枇杷花发育相关的EjAP2L基因及其编码蛋白与应用

本发明属于植物分子生物学领域，具体涉及一个枇杷ejap2l蛋白及其编码基因和应用。

背景技术：

枇杷是起源于我国的重要亚热带常绿果树，目前已广泛分布在日本、印度、巴基斯坦、西班牙、意大利、美国、巴西、南非等30多个国家，成为一种世界范围的重要果树。由于枇杷鲜美多汁、营养价值极高，同时价格较高，在推动我国农村产业结构调整中起着重要作用。在枇杷生产过程中，花果发育是一个连续的过程，早花品种通常也是果实早熟品种，特别是早花早熟品种往往可以在销售市场上抢占先机，因此选育早花早果新品种对枇杷产业发展具有重要作用：一方面可以提前上市时间，有效拓宽枇杷货架期；另一方面可以提高枇杷的生产效益，达到增收的效果。

在拟南芥中，apetala2(ap2)基因编码ap2/erebp转录因子，在调控花发育网络调控过程中扮演重要角色，包括营养生长向花分生组织生长的转变、花器官发育等方面。在花发育基因调控网络中，ap2不仅可以促进wuschel(wus)基因的表达，调控花芽分化，而且ap2还与ag基因相互拮抗，进而调控萼片和花瓣的发育。但是，ap2基因的功能研究仅限于模式植物拟南芥，主要农作物水稻、大麦，重要观赏花卉植物。但是多年生木本植物ap2-like基因的功能鉴定及作用机制一直未见报道，其是否参与调控功能尚不清楚。因此，开展多年生木本植物，特别是果树中的ap2-like基因序列、表达和功能进行分析，对拓宽ap2-like基因的认知具有重要作用。

本发明对枇杷ap2-like基因ejap2l的分子调控机制和应用进行研究，有助于综合了解多年生蔷薇科植物的花发育过程，并为枇杷早花早熟品种的定向选育提供有价值且可利用的基因资源。

技术实现要素：

本发明的目的是提供枇杷ejap2l蛋白及其编码基因与应用。

首先，本发明提供枇杷ejap2l蛋白，其为：

1)由seqidno.2所示的氨基酸组成的蛋白质；或

2)在seqidno.2所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由1)衍生的蛋白质。

本发明还提供编码所述的枇杷ejap2l蛋白的基因。

所述基因的序列如seqidno.1所示。

本发明还提供含有所述基因的过表达载体，宿主细胞和工程菌。

本发明还提供所述基因在调控被子植物开花时间和花器官中的用途。

本发明从枇杷花芽中分离了一个枇杷花发育调控密切相关的ap2-like基因ejap2l，发现其定位于细胞核，表明该基因编码蛋白属于典型的ap2转录因子基因的亚细胞定位特性。通过半定量pcr证实了ejap2l基因在枇杷不同器官中均有表达，但在成花转变、花器官和幼果中的表达量较高。实时荧光定量pcr证实了ejap2l基因在花芽生理分化期和花序支轴分化期的表达量较高，表明ejap2l基因的表达量具有促进枇杷花芽分化时间的作用。利用基因工程手段构建了ejap2l基因的植物过表达载体，将其转入野生型拟南芥中超量表达，能显著促进拟南芥开花时间，并在部分转基因植株中改变拟南芥的花瓣结构和数目。本发明为被子植物开花时间和花器官的改造提供了很好的应用前景。

附图说明

图1是实施例1枇杷ejap2l基因的核心序列、3'race、5'race和基因编码区序列验证的电泳照片。其中，a是核心序列克隆的电泳照片，m为dl2000dnamarker，ejap2l1为ejap2l基因的核心序列pcr产物；b是5'race的电泳照片，m为dl2000dnamarker，5r为5'race的pcr产物；c是3'race的电泳照片，m为dl2000dnamarker，3r为3'race的pcr产物；d为ejap2l基因orf验证的pcr电泳照片，m为dl2000dnamarker，fejap2l为ejap2l基因orf的pcr产物；箭头指示为pcr扩增的目的基因条带。

图2是枇杷花发育相关的ejap2l蛋白氨基酸序列比对图。a是枇杷(ejap2l)、拟南芥(atap2)、月季(rcap2)、毛白杨(ptap2)和大豆(gsap2)的ap2同源蛋白质序列对比率；b是ejap2l、atap2、rcap2、ptap2和gsap2的ap2同源蛋白质序列的整体对比，·代表氨基酸序列相同，-代表氨基酸序列缺失。

图3是实施例2枇杷ejap2l基因在烟草叶片中瞬时表达的亚细胞定位，显示该基因的表达产物定位于细胞核。gfp：绿色荧光蛋白；dapi：4，6-联脒-2-苯基吲哚；bf：明场成像；merged：gfp，dapi和bf的合并后的图像。

图4是实施例3枇杷ejap2l基因在枇杷不同器官的半定量pcr分析。a：茎；b：叶；c：叶芽；d：萼片；e：花瓣；f：花药；g：花丝；h：花柱；i：子房；j：幼果。

图5是实施例4枇杷ejap2l基因在枇杷花芽不同发育时期的表达量变化。其中横坐标代表花发育时期：s1.花芽的生理分化期；s2.花芽形态分化期；s3.花序主轴分化期；s4.花序支轴分化期；s5.花序侧生支轴快速伸长期；s6.小花分化期；s7.花蕾露白期；s8.盛花期。

图6是实施例7枇杷ejap2l拟南芥阳性苗的pcr产物鉴定。m为dl2000dnamarker，1-23是转ejap2l基因拟南芥植株，n1是模板为ddh2o的pcr产物阴性对照，n2是模板为未转基因拟南芥dna的pcr产物阴性对照，p1是模板为pfgc5941-ejap2l质粒的pcr产物阳性对照。

图7是实施例7转ejap2l基因前后的野生型拟南芥的开花时间分析。其中，与未转基因野生型拟南芥中相比，过量表达ejap2l基因能导致转基因拟南芥开花时间提前15天左右。

图8是实施例7转基因拟南芥的花器官对比分析。其中，a是未转基因拟南芥的花器官；b是转ejap2l基因拟南芥的花器官。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如sambrook等分子克隆实验手册(sambrookj&russelldw,molecularcloning:alaboratorymanual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。

实施例1枇杷ejap2l基因cdna序列的克隆

枇杷花芽总rna的提取

采集新鲜长度约0.5cm的枇杷花芽，迅速取样后，放入冻存管中，放入液氮中速冻2h后，然后放入-80℃超低温冰箱中待用。采用rna提取试剂盒提取枇杷花芽中的总rna：从-80℃超低温冰箱中取出收集的花芽材料，放入预先冷冻并且加有1mlrlt裂解液和100μlplantaid的研钵中，在室温条件下，充分研磨；将上述研磨液转移至2.0ml的离心管中，12000rpm离心15min后，吸取600μl上清液，转移至新的2.0ml离心管；向上清液中加入300μl无水酒精，吸打混匀后，加入吸附柱中，然后将吸附柱放入收集管，13000rpm离心，1min后倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；向吸附柱中加入600μl去蛋白液，13000rpm离心1min后；加入600μl漂洗液，13000rpm离心1min后，倒掉收集管中的废液，再次重复一次加入漂洗液并13000rpm离心2min；将吸附柱重新放回空收集管中，13000rpm空离心2min，去除残留的漂洗液，将吸附柱在超净工作台中放置2min，使残留的漂洗液挥发；将吸附柱放回至空的rnase-free离心管中，加入50μl的rnase-freeh2o2，室温放置2min，接着13000rpm离心2min；再次将第一次的洗脱液重新加入到吸附柱中，再离心一次，以提高rna浓度。吸取2μl稀释后的rna样品，用微量核酸浓度检测仪检测rna浓度。

枇杷ejap2l基因的核心保守序列克隆

以枇杷花芽总rna为模板，使用oligodt18引物进行逆转录反应，合成第一链cdna，以逆转录产物为模板，使用高保真酶ex-taq。选择ncbi网站公布的预测的枇杷近缘物种ap2基因同源序列：梨ap2-like基因(xm_018644219.1)，苹果ap2-like基因(xm_008371483.2)和拟南芥ap2-like基因(u12546.1)的cdna序列保守区域(比对区域的序列高度一致)，设计引物克隆枇杷ejap2l基因的保守序列：pejap2f:agctcgcagtatcggggcgtta，pejap2r:gagaacccggtactctggcg；反应条件为94℃5min；94℃30s，56℃30s，72℃30s，进行35个循环；72℃10min。反应结束后，通过1％琼脂糖凝胶电泳检测(图1a)，切下目的条带，按照说明书用琼脂糖凝胶dna回收试剂盒回收pcr产物，将回收的pcr产物连接到pmd18-t载体后，转入大肠杆菌感受态细胞中，挑取单克隆菌落，进行测序。

枇杷ejap2l基因的5'race实验

采用race5'/3'kit试剂盒进行5'race逆转录获得cdna。枇杷花芽总rna为5'race实验模板，以5'-cdsprimera为接头引物进行逆转录反应，合成5'race实验的第一链cdna。

根据获得ejap2l基因的核心序列片段，设计5′race实验的下游特异性引物5rejap2l1和5rejap2l2，5rejap2l1：5′-caggatatgcacaaattcttcctttgt-3′和5rejap2l2：5′-caagtacacttgtttccggcaatccc-3′。以5'race逆转录产物为模板，使用高保真ex-taq酶，特异性引物5rejap2l1和5'racelongprimer(试剂盒自备)，进行第一链pcr反应。接着，以第一链pcr反应产物为模板，使用高保真ex-taq酶，特异性引物5rejap2l2和5'raceshortprimer(试剂盒自备)，进行第二链巢式pcr反应。第二链pcr反应结束后，通过1％琼脂糖凝胶电泳检测(图1b)，切下目的条带，按照说明书用琼脂糖凝胶dna回收试剂盒回收pcr产物。将回收的pcr产物连接到pmd18-t载体后，转入大肠杆菌感受态细胞中，挑取单克隆菌落，进行测序。

枇杷ejap2l基因的3'race实验

根据核心片段序列和5'race实验所得到的序列，设计3′race实验的特异性引物3rejap2l1和3rejap2l2，其中3rejap2l1：5′-tggtcactacgacggtcggaggac-3′，3rejap2l2：5′-agtgtacttgggaggatttgaca-3′。根据3'race实验操作步骤：采用枇杷花芽总rna为3'race实验模板，以3'raceadaptor为引物进行逆转录反应，合成3'race实验的第一链cdna。以第一链3'race逆转录产物为模板，使用高保真ex-taq酶，上游外侧特异性引物3rejap2l1和下游引物3'raceouterprimer：5'-taccgtcgttccactagtgattt-3'，进行第一链pcr反应。以第一链pcr反应产物为模板，使用高保真ex-taq酶，上游内侧特异性引物3rejap2l2和3'raceinnerprimer：5'-cgcggatcctccactagtgatttcactatagg-3'，进行第二链pcr反应，用1％琼脂糖凝胶电泳检测第二链的pcr反应(图1c)。切下目的条带，用琼脂糖凝胶dna回收试剂盒回收pcr产物。连接到pmd18-t载体后，转入大肠杆菌感受态细胞中，挑取单克隆，进行测序分析。

在枇杷ejap2l基因序列全长两端设计引物ejap2lf:5'-atgctagatctcaacctcaggttc-3'和ejap2lr:5'-ctatccgatcgtgaactgcttctgg-3'，反应条件为94℃5min；94℃40s，56℃40s，72℃40s，进行35个循环；72℃10min。pcr反应结束后，利用1％琼脂糖凝胶电泳检测后，切下目的条带(图1c)，用琼脂糖凝胶dna回收试剂盒回收pcr产物。连接到pmd18-t载体后，转入大肠杆菌感受态细胞中，挑取单克隆，进行测序，对ejap2l基因的编码区序列进行验证。

使用dnaman软件对核心保守序列、3'race、5'race和编码区序列验证实验的pcr测序结果，进行序列分析和拼接，得到枇杷ejap2l基因cdna的编码区序列(seqidno.1)。使用primer5软件，对枇杷ejap2l基因的cdna的编码区序列，进行蛋白质序列翻译(seqidno.2)。进一步，将枇杷ejap2l基因，编码蛋白质的氨基酸序列与预测的拟南芥、月季、毛白杨和大豆的ap2同源蛋白质序列对比，该蛋白质序列与其近缘物种及其他被子植物的序列相比，比对率仅有59.65％，序列差异明显(图2)，表明了ejap2l蛋白序列的特异性。

实施例2枇杷ejap2l基因的亚细胞定位分析

利用软件oligo7对ejap2l基因的orf序列进行酶切位点分析，并设计两端的酶切位点引物，lejap2l-kpni：5'-ggggtaccatgctagatctcaacctcaggttc-3'；lejap2l-bamhi：5'-cgggatcctccgatcgtgaactgcttctgg-3'。以测序正确的pmd18-ejap2l质粒为模板进行扩增，得到含有kpni和bamhi酶切位点的ejap2l基因orf序列。分别提取目的基因和改造的载体pcambia1300质粒，用限制性内切酶kpni和bamhi分别进行双酶切反应，经琼脂糖凝胶电泳后进行回收。利用t4dna连接酶将双酶切后的目的基因ejap2l和改造的pcambia1300载体进行连接，并将重组载体转入大肠杆菌感受态细胞中，之后进行菌液pcr和双酶切验证后进行测序，确保目的基因序列成功连接到载体。提取构建好的载体质粒通过冻融法转入农杆菌gv3101-90感受态细胞。

从固体lb培养基平板上挑取农杆菌的单克隆菌落，接种至10ml液体培养基(含rif+kan)中，28℃，250rpm培养至od600＝0.5。取5ml培养液离心10min收集菌体，然后加入2ml渗透液重新悬浮菌体，接着离心10min加入2ml渗透液(10mmmgcl2、10mmmes-koh，ph＝5.6，150μm乙酰丁香酮)重新悬浮菌体。最后稀释成od600＝0.03～0.1后进行烟草叶片的转化，转化后的烟草弱光培养16h后，恢复正常生长，3-4d后进行gfp荧光的观察(图3)。

实施例3枇杷ejap2l基因的半定量pcr分析

分别提取枇杷茎、叶、叶芽、萼片、花瓣、花药、花丝、花柱、子房、幼果的总rna，去除总rna中微量的dna后，逆转录成cdna。根据枇杷cdna为模板，利用oligo7.0软件设计半定量pcr引物rtejap2lf:5'-ggcctatttgatagcgagattg-3'和rtejap2lr:5'-ggagcaattcccaagttcag-3'。以枇杷actin基因为内参基因，引物为rtejactinf：5'-aatggaactggaatggtcaaggc-3'和rtejactinr：5'-tgccagatcttctccatgtcatccca-3'，pcr反应程序为:94℃5min；94℃30s，56℃30s，72℃30s，进行35个循环；72℃10min。pcr反应结束后，利用1％琼脂糖凝胶电泳检测(图4)，表明ejap2l基因的表达与成花转变、花器官和幼果发育密切相关。

实施例4枇杷ejap2l基因的实时荧光定量pcr分析

分别提取枇杷花芽生理分化期(s1)、花芽形态分化期(s2)、花序主轴分化期(s3)、花序支轴分化期(s4)、花序侧生支轴快速伸长期(s5)、小花分化期(s6)、花蕾露白期(s7)、盛花期(s8)的材料总rna，去除总rna中微量的dna后，逆转录成cdna。根据枇杷cdna为模板，利用引物rtejap2lf和rtejap2lr(与实施例3中的引物序列相同)。以枇杷actin基因为内参基因，引物为rtejactinf：和rtejactinr(与实施例3中的引物序列相同)，用pcr对其特异性进行检测，在确保pcr特异性扩增前提下，方可进行实时荧光定量pcr实验，每个反应设置3个生物学重复。pcr反应程序为:94℃预变性5min；94℃20s，56℃20s，72℃20s，41个循环，接着，采集溶解曲线：将温度调至60℃，90s，预溶解；接着以1.0℃/s速度升温，每升温1℃保温5s，直至95℃。结果显示：在枇杷花发育过程中，ejap2l基因在枇杷花芽发育不同时期的表达具有显著性差异，在花芽生理分化期和花序支轴分化期的表达量较高(图5)，表明ejap2l基因的表达具有促进枇杷花芽分化和花器官发育的作用。

实施例5ejap2l基因的植物转基因载体pfgc5941-ejap2l构建

采用pcr扩增手段，在枇杷ejap2l基因的cds区两端引入酶切位点。以枇杷花芽总rna逆转录的cdna为模板，以tejap2lf：5′-ggcgcgccatgctagatctcaacctcagg-3′(引入asci酶切位点)和tejap2lr：5′-tcccccgggctatccgatcgtgaactgcttctgg-3′(引入smai酶切位点)为引物，使用ex-taq酶，进行pcr扩增。pcr反应程序：94℃5min；94℃40s，56℃40s，72℃40s，进行30个循环；72℃10min。pcr反应结束后，对pcr产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，使用琼脂糖凝胶dna回收试剂盒回收pcr产物。将回收的pcr产物与pmd18-t载体连接，转入大肠杆菌感受态细胞，挑取单克隆后，进行测序。根据测序结果分析，提取质粒。使用asci和smai限制性内切酶分别双酶切pmd18-ejap2l重组质粒和pfgc5941载体，通过1％琼脂糖凝胶电泳检测，利用琼脂糖凝胶dna回收试剂盒回收。使用t4dna连接酶将双酶切后的ejap2l基因与pfgc5941连接后，转入大肠杆菌感受态细胞，通过测序验证序列正确后，获得植物转基因表达载体pfgc5941-ejap2l。

实施例6将转基因表达载体pfgc5941-ejap2l转入拟南芥

取1μg的pfgc5941-ejap2l质粒，加入100μl农杆菌感受态细胞，混合均匀；冰浴10min，转入液氮，迅速冷冻2min，快速置于37℃，水浴10min；加入800μl的lb液体培养基，28℃、250rpm振荡5h；将菌液转移至lb(50mllb+50μg/mlkan+50μg/mlrif)固体选择培养基中，涂布均匀，在28℃条件下倒置培养48h。

将含有pfgc5941-ejap2l阳性克隆的农杆菌在25ml固体平板培养基(含有25μg/mlkan+25μg/mlrif)上划线，28℃，倒置培养48h；选取单克隆，接种到10ml的液体lb培养基(含有10μg/mlkan+10μg/mlrif)中；在28℃、250rpm条件下，振荡培养过夜至od＝0.7-0.8。取1ml的培养菌液均匀涂布在25ml固体lb培养基平板(含有25μg/mlkan+25μg/mlrif)上，28℃，倒置培养48h；利用灭菌的玻璃三角棒将固体培养基上的农杆菌刮下来，将菌块重悬于含有5％蔗糖和3％silwetl-77的1/2ms液体培养基中，使其od＝0.2，用于拟南芥转基因。

将拟南芥种子放在湿润的滤纸上，并置于4℃，48h，接着播种至营养土(珍珠岩：蛭石：营养土＝1:4:5)，在温度22℃，湿度70％，14h光照/10h黑暗条件下，培养；转基因前，将拟南芥(购自拟南芥突变体库)植株浇透水；在浸染时将待用的拟南芥植株上已有角果剪掉，将花芽浸入pfgc5941-ejap2l农杆菌浸染液中90s左右；罩上黑色封口膜，并保持膜内的高温和高湿环境，暗培养2d后，揭开薄膜；上述方法侵染4次，间隔时间为7d。

实施例7枇杷ejap2l基因的转基因拟南芥筛选和表型鉴定

收取ejap2l转基因拟南芥成熟种子，将种子处理干净。置于4℃冰箱中进行春化处理14d；将春化的种子均匀播撒在培养土上，喷洒水后用保鲜膜覆盖保湿，发芽后揭去保鲜膜，按照常规的水肥管理。待苗子长至十天左右喷洒20mg/l的草铵膦，每三天喷洒一次，一共喷洒三次。将存活的的拟南芥植株培养20天左右，每一植株取一定量的叶片，提取ejap2l转基因拟南芥dna，取1小片拟南芥的叶片置于2.0ml的eppendorf管中，放入液氮速冻，研磨；加入600μl提取缓冲液，涡旋震荡后，置于冰上；待所有样品处理完后，置于65℃水浴中，25min；将样品从水浴中取出，放置到室温，待冷却至室温后，加入340μl乙酸钾溶液，涡旋震荡，冰浴20min；13000rpm，高速离心5min，将上清液转移至新的eppendorf管中；加等量体积的异丙醇，4℃，13000rpm，离心10min，倒掉清液，用冰无水乙醇(提前2h将无水乙醇放入-20℃冰箱)漂洗；沉淀依次用70％、100％乙醇漂洗；沉淀吹干后，溶于50μl无菌水。

以未转基因野生型拟南芥的dna作为对照，对转基因拟南芥的阳性植株进行ejap2l基因进行确证。根据pfgc5941载体上35s启动子序列和ejap2l的保守序列里设计一对特异性引物(camv35s-f：tgagacttttcaacaaaggataatt,ejap2lr：cgataaaacgtaacgccccgat)，用2×mixtaq，1μldna，对抗草铵膦的拟南芥植株进行pcr鉴定，共获得23株阳性的ejap2l转基因野生型拟南芥植株(图6)。

在这些转基因株系中，随机挑选了1、2、3、10、11、12、13、17、18和19号株系进行开花时间的表型鉴定，对这些拟南芥的开花时间表型进行观察、统计和拍照。表型结果显示：与野生型拟南芥相比，与未转基因野生型拟南芥中相比，过量表达ejap2l基因能导致转基因拟南芥开花时间提前15天左右(图7)；这些转基因植株中，有1株转基因拟南芥的出现了花瓣数目增多和花瓣宽度变窄和长度变短(图8)。因此，结果表明：ejap2l基因表达导致拟南芥开花时间的提前，ejap2l基因的转基因拟南芥材料可用于植物开花时间的改造，进而使植物促进开花；同时，ejap2l基因的转基因拟南芥材料可用于花瓣数目和花器官结构的改造。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110>西南大学

<120>枇杷花发育相关的ejap2l基因及其编码蛋白与应用

<130>

<160>20

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>1494

<212>dna

<213>枇杷(eriobotryajaponica)

<400>1

atgctagatctcaacctcaggttcgtctcccacgacgtcgttcccgattcccaccacaag60

cttctctccacctccccgatcgaaagctccggaagcctcaactcctcctccaaccacacc120

cttgccggcgacgacgacgacgtctccgctactctcaacttccttgctccaaacgacgac180

gtatccgctggtcactacgacggtcggaggaccatccagctcttcccgctcgcccaatcc240

gtacgctcttcttcgtcgtcgtcatcggcttctaagaagcaatggccgggactgtcgtcc300

agttccagattggagctggagccgatttacaatgctcctgcggagcagaggattgcgcca360

ccgcagcaagtgaagaaaagcaggagagggccccggtcacggagctcgcagtatcggggc420

gttacgttttatcgaagaaccgggagatgggaatcccatatttgggattgccggaaacaa480

gtgtacttgggaggatttgacactgcccattctgctgctagggcatatgatcgagctgcg540

atcaaattccgtggaactgaggctgatattaacttcagtgttagtgattatgaggatgat600

attgagcagatgagtaattttacaaaggaagaatttgtgcatatcctgcgccgccagagt660

accgggttctctagaggaagctcgaaattcaggggagtcacattgcacaaatgtggccgc720

tgggaagctcgtatgggccagtttctaggcaagaagtgtatataccttggcctatttgat780

agcgagattgaagctgcaagggcatatgaccaggctgccattgagtgcaatggaagagaa840

gcagtcaccaacttcaattcaagctcatatgatggggagttaatgtctgaggccaataac900

aaaggtattattgttggtagagaacatcacttcaaaagataccaaatcgccaataacaaa960

ggtagccaccaaaatcttgatctgaacttgggaattgctccccctttcgtttctgaaatc1020

caaaaggagaacatcaatttgagcagctttccttttcagctaggctgtgacagcattcct1080

attcacacaagagcaaggaatgagaactctgttccagcacctatgaggtctcaactttct1140

catggctcaatggtcgcgcctgaggtgcctcctataatgagcaacatgaattccagtttc1200

tttcccattcatatgaaaagagctatggagaagagtatggatgttaattcatttcccagt1260

tcggcttggcaactccaagacctgaatggcgggccaacttccatgccactcttctctgct1320

gcagcatcatcaggattcccttcttcagcagccacttcatcgtcatcagctgtcactcaa1380

cttcatttccctaacaaggcgattctccgccaccatttttcaccgtattcaccaacaaca1440

tcccccatttttattgctgaggctgaaaaccagaagcagttcacgatcggatag1494

<210>2

<211>497

<212>prt

<213>枇杷(eriobotryajaponica)

<400>2

metleuaspleuasnleuargphevalserhisaspvalvalproasp

151015

serhishislysleuleuserthrserproilegluserserglyser

202530

leuasnserserserasnhisthrleualaglyaspaspaspaspval

354045

seralathrleuasnpheleualaproasnaspaspvalseralagly

505560

histyraspglyargargthrileglnleupheproleualaglnser

65707580

valargserserserserserserseralaserlyslysglntrppro

859095

glyleuserserserserargleugluleugluproiletyrasnala

100105110

proalagluglnargilealaproproglnglnvallyslysserarg

115120125

argglyproargserargserserglntyrargglyvalthrphetyr

130135140

argargthrglyargtrpgluserhisiletrpaspcysarglysgln

145150155160

valtyrleuglyglypheaspthralahisseralaalaargalatyr

165170175

aspargalaalailelyspheargglythrglualaaspileasnphe

180185190

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