一种马克思克鲁维酵母菌菌株培养基及其培养方法与流程

本发明属于微生物培养技术领域，具体的说是一种马克思克鲁维酵母菌菌株培养基及其培养方法。

背景技术：

现有技术中马克思克鲁维酵母菌的培养多数采用固态培养基或液态培养基，在培养过程中固态培养基培养法使菌落于培养基表面进行生长、繁育，由于固态培养基表面积有限，在大量培养菌株的过程中固态培养基对培养箱中的空间利用度较低，进而使菌株遍布固态培养基表面后，其繁殖速率极大地减缓，进而使菌株培养速率较慢，而液态培养基在培养过程中由于马克思克鲁维酵母菌为兼性厌氧菌，可以在液体环境中进行生长、繁育，因此对空间的利用程度较高，但是由于马克思克鲁维酵母菌在代谢的过程中会产生二氧化碳以及酸性产物，进而导致液体培养基中ph值随着时间的推移逐渐降低，且无氧环境中马克思克鲁维酵母菌产物中的酒精对马克思克鲁维酵母菌本身存在毒害性，进而导致液体培养基中的液态环境对马克思克鲁维酵母菌的生长、繁育起到抑制作用。

中国专利发布的一株用于奶啤生产的马克思克鲁维酵母菌菌株、其专用培养基及其应用，申请号：201711120989x，该方案提供的菌株、制备的液体菌种在0-4℃保存4天可含有活菌数超过1.0×1011个/ml，原料来源充足、价格便宜，配料方便，采用高密度液体发酵剂的制备方法，不仅减少培养体积，减少设备投资和生产时间，也节约了菌种购买成本，但是该方案中使用液体培养，在培养过程中代谢产物以及氧气环境均导致马克思克鲁维酵母菌不能可快速大量的繁殖，导致无法大规模快速的生成马克思克鲁维酵母菌菌株。

鉴于此，本发明研制一种马克思克鲁维酵母菌菌株培养基及其培养方法，用于解决上述技术问题。

技术实现要素：

为了弥补现有技术的不足，解决现有技术中由于马克思克鲁维酵母菌在代谢的过程中会产生二氧化碳以及酸性产物，进而导致液体培养基中ph值随着时间的推移逐渐降低，且无氧环境中马克思克鲁维酵母菌产物中的酒精对马克思克鲁维酵母菌本身存在毒害性，进而导致液体培养基中的液态环境对马克思克鲁维酵母菌的生长、繁育起到抑制作用的问题，本发明提出的一种马克思克鲁维酵母菌菌株培养基及其培养方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：本发明所述的一种马克思克鲁维酵母菌菌株培养基，所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基初始状态下呈块状固体、于24℃以上环境中缓慢膨胀；所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基由以下原料构成：

丝瓜瓤15～20份、马铃薯淀粉5～8份、去离子水30～35份、蛋白胨1～1.5份、琼脂1～1.5份、明胶0.5～1.5份；

所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基的制备方法包括以下步骤：

s1：选取自然老化的丝瓜瓤，去除表层丝瓜皮后裁剪为2*1*0.8cm长方形的片体，将片体于45～50℃下持续烘干15～18min后通入紫外线灭菌器中，进行常规消毒、灭菌处理；

s2：将琼脂置于加热至100～105℃的3/4去离子水中，保温加热5～8min，保温加热过程中伴随着持续搅拌，加热完成后将沸水通入过滤筛中，控制过滤筛网孔目数为160～200目，过滤得到凝固水；

s3：将马铃薯淀粉和蛋白胨添加至凝固水中，持续搅拌5～10min后，待溶液温度自然冷却至55～60℃后，用于对s1中消毒处理后的丝瓜瓤片体浸泡10～12min，浸泡完成后将丝瓜瓤片体捞出，快速通风冷却至16～24℃，使用压板将冷却后的丝瓜瓤进行压制，将丝瓜瓤厚度压缩至0.35-0.45cm后备用；

s4：将明胶溶于加热至80～90℃的1/4去离子水中，持续搅拌2～3min后将溶液冷却至30～32℃，将明胶溶液浇注在压缩状态的丝瓜瓤表面，并送入急冻箱中，使丝瓜瓤温度降低至15～20℃后制得压缩片；

s5：将压缩片上下错位堆叠，并置于温度循环箱中，控制温度循环箱中温度于18～24℃匀速循环，控制循环间隔为5～6min，循环处理10～12min后取出即制得马克思克鲁维酵母菌菌株培养基；

现有技术中马克思克鲁维酵母菌的培养多数采用固态培养基或液态培养基，在培养过程中固态培养基培养法使菌落于培养基表面进行生长、繁育，由于固态培养基表面积有限，在大量培养菌株的过程中固态培养基对培养箱中的空间利用度较低，进而使菌株遍布固态培养基表面后，其繁殖速率极大地减缓，进而使菌株培养速率较慢，而液态培养基在培养过程中由于马克思克鲁维酵母菌为兼性厌氧菌，可以在液体环境中进行生长、繁育，因此对空间的利用程度较高，但是由于马克思克鲁维酵母菌在代谢的过程中会产生二氧化碳以及酸性产物，进而导致液体培养基中ph值随着时间的推移逐渐降低，且无氧环境中马克思克鲁维酵母菌产物中的酒精对马克思克鲁维酵母菌本身存在毒害性，进而导致液体培养基中的液态环境对马克思克鲁维酵母菌的生长、繁育起到抑制作用；

本发明工作时，通过使用马铃薯淀粉作为糖源、蛋白胨作为氮源，将其溶于水中形成培养液，并向培养液中溶解琼脂，当培养液冷却后琼脂的加入会使培养液转换为凝胶状态，由于丝瓜瓤本身网状纤维层结构本身具备优异的导通性，将去皮后的丝瓜瓤切割成标准大小的片状体后，将片状体浸泡于尚未冷却的培养液中，并随后捞取、快速冷却，即可使培养液均匀凝结在丝瓜瓤内部的纤维丝上，使丝瓜瓤整体转换为固态培养基，同时由于丝瓜瓤本身网状结构致使其形变能力较强，将丝瓜瓤进行压缩，并使用明胶制成的溶液浇注在丝瓜瓤片体四周，当明胶溶液降温至15～20℃后，明胶溶液凝固，进而将压缩的丝瓜瓤进行固定，使丝瓜瓤制成的固体培养基体积缩小，将多个丝瓜培养基错位重叠，并置于温度循环箱中，在温度循环的过程中丝瓜瓤表层的明胶融解、凝固，进而使多层丝瓜瓤固体培养基之间黏连，体积的缩小使制得的培养基便于保存于运输，同时在进行菌株培养的过程中，缓慢升温，可以使培养基体积缓慢增大，进而使接种在表层的菌株随着时间的推移逐渐向膨胀的培养基内部进行渗透，进而有效的使培养基与空气的接触面积增大，而马克思克鲁维酵母菌在有氧环境中繁育速率较快，可以有效的促进马克思克鲁维酵母菌的繁育，同时在马克思克鲁维酵母菌代谢的过程，代谢产物在重力的作用顺着丝瓜瓤纤维丝在重力的作用下逐渐向底部滴落，进而使混杂在代谢产物中的菌株加速向培养基内部渗透，进而有效的加快菌株的培育速率，同时由于培养基缓慢膨胀，进而使培养基内部形成负压，进而使培养基内部对外界空气形成抽取，在空气抽取的过程中气流的流动对菌株向培养基内部扩散起到协助作用，进而有效的配合生成物的流动效果加速菌株向培养基内部扩散的速率，同时丝瓜瓤本身可以被菌株进行分解，在后续的发酵过程中也可以作为发酵材料使用，使丝瓜瓤的利用程度较高。

优选的，其中s1中丝瓜瓤在烘干前通入碱水中进行浸泡40～60min，浸泡完毕后送入-8～-5℃的冷库中进行冷冻处理，控制冷冻时间为10～15min；所述碱水为5～7％的氢氧化钠溶液；

工作时，由于丝瓜瓤中纤维本身较为纤细，使培养液在向丝瓜瓤纤维上挂壁凝固的过程中较为困难，通过将丝瓜瓤在烘干之前浸泡于氢氧化钠溶液中，利用氢氧化钠溶液对纤维素的溶胀作用，有效的将丝瓜瓤内部的细小纤维进行去除，同时还使纤维丝中的纤维素进行溶解，同时在浸泡完毕后，将丝瓜瓤进行冷冻处理，利用水分冻结、体积膨胀的原理，使纤维丝本身质地更加松软，使培养液可以向丝瓜瓤内部渗透，使培养液在丝瓜瓤内部纤维上凝结的更加顺利。

优选的，其中s3中以及s4中丝瓜瓤在快速冷却的过程中均伴随持续翻转，控制翻转速率为35～40r/min；

工作时，由于液体具备重力，在冷却凝结的过程中通过快速的翻转，进而使培养液在丝瓜瓤中均匀分布，避免培养液在丝瓜瓤内部凝结不均匀，甚至导致培养液在凝结的过程中将丝瓜瓤内部空隙进行堵塞，对菌株的侵入形成阻碍。

优选的，其中原料中还包括溅射微珠；所述溅射微珠含量占丝瓜瓤重量的20～25％；所述溅射微珠为包覆有压缩二氧化碳的颗粒状结构；所述溅射微珠表皮由白砂糖、蜂胶构成；

工作时，通过添加溅射微珠，在菌株的培养过程中，随着马克思克鲁维酵母菌菌株代谢过程中生成水、二氧化碳和酒精，在重力的作用下水滴滴在溅射微珠表层，进而使溅射微珠表层的糖壳溶解，溅射微珠内的二氧化碳气泡破裂，二氧化碳向外喷射，进而对溅射微珠表面的水滴形成冲击，使水滴随二氧化碳在丝瓜瓤内部呈横向溅射，由于水滴中蕴含马克思克鲁维酵母菌菌株，在水滴溅射的过程中，马克思克鲁维酵母菌菌株随之向丝瓜瓤内部进行横向扩散，配合水滴在重力作用下的竖直扩散，有效的增强马克思克鲁维酵母菌菌株在丝瓜瓤内部的扩散效率。

优选的，所述溅射微珠的制造方法包括以下步骤：

ⅰ：将白砂糖和蜂胶按照5:1的比例进行混合后通入加热皿中，控制加热皿内温度维持在95～100℃持续保温溶解，并于保温溶解的过程中进行画圈搅拌，控制搅拌速率为35～40r/min；

ⅱ：将保温溶解10～12min的糖浆倾倒于大理石台面上，并向糖浆内部填充二氧化碳气体，将糖浆反复折叠、压缩，直至糖浆冷却凝固，制得含有均匀、密集压缩气泡的糖浆固体；

ⅲ：将ⅱ中糖浆固体通入剪切机中，控制剪切机转速60～80r/min，进行剪切、破碎，并将破碎产物通入双重过滤筛中，利用双重过滤筛截取粒径在2～3mm的破碎产物即为溅射微珠，使用时直接将溅射微珠均匀洒入s3中通风冷却前的丝瓜瓤中；

工作时，通过反复折叠压缩，将二氧化碳气泡在糖浆中均匀破碎、分散，进而使凝固的糖浆中的二氧化碳压缩气泡分布较为均匀，密集程度较大，同时使用双重过滤，去除破碎的含气泡较少的碎屑和大颗粒破碎物，得到粒径大小较为合适的破碎微珠，进而使破碎微珠在丝瓜瓤内部分散的较为方便、溅射效果较好。

优选的，其中ⅱ中填充于糖浆内的二氧化碳气体中混杂着碳酸氢钠溶液；所述二氧化碳为加热至65～70℃的二氧化碳气体；所述二氧化碳气体在流动过程中与碳酸氢钠溶液接触；工作时，由于马克思克鲁维酵母菌在代谢过程中以及二氧化碳在水中溶解的过程中均会使培养基ph值向酸性转换，通过将二氧化碳在向糖浆内部流动的过程中流经碳酸氢钠溶液，进而使碳酸氢钠溶液雾化随二氧化碳气体向糖浆内部流动，进而利用碳酸氢钠溶液的微碱性对酸性物质进行中和，进而有效的维持培养基内部的ph值，使培养基内部的ph值偏向于中性，便于马克思克鲁维酵母菌的生长、繁育。

一种马克思克鲁维酵母菌菌株的培养方法，所述马克思克鲁维酵母菌菌株的培养方法包括以下步骤：

a1：将制备完成的马克思克鲁维酵母菌菌株培养基填充于培养箱中，并使用划线法将马克思克鲁维酵母菌菌株接种在培养箱中的培养基表面，将培养箱至于恒温箱中进行培养；

a2：控制恒温箱内温度缓慢升温至20～23℃，进行恒温培养2～3h，然后控制恒温箱内温度升温至30～35℃，持续保温培养14～16h，并在培养过程中持续向培养箱中补充新鲜无菌空气；

a3：将培养时间达到16～19h的培养箱中的残余培养基以及菌落用于接种生产发酵剂，并于发酵完成后降温至0-4℃，即可得到含有大量马克思克鲁维酵母菌菌株的液态发酵剂。

本发明的有益效果如下：

1.本发明所述的一种马克思克鲁维酵母菌菌株培养基及其培养方法，通过菌株培养的过程中温度的升高，可以使培养基体积缓慢增大，进而使接种在表层的菌株随着时间的推移逐渐向膨胀的培养基内部进行渗透，进而有效的使培养基与空气的接触面积增大，而马克思克鲁维酵母菌在有氧环境中繁育速率较快，可以有效的促进马克思克鲁维酵母菌的繁育，同时在马克思克鲁维酵母菌代谢的过程，代谢产物在重力的作用顺着丝瓜瓤纤维丝在重力的作用下逐渐向底部滴落，进而使混杂在代谢产物中的菌株加速向培养基内部渗透，进而有效的加快菌株的培育速率，同时由于培养基缓慢膨胀，进而使培养基内部形成负压，进而使培养基内部对外界空气形成抽取，在空气抽取的过程中气流的流动对菌株向培养基内部扩散起到协助作用，进而有效的配合生成物的流动效果加速菌株向培养基内部扩散的速率，同时丝瓜瓤本身可以被菌株进行分解，在后续的发酵过程中也可以作为发酵材料使用，使丝瓜瓤的利用程度较高。

2.本发明所述的一种马克思克鲁维酵母菌菌株培养基及其培养方法，通过添加溅射微珠，在菌株的培养过程中，随着马克思克鲁维酵母菌菌株代谢过程中生成水、二氧化碳和酒精，在重力的作用下水滴滴在溅射微珠表层，进而使溅射微珠表层的糖壳溶解，溅射微珠内的二氧化碳气泡破裂，二氧化碳向外喷射，进而对溅射微珠表面的水滴形成冲击，使水滴随二氧化碳在丝瓜瓤内部呈横向溅射，由于水滴中蕴含马克思克鲁维酵母菌菌株，在水滴溅射的过程中，马克思克鲁维酵母菌菌株随之向丝瓜瓤内部进行横向扩散，配合水滴在重力作用下的竖直扩散，有效的增强马克思克鲁维酵母菌菌株在丝瓜瓤内部的扩散效率。

附图说明

下面结合附图对本发明作进一步说明。

图1是马克思克鲁维酵母菌菌株培养基制备方法的方法流程图；

图2是溅射微珠制作方法的方法流程图；

图3是马克思克鲁维酵母菌菌株培养方法的方法流程图；

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

如图1至图3所示，本发明所述的一种马克思克鲁维酵母菌菌株培养基，所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基初始状态下呈块状固体、于24℃以上环境中缓慢膨胀；所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基由以下原料构成：

丝瓜瓤15～20份、马铃薯淀粉5～8份、去离子水30～35份、蛋白胨1～1.5份、琼脂1～1.5份、明胶0.5～1.5份；

所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基的制备方法包括以下步骤：

s1：选取自然老化的丝瓜瓤，去除表层丝瓜皮后裁剪为2*1*0.8cm长方形的片体，将片体于45～50℃下持续烘干15～18min后通入紫外线灭菌器中，进行常规消毒、灭菌处理；

s2：将琼脂置于加热至100～105℃的3/4去离子水中，保温加热5～8min，保温加热过程中伴随着持续搅拌，加热完成后将沸水通入过滤筛中，控制过滤筛网孔目数为160～200目，过滤得到凝固水；

s3：将马铃薯淀粉和蛋白胨添加至凝固水中，持续搅拌5～10min后，待溶液温度自然冷却至55～60℃后，用于对s1中消毒处理后的丝瓜瓤片体浸泡10～12min，浸泡完成后将丝瓜瓤片体捞出，快速通风冷却至16～24℃，使用压板将冷却后的丝瓜瓤进行压制，将丝瓜瓤厚度压缩至0.35-0.45cm后备用；

s4：将明胶溶于加热至80～90℃的1/4去离子水中，持续搅拌2～3min后将溶液冷却至30～32℃，将明胶溶液浇注在压缩状态的丝瓜瓤表面，并送入急冻箱中，使丝瓜瓤温度降低至15～20℃后制得压缩片；

s5：将压缩片上下错位堆叠，并置于温度循环箱中，控制温度循环箱中温度于18～24℃匀速循环，控制循环间隔为5～6min，循环处理10～12min后取出即制得马克思克鲁维酵母菌菌株培养基；

现有技术中马克思克鲁维酵母菌的培养多数采用固态培养基或液态培养基，在培养过程中固态培养基培养法使菌落于培养基表面进行生长、繁育，由于固态培养基表面积有限，在大量培养菌株的过程中固态培养基对培养箱中的空间利用度较低，进而使菌株遍布固态培养基表面后，其繁殖速率极大地减缓，进而使菌株培养速率较慢，而液态培养基在培养过程中由于马克思克鲁维酵母菌为兼性厌氧菌，可以在液体环境中进行生长、繁育，因此对空间的利用程度较高，但是由于马克思克鲁维酵母菌在代谢的过程中会产生二氧化碳以及酸性产物，进而导致液体培养基中ph值随着时间的推移逐渐降低，且无氧环境中马克思克鲁维酵母菌产物中的酒精对马克思克鲁维酵母菌本身存在毒害性，进而导致液体培养基中的液态环境对马克思克鲁维酵母菌的生长、繁育起到抑制作用；

本发明工作时，通过使用马铃薯淀粉作为糖源、蛋白胨作为氮源，将其溶于水中形成培养液，并向培养液中溶解琼脂，当培养液冷却后琼脂的加入会使培养液转换为凝胶状态，由于丝瓜瓤本身网状纤维层结构本身具备优异的导通性，将去皮后的丝瓜瓤切割成标准大小的片状体后，将片状体浸泡于尚未冷却的培养液中，并随后捞取、快速冷却，即可使培养液均匀凝结在丝瓜瓤内部的纤维丝上，使丝瓜瓤整体转换为固态培养基，同时由于丝瓜瓤本身网状结构致使其形变能力较强，将丝瓜瓤进行压缩，并使用明胶制成的溶液浇注在丝瓜瓤片体四周，当明胶溶液降温至15～20℃后，明胶溶液凝固，进而将压缩的丝瓜瓤进行固定，使丝瓜瓤制成的固体培养基体积缩小，将多个丝瓜培养基错位重叠，并置于温度循环箱中，在温度循环的过程中丝瓜瓤表层的明胶融解、凝固，进而使多层丝瓜瓤固体培养基之间黏连，体积的缩小使制得的培养基便于保存于运输，同时在进行菌株培养的过程中，缓慢升温，可以使培养基体积缓慢增大，进而使接种在表层的菌株随着时间的推移逐渐向膨胀的培养基内部进行渗透，进而有效的使培养基与空气的接触面积增大，而马克思克鲁维酵母菌在有氧环境中繁育速率较快，可以有效的促进马克思克鲁维酵母菌的繁育，同时在马克思克鲁维酵母菌代谢的过程，代谢产物在重力的作用顺着丝瓜瓤纤维丝在重力的作用下逐渐向底部滴落，进而使混杂在代谢产物中的菌株加速向培养基内部渗透，进而有效的加快菌株的培育速率，同时由于培养基缓慢膨胀，进而使培养基内部形成负压，进而使培养基内部对外界空气形成抽取，在空气抽取的过程中气流的流动对菌株向培养基内部扩散起到协助作用，进而有效的配合生成物的流动效果加速菌株向培养基内部扩散的速率，同时丝瓜瓤本身可以被菌株进行分解，在后续的发酵过程中也可以作为发酵材料使用，使丝瓜瓤的利用程度较高。

作为本发明的一种实施方式，其中s1中丝瓜瓤在烘干前通入碱水中进行浸泡40～60min，浸泡完毕后送入-8～-5℃的冷库中进行冷冻处理，控制冷冻时间为10～15min；所述碱水为5～7％的氢氧化钠溶液；

工作时，由于丝瓜瓤中纤维本身较为纤细，使培养液在向丝瓜瓤纤维上挂壁凝固的过程中较为困难，通过将丝瓜瓤在烘干之前浸泡于氢氧化钠溶液中，利用氢氧化钠溶液对纤维素的溶胀作用，有效的将丝瓜瓤内部的细小纤维进行去除，同时还使纤维丝中的纤维素进行溶解，同时在浸泡完毕后，将丝瓜瓤进行冷冻处理，利用水分冻结、体积膨胀的原理，使纤维丝本身质地更加松软，使培养液可以向丝瓜瓤内部渗透，使培养液在丝瓜瓤内部纤维上凝结的更加顺利。

作为本发明的一种实施方式，其中s3中以及s4中丝瓜瓤在快速冷却的过程中均伴随持续翻转，控制翻转速率为35～40r/min；

工作时，由于液体具备重力，在冷却凝结的过程中通过快速的翻转，进而使培养液在丝瓜瓤中均匀分布，避免培养液在丝瓜瓤内部凝结不均匀，甚至导致培养液在凝结的过程中将丝瓜瓤内部空隙进行堵塞，对菌株的侵入形成阻碍。

作为本发明的一种实施方式，其中原料中还包括溅射微珠；所述溅射微珠含量占丝瓜瓤重量的20～25％；所述溅射微珠为包覆有压缩二氧化碳的颗粒状结构；所述溅射微珠表皮由白砂糖、蜂胶构成；

工作时，通过添加溅射微珠，在菌株的培养过程中，随着马克思克鲁维酵母菌菌株代谢过程中生成水、二氧化碳和酒精，在重力的作用下水滴滴在溅射微珠表层，进而使溅射微珠表层的糖壳溶解，溅射微珠内的二氧化碳气泡破裂，二氧化碳向外喷射，进而对溅射微珠表面的水滴形成冲击，使水滴随二氧化碳在丝瓜瓤内部呈横向溅射，由于水滴中蕴含马克思克鲁维酵母菌菌株，在水滴溅射的过程中，马克思克鲁维酵母菌菌株随之向丝瓜瓤内部进行横向扩散，配合水滴在重力作用下的竖直扩散，有效的增强马克思克鲁维酵母菌菌株在丝瓜瓤内部的扩散效率。

作为本发明的一种实施方式，所述溅射微珠的制造方法包括以下步骤：

ⅰ：将白砂糖和蜂胶按照5:1的比例进行混合后通入加热皿中，控制加热皿内温度维持在95～100℃持续保温溶解，并于保温溶解的过程中进行画圈搅拌，控制搅拌速率为35～40r/min；

ⅱ：将保温溶解10～12min的糖浆倾倒于大理石台面上，并向糖浆内部填充二氧化碳气体，将糖浆反复折叠、压缩，直至糖浆冷却凝固，制得含有均匀、密集压缩气泡的糖浆固体；

ⅲ：将ⅱ中糖浆固体通入剪切机中，控制剪切机转速60～80r/min，进行剪切、破碎，并将破碎产物通入双重过滤筛中，利用双重过滤筛截取粒径在2～3mm的破碎产物即为溅射微珠，使用时直接将溅射微珠均匀洒入s3中通风冷却前的丝瓜瓤中；

工作时，通过反复折叠压缩，将二氧化碳气泡在糖浆中均匀破碎、分散，进而使凝固的糖浆中的二氧化碳压缩气泡分布较为均匀，密集程度较大，同时使用双重过滤，去除破碎的含气泡较少的碎屑和大颗粒破碎物，得到粒径大小较为合适的破碎微珠，进而使破碎微珠在丝瓜瓤内部分散的较为方便、溅射效果较好。

作为本发明的一种实施方式，其中ⅱ中填充于糖浆内的二氧化碳气体中混杂着碳酸氢钠溶液；所述二氧化碳为加热至65～70℃的二氧化碳气体；所述二氧化碳气体在流动过程中与碳酸氢钠溶液接触；工作时，由于马克思克鲁维酵母菌在代谢过程中以及二氧化碳在水中溶解的过程中均会使培养基ph值向酸性转换，通过将二氧化碳在向糖浆内部流动的过程中流经碳酸氢钠溶液，进而使碳酸氢钠溶液雾化随二氧化碳气体向糖浆内部流动，进而利用碳酸氢钠溶液的微碱性对酸性物质进行中和，进而有效的维持培养基内部的ph值，使培养基内部的ph值偏向于中性，便于马克思克鲁维酵母菌的生长、繁育。

一种马克思克鲁维酵母菌菌株的培养方法，所述马克思克鲁维酵母菌菌株的培养方法包括以下步骤：

a1：将制备完成的马克思克鲁维酵母菌菌株培养基填充于培养箱中，并使用划线法将马克思克鲁维酵母菌菌株接种在培养箱中的培养基表面，将培养箱至于恒温箱中进行培养；

a2：控制恒温箱内温度缓慢升温至20～23℃，进行恒温培养2～3h，然后控制恒温箱内温度升温至30～35℃，持续保温培养14～16h，并在培养过程中持续向培养箱中补充新鲜无菌空气；

a3：将培养时间达到16～19h的培养箱中的残余培养基以及菌落用于接种生产发酵剂，并于发酵完成后降温至0-4℃，即可得到含有大量马克思克鲁维酵母菌菌株的液态发酵剂。

具体实施流程如下：

工作时，通过使用马铃薯淀粉作为糖源、蛋白胨作为氮源，将其溶于水中形成培养液，并向培养液中溶解琼脂，当培养液冷却后琼脂的加入会使培养液转换为凝胶状态，由于丝瓜瓤本身网状纤维层结构本身具备优异的导通性，将去皮后的丝瓜瓤切割成标准大小的片状体后，将片状体浸泡于尚未冷却的培养液中，并随后捞取、快速冷却，即可使培养液均匀凝结在丝瓜瓤内部的纤维丝上，使丝瓜瓤整体转换为固态培养基，同时由于丝瓜瓤本身网状结构致使其形变能力较强，将丝瓜瓤进行压缩，并使用明胶制成的溶液浇注在丝瓜瓤片体四周，当明胶溶液降温至15～20℃后，明胶溶液凝固，进而将压缩的丝瓜瓤进行固定，使丝瓜瓤制成的固体培养基体积缩小，将多个丝瓜培养基错位重叠，并置于温度循环箱中，在温度循环的过程中丝瓜瓤表层的明胶融解、凝固，进而使多层丝瓜瓤固体培养基之间黏连，体积的缩小使制得的培养基便于保存于运输。

为了验证本发明制备的马克思克鲁维酵母菌菌株培养基的使用效果，特设立以下几组实验用于验证本发明制备的马克思克鲁维酵母菌菌株培养基在马克思克鲁维酵母菌菌株培养过程中起到的促进作用；

实施例1

所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基由以下原料构成：

马铃薯淀粉5～8份、去离子水30～35份、蛋白胨1～1.5份、琼脂1～1.5份；

将琼脂置于加热至100～105℃的3/4去离子水中，保温加热5～8min，保温加热过程中伴随着持续搅拌，加热完成后将沸水通入过滤筛中，控制过滤筛网孔目数为160～200目，过滤得到凝固水，将马铃薯淀粉和蛋白胨添加至凝固水中，持续搅拌5～10min后，待溶液温度自然冷却至常温后即制得马克思克鲁维酵母菌菌株培养基，将制备完成的马克思克鲁维酵母菌菌株培养基等分填充于3个培养箱中，并使用划线法将100个马克思克鲁维酵母菌菌株接种在培养箱中的培养基表面，将培养箱至于恒温箱中，控制恒温箱内温度升温至30～35℃，持续3个培养箱保温培养4h、12h、19h，恒温培育完毕后将培养基完全溶于1l去离子水中，进行离心搅拌处理，离心处理完毕后随即提取5组1ml离心液，使用染色体荧光染色技法进行菌株数量检测；

实施例2

所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基初始状态下呈块状固体、于24℃以上环境中缓慢膨胀；所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基由以下原料构成：

丝瓜瓤15～20份、马铃薯淀粉5～8份、去离子水30～35份、蛋白胨1～1.5份、琼脂1～1.5份、明胶0.5～1.5份；

选取自然老化的丝瓜瓤，去除表层丝瓜皮后裁剪为2*1*0.8cm长方形的片体，将片体于45～50℃下持续烘干15～18min后通入紫外线灭菌器中，进行常规消毒、灭菌处理，同步将琼脂置于加热至100～105℃的3/4去离子水中，保温加热5～8min，保温加热过程中伴随着持续搅拌，加热完成后将沸水通入过滤筛中，控制过滤筛网孔目数为160～200目，过滤得到凝固水，将马铃薯淀粉和蛋白胨添加至凝固水中，持续搅拌5～10min后，待溶液温度自然冷却至55～60℃后，用于对s1中消毒处理后的丝瓜瓤片体浸泡10～12min，浸泡完成后将丝瓜瓤片体捞出，快速通风冷却至16～24℃，使用压板将冷却后的丝瓜瓤进行压制，将丝瓜瓤厚度压缩至0.35-0.45cm后备用，将明胶溶于加热至80～90℃的1/4去离子水中，持续搅拌2～3min后将溶液冷却至30～32℃，将明胶溶液浇注在压缩状态的丝瓜瓤表面，并送入急冻箱中，使丝瓜瓤温度降低至15～20℃后制得压缩片，将压缩片上下错位堆叠，并置于温度循环箱中，控制温度循环箱中温度于18～24℃匀速循环，控制循环间隔为5～6min，循环处理10～12min后取出即制得马克思克鲁维酵母菌菌株培养基，将制备完成的马克思克鲁维酵母菌菌株培养基等分填充于3个培养箱中，并使用划线法将100个马克思克鲁维酵母菌菌株接种在培养箱中的培养基表面，将培养箱至于恒温箱中，控制恒温箱内温度缓慢升温至20～23℃，进行恒温培养3h，然后控制恒温箱内温度升温至30～35℃，并控制三个培养箱持续保温培养1h、9h、16h，并在培养过程中持续向培养箱中补充新鲜无菌空气，恒温培育完毕后将培养基完全溶于1l去离子水中，进行离心搅拌处理，离心处理完毕后随即提取5组1ml离心液，使用染色体荧光染色技法进行菌株数量检测；

实施例3

所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基初始状态下呈块状固体、于24℃以上环境中缓慢膨胀；所述马克思克鲁维酵母菌菌株培养基由以下原料构成：

丝瓜瓤15～20份、马铃薯淀粉5～8份、去离子水30～35份、蛋白胨1～1.5份、琼脂1～1.5份、明胶0.5～1.5份；

选取自然老化的丝瓜瓤，去除表层丝瓜皮后裁剪为2*1*0.8cm长方形的片体，将片体于45～50℃下持续烘干15～18min后通入紫外线灭菌器中，进行常规消毒、灭菌处理，同步将琼脂置于加热至100～105℃的3/4去离子水中，保温加热5～8min，保温加热过程中伴随着持续搅拌，加热完成后将沸水通入过滤筛中，控制过滤筛网孔目数为160～200目，过滤得到凝固水，将马铃薯淀粉和蛋白胨添加至凝固水中，持续搅拌5～10min后，待溶液温度自然冷却至55～60℃后，将消毒处理后的丝瓜瓤片体浸泡10～12min，浸泡完成后将丝瓜瓤片体捞出，快速通风冷却至16～24℃，并将含量占丝瓜瓤重量20～25％的溅射微珠均匀散布在丝瓜瓤内部，使用压板将冷却后的丝瓜瓤进行压制，将丝瓜瓤厚度压缩至0.35-0.45cm后备用，将明胶溶于加热至80～90℃的1/4去离子水中，持续搅拌2～3min后将溶液冷却至30～32℃，将明胶溶液浇注在压缩状态的丝瓜瓤表面，并送入急冻箱中，使丝瓜瓤温度降低至15～20℃后制得压缩片，将压缩片上下错位堆叠，并置于温度循环箱中，控制温度循环箱中温度于18～24℃匀速循环，控制循环间隔为5～6min，循环处理10～12min后取出即制得马克思克鲁维酵母菌菌株培养基，将制备完成的马克思克鲁维酵母菌菌株培养基等分填充于3个培养箱中，并使用划线法将100个马克思克鲁维酵母菌菌株接种在培养箱中的培养基表面，将培养箱至于恒温箱中，控制恒温箱内温度缓慢升温至20～23℃，进行恒温培养3h，然后控制恒温箱内温度升温至30～35℃，并控制三个培养箱持续保温培养1h、9h、16h，并在培养过程中持续向培养箱中补充新鲜无菌空气，恒温培育完毕后将培养基完全溶于1l去离子水中，进行离心搅拌处理，离心处理完毕后随即提取5组1ml离心液，使用染色体荧光染色技法进行菌株数量检测；

表1(菌株含量/ml)

根据以上三组实施例实验数据显示，使用本发明方法和配方制备的马克思克鲁维酵母菌菌株培养基在进行马克思克鲁维酵母菌菌株培养的过程中，随着时间的推移，马克思克鲁维酵母菌菌株的生长、繁育过程中不受阻碍的持续生长，而不使用本发明方法和使用本发明部分方法的实施例中，随着时间的推移，马克思克鲁维酵母菌菌株的繁育分别受到空间以及生成物的抑制，进而导致本发明制备的马克思克鲁维酵母菌菌株培养基中马克思克鲁维酵母菌菌株的生长繁育效率较高。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。