一种与植物耐盐相关的OsFLP蛋白质及其相关生物材料与应用

本发明涉及生物技术领域中一种与植物耐盐相关的osflp蛋白质及其相关生物材料与应用。

背景技术：

随着全球气候变化，非生物胁迫对植物生长的影响已经成为人类面临的重大挑战之一，严重制约着植物的生长和发育。非生物胁迫是指在特定环境下，任何非生物因素对植物所造成的不利影响，包括干旱、低温、盐碱等因素。其中干旱和盐碱是制约植物生长的两个最主要的胁迫因素。尤其是在全球土地盐渍化程度加深，可使用耕地面积越来越少的今天，对植物响应非生物胁迫的应答响应基因及其作用机制研究已成为当今最热点的课题之一。筛选与培育与植物耐盐性相关的基因品种对提高农业生产是十分重要的。

水稻作为世界上最重要的粮食作物之一，比其他作物如玉米、小麦等的基因组小，基因组长度大约为420mb，成为继拟南芥(arabidopsisthaliana)之后的另外一类重要的模式植物。近些年来水稻已被广泛应用于植物遗传学、发育生物学和分子生物学的研究。面对农作物生产中日益严重的土壤盐渍化问题，克隆水稻耐盐基因并对其功能进行研究，对尽快培育作物耐盐品种有重要的实践意义。

盐胁迫能够引起渗透胁迫和离子胁迫，抑制植物正常的细胞生长和分裂。为了应对不利的环境，植物通过快速渗透和离子信号维持渗透和离子稳态。高盐渗透胁迫能迅速增加脱落酸(aba)的生物合成，从而调节aba依赖的胁迫反应途径。蛋白质激酶、转录因子、mirna和活性氧相关蛋白的基因都可以通过aba依赖途径参与盐胁迫响应；还有一些盐诱导基因是独立于aba作用的。另外，由于盐胁迫能引起植物中渗透保护物质的积累，与这些渗透保护大分子合成相关的基因也在盐胁迫应答中发挥作用；激素作为向胞内传递胁迫信号的分子，他们的合成和传递途径中的基因也参与到盐胁迫中来。植物逆境调控网络错综复杂，对其研究充满挑战和意义，对水稻耐盐基因的探索和运用为解决当前农业生产上面临的难题提供了一个新思路，对分子育种、耐盐品种的研发有重要意义。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是如何提高植物的耐盐能力。

本发明提供了一种蛋白质，名称为osflp，是如下a1)、a2)或a3)的蛋白质：

a1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；

a2)将a1)的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与a1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性且具有提高耐盐活性的蛋白质；

a3)在a1)或a2)的n末端或/和c末端连接蛋白质标签得到的融合蛋白质。

上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述蛋白质中，所述蛋白质标签(protein-tag)是指利用dna体外重组技术，与目的蛋白质一起融合表达的一种多肽或者蛋白质，以便于目的蛋白质的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白质标签可为flag标签、his标签、mbp标签、ha标签、myc标签、gst标签和/或sumo标签等。

上述蛋白质中，同一性是指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如ncbi主页网站的blast网页。例如，可在高级blast2.1中，通过使用blastp作为程序，将expect值设置为10，将所有filter设置为off，使用blosum62作为matrix，将gapexistencecost，perresiduegapcost和lambdaratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。

上述蛋白质中，所述90％以上的同一性可为至少91％、92％、95％、96％、98％、99％或100％的同一性。

与osflp相关的生物材料也属于本发明的保护范围。

本发明所提供的与蛋白质osflp相关的生物材料，为下述b1)至b5)中的任一种：

b1)编码osflp的核酸分子；

b2)含有b1)所述核酸分子的表达盒；

b3)含有b1)所述核酸分子的重组载体、或含有b1)所述表达盒的重组载体；

b4)含有b1)所述核酸分子的重组微生物、或含有b2)所述表达盒的重组微生物、或含有b3)所述重组载体的重组微生物；

b5)含有b1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有b2)所述表达盒的转基因植物细胞系、或含有b3)所述重组载体的转基因植物细胞系。

其中，所述核酸分子可以是dna，如cdna、基因组dna或重组dna；所述核酸分子也可以是rna，如mrna或hnrna等。

上述生物材料中，b1)所述核酸分子为如下b1)或b2)所示的基因：

b1)编码链的编码序列(cds)是序列表中序列2的cdna分子或dna分子；

b2)编码链的核苷酸是序列表中序列2的cdna分子或dna分子。

其中，序列表中的序列2由1617个核苷酸组成，编码序列表中的序列1所示的蛋白质。

上述生物材料中，b2)所述的含有所述核酸分子的表达盒(osflp基因表达盒)，是指能够在宿主细胞中表达osflp的核酸分子，该核酸分子不但可包括启动osflp基因转录的启动子，还可包括终止osflp转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。可用于本发明的启动子包括但不限于：组成型启动子，组织、器官和发育特异的启动子，和诱导型启动子。启动子的例子包括但不限于：花椰菜花叶病毒的组成型启动子35s；来自西红柿的创伤诱导型启动子，亮氨酸氨基肽酶("lap",chao等人(1999)plantphysiology120:979-992)；来自烟草的化学诱导型启动子，发病机理相关1(pr1)(由水杨酸和bth(苯并噻二唑-7-硫代羟酸s-甲酯)诱导)；西红柿蛋白质酶抑制剂ii启动子(pin2)或lap启动子(均可用茉莉酮酸曱酯诱导)；热休克启动子(美国专利5，187，267)；四环素诱导型启动子(美国专利5，057,422)；种子特异性启动子，如谷子种子特异性启动子pf128(cn101063139b(中国专利200710099169.7))，种子贮存蛋白质特异的启动子(例如，菜豆球蛋白质、napin,oleosin和大豆betaconglycin的启动子(beachy等人(1985)emboj.4:3047-3053))。它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用。此处引用的所有参考文献均全文引用。合适的转录终止子包括但不限于：农杆菌胭脂碱合成酶终止子(nos终止子)、花椰菜花叶病毒camv35s终止子、tml终止子、豌豆rbcse9终止子和胭脂氨酸和章鱼氨酸合酶终止子(参见，例如：odell等人(i⁹⁸⁵)nature313:810；rosenberg等人(1987)gene,56:125；guerineau等人(1991)mol.gen.genet,262:141；proudfoot(1991)cell,64:671；sanfacon等人genesdev.,5:141；mogen等人(1990)plantcell,2:1261；munroe等人(1990)gene,91:151；ballad等人(1989)nucleicacidsres.17:7891；joshi等人(1987)nucleicacidres.,15:9627)。

可用现有的植物表达载体构建含有所述osflp基因表达盒的重组表达载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。如pahc25、pwmb123、pbin438、pcambia1302、pcambia2301、pcambia1301、pcambia1300、pbi121、pcambia1391-xa、pcambia1391-xb(cambia公司)、ph7wg2d.1等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mrna加工或基因表达的dna片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mrna前体的3’端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(ti)质粒基因(如胭脂碱合成酶基因nos)、植物基因(如大豆贮存蛋白质基因)3’端转录的非翻译区均具有类似功能。使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是atg起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(gus基因、萤光素酶基因等)、抗生素的标记基因(如赋予对卡那霉素和相关抗生素抗性的nptii基因，赋予对除草剂膦丝菌素抗性的bar基因，赋予对抗生素潮霉素抗性的hph基因，和赋予对methatrexate抗性的dhfr基因，赋予对草甘磷抗性的epsps基因)或是抗化学试剂标记基因等(如抗除莠剂基因)、提供代谢甘露糖能力的甘露糖-6-磷酸异构酶基因。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

上述生物材料中，所述重组微生物具体可为酵母，细菌，藻和真菌。

上述的蛋白质、或上述生物材料在调控植物耐盐性中的应用也属于本发明的保护范围。

为了解决上述技术问题，本发明还提供了植物试剂，其作用为提高植物耐盐性。

本发明所提供的植物试剂含有所述的蛋白质或/和所述的蛋白质相关的生物材料。

上述植物试剂的活性成分可为所述的蛋白质或/和所述的蛋白质相关的生物材料，上述植物试剂的活性成分还可含有其他生物成分或/和非生物成分，上述植物试剂的其他活性成分本领域技术人员可根据植物的氮吸收效果确定。

为了解决上述技术问题，本发明还提供了一种培育耐盐植物的方法。

本发明所提供的培育耐盐植物的方法，包括将编码所述蛋白质的核酸分子导入目的植物中，得到耐盐植物；所述耐盐植物对盐的耐受性优于所述目的植物的对盐的耐受性。

本发明还提高一种蛋白质，其对盐敏感，所述蛋白质是如下x1)、x2)或x3)的蛋白质：

x1)氨基酸序列是序列表中序列1第118位氨基酸残基由丙氨酸残基替换为苏氨酸残基，保持其它序列不变得到的蛋白质；

x2)将x1)的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与x1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性且具有提高盐敏感活性的蛋白质；

x3)在x1)或x2)的n末端或/和c末端连接蛋白质标签得到的融合蛋白质。

本发明还提供与上述盐敏感蛋白质相关的生物材料，为下述y1)至y5)中的任一种：

y1)编码所述的盐敏感蛋白质的核酸分子；

y2)含有y1)所述核酸分子的表达盒；

y3)含有y1)所述核酸分子的重组载体、或含有y1)所述表达盒的重组载体；

y4)含有y1)所述核酸分子的重组微生物、或含有y2)所述表达盒的重组微生物、或含有y3)所述重组载体的重组微生物；

y5)含有y1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有y2)所述表达盒的转基因植物细胞系、或含有y3)所述重组载体的转基因植物细胞系。

本发明还提供一种培育盐敏感植物的方法，包括将编码所述的盐敏感蛋白质的核酸分子导入目的植物中，得到盐敏感植物；所述盐敏感植物对盐的敏感性高于所述目的植物的对盐的敏感性。

本发明所述目的植物可为不含编码所述蛋白质的核酸分子的单子叶植物或双子叶植物。所述单子叶植物可为谷子、水稻。

本发明方法中，其中所述的核酸分子可先进行如下修饰，再导入目的植物中，以达到更好的表达效果：

1)修饰邻近起始甲硫氨酸的基因序列，以使翻译有效起始；例如，利用在植物中已知的有效的序列进行修饰；

2)与各种植物表达的启动子连接，以利于其在植物中的表达；所述启动子可包括组成型、诱导型、时序调节、发育调节、化学调节、组织优选和组织特异性启动子；启动子的选择将随着表达时间和空间需要而变化，而且也取决于靶物种；例如组织或器官的特异性表达启动子，根据需要受体在发育的什么时期而定；尽管证明了来源于双子叶植物的许多启动子在单子叶植物中是可起作用的，反之亦然，但是理想地，选择双子叶植物启动子用于双子叶植物中的表达，单子叶植物的启动子用于单子叶植物中的表达；

3)与适合的转录终止子连接，也可以提高本发明基因的表达效率；例如来源于camv的tml，来源于rbcs的e9；任何已知在植物中起作用的可得到的终止子都可以与本发明基因进行连接；

4)引入增强子序列，如内含子序列(例如来源于adhl和bronzel)和病毒前导序列(例如来源于tmv，mcmv和amv)。

所述的核酸分子可通过使用ti质粒，植物病毒栽体，直接dna转化，微注射，电穿孔等常规生物技术方法导入植物细胞(weissbach,1998，methodforplantmolecularbiologyviii,academypress,newyork,pp.411-463；geisersonandcorey,1998,plantmolecularbiology(2ndedition)。

本发明所述耐盐植物或所述盐敏感植物可为转基因植物，也可为通过杂交等常规育种技术获得的植物。

本发明所述转基因植物理解为不仅包含第一代到第二代转基因植物，也包括其子代。对于转基因植物，可以在该物种中繁殖该基因，也可用常规育种技术将该基因转移进入相同物种的其它品种，特别包括商业品种中。所述转基因植物包括种子、愈伤组织、完整植株和细胞。

将osflp基因导入水稻的转基因实验证明，表达osflp基因的转基因水稻与受体水稻相比，显著促进了对盐的耐受性，说明osflp基因是与耐盐相关的基因，osflp基因可用于提高植物的耐盐性，提高植物的抗逆能力。

附图说明

图1为实施例1中水稻osflp蛋白与已知r2r3-myb家族蛋白的序列比较图。

图2为实施例1中转osflp阳性转化植株的植物组织gus染色图，其中，a为萌发3d的水稻幼苗，b为主根，c为根的中柱，d为成熟气孔，e为幼苗颈节点，f为e的颈节点局部放大图。

图3为实施例1中不同nacl处理时长下野生型水稻中的osflp基因表达量柱状图，数据表示为平均值±标准差，重复数为3，采用student’sttest进行显著性分析，**表示显著性分析结果为p＜0.01。

图4为实施例2中osflp-1突变体突变位点分析图。

图5为实施例3中ph7wg2d.1的质粒图谱。

图6为实施例3中4种材料盐处理21天后的照片和存活率柱状图。其中，图6的a图为4种材料未经盐处理的对照组照片，图6的b图为4种材料盐处理后的实验组照片，图6的c图为4种材料处理组和对照组的存活率统计柱状图，数据表示为平均值±标准差，重复数为3，采用student’sttest进行显著性分析，**表示显著性分析结果为p＜0.01。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均为常规生化试剂，可从商业途径得到。

1载体

下述实施例中载体pcambia1301为北京华博德亿生物技术有限公司产品，货号：vt3013。

下述实施例中载体ph7wg2d.1为中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心(biovector)产品，货号：biovector921816。

下述实施例中载体topovector(货号：cv0402)为北京艾德科技有限公司产品。

2植物品系

下述实施例中的水稻品种zh11(oryzasatival.ssp.japonicacv.zhonghua11,zh11)记载于非专利文献“ospgip1-mediatedresistancetobacterialleafstreakinriceisbeyondresponsivetothepolygalacturonaseofxanthomonasoryzaepv.oryzicola”。公众可从中科院植物所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

4试剂

gatewaylrclonaseⅱenzymemix(货号：11791019)为赛默飞世尔科技(中国)有限公司公司产品。

下述实施例中，如无特殊说明，序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应dna的5′末端核苷酸，末位均为相应dna的3′末端核苷酸。

实施例1、植物耐盐相关基因osflp的获得

1、水稻osflp蛋白序列分析

利用拟南芥atflp的氨基酸序列在ncbi(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和水稻基因组数据库(http://rice.plantbiology.msu.edu/)中进行比对，寻找拟南芥atflp的同源蛋白。结果获得了一个与atflp氨基酸序列具有33.89％相似性的蛋白，并命名为osflp，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。

通过与已知的几个r2r3-myb家族蛋白序列，包括拟南芥atflp、atmyb88、atmyb121、atmyb0(atgl1)和水稻osmps蛋白序列进行比较分析，结果见图1，发现在osflp蛋白的n端具有r2和r3两个myb结构域。其中r2包含h1、h2和h3三个保守基序，r3包含h1、h2和h3三个保守基序，证明osflp是一个r2r3-myb家族蛋白。

2、水稻osflp基因的克隆

编码osflp蛋白的基因名称为osflp，该基因在水稻基因组数据库中的编为os07g0627300，来源于水稻日本晴生态型。osflp基因位于七号染色体上，共有12个外显子。

取水稻幼苗100-200mg，用rna提取试剂盒提取总rna，硝化后根据提取rna的浓度反转录合成一定量的单链cdna。osflp基因扩增条件如下，将合成的单链cdna稀释4倍，作为pcr反应的模板：采用toyobo公司的高保真dna聚合酶kod-plus，对osflp的cdna全长进行扩增，扩增体系为50μl，含10×kodbuffer5μl，2mmdntpmix5μl，primer1和primer2各1.5μl，kod-plusdna聚合酶0.5μl，模板1-5μl，补充灭菌超纯水至50μl，反应体系配制过程在冰上操作。

primer1：5’-atggcgaccggacccgatctg-3’；

primer2：5’-tcataggctattaaggagagc-3’。

bio-radpcr扩增仪上进行扩增，预变性5min，94℃变性30s，54℃30s，68℃2min，循环数32个，68℃延伸10min。将扩增片段用1％的琼脂糖凝胶进行电泳，回收扩增片段，连接到载体blunt上，进行酶切及测序鉴定，获得正确的osflp基因cdna(见序列表的序列2)。

3、水稻osflp表达模式分析

利用植物组织模式表达载体pgus1301，及步骤2获得的osflp基因cdna，构建osflp:osflp-gus表达载体，转化zh11野生型水稻，对阳性转化植株进行gus染色，分析osflp表达模式。

染色结果见图2，osflp可以在水稻萌发种子基部表达，在地上部和根部都有表达。在根尖、成熟气孔中表达，在地上部的表达中，颈节点处表达量高。

4、水稻osflp基因在盐处理后的表达分析

取生长2周的zh11野生型水稻幼苗，在水培管中分别用200mmnacl处理幼苗根部0h、2h、4h、6h、12h、24h后提取植物总rna，设置3个重复，qrt-pcr检测osflp的相对表达量，osflp引物和内参引物如下(osflp引物为primer3和primer4；内参引物为primer5和primer6)。

primer3：5’-aactggacaattatagcggcac-3’；

primer4：5’-ggaatgttgggactgtatgagc-3’。

primer5：5’-ggatccatcttggcatctctca-3’；

primer6：5’-gggccagactcgtcgtactc-3’。

结果见图3，osflp基因表达受到盐胁迫的诱导上调，盐处理不同时间下，水稻中osflp的相对含量都显著高于正常情况，且在处理6h时表达量最高。

实施例2、基因osflp突变体的获得

1、利用tilling技术获得osflp-1突变体

tilling(targetinginducedlocallesionsingenomes，定向诱导基因组局部突变)技术是一种全新的反向遗传学研究方法，利用化学诱变剂甲基磺酸乙酯对种子进行诱变，然后借助高通量测序手段快速有效的从诱变群体中鉴定出点突变。为了更好地解析osflp在水稻中的功能，我们用tilling技术，获得了不同突变位点的osflp突变体株系，具体见表1。我们对获得的不同突变位点的株系进行观察比较，以气孔为出发点，找到了具有不同于野生型气孔表型的株系a2349-2，将该突变体命名为osflp-1突变体。

表1

2、osflp-1突变体突变位点分析

我们设计相应的引物，扩增zh11和osflp-1突变体中的osflp基因组dna。通过测序发现(图4)，zh11的osflp基因组dna核苷酸序列见序列表的序列3，osflp-1突变体中osflp基因起始密码子atg后第2126位处，碱基g突变为碱基a，该突变位点位于该基因的第六个外显子上。即osflpcds(序列表序列2)第352位碱基由g突变为a，导致序列表中序列1第118位氨基酸残基由丙氨酸残基(ala)替换为苏氨酸残基(thr)，氨基酸发生改变，氨基酸极性也由非极性变成极性，疏水性氨基酸变为亲水性氨基酸，氨基酸性质发生改变。

实施例3、转基因osflp水稻的获得

1、osflp基因过表达载体构建及水稻转基因材料的获得

osflp基因过表达载体是利用ph7wg2d.1(质粒图谱见图5)作为出发载体，采取gateway体系方法构建，具体实施如下：扩增osflp的cdna片段(核苷酸序列是序列2)，凝胶回收后将osflp的cdna片段连接到入门载体topovector，得到的质粒命名为osflp-topo。将质粒osflp-topo用pvuⅰ限制性内切酶(识别位点是：cgatcg，切割后的片段具有黏性，它属于限制性内切酶ⅱ类)在37℃条件下，酶切3小时，把酶产物进行琼脂糖凝胶电泳分离，切胶回收。取回收产物1.5μl、ph7wg2d.1质粒0.5μl及gatewaylrclonaseⅱenzymemix0.5μl混合，于25℃反应4小时连接。终止反应后，将混合物转化大肠杆菌dh5α的感受态细胞，得到单菌落克隆。对单菌落进行繁殖并提取质粒，对质粒进行pcr鉴定后得到序列正确的质粒。得到的重组表达载体命名为super-ph7wg2d.1-osflp。super-ph7wg2d.1-osflp含有核苷酸序列是序列2的osflp基因，能表达氨基酸序列是序列1的蛋白质osflp。

将质粒super-ph7wg2d.1-osflp转化根癌农杆菌菌株eha105的感受态细胞，利用菌落pcr和酶切的方法鉴定得到转入super-ph7wg2d.1-osflp的阳性克隆(将其命名为eha105/super-ph7wg2d.1-osflp)，利用eha105/super-ph7wg2d.1-osflp对水稻野生型zh11进行转化，得到osflp基因过表达水稻，命名为oe。

2、osflp基因互补osflp-1的载体构建及阳性植株获得

水稻互补载体为以pcambia1301为出发载体进行构建，转化实施例2中的osflp-1突变体，将得到的转化苗在含有50μg/μl潮霉素的水培培养基上进行筛选，t2代的种子也需要用潮霉素进行筛选，得到的阳性植株为互补材料，命名为com。

3、水稻osflp-1突变体及osflp基因过表达株系耐盐的表型分析

采用野生型zh11、突变体osflp-1(见实施例2)、互补材料com(实施例3中的2构建)和osflp基因过表达的植株oe(实施例3中的1)共4种水稻材料的t3代植株为实验材料。

在水稻大田生长环境中，实验组对生长20天的水稻幼苗进行盐处理，向幼苗浇盐溶液，浇盐浓度为200mmnacl，浇盐处理后观察表型并统计存活率，对照组(control)以水替换盐溶液。每种材料每个处理12株，重复数为4。

结果显示，浇盐处理15天后，对照组中4种材料幼苗生长状态没有差异，而盐处理组幼苗则表现出叶片发黄，卷缩下垂，生长停滞等胁迫状态。相同盐浓度处理下，4种幼苗对胁迫的反映不同，osflp-1突变体叶片发黄干枯现象更明显，而osflp过表达植株无论是生长高度还是整个植株的生长状态都更好。盐处理21天后的结果见图6，4种材料的对照组仍然都表现出正常生长的状态，相互间没有差异；而实验组中osflp-1几乎全部死亡，没有新生叶片，表现出对盐处理的高敏感性；野生型zh11和互补植株com叶片整体发黄，死亡植株数目小于osflp-1，osflp基因过表达植株则表现出对盐环境更强的耐受性，植株高度更高，叶片相对更伸展，新生叶片数目也多。对处理21天的水稻幼苗存活率进行统计发现，与野生型zh11相比，osflp-1突变体的存活率有极显著的下降，过表达植株的存活率显著增高。

同时，我们还验证了zh11和osflp-1突变体中一些与盐胁迫响应相关基因的表达量，也将对其中差异表达的基因进行验证。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<120>一种与植物耐盐相关的osflp蛋白质及其相关生物材料与应用

<110>中国科学院植物研究所

<130>gncsy210905

<160>3

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>538

<212>prt

<213>水稻(oryzasativa)

<400>1

metalathrglyproaspleuthrproproalaalaalaalaserala

151015

glualaproseralaseralaalalyslysasparghisilevalser

202530

trpserthrglugluaspaspvalleuargthrglnilealaleuhis

354045

glythraspasntrpthrileilealaalaglnphelysasplysthr

505560

alaargglncysargargargtrptyrasntyrleuasnserglucys

65707580

lyslysglyglytrpserargglugluaspleuleuleucysgluala

859095

glnlysvalleuglyasnlystrpthrgluilealalysvalvalser

100105110

glyargthraspasnalavallysasnargpheserthrleucyslys

115120125

argargalalysaspaspgluleuphelysgluasnglyserleucys

130135140

serserthrserserlysargalaleuvalglnthrglycysleuthr

145150155160

serglyalaserglyseralaproproilelysglnmetargprocys

165170175

asnseraspphelysgluasnmetthrproasnmetargleuvalgly

180185190

glnasplysserthrglnaspserargglnproleualailevaltyr

195200205

glnasnasnglnaspasnmetasnthrmetaspthrglnasnleuval

210215220

alalysthralaalalysglnleuphealaglygluglnasncysval

225230235240

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