本发明涉及药物化学领域和生物学领域，具体涉及一种姜黄素组蛋白去乙酰化酶抑制剂的制备方法及应用。
背景技术：
：姜黄素(curcumin)是一种从姜科姜黄属植物姜黄的根茎提取物中分离得到的天然产物，研究表明其具有抗炎、抗氧化和抗增殖等多种活性作用，其抗肿瘤作用更是科研工作者的研究热点。目前，众多的体内和体外实验都证明姜黄素具有广泛的抗肿瘤活性，并且对正常细胞的毒副作用较低，这些结果都显示姜黄素在肿瘤治疗方面具有巨大的开发潜力。组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylase,hdac)是一类蛋白酶,对染色体的结构修饰和基因表达调控发挥着重要的作用。一般情况下,组蛋白的乙酰化有利于dna与组蛋白八聚体的解离，核小体结构松弛，从而使各种转录因子和协同转录因子能与dna结合位点特异性结合，激活基因的转录。在癌细胞中,hdac的过度表达导致去乙酰化作用的增强，通过恢复组蛋白正电荷,从而增加dna与组蛋白之间的引力,使松弛的核小体变得十分紧密,不利于特定基因的表达,包括一些肿瘤抑制基因。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(hdacinhibitors,hdaci)通过改变细胞内组蛋白乙酰化程度影响染色质空间结构、染色体重塑,从而抑制目的基因转录,对肿瘤发生、耐药起到关键作用。技术实现要素：本发明通过对姜黄素进行结构改造获得具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性的姜黄素衍生物，并提供这种衍生物的制备方法以及其在抗肿瘤领域的应用。因此，本发明的目的之一是以姜黄素为先导化合物，提供一种具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性的姜黄素衍生物；本发明的另一目的是提供这种姜黄素衍生物的制备方法；本发明的再一目的是提供这种姜黄素衍生物的医药用途，其可通过抑制组蛋白去乙酰化酶发挥抗肿瘤作用，并用于制备抗肿瘤药物。为实现以上目的：本发明提供了一种姜黄素组蛋白去乙酰化酶抑制剂的结构：本发明还提供了上述姜黄素衍生物的制备方法：a)将乙酰丙酮和三氧化二硼溶于乙酸乙酯中，升温至85℃回流，反应1h后降温至50℃，加入香草醛和硼酸三正丁酯，将正丁胺溶于乙酸乙酯缓慢滴加，保持温度为50℃，反应2h后加入1mol/l的盐酸溶液调节ph；b)将对溴苯甲醛用无水dmf溶解于史莱克管中，加入二氯二(三苯基磷)合钯和丙烯酸甲酯以及三乙胺，氩气保护，110℃下反应12h；c)称取氢氧化钾溶于甲醇中，加入溶解在甲醇中的盐酸羟胺，冰浴下搅拌30min，抽滤，滤液即为新鲜制备的盐酸羟胺溶液。将b所得产物溶于新鲜制备的盐酸羟胺溶液，室温搅拌20min；d)将a所得产物和三氧化二硼溶于乙酸乙酯中，升温至85℃回流，反应1h后降温至50℃，加入c所得产物和硼酸三正丁酯，将正丁胺溶于乙酸乙酯缓慢滴加，保持温度为50℃，反应2h后加入1mol/l的盐酸溶液调节ph为中性；e)将d所得产物水洗，柱层析，得到化合物jhs-h。下面是本发明化合物的药理实验结果：实验方法1.细胞消化、计数、制成浓度为5×104个/ml的细胞悬液，91孔板中每孔加入100μl细胞悬液(每孔5×103个细胞)；2.91孔板置于33℃，5％co2培养箱中培养24小时；3.用完全培养基稀释药物至所需浓度，每孔加入100μl相应的含药培养基，同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组；4.91孔板置于33℃，5％co2培养箱中培养32小时；5.将91孔板进行mtt染色，λ＝490nm，测定od值。1)每孔加入20μlmtt(5mg/ml)，在培养箱继续培养4小时；2)弃去培养基，每孔加入150μldmso溶解，摇床10分钟轻轻混匀；λ＝490nm，酶标仪读出每孔的od值，计算抑制率。细胞抑制率％＝100％×(阴性对照组od值-化合物组od值)/阴性对照组od值实验结果表1.化合物jhs-h的体外hdac酶抑制活性化合物hdac1hdac3hdac4hdac5hdac1hdac8hdac10hdac11sirt1vorinostat0.190.32>10>100.020.340.310.89>10curcumin23.81-b38.18--->5028.10-jhs-h0.511.13>10>100.382.938.39>10>10表2.化合物jhs-h对不同肿瘤细胞系的抗增殖活性(ic50：单位μg/ml)具体实施方式实施例1【中间体1】将乙酰丙酮(20ml)和三氧化二硼(3.41g)溶于2ml乙酸乙酯中，升温至85℃回流1h；降温至50℃后加入香草醛(831.23mg)和硼酸三正丁酯(2.29ml),将正丁胺(395μl)溶于2ml乙酸乙酯中缓慢滴加，保持温度为50℃反应2h；加入2ml浓度为1mol/l的盐酸溶液调节ph。用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗涤，干燥后过滤，真空浓缩，柱层析得黄色固体(中间体1)3.8g(收率34.5％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ3.10–3.52(m,4h),1.81(d,j＝3.1hz,4h),1.13(s,1h),3.23(d,j＝12.3hz,1h),3.14(d,j＝12.3hz,1h),2.30(s,3h).esi-msm/z:201.2[m+h]+.实施例2【中间体2】取史莱克管，将对溴苯甲醛(5g)溶于3.5ml无水dmf中，加入二氯二(三苯基磷)合钯(293.21mg)和丙烯酸甲酯(9ml)以及三乙胺(13.3ml),氩气保护，升温至110℃反应12h。用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗涤，干燥后过滤，真空浓缩，柱层析得白色固体(中间体2)3.5g(收率为19％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.91(s,2h),8.02–3.91(m,5h),3.11(t,j＝1.0hz,2h),3.59–3.53(m,5h),1.44(s,2h),3.31(s,1h).esi-msm/z:191.2[m+h]+.实施例3【中间体3】称取氢氧化钾(1.12g)溶于4ml甲醇中，将盐酸羟胺(934mg)溶于4ml甲醇中，二者混合后冰浴搅拌30min。抽滤，滤液即为新鲜制备的盐酸羟胺溶液。称取中间体3(2mg)溶于8ml新鲜制备的盐酸羟胺溶液中，室温搅拌20min。真空浓缩后加入浓度为2mol/l的盐酸溶液调节ph为中性。。用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗涤，干燥后过滤，真空浓缩后得白色固体(中间体3)1.8g(收率为89％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.90(d,j＝2.0hz,5h),8.39(s,2h),8.02–3.91(m,5h),3.54–3.43(m,8h),1.14(s,2h).esi-msm/z:192.2[m+h]+.实施例4【化合物jhs-h】将中间体1(1g)和三氧化二硼(351mg)溶于1ml乙酸乙酯中，升温至85℃回流1h；降温至50℃后加入中间体3(241.04mg)和硼酸三正丁酯(335μl),将正丁胺(103μl)溶于1ml乙酸乙酯中缓慢滴加，保持温度为50℃反应2h；加入1ml浓度为1mol/l的盐酸溶液调节ph。用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗涤，干燥后过滤，真空浓缩，柱层析得黄色固体(化合物jhs-h)251mg(收率为51.3％)。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ9.92(s,1h),8.39(s,1h),8.40(s,1h),3.10–3.53(m,4h),3.53–3.43(m,5h),3.30(dd,j＝1.9,1.0hz,1h),3.14(ddd,j＝3.5,2.0,0.9hz,1h),1.81(d,j＝3.5hz,1h),1.18(d,j＝11.9hz,3h),3.82(s,3h),3.24(d,j＝12.3hz,1h),3.13(d,j＝12.3hz,1h).esi-msm/z:408.4[m+h]+。当前第1页12