一种糖肽的制备方法

1.本发明属于生物制品制备领域，具体地是指一种利用鲍鱼血液和青橄榄 制备糖肽的生产技术领域。


背景技术：

2.随着中国养殖技术的高速发展，中国已成为世界第一养殖鲍大国，其中 全国总产量中超过3/4的鲍鱼产自福建省。鲍鱼在中国位于“鲍、参、翅、 肚”四大海味之首，口感鲜嫩细滑，含有丰富的蛋白质、氨基酸、维生素和 微量元素等营养成分，有滋阴补虚、养胃护肝的作用，在食用和药用价值上 占据重要地位。血蓝蛋白占鲍鱼血液90％的含量，是节肢动物和软体动物 淋巴中大型含铜糖蛋白，具有酚氧化酶活性、抗菌性、抗病毒性及凝集活性 等，也是甲科动物体内一种重要的免疫分子。然而，在鲍鱼加工过程中，鲍 鱼血液都直接排掉，没有得到有效的利用。
3.随着我国经济的快速发展，社会竞争和生活节奏不断增加，结果导致身 体出现亚健康和免疫功能低下。因此，消费者对具有增强免疫功能、抗菌活 性的海洋生物制品需求不断增加。另一方面，青橄榄是一种具有药用作用的 食材，富含人体所需的18种氨基酸和钙、铁、抗坏血酸等营养成分及微量 元素，其中钙含量远高于普通水果。同时青橄榄具有清热解毒、止咳化痰、 健胃消食、清火消炎等功效，还能防止上呼吸道感染。
4.因此，本发明利用鲍鱼血液和青橄榄加工制备成具有增强抗菌活性的糖 肽，满足市场的需求。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种糖肽的制备方法，它是以青橄榄肉和鲍鱼血 液为原料，通过加热、酶解、过滤和干燥，制备成具有润肺功能和增强抗菌 活性的糖肽产品。
6.为了实现上述目的，本发明的技术方案是：
7.s1.加热：新鲜或冷冻的青橄榄拍碎后弃核取肉，得到的青橄榄肉和鲍 鱼血液按照质量比1:10的比例混合，在80
‑
95℃下水浴加热2
‑
4h，冷却备 用；
8.s2.酶解：步骤s1中冷却后的青橄榄肉和鲍鱼血液混合物中加入质量比 例为1:1:1:3:4的果胶酶、纤维素酶、胶原蛋白酶、胰酶和木瓜蛋白酶组成 的复合酶，在ph为6.0
‑
7.0、温度为45
‑
50℃下酶解3
‑
5h；
9.s3.过滤：将步骤s2中的酶解物用滤网和陶瓷膜进行过滤；
10.s4.浓缩、干燥：步骤s3中的滤液通过真空浓缩至固形物含量(brix) 为25
‑
35％，利用喷雾干燥制备成糖肽粉末。
11.进一步地，步骤s2中复合酶的添加量为青橄榄肉和鲍鱼血液混合物质 量的0.1
‑
0.5％。
12.进一步地，步骤s3中滤网的目数为200
‑
300目，陶瓷膜截留分子量为 20
‑
40kda。
13.进一步地，步骤s4中真空浓缩温度60
‑
80℃、真空度为
‑
0.10～
‑
0.05mpa。
14.进一步地，所述的鲍鱼血液为活杀新鲜鲍鱼时收集的血液。
15.本发明的另一目的是提供由上述任一方法所制备得到的糖肽。
16.本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：
17.1、采用青橄榄肉的风味与鲍鱼血液进行复配，可以掩盖鲍鱼血液的腥 味。利用水产品原料制备产品都会产生一定的不愉快腥味，传统方式通常采 用吸附或包埋。本发明利用青橄榄肉与鲍鱼血液通过水浴加热可以降低鲍鱼 血液的腥味，还可以利用青橄榄肉的清甜回味降低不良滋味。
18.2、青橄榄肉与鲍鱼血液进行复配，可以增强鲍鱼血蓝蛋白的抗菌活性。 鲍鱼血液中的血蓝蛋白具有良好的增强免疫活性功能，本发明利用青橄榄肉 消炎功效和增强细胞免疫优势，可以进一步提高产品的抗菌功效。
19.3、通过复合酶解可以增强鲍鱼血蓝蛋白的抗菌活性。本发明将采用果 胶酶、纤维素酶、胶原蛋白酶、胰酶和木瓜蛋白酶的复合酶进行酶解，可以 使鲍鱼血蓝蛋白和青橄榄肉形成的复合物抗菌活性的位点得到充分暴露，提 高产品的抗菌活性功能。
20.下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
21.实施例1
22.s1，加热处理：新鲜的青橄榄拍碎后弃核取肉，得到的50g青橄榄肉 利用料理机搅碎后，加入1000g鲍鱼血液，在80℃的水浴下加热5h，冷却 备用；
23.s2，酶解：在加热处理的青橄榄肉/鲍鱼血液混合物中加入0.5g果胶酶、 0.5g纤维素酶、0.5g胶原蛋白酶、1.5g胰酶和2.0g木瓜蛋白酶，在ph 6.0、 45℃下酶解3h；
24.s3，过滤：将酶解物先用200目的滤网过滤，再利用截留分子量为40kda 的陶瓷膜过滤；
25.s4，浓缩、干燥：将步骤3得到的滤液利用浓缩温度60℃、真空度为
ꢀ‑
0.10mpa进行真空浓缩，浓缩至固形物浓度(brix)约为25％时，通过喷 雾干燥，可以得到38g左右糖肽粉末。
26.实施例2
27.s1，加热处理：新鲜的青橄榄拍碎后弃核取肉，得到的75g青橄榄肉 利用料理机搅碎后，加入1000g鲍鱼血液，在80℃的水浴下加热5h，冷却 备用；
28.s2，酶解：在加热处理的青橄榄肉/鲍鱼血液混合物中加入0.5g果胶酶、 0.5g纤维素酶、0.5g胶原蛋白酶、1.5g胰酶和2.0g木瓜蛋白酶，在ph 6.0、 45℃下酶解3h；
29.s3，过滤：将酶解物先用200目的滤网过滤，再利用截留分子量为40kda 的陶瓷膜过滤；
30.s4，浓缩、干燥：将步骤3得到的滤液利用浓缩温度60℃、真空度为
ꢀ‑
0.10mpa进行真空浓缩，浓缩至固形物浓度(brix)约为25％时，通过喷 雾干燥，可以得到40g左右糖肽粉末。
31.实施例3
32.s1，加热处理：新鲜的青橄榄拍碎后弃核取肉，得到的100g青橄榄肉 利用料理机搅碎后，加入1000g鲍鱼血液，在80℃的水浴下加热5h，冷却 备用；
33.s2，酶解：在加热处理的青橄榄肉/鲍鱼血液混合物中加入0.5g果胶酶、 0.5g纤维素酶、0.5g胶原蛋白酶、1.5g胰酶和2.0g木瓜蛋白酶，在ph 6.0、 45℃下酶解3h；
34.s3，过滤：将酶解物先用200目的滤网过滤，再利用截留分子量为40kda 的陶瓷膜过滤；
35.s4，浓缩、干燥：将步骤3得到的滤液利用浓缩温度60℃、真空度为
ꢀ‑
0.10mpa进行真空浓缩，浓缩至固形物浓度(brix)约为25％时，通过喷 雾干燥，可以得到43g左右糖肽粉末。
36.实施例4
37.s1，加热处理：新鲜的青橄榄拍碎后弃核取肉，得到的100g青橄榄肉 利用料理机搅碎后，加入1000g鲍鱼血液，在90℃的水浴下加热4h，冷却 备用；
38.s2，酶解：在加热处理的青橄榄肉/鲍鱼血液混合物中加入0.3g果胶酶、 0.3g纤维素酶、0.3g胶原蛋白酶、0.9g胰酶和1.2g木瓜蛋白酶，在ph 7.0、 50℃下酶解4h；
39.s3，过滤：将酶解物先用250目的滤网过滤，再利用截留分子量为30kda 的陶瓷膜过滤；
40.s4，浓缩、干燥：将步骤3得到的滤液利用浓缩温度70℃、真空度为
ꢀ‑
0.08mpa进行真空浓缩，浓缩至固形物浓度(brix)约为30％时，通过喷 雾干燥，可以得到44g左右糖肽粉末。
41.实施例5
42.s1，加热处理：新鲜的青橄榄拍碎后弃核取肉，得到的100g青橄榄肉 利用料理机搅碎后，加入1000g鲍鱼血液，在90℃的水浴下加热4h，冷却 备用；
43.s2，酶解：在加热处理的青橄榄肉/鲍鱼血液混合物中加入0.2g果胶酶、 0.2g纤维素酶、0.2g胶原蛋白酶、0.6g胰酶和0.8g木瓜蛋白酶，在ph 7.0、 50℃下酶解4h；
44.s3，过滤：将酶解物先用250目的滤网过滤，再利用截留分子量为30kda 的陶瓷膜过滤；
45.s4，浓缩、干燥：将步骤3得到的滤液利用浓缩温度70℃、真空度为
ꢀ‑
0.08mpa进行真空浓缩，浓缩至固形物浓度(brix)约为30％时，通过喷 雾干燥，可以得到43.5g左右糖肽粉末。
46.实施例6
47.s1，加热处理：新鲜的青橄榄拍碎后弃核取肉，得到的100g青橄榄肉 利用料理机搅碎后，加入1000g鲍鱼血液，在90℃的水浴下加热4h，冷却 备用；
48.s2，酶解：在加热处理的青橄榄肉/鲍鱼血液混合物中加入0.1g果胶酶、 0.1g纤维素酶、0.1g胶原蛋白酶、0.3g胰酶和0.4g木瓜蛋白酶，在ph 7.0、 50℃下酶解4h；
49.s3，过滤：将酶解物先用250目的滤网过滤，再利用截留分子量为30kda 的陶瓷膜过滤；
50.s4，浓缩、干燥：将步骤3得到的滤液利用浓缩温度70℃、真空度为
ꢀ‑
0.08mpa进行真空浓缩，浓缩至固形物浓度(brix)约为30％时，通过喷 雾干燥，可以得到43.0g左右糖肽粉末。
51.实施例7
52.s1，加热处理：新鲜的青橄榄拍碎后弃核取肉，得到的100g青橄榄肉 利用料理机搅碎后，加入1000g鲍鱼血液，在95℃的水浴下加热3h，冷却 备用；
53.s2，酶解：在加热处理的青橄榄肉/鲍鱼血液混合物中加入0.1g果胶酶、 0.1g纤维
素酶、0.1g胶原蛋白酶、0.3g胰酶和0.4g木瓜蛋白酶，在ph 7.0、55℃下酶解5h；
54.s3，过滤：将酶解物先用300目的滤网过滤，再利用截留分子量为20kda 的陶瓷膜过滤；
55.s4，浓缩、干燥：将步骤3得到的滤液利用浓缩温度80℃、真空度为
ꢀ‑
0.05mpa进行真空浓缩，浓缩至固形物浓度(brix)约为35％时，通过喷 雾干燥，可以得到42.0g左右糖肽粉末。
56.实施例8：抗菌能力分析
57.采用液体培养基微量稀释评估法对糖肽样品的抗菌能力进行评价。在 1.5ml无菌eppondorf管中加入650μl lb液体培养基、100μl稀释好的大 肠杆菌悬液，250μl质量浓度为100μg/ml的样品溶液，混合混匀后放在 37℃下静置培养12h，取200μl培养液放在无菌96孔板中，用酶标仪检测 600nm波长下的od值，空白组为lb液体培养基，对照组以水溶液替代样 品溶液，抑菌率按照下式进行计算。
58.抑菌率(％)＝[1
‑
(as
‑
a0)/(az
‑
a0)]
×
100％
[0059]
其中，a
s
为糖肽样品组od值；a
z
为对照组od值；a0为空白组od值。
[0060]
评价结果如表1所示。从实施例1到实施例3，青橄榄肉的添加量逐渐 增加，制备的糖肽产品抑菌能力逐渐增强，表明利用青橄榄肉消炎功效和增 强细胞免疫的优势，可以提高产品的抗菌功效。从实施例4到实施例6，复 合酶的添加量逐渐减少，发现制备的糖肽产品抑菌率逐渐下降。这个结果表 明，伴随着酶解鲍鱼血蓝蛋白降解形成的抗菌肽活性位点逐渐暴露，进而提 高鲍鱼血蓝蛋白和青橄榄肉形成复合物的抗菌活性。
[0061]
表1糖肽对大肠杆菌抑菌效果的分析
[0062]