1.一种制备包括一或多种含myc多肽的生物活性纳米颗粒群的方法,所述方法包括:
(a)使含myc多肽在包括某一浓度的变性剂的增溶溶液中增溶以提供增溶的含myc多肽;
(b)用第一重折叠缓冲液对所述增溶的含myc多肽进行第一重折叠步骤至少约30到180分钟以提供第一多肽混合物,所述第一重折叠缓冲液包括约0.35到约0.65浓度的步骤(a)的所述变性剂和约100mm到约1m碱金属盐和/或碱性金属盐;
(c)用第二重折叠缓冲液对所述第一多肽混合物进行第二重折叠步骤至少约30到180分钟以提供第二多肽混合物,所述第二重折叠缓冲液包括约0.10到约0.30浓度的步骤(b)的所述变性剂和约100mm到1m碱金属盐和/或碱性金属盐;和
(d)用第三重折叠缓冲液对所述第二多肽混合物进行第三重折叠步骤至少约30到180分钟,所述第三重折叠缓冲液包括约100mm到1m碱金属盐和/或碱性金属盐;
(e)将所述含myc多肽保持在所述第三重折叠缓冲液中一段时间,所述时间足以产生数均直径介于约80nm和约150nm之间的生物活性纳米颗粒,
其中相较于未与所述生物活性纳米颗粒接触的抗cd3或抗cd28活化的t细胞,在适合t细胞增殖的条件下使抗cd3或抗cd28活化的t细胞与所述生物活性纳米颗粒接触增强了所述t细胞的活化、存活或增殖中的一或多种。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一重折叠步骤、第二重折叠步骤和/或第三重折叠步骤包括通过缓冲液更换来进行所述步骤。
3.根据权利要求2所述的方法,其中使用切向流过滤进行缓冲液更换。
4.根据权利要求1所述的方法,其中所述碱金属盐包括钠盐、锂盐和钾盐中的一或多种,其中所述钠盐包括氯化钠(nacl)、溴化钠、硫酸氢钠、硫酸钠、碳酸氢钠或碳酸钠中的一或多种,其中所述锂盐包括氯化锂、溴化锂、硫酸氢锂、硫酸锂、碳酸氢锂或碳酸锂中的一或多种,以及其中所述钾盐包括氯化钾、溴化钾、硫酸氢钾、硫酸钾、碳酸氢钾或碳酸钾中的一或多种。
5.根据权利要求1所述的方法,其中所述碱金属盐包括镁盐和钙盐中的一或多种,其中所述镁盐包括氯化镁、溴化镁、硫酸氢镁、硫酸镁、碳酸氢镁或碳酸镁中的一或多种,以及其中所述钙盐包括氯化钙、溴化钙、硫酸氢钙、硫酸钙、碳酸氢钙或碳酸钙中的一或多种。
6.根据权利要求1所述的方法,其中所述碱金属盐包括nacl且所述第一、第二和/或第三重折叠缓冲液包括约500mmnacl。
7.根据权利要求1所述的方法,其中步骤(a)中的变性剂的浓度为约1m到约10m,其中所述变性剂包括胍、盐酸胍、氯化胍、硫氰酸胍、尿素、硫脲、高氯酸锂、氯化镁、苯酚、甜菜碱、肌氨酸、氨基甲酰肌氨酸、牛磺酸、二甲亚砜(dmso);醇;洗涤剂;氢氧化物中的一或多种。
8.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一重折叠缓冲液、所述第二重折叠缓冲液和/或第三重折叠缓冲液各自独立地包括缓冲剂,其中所述缓冲剂包括tris(三[羟甲基]氨基甲烷)、hepps(n-[2-羟乙基]哌嗪-n'-[3-丙烷-磺酸])、capso(3-[环己基氨基]-2-羟基-1-丙磺酸)、amp(2-氨基-2-甲基-1-丙醇)、caps(3-[环己基氨基]-1-丙磺酸)、ches(2-[n-环己基氨基]乙磺酸)、精氨酸、赖氨酸和硼酸钠中的一或多种。
9.根据权利要求8所述的方法,其中每种缓冲剂独立地以约1mm到约1m的浓度存在。
10.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一重折叠缓冲液、第二重折叠缓冲液和/或第三重折叠缓冲液各自独立地包括氧化剂和还原剂,其中氧化剂与还原剂的摩尔比为约2:1到约20:1,其中所述氧化剂是以约0.1mm到约10mm的浓度包括在内,且其中所述还原剂是以约0.02mm到约2mm的浓度包括在内。