核酸提取装置及核酸提取方法、核酸提取用试剂盒与流程

本发明涉及医疗器械技术领域，具体为核酸提取装置及核酸提取方法、核酸提取用试剂盒。

背景技术：

在核酸提取作业中，需要将不停的溶液进行反复交互进行不同作业从而完成核酸提取，在对溶液进行交互作业时，通常需要采用滴管或类似装置对溶液进行吸附并传输；

中国专利(申请号cn201921420226.1)一种核酸提取仪用核酸提取装置，在该申请文中提出了上述类似的问题，该方案中采用的方法主要为：采用一次性的透明细管，在每次溶液交互作业中对透明细管进行更换，省略了对滴管清洗的步骤；

但是，该方案中：首先，滴管的清洗并不复杂，无需对滴管清洗步骤进行省略；其次，频繁的更换透明细管使得作业繁琐度增加；另外，滴管管体内部液体的温度流失降低较快；为此，我们提出了一种核酸提取装置及核酸提取方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种核酸提取装置及核酸提取方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种核酸提取装置及核酸提取方法，包括一级滴管、二级滴管和调节限制管；

所述二级滴管用于排出和吸附溶液，所述一级滴管用于控制二级滴管进行吸附和排出溶液作业，一级滴管和二级滴管通过调节限制管相互连接，一级滴管和二级滴管能够通过调节限制管进行活动的角度变化；

所述二级滴管包括二级管体、外导板、连接管和二级胶头，所述二级管体通过外导板与连接管和二级胶头相互连接；

所述一级滴管包括一级管体、一级胶头和活动槽，所述一级管体和一级胶头相互连接，所述活动槽开设在一级管体的底部，活动槽用于限制二级滴管进行活动变化。

优选的，所述外导板为从下至上逐渐变窄的锥形管状，外导板固定安装在二级管体的顶部，所述二级胶头设置在外导板的上方位置，通过二级胶头受到的压力变化使得二级滴管产生吸附或排出溶液的效果。

优选的，所述一级胶头固定安装在一级管体的顶部，所述活动槽的大小和二级胶头的大小相适配，通过活动槽将二级胶头限制卡扣在一级管体的底部。

优选的，所述一级滴管还包括活动板和密闭板，所述活动板固定安装在连接管的顶端侧壁上，且活动板的内端大小和二级胶头的外端大小相适配，活动板的外端大小和活动槽的内端大小相适配，通过活动板避免二级胶头因压力形变脱离活动槽的情况发生，所述密闭板的内端和活动板的外端相互固定连接，密闭板的外端和活动槽的内侧对应位置壁面相互固定连接，通过活动板下压使得密闭板始终夹在活动槽和活动板之间，从而避免一级管体内部气体外溢情况发生。

优选的，所述二级滴管还包括内导板、分流板和夹槽，所述夹槽开设在二级管体的顶部，夹槽将二级管体分割为内侧板和外侧板，内侧板和外侧板的底端相互连接，所述内导板固定安装在所述内侧板的顶部，内导板的形状大小和外导板相适配，内导板和外导板相互间隔设置，所述分流板固定安装在内导板的顶部，分流板位于连接管的内部，分流板从上之下逐渐变窄，分流板的底部和内导板的顶部相适配。

优选的，所述夹槽的内部设置有加温模块，所述加温模块包括浮动板、连接绳、中层板和摩擦柱，所述浮动板设置在夹槽的内侧上方位置，所述浮动板通过连接绳固定安装在外导板的内侧底部，浮动板能够通过空气压力在夹槽的内部进行小幅度的上下活动，所述中层板固定安装在浮动板的底部，所述摩擦柱环形间隔固定安装在中层板的内侧和外侧侧壁上，摩擦柱在受压状态下能够进行形变。

一种核酸提取装置的核酸提取方法：

s1：通过提取装置将500微升稀释剂吸取并添加至离心管中；

向离心管中加入采样后的拭子，并对离心管内部进行反复搅动一级滴管1min使得拭子和稀释剂混合；

s2：通过提取装置吸取200微升上清液至1.5ml离心管中；

s3：通过提取装置分别吸取200微升裂解液和20ul蛋白酶k添加至离心管中；

s4：将离心管涡旋震荡后置于56℃金属浴中10min后再通过提取装置向离心管中添加200ul乙醇，上下颠倒混匀；

s5：将吸附柱安装在新的离心管中，再将液体全部转移到吸附柱中，在12000rpm状态下离心1min，倒掉废液；

s6：通过提取装置向吸附柱内添加500ul清洗液wa，在12000rpm状态下离心1min，倒掉废液；清洗液wa为初次清洗液；

s7：通过提取装置向吸附柱内添加500ul清洗液wb，在12000rpm状态下离心1min，倒掉废液；清洗液wb为二次清洗液；

s8：不加任何试剂再次12000rpm离心3min；

s9：将吸附柱转移至新的1.5ml离心管中，将洗脱液进行56℃预热后再通过提取装置向吸附柱中悬空滴加60pl洗脱液；

s10：将离心管在放置在室温下2min后，在12000rpm状态下离心1min，将离心管内吸附柱丢弃，管内剩余液体即为提取好的核酸溶液。

一种核酸提取用试剂盒，该核酸提取用试剂盒使用有如权利要求1-6任一所述的一种核酸提取装置。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)、该核酸提取装置及核酸提取方法，通过一级滴管和二级滴管的两级布置，以及二级胶头和活动槽的活动限制，使得操作位置即一级滴管处于任何角度的倾斜时，二级滴管会受到重力始终保持垂直水平面状态，从而使得二级胶头产生的负压压力相对二级管体排口处于垂直状态，使得二级管体内部溶液从上至下能够受到相对均匀的压力，从而避免在进行排液时因倾斜导致压力不均产生残液遗留的情况发生。

(2)、该核酸提取装置及核酸提取方法，通过一级滴管和二级滴管的两级布置，使得吸取和排出溶液的二级管体能够始终保持垂直水平面状态，从而使得在进行添加作业时不会因为倾斜导致二级管体和溶液造成不必要污染的情况发生。

(3)、该核酸提取装置及核酸提取方法，通过活动板的限制和密闭板夹层配合作业，从而使得二级滴管在进行调节使得以及一级胶头在产生负压传递时，二级滴管不会与一级滴管产生脱离同时一级管体内部的气压不会产生外泄，从而有效的保证装置稳定运行的效果。

(4)、该核酸提取装置及核酸提取方法，通过褶皱状的调节限制管，二级滴管进行调节使得调节限制管进行褶皱时，通过三角挤压褶皱和支撑，在进行调节时不会产生较大幅度的震动，从而使得二级滴管在进行传输作业时不会因为一级滴管的小幅度变化导致二级滴管产生震动或者较大幅度的变化情况发生，有效保证溶液传输的稳定性。

(5)、该核酸提取装置及核酸提取方法，通过分流板将二级胶头产生压力进行聚集调节后通过内导板传输至二级管体内部，从而使得在任何倾斜状态下，不会因为二级胶头受压偏移导致二级管体内部产生的压力分布不均情况发生，有效的保证压力分布均匀使得二级管体内部液体能够有效的排出。

(6)、该核酸提取装置及核酸提取方法，当需要吸取56℃的洗脱液前，反复挤压一级胶头，使得一级胶头产生负压反复作用传输至二级胶头上，使得二级胶头进行反复的二次负压，二级胶头二次负压产生的气流流动部分会传输至外导板和内导板的夹层内，从而作用于浮动板，使得浮动板会反复的进行下降并通过连接绳进行反复的上升，从而使得浮动板会带动中层板在夹槽内部进行移动，从而使得中层板反复带动摩擦柱对二级管体内侧板和外侧板进行反复的摩擦，从而能够使得二级管体内侧板和外侧板因摩擦产生一定的高温，配合夹槽隔层限制，使得二级管体内部洗脱液的温度流失降低。

附图说明

图1为本发明一种核酸提取装置及核酸提取方法的整体结构示意图；

图2为本发明二级滴管的局部结构示意图；

图3为本发明图2中a处的局部结构放大示意图；

图4为本发明一级滴管的局部结构示意图；

图5为本发明图4中b处的局部结构放大示意图；

图6为本发明调节限制管的局部结构示意图；

图7为本发明加温模块的局部结构示意图。

图中：1、一级滴管；101、一级管体；102、一级胶头；103、活动槽；104、活动板；105、密闭板；2、二级滴管；201、二级管体；202、外导板；203、内导板；204、连接管；205、分流板；206、二级胶头；207、夹槽；3、调节限制管；4、加温模块；401、浮动板；402、连接绳；403、中层板；404、摩擦柱。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1-图7，本发明提供一种技术方案：一种核酸提取装置，包括一级滴管1、二级滴管2和调节限制管3，一级滴管1设置在二级滴管2的上方位置，二级滴管2用于排出和吸附溶液，一级滴管1用于控制二级滴管2进行吸附和排出溶液作业，一级滴管1和二级滴管2通过调节限制管3相互连接，一级滴管1和二级滴管2能够通过调节限制管3进行活动的角度变化，调节限制管3为三角褶皱形层管；

二级滴管2包括二级管体201、外导板202、连接管204和二级胶头206，二级管体201为锥形管状，外导板202为从下至上逐渐变窄的锥形管状，外导板202固定安装在二级管体201的顶部，二级胶头206设置在外导板202的上方位置，二级胶头206通过连接管204和外导板202相互连接，通过二级胶头206受到的压力变化使得二级滴管2产生吸附或排出溶液的效果。

一级滴管1包括一级管体101、一级胶头102和活动槽103，一级胶头102固定安装在一级管体101的顶部，一级胶头102和二级胶头206相适配，活动槽103开设在一级管体101的底部，活动槽103为球状槽孔，活动槽103的大小和二级胶头206的大小相适配，通过活动槽103将二级胶头206限制卡扣在一级管体101的底部；

一级滴管1还包括活动板104和密闭板105，活动板104为半球状弧面板，活动板104固定安装在连接管204的顶端侧壁上，且活动板104的内端大小和二级胶头206的外端大小相适配，活动板104的外端大小和活动槽103的内端大小相适配，通过活动板104避免二级胶头206因压力形变脱离活动槽103的情况发生，密闭板105为圆环形板状，密闭板105的内端和活动板104的外端相互固定连接，密闭板105的外端和活动槽103的内侧对应位置壁面相互固定连接，通过活动板104下压使得密闭板105始终夹在活动槽103和活动板104之间，从而避免一级管体101内部气体外溢情况发生；

二级滴管2还包括内导板203、分流板205和夹槽207，夹槽207开设在二级管体201的顶部，夹槽207将二级管体201分割为内侧板和外侧板，内侧板和外侧板的底端相互连接，内导板203固定安装在内侧板的顶部，内导板203的形状大小和外导板202相适配，内导板203和外导板202相互间隔设置，分流板205固定安装在内导板203的顶部，分流板205位于连接管204的内部，分流板205从上之下逐渐变窄，分流板205的底部和内导板203的顶部相适配；

夹槽207的内部设置有加温模块4，加温模块4包括浮动板401、连接绳402、中层板403和摩擦柱404，浮动板401设置在夹槽207的内侧上方位置，浮动板401的大小小于夹槽207的大小，浮动板401通过连接绳402固定安装在外导板202的内侧底部，连接绳402能够进行弹性形变，浮动板401能够通过空气压力在夹槽207的内部进行小幅度的上下活动，中层板403固定安装在浮动板401的底部，摩擦柱404环形间隔固定安装在中层板403的内侧和外侧侧壁上，摩擦柱404在受压状态下能够进行形变。

一种核酸提取装置的核酸提取方法，包括：

s1：通过提取装置将500微升稀释剂吸取并添加至离心管中；

向离心管中加入采样后的拭子，并对离心管内部进行反复搅动一级滴管1min使得拭子和稀释剂混合；

s2：通过提取装置吸取200微升上清液至1.5ml离心管中；

s3：通过提取装置分别吸取200微升裂解液和20ul蛋白酶k添加至离心管中；

s4：将离心管涡旋震荡后置于56℃金属浴中10min后再通过提取装置向离心管中添加200ul乙醇，上下颠倒混匀；

s5：将吸附柱安装在新的离心管中，再将液体全部转移到吸附柱中，在12000rpm状态下离心1min，倒掉废液；

s6：通过提取装置向吸附柱内添加500ul清洗液wa，在12000rpm状态下离心1min，倒掉废液；

s7：通过提取装置向吸附柱内添加500ul清洗液wb，在12000rpm状态下离心1min，倒掉废液；

s8：不加任何试剂再次12000rpm离心3min；

s9：将吸附柱转移至新的1.5ml离心管中，将洗脱液进行56℃预热后再通过提取装置向吸附柱中悬空滴加60pl洗脱液；

s10：将离心管在放置在室温下2min后，在12000rpm状态下离心1min，将离心管内吸附柱丢弃，管内剩余液体即为提取好的核酸溶液。

工作原理：

在使用时，通过挤压一级胶头102使得一级胶头102形变产生负压对二级胶头206进行挤压再次产生二级负压从而将指定溶液进行吸附至二级管体201内部，当再次挤压一级胶头102时会使得二级管体201内部溶液排出。

通过一级滴管1和二级滴管2的两级布置，以及二级胶头206和活动槽103的活动限制，使得操作位置即一级滴管1处于任何角度的倾斜时，二级滴管2会受到重力始终保持垂直水平面状态，从而使得二级胶头206产生的负压压力相对二级管体201排口处于垂直状态，使得二级管体201内部溶液从上至下能够受到相对均匀的压力，从而避免在进行排液时因倾斜导致压力不均产生残液遗留的情况发生。

通过一级滴管1和二级滴管2的两级布置，使得吸取和排出溶液的二级管体201能够始终保持垂直水平面状态，从而使得在进行添加作业时不会因为倾斜导致二级管体201和溶液造成不必要污染的情况发生。

通过活动板104的限制和密闭板105夹层配合作业，从而使得二级滴管2在进行调节使得以及一级胶头102在产生负压传递时，二级滴管2不会与一级滴管1产生脱离同时一级管体101内部的气压不会产生外泄，从而有效的保证装置稳定运行的效果。

通过褶皱状的调节限制管3，二级滴管2进行调节使得调节限制管3进行褶皱时，通过三角挤压褶皱和支撑，在进行调节时不会产生较大幅度的震动，从而使得二级滴管2在进行传输作业时不会因为一级滴管1的小幅度变化导致二级滴管2产生震动或者较大幅度的变化情况发生，有效保证溶液传输的稳定性。

通过分流板205将二级胶头206产生压力进行聚集调节后通过内导板203传输至二级管体201内部，从而使得在任何倾斜状态下，不会因为二级胶头206受压偏移导致二级管体201内部产生的压力分布不均情况发生，有效的保证压力分布均匀使得二级管体201内部液体能够有效的排出。

在s9中，当需要吸取56℃的洗脱液前，反复挤压一级胶头102，使得一级胶头102产生负压反复作用传输至二级胶头206上，使得二级胶头206进行反复的二次负压，二级胶头206二次负压产生的气流流动部分会传输至外导板202和内导板203的夹层内，从而作用于浮动板401，使得浮动板401会反复的进行下降并通过连接绳402进行反复的上升，从而使得浮动板401会带动中层板403在夹槽207内部进行移动，从而使得中层板403反复带动摩擦柱404对二级管体201内侧板和外侧板进行反复的摩擦，从而能够使得二级管体201内侧板和外侧板因摩擦产生一定的高温，配合夹槽207隔层限制，使得二级管体201内部洗脱液的温度流失降低。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。