实施例、试验例，并不限定本发明，另外可以在不超出本发明范围的范围变化。
[0376]
核磁共振谱(nmr)的测定使用jeol jnm-ecx400 ft-nmr(日本电子)。液相色谱-质谱(lc-mass)通过以下的方法测定。使用[uplc]waters aquity uplc系统和beh c18柱(2.1mm
×
50mm、1.7μm)(waters)，采用乙腈:0.05%三氟乙酸水溶液=5:95(0分)~95:5(1.0分)~95:5(1.6分)~5:95(2.0分)的流动相和梯度条件。
[0377]1h-nmr数据中，nmr信号图案中，s表示单峰，d表示双峰，t表示三重峰，q表示四重峰，m表示多重峰，br表示宽峰，j表示耦合常数，hz表示赫兹，cdcl3表示氘代氯仿，dmso-d6表示氘代二甲基亚砜，d2o表示重水。 1
h-nmr数据中，对于羟基(oh)、氨基(nh2)、羧基(cooh)的质子等的由于为宽带而无法确认的信号，不记载数据。
[0378]
lc-mass数据中，m表示分子量，rt表示保留时间，[m+h]
+
，[m+na]
+
表示分子离子峰。
[0379]
实施例中的“室温”通常表示约0℃至约35℃的温度。
[0380]
实施例中的反应性取代基导入率(摩尔%)表示导入的反应性取代基的摩尔数相对于由1h-nmr(d2o)算出的构成海藻酸的单糖(古罗糖醛酸和甘露糖醛酸)单元的摩尔数的比例。
[0381]
实施例中，导入反应性基团或互补的反应性基团前的海藻酸钠使用具有前述表46中记载的物性值的海藻酸钠。
[0382]
表48中显示(实施例1)~(实施例20)中得到的导入了反应性基团的海藻酸衍生物的物性值(具体而言为反应性基团导入率(mol%)、分子量和重均分子量(万da))。
[0383]
表49-1~表49-5中显示(实施例1)~(实施例20)中的中间体的1h-nmr，表50中显示(实施例1)~(实施例20)中的中间体的lcm-mass。
[0384]
(实施例1)导入3-叠氮基丙基氨基的海藻酸(ex1-a2)的合成:[化70]
在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(20 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物 (dmt-mm)(56 mg)、市售的3-叠氮基丙基胺[cas registry no.:88192-19-2](1-1、5.1 mg)的乙醇(2ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(50μl)。在30℃搅拌3小时后，依次加入氯化钠(0.2g)、乙醇(40ml)，在室温搅拌30分間。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex1-a2(187 mg)。
[0385]
(实施例2)导入2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙烷-1-氨基的海藻酸(ex2-a2)的合成:[化71]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(10.9 ml)中在冰冷却搅拌下加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(55.83 mg)和1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(252.17μl)。接着加入市售的2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙烷-1-胺[cas registry no.:166388-57-4](2-1、26.36 mg)的乙醇(1 ml)和水(1 ml)溶液，在室温下搅拌15小时后，依次加入氯化钠(100 mg)、乙醇(21.8 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，减压干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex2-a2(99 mg)。
[0386]
(实施例3)导入2-氨基-n-(3-叠氮基丙基)乙酰胺基的海藻酸(ex3-a2)的合成:[化72]。
[0387]
《步骤1》(2-(3-叠氮基丙基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(3-2)的合成:[化73]在市售的3-叠氮基丙基胺[cas registry no.:88192-19-2](1-1、41μl)、n-(叔丁
氧基羰基)甘氨酸[cas registry no.:4530-20-5](3-1、100 mg)的乙醇(2 ml)溶液中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(197 mg)，在室温搅拌18小时。向反应液中加水，用乙酸乙酯萃取后，将有机层用水、饱和食盐水依次洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。将得到的油状物溶解在甲基-叔丁基醚(10 ml)中，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩，得到无色油状物形式的标题化合物3-2(95 mg)。
[0388]
《步骤2》2-氨基-n-(3-叠氮基丙基)乙酰胺盐酸盐(3-3)的合成:[化74]在(实施例3) 《步骤1》中得到的化合物(3-2、95mg)中在冰水冷却下加入4n-盐酸/1,4-二噁烷(665μl)后，在室温搅拌1小时。向反应液中加入二异丙基醚(2.0ml)，进行减压浓缩。将得到的油状物用甲基-叔丁基醚倾析洗涤后，进行减压浓缩，得到无色胶状物形式的标题化合物3-3(62 mg)。
[0389]
《步骤3》导入2-氨基-n-(3-叠氮基丙基)乙酰胺基的海藻酸(ex3-a2)的合成:[化75]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(20 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(56 mg)、(实施例3)《步骤2》中得到的化合物(3-3、10.6 mg)的乙醇(2 ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(76 μl)。在30℃搅拌3小时后，依次加入氯化钠(0.2 g)、乙醇(40 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex3-a2(207 mg)。
[0390]
(实施例4)导入3-氨基-n-(3-叠氮基丙基)丙酰胺基的海藻酸(ex4-a2)的合成:[化76]。
[0391]
《步骤1》(3-((3-叠氮基丙基)氨基)-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯(4-2)的合成:
[化77]在市售的3-叠氮基丙基胺[cas registry no.:88192-19-2](1-1、38μl)、n-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸[cas registry no.:3303-84-2](4-1、100 mg)的乙醇(2 ml)溶液中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(146 mg)，在室温下搅拌18小时。向反应液中加水，用乙酸乙酯萃取后，将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩，得到白色蜡状物形式的标题化合物4-2(124 mg)。
[0392]
《步骤2》3-氨基-n-(3-叠氮基丙基)丙酰胺盐酸盐(4-3)的合成:[化78]在(实施例4) 《步骤1》中得到的化合物(4-2、124 mg)中在冰水冷却下加入4n-盐酸/1,4-二噁烷(868μl)后，在室温下搅拌1小时。向反应液中加入二异丙基醚(2.6 ml)，进行减压浓缩。将得到的油状物用甲基-叔丁基醚倾析洗涤后，进行减压浓缩，得到无色胶状物形式的标题化合物4-3(93 mg)。
[0393]
《步骤3》导入3-氨基-n-(3-叠氮基丙基)丙酰胺基的海藻酸(ex4-a2)的合成:[化79]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(20 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(56 mg)、(实施例4)《步骤2》中得到的化合物(4-3、12.6 mg)的乙醇(2 ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(76μl)。在30℃搅拌3小时后，依次加入氯化钠(0.2g)、乙醇(40 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex4-a2(211 mg)。
[0394]
(实施例5)导入n-(4-(氨基甲基)苄基)-2-叠氮基乙酰胺基的海藻酸(ex5-a2)的合成:[化80]
(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(70 mg)、(实施例5)《步骤2》中得到的化合物(5-3、16.1 mg)、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(95 μl)。在30℃搅拌3小时后，依次加入氯化钠(0.25 g)、乙醇(50 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex5-a2(239 mg)。
[0398]
(实施例6)导入2-(4-叠氮基苯氧基)乙烷-1-氨基的海藻酸(ex6-a2)的合成:[化84]。
[0399]
《步骤1》(2-(4-叠氮基苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(6-3)的合成:[化85]在市售的4-叠氮基苯酚[cas registry no.:24541-43-3](6-1、0.3 g)、市售的(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯[cas registry no.:39684-80-5](6-2、0.6 g)和n-甲基吡咯烷酮(3 ml)的混合物中在室温下加入碳酸钾(0.61g)。将反应混合物在80℃搅拌6小时30分钟，冷却至室温后，加入水(10 ml)和甲基叔丁基醚(20 ml)。将生成的悬浮液进行硅藻土过滤，将残留物用甲基叔丁基醚(5 ml)洗涤2次。分离滤液，将有机层在减压下浓缩，得到粗产物。将该粗产物溶解在甲基叔丁基醚(20ml)中，依次用1n-氢氧化钠水溶液(5ml)洗涤2次，用水(5ml)洗涤2次，用饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤有机层后，在减压下浓缩，得到紫色的油状物形式的标题化合物6-3(0.411 g)。
[0400]
《步骤2》2-(4-叠氮基苯氧基)乙烷-1-胺盐酸盐(6-4)的合成:[化86]在(实施例6)《步骤1》得到的化合物(6-3、0.41 g)和1,4-二噁烷(2.87 ml)的混合物中在水冷却搅拌下加入4n-盐酸/1,4-二噁烷(2.87 ml)后，在室温下搅拌18小时。向反应
液中加入二异丙基醚(40 ml)，将悬浮液在室温下搅拌30分钟。过滤析出物，将回收的固体减压干燥，得到淡紫色固体形式的标题化合物6-4(0.2834 g)。
[0401]
《步骤3》导入2-(4-叠氮基苯氧基)乙烷-1-氨基的海藻酸(ex6-a2)的合成:[化87]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(29.66 ml)中在室温下加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(91.52 mg)和1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(68.63μl)。接着，在室温下加入(实施例6)《步骤2》中得到的化合物(6-4、14.73 mg)的水(1 ml)和乙醇(1 ml)溶液，在同温度下搅拌42小时后，依次加入氯化钠(300 mg)、乙醇(59.3 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到粉色固体形式的标题化合物ex6-a2(269 mg)。
[0402]
(实施例7)导入n-(2-氨基乙基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺基的海藻酸(ex7-b2)的合成:[化88]。
[0403]
《步骤1》(2-(2,2,2-三氟乙酰胺)氨基甲酸叔丁酯(7-2)的合成:[化89]在市售的叔丁基(2-氨基乙基)氨基甲酸酯(7-1、3.00 g、[cas registry no.:57260-73-8])的四氢呋喃(12.0 ml)溶液中滴加三氟乙酸乙酯(2.24 ml)。将反应混合物在室温搅拌14.5小时。将反应液在减压下浓缩，向残渣中加入叔丁基甲基醚(5 ml)和庚烷(25 ml)，进行研碎。滤取固体后，用庚烷洗涤，得到白色固体形式的标题化合物7-2(4.36 g)。
[0404]
《步骤2》
n-(2-氨基乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺盐酸盐(7-3)的合成:[化90]将(实施例7)《步骤1》中得到的化合物7-2(0.50 g)悬浮于1,4-二噁烷(3.0 ml)中。在冰水冷却下加入4n-盐酸/1,4-二噁烷(7.0 ml)，在室温下搅拌3小时。向反应液中加入二异丙基醚(30.0 ml)，在室温下搅拌50分钟。滤取固体，用二异丙基醚洗涤后，减压干燥，得到白色固体形式的标题化合物7-3(0.70 g)。
[0405]
《步骤3》n-(2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(7-5)的合成:[化91]在按照文献公知的方法(org. process res. dev.(2018)22:108-110)合成的羧酸(7-4、300 mg)的乙醇(2 ml)溶液中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(1.09 g)、(实施例7)《步骤2》得到的化合物7-3(380 mg)、三乙基胺(321 μl)，在30℃搅拌3小时后，追加三乙基胺(229 μl)，在同温度下搅拌1小时。进一步在室温下搅拌15.5小时后，加入水(10 ml)和乙酸乙酯(50 ml)，分液，将水层用乙酸乙酯(10 ml)萃取。将有机层依次用0.5n-柠檬酸、水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。向残渣中加入叔丁基甲基醚，滤去不溶物，将滤液浓缩后，用硅胶柱色谱(10%-乙酸乙酯/正庚烷~40%乙酸乙酯/正庚烷)纯化，得到白色固体形式的标题化合物7-5(322 mg)。
[0406]
《步骤4》n-(2-氨基乙基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺(7-6)的合成:[化92]在(实施例7)《步骤3》得到的化合物7-5(322 mg)的甲醇(4.8 ml)溶液中加入碳酸钾(278 mg)的水(1.6 ml)溶液，在室温下搅拌7.5小时。将反应液减压浓缩，加入水(3 ml)后，用氯化钠饱和。将水层用乙酸乙酯(30 ml，10 ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩，得到无色油状物形式的标题化合物7-6(238 mg)。
[0407]
《步骤5》导入n-(2-氨基乙基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺基的海藻酸(ex7-b2)的合成:
[化93]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:b-2)水溶液(120 ml)中在室温搅拌下依次加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(335 mg)、(实施例7)《步骤4》中得到的化合物7-6(68 mg)的乙醇(12 ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(303μl)，在30度搅拌3小时。在反应液中加入氯化钠(1.2 g)后，加入乙醇(240 ml)，搅拌1.5小时。滤取得到的沉淀，用乙醇(20 ml
×
5)洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex7-b2(1.16 g)。
[0408]
(实施例8)导入n-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺基的海藻酸的合成(ex8-a2):[化94]。
[0409]
《步骤1》(2-(2-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙氧基)乙基氨基甲酸叔丁酯(8-2)的合成:[化95]在(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(8-1、1.0 g、[cas registry no.:57260-73-8])的四氢呋喃(4.0 ml)溶液中滴加三氟乙酸乙酯(0.6 ml)。将反应混合物在室温搅拌3.5小时，进行减压浓缩，得到无色油状物形式的标题粗化合物8-2(1.5 g)。
[0410]
《步骤2》n-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺盐酸盐(8-3)的合成:[化96]在(实施例8)《步骤1》得到的化合物8-2(1.5 g)中在冰水冷却下加入4n-盐酸/1,4-二噁烷溶液(10.3 ml)，在室温下搅拌1小时。向反应液中加入二异丙基醚(30 ml)，在室温搅拌30分钟。在减压下蒸馏除去溶剂，用二异丙基醚共沸后，减压干燥，得到无色油状物形式的标题化合物8-3(1.3 g)。
[0411]
《步骤3》n-(2-(2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙氧基)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(8-4)的合成:[化97]将按照文献公知的方法(org. process res. dev.(2018)22:108-110)合成的羧酸(7-4、300 mg)、(实施例8)《步骤2》中得到的化合物8-3(443 mg)溶解在乙腈(6.0 ml)中。加入o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸盐(0.75 g)、n,n-二异丙基乙基胺(920 μl)，在室温搅拌2.5小时。在反应液中加入乙酸乙酯(20 ml)、水(10 ml)，分液。将有机层依次用水(10ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。将残渣用硅胶柱色谱(50%乙酸乙酯/正庚烷~70%乙酸乙酯/正庚烷)纯化，得到无色胶状物形式的标题化合物8-4(469 mg)。
[0412]
《步骤4》n-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺(8-5)的合成:[化98]在(实施例8)《步骤3》中得到的化合物8-4(220 mg)的甲醇(3.0 ml)溶液中加入碳酸钾(103 mg)的水(0.99 ml)溶液，在室温下搅拌4.5小时。在减压下蒸馏除去甲醇，加入水(2 ml)后，用食盐饱和。进行乙酸乙酯(15 ml、10 ml
×
4)萃取，用无水硫酸钠干燥后，在减压下蒸馏除去溶剂。将残渣溶解在乙酸乙酯(10 ml)中，滤除不溶物后，进行减压浓缩，得到淡黄色胶状物形式的标题粗化合物8-5(140 mg)。
[0413]
《步骤5》导入n-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺基的海藻酸(ex8-a2)的合成:[化99]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(40 ml)中在室温搅拌下依次加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(112 mg)、(实施例8)《步骤4》中得到的化合物8-5(30mg)的乙醇(4，0ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(101 μl)，在30℃搅拌3小时。向反应液中加入氯化钠(0.4g)后，加入乙醇(80 ml)，搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex8-a2(410 mg)。
[0414]
(实施例9a、9b)导入n-(2-氨基乙基)-2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙酰胺基的海藻酸(ex9a-a2、ex9b-b2)的合成:[化100]。
[0415]
《步骤1》(2-氧代-2-((2-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(9-1)的合成:[化101]将n-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(91 mg、[cas registry no.:4530-20-5])、(实施例7)《步骤2》中得到的化合物(7-3、100 mg)溶解在乙腈(3.0 ml)中。加入o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸盐(217 mg)、n,n-二异丙基乙基胺(281μl)，在室温下搅拌3.5小时。向反应液中加入乙酸乙酯(15 ml)、水(5 ml)，分液后，将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。将残渣用柱色谱(洗脱溶剂:40%乙酸乙酯/正庚烷
→
乙酸乙酯)纯化，得到浅米黄色无定形的标题化合物9-1(180 mg)。
[0416]
《步骤2》n-(2-(2-氨基乙酰胺)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺盐酸盐(9-2)的合成:[化102]在(实施例9)《步骤1》中得到化合物(9-1、180 mg)中在冰水冷却下加入4n-盐酸/1,4-二噁烷(1.2 ml)后，在室温下搅拌0.8小时。向反应液中加入二异丙基醚(3.6 ml)，搅拌30分钟。过滤得到的固体，得到白色固体形式的标题化合物9-2(114 mg)。
[0417]
《步骤3》n-(2-(2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙酰胺)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(9-3)的合成:[化103]
在按照文献公知的方法(org. process res. dev.(2018)22:108-110)合成的羧酸(7-4、80 mg)、(实施例9)《步骤2》中得到的化合物(9-2、110 mg)中加入乙醇(1.6 ml)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(219 mg)、三乙基胺(67μl)，在室温下搅拌3小时的。向反应液中加入水(3.2 ml)，在室温下搅拌30分钟后，过滤固体，用水洗涤。向得到的固体中加入乙酸乙酯/乙醇(1/1、10 ml)，滤去不溶物。将滤液进行减压浓缩，得到白色固体形式的标题化合物9-3(101 mg)。
[0418]
《步骤4》n-(2-(氨基乙基)-2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙酰胺(9-4)的合成:[化104]在(实施例9)《步骤3》中得到的化合物(9-3、60 mg)的甲醇(1.8 ml)溶液中加入碳酸钾(59 mg)的水(0.3 ml)溶液，在室温下搅拌4小时。将反应液减压浓缩后，加入水(2ml)，用氯化钠饱和。用乙酸乙酯(15ml，10 ml
×
4)萃取，将萃取层进行减压浓缩。向残渣中加入乙酸乙酯(10 ml)、乙醇(1ml)，滤去不溶物。将得到的滤液进行减压浓缩，得到无色胶状物形式的标题化合物9-4(49 mg)。
[0419]
《步骤5-1》导入n-(2-(氨基乙基)-2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙酰胺基的海藻酸(ex9a-a2)的合成:[化105]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(38 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(106 mg)、(实施例9)《步骤4》中得到的化合物(9-4、30.3 mg)的乙醇(3.8 ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(96 μl)。在30℃搅拌3.2小时后，依次加入氯化钠(0.38 g)、乙醇(76 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex9a-a2(381 mg)。
[0420]
《步骤5-2》导入n-(2-(氨基乙基)-2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙酰胺基的海藻酸(ex9b-b2)的合成:[化106]
在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:b-2)水溶液(38 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(64 mg)、(实施例9)《步骤4》中得到的化合物(9-4、18.2 mg)、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(58μl)。在30℃搅拌3.2小时后，依次加入氯化钠(0.38 g)、乙醇(76 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex9b-b2(366 mg)。
[0421]
(实施例10)导入n-(2-氨基乙基)-3-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)丙酰胺基的海藻酸(ex10-a2)的合成:[化107]。
[0422]
《步骤1》(3-氧代-3-((2-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基)氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(10-1)的合成:[化108]将市售的n-(叔丁氧基羰基)-β-丙氨酸(113 mg、[cas registry no.:3303-84-2])、(实施例7)《步骤2》中得到的化合物(7-3、110 mg)溶解在乙腈(3.3 ml)中。加入o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸盐(261 mg)、n,n-二异丙基乙基胺(319 μl)，在室温搅拌3小时。向反应液中加入乙酸乙酯(15 ml)、水(5 ml)，分液后，将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩，用叔丁基甲基醚(20 ml)研碎。滤取固体，溶解在乙酸乙酯(20 ml)中。将有机层依次用1n-柠檬酸、水、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。将残渣用叔丁基甲基醚(10 ml)研碎后，滤取固体，得到白色固体形式的标题化合物10-1(80 mg)。
[0423]
《步骤2》3-氨基-n-(2-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基)丙酰胺盐酸盐(10-2)的合成:[化109]
在(实施例10)《步骤1》中得到的化合物(10-1、80 mg)中在冰水冷却下加入4n-盐酸/1,4-二噁烷(1.1 ml)后，在室温下搅拌2小时。向反应液中加入二异丙基醚(3.4 ml)，搅拌1.5小时。过滤得到的固体，得到白色固体形式的标题化合物10-2(61 mg)。
[0424]
《步骤3》3-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)-n-(2-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基)丙酰胺(10-3)的合成:[化110]在按照文献公知的方法(org. process res. dev.(2018)22:108-110)合成的羧酸(7-4、44 mg)、(实施例10)《步骤2》中得到的化合物(10-2、61 mg)中加入乙醇(1.2 ml)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(115 mg)、三乙基胺(39 μl)，在室温下搅拌2小时。向反应液中加入水(3.7 ml)，用乙酸乙酯(15 ml， 5 ml)萃取。将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。向得到的固体中加入叔丁基甲基醚(10 ml)，研碎，过滤。将得到的固体用柱色谱(80%乙酸乙酯/正庚烷
→
乙酸乙酯
→
20%甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到淡黄色固体形式的标题化合物10-3(60 mg)。
[0425]
《步骤4》n-(2-(氨基乙基)-3-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)丙酰胺(10-4)的合成:[化111]在(实施例10)《步骤3》中得到的化合物(10-3、60 mg)的甲醇(3.0 ml)溶液中加入碳酸钾(42 mg)的水(0.3 ml)溶液，在室温搅拌3小时后，进一步加入碳酸钾(42 mg)的水(0.3 ml)溶液，在室温下搅拌16.5小时。将反应液减压浓缩后，加入饱和食盐水(2ml)，进一步用氯化钠饱和。用乙酸乙酯(15ml，10 ml
×
4)萃取，将萃取层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。向残渣中加入乙酸乙酯(5 ml)和数滴的甲醇，滤去不溶物。将得到的滤液进行减压浓缩，得到无色油状物形式的标题化合物10-4(31 mg)。
[0426]
《步骤5》导入n-(2-氨基乙基)-3-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)丙酰胺基的海藻酸(ex10-a2)的合成:[化112]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(41 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(114 mg)、(实施例10)《
步骤4》中得到的化合物(10-4、30.5 mg)的乙醇(4.1 ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(103 μl)。在30℃搅拌3小时后，依次加入氯化钠(0.41 g)、乙醇(82 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex10-a2(406 mg)。
[0427]
(实施例11a、11b)导入2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙烷-1-氨基的海藻酸(ex11a-a2、ex11b-b2)的合成:[化113]。
[0428]
《步骤1》(e)-n-(2-((2-溴环辛-2-烯-1-基)氧)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(11-3)的合成:[化114]在按照文献公知的方法(org. process res. dev.(2018)22:108-110)合成的二溴体(11-1、1 g)和按照文献公知的方法(国际公开第2015/140807号小册子)合成的醇体(11-2、5.28 g)的混合物中在室温下加入二氯甲烷(2 ml)。将内温保持在室温的同时，将反应容器用铝箔包裹，防止受到光的损害。接着，在室温下一次加入三氟甲磺酸银(1.92 g)，在同温度下搅拌1小时。搅拌后，在冰冷却下加入饱和食盐水(5 ml)，将析出的银盐通过硅藻土过滤除去，将残留物用甲基叔丁基醚(10 ml)洗涤。分离滤液，将有机层用水(5 ml)洗涤2次。然后，用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩，由此得到粗产物。将该粗产物用硅胶柱色谱(正庚烷/乙酸乙酯)纯化，得到含有化合物11-3(0.46 g)的级分。
[0429]
《步骤2》2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙烷-1-胺(11-4)的合成:[化115]在含有(实施例11)《步骤1》中得到的化合物(11-3、0.46 g)的级分和二甲基亚砜(1.38 ml)的混合物中在水冷却搅拌下加入28%甲醇钠甲醇溶液(1.82 ml)，在室温下搅拌
16小时。加入水(10 ml)使反应停止，在减压下浓缩甲醇。将生成的溶液用甲基叔丁基醚(10 ml)萃取3次。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩，由此得到褐色油状物形式的标题化合物11-4(0.196 g)的粗产物。
[0430]
《步骤3-1》导入2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙烷-1-氨基的海藻酸(ex11a-a2)的合成:[化116]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(69.2 ml)中在室温下加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(213.55 mg)。接着，在室温下加入(实施例11)《步骤2》中得到的化合物(11-4、26.78 mg)的水(1 ml)和乙醇(1 ml)溶液，在同温度下搅拌24小时后，依次加入氯化钠(700 mg)、乙醇(138.4 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex11a-a2(661 mg)。
[0431]
《步骤3-2》导入2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙烷-1-氨基的海藻酸(ex11b-b2)的合成:[化117]使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:b-2)水溶液(70.1 ml)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(216.4 mg)和(实施例11)《步骤2》中得到的化合物(11-4、27.14 mg)，进行与(实施例11)《步骤3-1》同样的操作，得到白色固体形式的标题化合物ex11b-b2(648 mg)。
[0432]
(实施例12)导入2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙氧基)乙烷-1-氨基的海藻酸(ex12-a2)的合成:[化118]。
[0433]
《步骤1》2,2,2-三氟-n-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)乙酰胺(12-2)的合成:[化119]
在市售的2-(2-氨基乙氧基)乙醇[cas registry no.:929-06-6](12-1、2.0 ml)的四氢呋喃(8.0 ml)溶液中用5分钟滴加2,2,2-三氟乙酸乙酯(2.5 ml)后，在室温下搅拌20小时。将反应液减压浓缩后，加入乙酸乙酯(30 ml)、水(10 ml)，分液。将水层用乙酸乙酯(10 ml)萃取，将合并的有机层依次用水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩，得到无色油状物形式的标题化合物12-2(3.7 g)。
[0434]
《步骤2》(e)-n-(2-(2-((2-溴环辛-2-烯-1-基)氧)乙氧基)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(12-3)的合成:[化120]将按照文献公知的方法(org. process res. dev.(2018)22:108-110)合成的二溴体(11-1、0.30 g)溶解在二氯甲烷(0.54 ml)中，在铝箔遮光下加入(实施例12)《步骤1》中得到的化合物(12-2、1.86 g)、三氟甲磺酸银(0.52 g)。在遮光下在室温下搅拌1.5小时后，向反应液中在冰水冷却下依次加入饱和碳酸氢钠水溶液(2.0 ml)、饱和食盐水(3.0 ml)。将固体用硅藻土滤去，用叔丁基甲基醚(10 ml
×
3)洗涤。将滤液分液，将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩，得到淡茶色油状物形式的标题化合物12-3(424 mg)。
[0435]
《步骤3》n-(2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙氧基)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(12-4)的合成:[化121]将(实施例12)《步骤2》中得到的化合物(12-3、100 mg)溶解在四氢呋喃(0.7 ml)、n,n-二甲基甲酰胺(0.7 ml)中。在冰水下加入60%氢化钠(21 mg)，在同温度下搅拌3小时。加入60%氢化钠(10 mg)，在室温下搅拌1小时，进一步加入60%氢化钠(10 mg)，在室温下搅拌20小时。加入水(3 ml)，用乙酸乙酯(15 ml、10 ml)萃取，将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。将残渣通过柱色谱(正庚烷
→
50%乙酸乙酯/正庚烷)纯化，得到无色油状物形式的标题化合物12-4(37 mg)。
[0436]
《步骤4》2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙氧基)乙烷-1-胺(12-5)的合成:
[化122]在(实施例12)《步骤3》中得到的化合物(12-4、37 mg)的甲醇(555 μl)溶液中加入碳酸钾(50 mg)的水(185 μl)溶液，在室温下搅拌17小时。将反应液减压浓缩后，加入水(1 ml)，用氯化钠饱和。用乙酸乙酯(10 ml
×
4)萃取，将萃取层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。向残渣中加入乙酸乙酯(10 ml)和几滴甲醇，滤去不溶物。将得到的滤液进行减压浓缩，得到无色油状物形式的标题化合物12-5(30 mg)。
[0437]
《步骤5》导入2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙氧基)乙烷-1-氨基的海藻酸(ex12-a2)的合成:[化123]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(52 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(145 mg)、(实施例12)《步骤4》中得到的化合物(12-5、29 mg)的乙醇(5.2 ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(131 μl)。在30℃搅拌3.2小时后，依次加入氯化钠(0.52 g)、乙醇(104 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex12-a2(522 mg)。
[0438]
(实施例13)导入3-氨基-n-(2-(2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙氧基)乙基)丙酰胺基的海藻酸(ex13-a2)的合成:[化124]。
[0439]
《步骤1》3-(2,2,2-三氟乙酰胺)丙酸(13-2)的合成:[化125]将市售的β-丙氨酸[cas registry no.:107-95-9](13-1、2.0 g)溶解在甲醇(40.0 ml)中，加入三乙基胺(3.3 ml)。在冰冷却下用5分钟滴加2,2,2-三氟乙酸(3.4 ml)后，在室温下搅拌20.5小时。将反应液减压浓缩，加入水(20 ml)，用1n-盐酸调节至ph4。用
乙酸乙酯(100 ml
×
2、50 ml)萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩，得到白色固体形式的标题化合物13-2(2.9g)。
[0440]
《步骤2》(2-(2-(3-(2,2,2-三氟乙酰胺)丙酰胺)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(13-3)的合成:[化126]在(实施例13)《步骤1》中得到的化合物(13-2、400 mg)、(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(8-1、441 mg、[cas registry no.:57260-73-8])的乙醇(4.0 ml)溶液中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(897 mg)，搅拌3.5小时。向反应液中加入水(5 ml)，用乙酸乙酯(20 ml、10 ml)萃取后，将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩，将残渣用柱色谱(30%乙酸乙酯/正庚烷
→
乙酸乙酯)纯化，得到无色油状物形式的标题化合物13-3(451 mg)。
[0441]
《步骤3》n-(2-(2-氨基乙氧基)乙基)-3-(2,2,2-三氟乙酰胺)丙酰胺盐酸盐(13-4)的合成:[化127]在(实施例13)《步骤2》中得到的化合物(13-3、451 mg)中在冰水冷却下加入4n-盐酸/1,4-二噁烷(3.16 ml)，在室温下搅拌3小时。向反应液中加入二异丙基醚(6.4 ml)，进行减压浓缩，得到无色胶状物形式的标题化合物13-4(433 mg)。
[0442]
《步骤4》n-(2-(2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙氧基)乙基-3-(2,2,2-三氟乙酰胺)丙酰胺(13-5)的合成:[化128]在按照文献公知的方法(org. process res. dev.(2018)22:108-110)合成的羧酸(7-4、111 mg)、(实施例13)《步骤3》中得到的化合物(13-4、215 mg)中加入乙醇(1.7 ml)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(253 mg)、三乙基胺(102 μl)，在室温下搅拌21小时。向反应液中加入水(5 ml)，用乙酸乙酯(15 ml)萃取。将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。将得到的残渣通过柱色谱(30%乙酸乙酯/正庚烷
→
乙酸乙酯
→
15%甲醇/乙酸乙酯)纯化，得到无色油状物
形式的标题化合物13-5(35 mg)。
[0443]
《步骤5》3-氨基-n-(2-(2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙氧基)乙基)丙酰胺(13-6)的合成:[化129]在(实施例13)《步骤4》中得到的化合物(13-5、35 mg)的甲醇(700 μl)溶液中加入碳酸钾(33 mg)的水(175 μl)溶液，在室温下搅拌16.5小时。将反应液减压浓缩后，加入水(2 ml)，用氯化钠饱和。用乙酸乙酯(10 ml
×
5)萃取，将萃取层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。在残渣中加入乙酸乙酯(10 ml)和几滴甲醇，滤去不溶物。将得到的滤液进行减压浓缩，得到无色胶状物形式的标题化合物13-6(24 mg)。
[0444]
《步骤6》导入3-氨基-n-(2-(2-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)乙氧基)乙基)丙酰胺基的海藻酸(ex13-a2)的合成:[化130]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(28 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(78 mg)、(实施例13)《步骤5》中得到的化合物(13-6、24 mg)的乙醇(2.8 ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(71μl)。在30℃下搅拌3.5小时后，依次加入氯化钠(0.28 g)、乙醇(56 ml)，在室温下搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex13-a2(272 mg)。
[0445]
(实施例14)导入n-(4-(2-氨基乙氧基)苄基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺基的海藻酸(ex14a-a2、ex14b-b2)的合成:[化131]。
[0446]
《步骤1》n-(2-溴乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(14-2)的合成:[化132]
对市售的2-溴乙基胺氢溴酸盐[cas registry no.:2576-47-8](14-1、3 g)的甲醇(30 ml)溶液在冰冷却搅拌下加入三乙基胺(4.29 ml)。向该混合物中在同温度下缓慢加入三氟乙酸乙酯 (1.92ml)，在室温下搅拌42小时。反应结束后，将反应液在减压下浓缩，加入水(10 ml)。用乙酸乙酯(10 ml)萃取3次，将有机层依次用水(5 ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩，由此得到淡褐色固体形式的标题化合物14-2(2.457g)。
[0447]
《步骤2》(4-(2-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙氧基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(14-4)的合成:[化133]在市售的(4-羟基苄基)氨基甲酸叔丁酯[cas registry no.:149505-94-2](14-3、0.36 g)、(实施例14)《步骤1》中得到的化合物(14-2、0.46 g)、碘化钾(0.35 g)和n-甲基吡咯烷酮(3.6 ml)的混合物中在室温下加入碳酸钾(0.45 g)，在140℃搅拌5小时。反应结束后，冷却至室温，用水(10 ml)稀释。用甲基叔丁基醚(10 ml)萃取3次，依次将有机层用1n-氢氧化钠水溶液(5 ml)洗涤2次，用水(5 ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤有机层后，在减压下浓缩，得到粗产物。将得到的粗产物用硅胶柱色谱(正庚烷/乙酸乙酯)纯化，得到白色无定形的标题化合物14-4(0.202 g)。
[0448]
《步骤3》n-(2-(4-(氨基甲基)苯氧基)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺盐酸盐(14-5)的合成:[化134]使用(实施例14)《步骤2》中得到的化合物(14-4、0.2 g)，实施与(实施例6)《步骤2》同样的操作，得到白色固定形式的标题化合物14-5(0.147g)。
[0449]
《步骤4》n-(2-(4-((2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)甲基)苯氧基)乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(14-6)的合成:
[化135]在按照文献公知的方法(org. process res. dev.(2018)22:108-110)合成的羧酸(7-4、50 mg)、(实施例14)《步骤3》合成的化合物(14-5、81.96 mg)和乙醇的混合物中在冰冷却搅拌下加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(137.22 mg)和三乙基胺(38.25 μl)，在室温下搅拌1小时30分钟。反应结束后，加入水(2ml)，搅拌悬浮液，加入甲基叔丁基醚(0.5ml)。将分离的水层用甲基叔丁基醚(5 ml)萃取2次，依次用水(5 ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤干燥的有机层，在减压下浓缩。将粗产物用硅胶柱色谱(正庚烷/乙酸乙酯)纯化，得到白色无定形的标题化合物14-6(99 mg)。
[0450]
《步骤5》n-(4-(2-氨基乙氧基)苄基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺(14-7)的合成:[化136]在(实施例14)《步骤4》中得到的化合物(14-6、99 mg)和甲醇(1485 μl)的混合物中在水冷却搅拌下加入碳酸钾(64.17 mg)和水(495 μl)，在室温下搅拌15小时。反应结束后，将甲醇在减压下浓缩，将生成的水层用乙酸乙酯(5 ml)萃取3次。将有机层依次用水(5 ml)和饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤干燥的有机层后，在减压下浓缩，由此得到黄色油状物形式的标题化合物14-7(68 mg)的粗产物。
[0451]
《步骤6-1》导入n-(4-(2-氨基乙氧基)苄基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺基的海藻酸(ex14a-a2)的合成:[化137]使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(49.44 ml)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(152.54 mg)和(实施例14)《步骤5》中得到的化合物(14-7、37.79 mg)，进行与(实施例11)《步骤3-1》同样的操作，得到白色固体形式的标题化合物ex14a-a2(479 mg)。
[0452]
《步骤6-2》
导入n-(4-(2-氨基乙氧基)苄基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺基的海藻酸(ex14b-b2)的合成:[化138]使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:b-2)水溶液(40.08 ml)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(123.66 mg)和(实施例14)《步骤5》中得到的化合物(14-7、30.64 mg)，进行与(实施例11)《步骤3-1》同样的操作，得到白色固体形式的标题化合物ex14b-b2(356 mg)。
[0453]
(实施例15)导入2-氨基-n-[3-(11,12-二脱氢二苯并[b,f]吖辛因-5(6h)-基)-3-氧代丙基]乙酰胺基的海藻酸(ex15-a2)的合成:[化139]。
[0454]
《步骤1》(9h-芴-9-基)甲基-n-[3-(11,12-二脱氢二苯并[b,f]吖辛因-5(6h)-基)-3-氧代丙基]乙酰胺-2-氨基甲酸酯基(15-2)的合成:[化140]将市售的3-氨基-1-(11,12-二脱氢二苯并[b,f]吖辛因-5(6h)-基)-1-丙酮[cas registry no.:1255942-06-3](15-1、50 mg)、n-[(9h-芴-9-基甲氧基)羰基]甘氨酸[cas registry no.:29022-11-5](54 mg)溶解在乙腈(1.5 ml)中。加入o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸盐(76 mg)、n,n-二异丙基乙基胺(70μl)，在室温下搅拌4.5小时。向反应液中加入乙酸乙酯(15 ml)、水(5 ml)，分液后，将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，通过柱色谱纯化，得到浅米黄色无定形的标题化合物15-2(63 mg)。
[0455]
《步骤2》2-氨基-n-[3-(11,12-二脱氢二苯并[b,f]吖辛因-5(6h)-基)-3-氧代丙基]乙酰胺(15-3)的合成:[化141]
在(实施例15)《步骤1》中得到的化合物(15-2、63 mg)中加入哌啶(56 μl)的n,n-二甲基甲酰胺(315 μl)溶液，在室温下搅拌30分钟。向反应液中加入乙酸乙酯(15 ml)、水(5 ml)，分液后，将有机层依次用水、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥后，进行减压浓缩。在得到的固体中加入叔丁基甲基醚(5 ml)，研碎后，滤取，得到浅米黄色固体形式的标题化合物15-3(10 mg)。由滤液回收，追加，得到淡黄色胶状物形式的标题化合物15-3(11 mg)。
[0456]
《步骤3》导入2-氨基-n-[3-(11,12-二脱氢二苯并[b,f]吖辛因-5(6h)-基)-3-氧代丙基]乙酰胺基的海藻酸(ex15-a2)的合成:[化142]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(19 ml)中加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(106 mg)、(实施例15)《步骤2》中得到的化合物(15-3、21 mg)的乙醇(1.9 ml)溶液、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(48 μl)。在30℃搅拌3小时后，依次加入氯化钠(0.19 g)、乙醇(38 ml)，在室温搅拌30分钟。滤取得到的沉淀，用乙醇洗涤后，进行减压干燥。将得到的固体溶解在水中后，进行冷冻干燥，得到白色固体形式的标题化合物ex15-a2(188 mg)。
[0457]
(实施例16)导入2-氨基-n-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙基)乙酰胺基的海藻酸(ex16-a2)的合成:[化143]。
[0458]
《步骤1》(2,2,2-三氟乙酰基)甘氨酸(16-2)的合成:[化144]
将甘氨酸(16-1、2 g)悬浮在甲醇(10 ml)中，冷却至4℃。在同温度下加入三氟乙酸乙酯(3.5 ml)和三乙基胺(3.71 ml)，在室温下搅拌23小时。反应结束后，缓慢加入1n-盐酸(20 ml)直到ph2，用乙酸乙酯(10 ml)萃取3次，依次用水(5 ml)和饱和食盐水(5 ml)洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤后，在减压下浓缩，得到淡黄色油状物。将得到的油状物溶解在乙酸乙酯(20 ml)中，加入正庚烷(10 ml)。将该溶液在减压下浓缩，由此得到白色无定形的标题化合物16-2(3.22 g)。
[0459]
《步骤2》n-(2-((2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙基)氨基)-2-氧代乙基)-2,2,2-三氟乙酰胺(16-3)的合成:[化145]在化合物11-4(80 mg)和(实施例16)《步骤1》中得到的化合物(16-2、81.83 mg)的混合物中在冰冷却搅拌下加入乙醇(1600 μl)和4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(239.21 mg)，在室温下搅拌3小时。加入水(2 ml)，使反应停止，用甲基叔丁基醚(5 ml)萃取3次。将有机层依次用水(5 ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。将有机层过滤后，在减压下浓缩，得到粗产物。将该粗产物用正庚烷(10 ml)研碎，通过过滤和在减压下干燥，得到白色固体形式的标题化合物16-3(95.1mg)。
[0460]
《步骤3》2-氨基-n-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙基)乙酰胺(16-4)的合成:[化146]使用(实施例16)《步骤2》中得到的化合物(16-3、60 mg)、甲醇(900 μl)、碳酸钾(51.78 mg)和水(300μl)，实施与(实施例14)《步骤5》同样的操作，由此得到淡黄色油状物形式的标题化合物16-4(15 mg)。
[0461]
《步骤4》导入2-氨基-n-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙基)乙酰胺基的海藻酸(ex16-a2)的合成:
[化147]使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(29.66 ml)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(91.52 mg)和(实施例16)《步骤3》中得到的化合物(16-4、15 mg)，进行与(实施例11)《步骤3-1》同样的操作，得到白色固体形式的标题化合物ex16-a2(279 mg)。
[0462]
(实施例17)导入(2s)-2-氨基-n-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙基)-3-苯基丙酰胺基的海藻酸(ex17-a2)的合成:[化148]。
[0463]
《步骤1》(2,2,2-三氟乙酰基)-l-苯基丙氨酸(17-2)的合成:[化149]将l-苯基丙氨酸[cas registry no.:63-91-2](17-1、2 g)溶解在甲醇(10 ml)中，冷却至4℃。接着在同温度下加入三氟乙酸乙酯(1.59 ml)和三乙基胺(1.69 ml)，在室温下搅拌16小时。反应结束后，缓慢加入1n-盐酸(10 ml)至ph1，将悬浮液搅拌30分钟。过滤悬浮液，将回收的固体在减压下干燥，由此得到白色固体形式的标题化合物17-2(2.53g)。
[0464]
《步骤2》(2s)-n-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙基)-3-苯基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺)丙酰胺(17-3)的合成:[化150]
在化合物11-4(60 mg)和(实施例17)《步骤1》中得到的化合物(17-2、93.7 mg)的混合物中在冰冷却下加入乙醇(1200 μl)和4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(179.41 mg)，在室温下搅拌3小时。加入水(2 ml)，使反应停止，用甲基叔丁基醚(5 ml)萃取3次。将有机层依次用水(5 ml)、饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。将有机层过滤后，在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物用硅胶柱色谱(正庚烷/乙酸乙酯)纯化，由此得到白色无定形的标题化合物17-3(57mg)。
[0465]
《步骤3》(2s)-2-氨基-n-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙基)-3-苯基丙酰胺(17-4)的合成:[化151]使用(实施例17)《步骤2》中得到的化合物(17-3、57mg)、甲醇(855 μl)、碳酸钾(38.39 mg)和水(285 μl)，实施与(实施例14)《步骤5》同样的操作，得到淡黄色油状物形式的标题化合物17-4(35 mg)。
[0466]
《步骤4》导入(2s)-2-氨基-n-(2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙基)-3-苯基丙酰胺基的海藻酸(ex17-a2)的合成:[化152]使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(47.46 ml)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(146.44 mg)和(实施例17)《步骤3》中得到的化合物(17-4、34.53 mg)，进行与(实施例11)《步骤3-1》同样的操作，得到白色固体形式的标题化合物ex17-a2(383 mg)。
[0467]
(实施例18)导入4-(2-氨基乙氧基)-n-(3-叠氮基丙基)苯甲酰胺基的海藻酸(ex18-a2)的合成:[化153]。
[0468]
《步骤1》4-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙氧基)苯甲酸甲酯(18-2)的合成:
a2)的合成:[化156]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(19.6ml)中在冰冷却搅拌下使用4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(50.19 mg)、(实施例18)《步骤2》中得到的化合物18-4(54.37 mg)、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(181.4μl)，进行与(实施例11)《步骤3-1》同样的操作，得到白色固体形式的标题化合物ex18-a2(198 mg)。
[0472]
(实施例19)导入3-氨基-1-(11,12-二脱氢二苯并[b,f]吖辛因-5(6h)-基)-1-丙酮基的海藻酸(ex19-a2)的合成:[化157]在制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:a-2)水溶液(43.6 ml)中使用4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(111.7 mg)、1摩尔浓度-碳酸氢钠水溶液(403.5 μl)、市售的3-氨基-1-(11,12-二脱氢二苯并[b,f]吖辛因-5(6h)-基)-1-丙酮[cas registry no.:1255942-06-3](19-1、83.6 mg)，进行与(实施例11)《步骤3-1》同样的操作，得到淡黄色固体形式的标题化合物ex19-a2(376 mg)。
[0473]
(实施例20)导入n-(4-(氨基甲基)苄基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺基的海藻酸(ex20-b2)的合成:[化158]。
[0474]
《步骤1》(4-((2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(化合物20-2)的合成:[化159]
在参考文献公知的方法(bioorganic & medicinal chemistry(2003)11:4189-4206)合成的(4-(氨基乙基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(20-1、0.67 g)、三乙基胺(0.39 ml)和甲醇(6.67 ml)的混合物中在冰冷却搅拌下滴加三氟乙酸乙酯(0.44 ml)。将反应混合物升温至室温，在同温度下搅拌5小时。用水(10 ml)停止反应，用乙酸乙酯(10ml)萃取3次。将回收的有机层用饱和食盐水(5 ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥。将干燥的有机层过滤后，浓缩，得到淡黄色无定形的标题粗化合物20-2(0.67 g)。
[0475]
《步骤2》n-(4-(氨基乙基)苄基)-2,2,2-三氟乙酰胺 盐酸盐(化合物20-3)的合成:[化160]在(实施例20)《步骤1》中得到的化合物20-2(0.5 g)的1,4-二噁烷溶液(3.5 ml)中在水冷却搅拌下加入4n-盐酸/1,4-二噁烷(3.5 ml)，在室温下搅拌3小时。向反应液中加入二异丙基醚(40 ml)后，过滤析出物，得到白色固体形式的标题化合物20-3(0.4 g)。
[0476]
《步骤3》n-(4-((2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺)甲基)苄基)-2,2,2-三氟乙酰胺(化合物20-4)的合成:[化161]在按照文献公知的方法(org. process res. dev.(2018)22:108-110)合成的羧酸(7-4、0.17 g)和o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸盐(0.26 g)的乙腈(1.7 ml)溶液中，在冰冷却搅拌下滴加(实施例20)《步骤2》中得到的化合物20-3(0.26 g)和n,n-二异丙基乙基胺(0.51 ml)，在室温下搅拌1小时30分钟。加入水(5 ml)，使反应停止后，用乙酸乙酯(5 ml)萃取3次。将有机层用饱和食盐水(3 ml)洗涤后，用无水硫酸钠干燥。过滤干燥的有机层后，在减压下蒸馏除去溶剂。将残留物通过硅胶柱色谱(12%乙酸乙酯/正庚烷~100%乙酸乙酯)纯化，得到白色无定形的标题化合物20-4(0.19 g)。
[0477]
《步骤4》n-(4-(氨基甲基)苄基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺(化合物20-5)的合成:[化162]
在(实施例20)《步骤3》中得到的化合物20-4(0.18 g)和甲醇(1.8 ml)的混合物中在冰冷却搅拌下滴加碳酸钾(0.13 g)水溶液(0.9 ml)，在室温下搅拌17小时30分钟。将甲醇在减压下蒸馏除去，用乙酸乙酯(5 ml)萃取3次。将有机层用饱和食盐水(5 ml)洗涤后，用无水硫酸钠干燥。将有机层过滤后，在减压下蒸馏除去溶剂，得到淡黄色油状物形式的标题粗化合物20-5(0.13 g)。
[0478]
《步骤5》导入n-(4-(氨基乙基)苄基)-2-(环辛-2-炔-1-基氧)乙酰胺基的海藻酸(ex20-b2)的合成:[化163]使用制备为1重量%的海藻酸钠(持田制药株式会社制:b-2)水溶液(50.9 ml)、4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(dmt-mm)(0.12 g)、(实施例20)《步骤4》中得到的化合物20-5(35 mg)的乙醇(3 ml)溶液，进行与(实施例11)《步骤3-1》同样的操作，得到白色固体形式的标题化合物ex20-b2(521 mg)。
[0479]
(实施例p1~p7)按照前述实施例所示的方法，使用对应的氨基化合物(可以为制药学上允许的盐或它们的溶剂化物)和海藻酸制造下表所示的(实施例p1)~(实施例p7)的海藻酸衍生物。
[0480]
[表47]
。
[0481]
海藻酸衍生物的物性数据[表48]
。
[0482]
中间体化合物的nmr数据[表49-1]
。
[0483]
[表49-2]
。
[0484]
[表49-3]
。
[0485]
[表49-4]
。
[0486]
[表49-5]。
[0487]
中间体化合物的lc-mass数据[表50]
。
[0488]
[反应性基团或互补的反应性基团的导入率测定]反应性基团或互补的反应性基团导入率是指将每个作为海藻酸的重复单元的糖醛酸单糖单元中所导入的反应性基团或互补的反应性基团的数以百分数表示的值。
[0489]
本实施例中，反应性基团或互补的反应性基团导入率(mol%)通过1h-nmr的积分比计算。而且，算出导入率所必需的海藻酸的量通过利用校正曲线的咔唑硫酸法进行测定，反应性基团或互补的反应性基团的量也可通过利用校正曲线的吸光度测定法进行测定。
[0490]
[分子量的测定]将实施例中得到的导入了反应性基团或互补的反应性基团的海藻酸固体溶于包含0.15 mol/l的nacl的10mmol/l磷酸缓冲液(ph7.4)而制备0.1%或0.2%溶液，通过孔径0.22μm的聚醚砜制过滤器(minisart high flow filter、sartorius公司)除去不溶物后，作为凝胶过滤用样品。通过分光光度计du-800(beckman-coulter公司)测定各样品的光谱，确定各化合物的凝胶过滤中的测定波长。关于不具有特异的吸収波长的化合物，使用差示折射计。
[0491]
将200μl凝胶过滤用样品供于superose6 increase10/300 gl柱(ge healthcare science公司)。凝胶过滤使用akta explorer 10s作为色谱装置，使用包含0.15 mol/l nacl的10mmol/l磷酸缓冲液(ph7.4)作为展开溶剂，在室温下流速为0.8ml/mim的条件下实施。监测各化合物确定的波长的吸収并制作样品的洗脱曲线。所得色谱图使用unicorn5.31软件(ge healthcare science公司)进行解析，确定峰范围。
[0492]
导入了反应性基团或互补的反应性基团的海藻酸的分子量使用蓝色葡聚糖(分子
量200万da、 sigma公司)、甲状腺球蛋白(分子量66.9万da、ge healthcare science公司)铁蛋白(分子量44万da、ge healthcare science公司)醛缩酶(分子量15.8万da、ge healthcare science公司)、伴白蛋白(分子量7.5万da、ge healthcare science公司)、卵白蛋白(分子量4.4万da、ge healthcare science公司)、核糖核酸酶a(分子量1.37万da、ge healthcare science公司)和抑肽酶(分子量6500da、ge healthcare science公司)作为标准品，在与导入了反应性基团或互补的反应性基团的海藻酸相同的条件下进行凝胶过滤，利用unicorn软件确定各成分的洗脱液量。分别地，将该各成分的洗脱液量在横轴描点，将分子量的对数值在纵轴描点，进行线性回归，制作校正曲线。从蓝色葡聚糖至铁蛋白、从铁蛋白至抑肽酶制作2种校正曲线。
[0493]
使用该校正曲线，先计算得到的色谱的洗脱时间i下的分子量(mi)。接着，读取洗脱时间i下的吸光度并作为hi。根据这些数据由下式求出重均分子量(mw)。
[0494]
[数1]。
[0495]
[凝胶稳定性的测定](凝胶稳定性的测定(1)):pbs中稳定性将实施例1、4、5和19中得到的(ex1-a2)、(ex4-a2)、(ex5-a2)和(ex19-a2)的各海藻酸衍生物溶解在水中，使浓度为1.0%，从而分别得到海藻酸水溶液(1-1)、(4
‐
1)、(5-1)、(19-1)。将这些溶液分别以(1-1)和(19-1)、(4-1)和(19-1)、(5-1)和(19-1)的组合等量混合，加入装有18g注射针的注射筒，将该注射筒设置于流速设定为1ml/分钟的注射泵，滴加浓度为30mmol/l的氯化钙溶液30秒，搅拌5分钟，得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10ml的pbs洗涤1次，在pbs中在37℃静置10分钟，进行化学交联，得到化学交联海藻酸凝胶。用(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的交联海藻酸凝胶(珠)也与这些同样制备。向该凝胶中添加19.5ml的pbs，在37℃振荡，随时间经过回收水溶液，补充与回收的量同量的pbs。试验结束后，向试验溶液中添加海藻酸裂解酶(nippon gene，319-08261)10μl，在37℃振荡3小时以上，使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定所回收的水溶液中的海藻酸浓度，将各时间点的洗脱海藻酸量除以由所有时间点的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量得到的值用百分率表示，将该值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0496]
得到图1的结果。前述交联海藻酸凝胶(珠)经过96小时也没有崩解，可确定凝胶的稳定性。即，表示通过形成利用huisgen反应的化学交联，所制作的(珠)结构体长期维持其结构。由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的交联海藻酸凝胶(珠)为本试验的对照。
[0497]
(凝胶稳定性的测定(2)):edta下稳定性将(凝胶稳定性的测定(1))中得到的海藻酸水溶液分别以(1-1)和(19-1)、(4-1)和(19-1)、(5-1)和(19-1)的组合等量混合，加入装有18g的注射针的注射筒，将该注射筒设置于流速设定为1ml/分钟的注射泵，滴加浓度为30mmol/l的氯化钙溶液30秒，搅拌5分钟得到海藻酸凝胶。由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的交联海藻酸凝胶(珠)也与它们同样地制备。将该凝胶用10ml的生理食盐水洗涤1次，在生理食盐水中在37℃静置10分钟进行化学交联，
得到化学交联海藻酸凝胶。向该凝胶中添加19.5ml的5 mm乙二胺四乙酸二钾盐二水合物(edta
･
2k)/生理食盐水，在37℃振荡，随时间回收水溶液，补充与回收的量同样量的5mm edta
･
2k/生理食盐水。试验结束后，向试验溶液中添加海藻酸裂解酶(nippon gene，319-08261)10μl，在37℃振荡3小时以上，使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定所回收的水溶液中的海藻酸浓度，将各时间点的洗脱海藻酸量除以由所有时间点的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量得到的值用百分率表示，将该值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0498]
结果示于图2。前述交联海藻酸凝胶(珠)经过24小时后的崩解率为2%以下。即，表示通过利用huisgen反应进行的交联形成，所制作的结构体在没有钙离子的溶液(生物体的生理浓度以下)的条件下也维持结构。由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的交联海藻酸凝胶(珠)是本试验的对照。
[0499]
(凝胶稳定性的测定(3)):pbs中稳定性将实施例3、5、6、9、10、12和18中得到的(ex3-a2)、(ex5-a2)、(ex6-a2)、(ex9a-a2)、(ex10-a2)、(ex12-a2)和(ex18-a2)的各海藻酸衍生物溶解在水中，使浓度为1.0%，分别得到海藻酸水溶液(3-1)、(5-1)、(6-1)、(9-1)、(10
‐
1)、(12-1)、(18-1)。将它们分别以(6-1)和(9-1)、(3-1)和(10-1)、(5-1)和(10-1)、(18-1)和(12-1)的组合等量混合，加入装有18g注射针的注射筒，将该注射筒设置于流速设定为1ml/分钟的注射泵，滴加浓度为30mmol/l的氯化钙溶液30秒，搅拌5分钟得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10ml的pbs洗涤1次，在pbs中在37℃静置10分钟，进行化学交联，得到化学交联海藻酸凝胶。由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的交联海藻酸凝胶(珠)也与它们同样地制备。向该凝胶中添加19.5ml的pbs，在37℃振荡，随时间回收水溶液，补充与回收的量同样量的pbs。试验结束后，向试验溶液中添加海藻酸裂解酶(nippon gene，319-08261)10μl，在37℃振荡3小时以上，使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定所回收的水溶液中的海藻酸浓度，将各时间点的洗脱海藻酸量除以由所有时间点的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量得到的值用百分率表示，将该值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0500]
得到图3的结果。前述交联海藻酸凝胶(珠)经过96小时也不崩解，可确认凝胶的稳定性。即，表示通过形成利用huisgen反应的化学交联，所制作的(珠)结构体长期维持其结构。要说明的是，由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的交联海藻酸凝胶(珠)是本试验的对照。
[0501]
(凝胶稳定性的测定(4)):edta下稳定性将(凝胶稳定性的测定(3))中得到的海藻酸水溶液分别以(6-1)和(9-1)、(3-1)和(10-1)、(5-1)和(10-1)、(18-1)和(12-1)的组合等量混合，加入装有18g注射针的注射筒，将该注射筒设置于流速设定为1ml/分钟的注射泵，滴加浓度为30mmol/l的氯化钙溶液30秒，搅拌5分钟得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10ml的生理食盐水洗涤1次，在生理食盐水中在37℃静置10分钟进行化学交联，得到化学交联海藻酸凝胶。由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的交联海藻酸凝胶(珠)也与它们同样制备。向该凝胶中添加19.5ml的5mm乙二胺四乙酸二钾盐二水合物(edta
･
2k)/生理食盐水，在37℃振荡，随时间回收水溶液，补充与回收的量同样量的5mm edta
･
2k/生理食盐水。试验结束后，向试验溶液中添加海藻酸裂解酶(nippon gene，319-08261)10μl，在37℃振荡3小时以上，使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定所回收的水溶液中的海藻酸浓度，将各时间点的洗脱海藻酸量除以由所有时间点
的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量得到的值用百分率表示，将该值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0502]
结果示于图4。前述交联海藻酸凝胶(珠)经过24小时后的崩解率为4%以下。即，表示通过形成利用huisgen反应的交联，所制作的结构体即使在没有钙离子的溶液(生物体的生理浓度以下)的条件下也维持结构。由ex18-a2/ex19-a2制作的交联海藻酸凝胶(珠)是本试验的对照。
[0503]
(凝胶稳定性的测定(5)):pbs中稳定性将实施例4、9、16、18和20中得到的(ex4-a2)、(ex9a-a2)、(ex16-a2)、(ex18-a2)和(ex20-b2)的各海藻酸衍生物溶解在水中，使浓度为1.0%，分别得到海藻酸水溶液(4-1)、(9-1)、(16-1)、(18-1)、(20
‐
1)。将它们分别以(4-1)和(20-1)、(18-1)和(9-1)、(18-1)和(16-1)的组合等量混合，加入装有18g注射针的注射筒，将该注射筒设置于流速设定为1ml/分钟的注射泵，滴加浓度为30mmol/l的氯化钙溶液30秒，搅拌5分钟得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10ml的pbs洗涤1次，在pbs中在37℃静置10分钟，进行化学交联，得到化学交联海藻酸凝胶。由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的交联海藻酸凝胶(珠)也与他们同样地制备。向该凝胶中添加19.5 ml的pbs，在37℃振荡，随时间回收水溶液，补充与回收的量同样量的pbs，试验结束后，向试验溶液中添加海藻酸裂解酶(nippon gene，319-08261)10μl，在37℃振荡3小时以上，使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定所回收的水溶液中的海藻酸浓度，将各时间点的洗脱海藻酸量除以由所有时间点的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量得到的值用百分率表示，将该值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0504]
结果示于图5。通过前述方法制作的交联海藻酸经过96小时崩解率为约12%以下。即，通过形成利用huisgen反应的化学交联，所制作的(珠)结构体维持其结构。由ex18-a2/ex19-a2制作的交联海藻酸凝胶(珠)是本试验的对照。
[0505]
(凝胶稳定性的测定(6)):edta下稳定性将(凝胶稳定性的测定(5))中得到的海藻酸水溶液分别以(4-1)和(20-1)、(18-1)和(9-1)、(18-1)和(16-1)的组合等量混合，加入装有18g注射针的注射筒，将该注射筒设置于流速设定为1ml/分钟的注射泵，滴加浓度为30mmol/l的氯化钙溶液30秒，搅拌5分钟得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10ml的生理食盐水洗涤1次，在生理食盐水中在37℃静置10分钟进行化学交联，得到化学交联海藻酸凝胶。由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的交联海藻酸凝胶(珠)也与它们同样的制备。向该凝胶中添加19.5 ml的5 mm乙二胺四乙酸二钾盐二水合物(edta
･
2k)/生理食盐水，在37℃振荡，随时间回收水溶液，补充与回收的量同样量的5 mm edta
･
2k/生理食盐水。试验结束后，向试验溶液中添加海藻酸裂解酶(nippon gene，319-08261)10μl，在37℃振荡3小时以上，使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过咔唑硫酸法测定所回收的水溶液中的海藻酸浓度，将各时间点的洗脱海藻酸量除以由所有时间点的海藻酸浓度和试验结束后的海藻酸浓度算出的总海藻酸量得到的值用百分率表示，将该值作为崩解率，作为凝胶稳定性的指标。
[0506]
得到图6的结果。前述交联海藻酸凝胶(珠)经过24小时后的崩解率为18%以下。即，表示通过形成利用huisgen反应的交联，所制作的结构体在没有钙离子的溶液(生物体的生理浓度以下)的条件下也维持结构。由ex18-a2/ex19-a2制作的交联海藻酸凝胶(珠)是本试
验的对照。
[0507]
[凝胶透过性的测定](凝胶透过性的测定(1))将实施例1、3、4、5和18中得到的(ex1-a2)、(ex3-a2)、(ex4-a2)、(ex5-a2)和(ex18-a2)的各海藻酸衍生物溶解在水中，使浓度为2.0%，制备海藻酸水溶液，向该海藻酸水溶液中加入2/5容量的制备为1 mg/ml的分子量15万的荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖(sigma-aldrich，fd150s)、和3/5容量的水，得到含有0.2 mg/ml荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的1.0%海藻酸水溶液(1-2)、(3-2)、(4-2)、(5-2)、(18-2)。
[0508]
进一步，将实施例10、12和19中得到的(ex10-a2)、(ex12-a2)和(ex19-a2)的各海藻酸衍生物溶解在水中使浓度为1.0%，分别得到海藻酸水溶液(10-1)、(12
‐
1)、(19
‐
1)。
[0509]
将它们分别以(1-2)和(19-1)、(4-2)和(19-1)、(5-2)和(19-1)、(3-2)和(10-1)、(18-2)和(12-1)的组合等量混合，添加浓度为30 mmol/l的氯化钙溶液40ml，搅拌5分钟，得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10ml的生理食盐水洗涤1次，在生理食盐水中在37℃静置10分钟进行化学交联，得到内包荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的化学交联海藻酸凝胶。由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的内包荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的化学交联海藻酸凝胶也与它们同样地制备。向该凝胶中添加19.5ml的生理食盐水，在37℃振荡，随时间回收水溶液，补充与回收的量同样量的生理食盐水。试验结束后，向试验溶液中添加海藻酸裂解酶(nippon gene、319-08261)10 μl，在37℃振荡3小时以上，使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过荧光定量法(激发光:485nm、荧光:535nm)测定回收的水溶液中的葡聚糖浓度，将各时间点的葡聚糖量除以试验结束后的总葡聚糖量得到的值用百分率表示，将该值作为透过率。
[0510]
得到图7的结果。24小时后的透过率为25%~40%的范围。要说明的是，由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的内包荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的化学交联海藻酸凝胶是本试验的对照。
[0511]
(凝胶透过性的测定(2))将实施例4、5、6和18中得到的(ex4-a2)、(ex5-a2)、(ex6-a2)和(ex18-a2)的各海藻酸衍生物溶解在水中，使浓度为2.0%，制备海藻酸水溶液，向该海藻酸水溶液中加入2/5容量的制备为1mg/ml的分子量15万的荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖(sigma-aldrich，fd150s)和3/5容量的水，得到含有0.2mg/ml荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的1.0%海藻酸水溶液(4
‐
2)、(5-2)、(6-2)、(18-2)。
[0512]
进一步，将实施例9、10、16和20中得到的(ex9a-a2)、(ex10-a2)、(ex16-a2)和(ex20-b2)的各海藻酸衍生物溶解在水中，使浓度为1.0%，分别得到海藻酸水溶液(9-1)、(10
‐
1)、(16
‐
1)、(20-1)。
[0513]
将它们分别以(4-2)和(20-1)、(5-2)和(10-1)、(6-2)和(9-1)、(18-2)和(9-1)、(18-2)和(16-1)的组合等量混合，添加浓度为30mmol/l的氯化钙溶液40ml，搅拌5分钟，得到海藻酸凝胶。将该凝胶用10ml的生理食盐水洗涤1次，在生理食盐水中在37℃静置10分钟进行化学交联，得到内包荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的化学交联海藻酸凝胶。由(ex18-a2)/(ex19-a2)制作的内包荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的化学交联海藻酸凝胶也与它们同样地制备。向该凝胶中添加19.5ml的生理食盐水，在37℃振荡，随时间回收水溶液，补充与回收的量同样量的生理食盐水。试验结束后，向试验溶液中添加海藻酸裂解酶(nippon gene、319-08261)10μl，在37℃振荡3小时以上，使凝胶全部崩解，回收水溶液。通过荧光定量法
(激发光:485nm、荧光:535nm)测定回收的水溶液中的葡聚糖浓度，将各时间点的葡聚糖量除以试验结束后的总葡聚糖量得到的值用百分率表示，将该值作为透过率。
[0514]
得到图8的结果。24小时后的透过率为25%~30%的范围。由ex18-a2/ex19-a2制作的内包荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖的化学交联海藻酸凝胶是本试验的对照。
[0515]
[交联海藻酸衍生物(凝胶)的生物适应性评价]将实施例4、5、12、16、18、19和20中得到的(ex4-a2)、(ex5-a2)、(ex12-a2)、(ex16-a2)、(ex18-a2)、(ex19-a2)和(ex20-b2)的各海藻酸衍生物溶解在水中，作为导入了反应性基团的海藻酸溶液。将其用minisart high flow (sartorius，16532guk)过滤灭菌后，制备1.0%反应性基团导入海藻酸/生理食盐水溶液。向播种于96孔板中使细胞浓度为5
×
10 3
cells/well后培养1天的hela细胞中添加1.0%反应性基团导入海藻酸/生理食盐水溶液，使(ex18-a2)和(ex19-a2)、(ex5-a2)和(ex19-a2)、(ex4-a2)和(ex20-b2)、(ex18-a2)和(ex12-a2)或者(ex16-a2)的组合的最终浓度为0.1%，培养1天后作为细胞毒性的指标用celltiter-glo luminescent cell viability assay(promega、g7571)评价atp活性。
[0516]
得到图9的结果。通过前述方法评价的所有交联海藻酸凝胶中确认了atp活性，表示交联海藻酸凝胶没有细胞毒性，表示形成利用huisgen反应的化学交联的海藻酸结构体(珠)具有生物适应性。