一种方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法与流程

1.本发明涉及细菌检测技术领域，具体为一种方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法。


背景技术：

2.细菌抗原检测是指用已知细菌抗体检测患者体内有无相应抗原的方法，用于细菌感染性疾病的辅助诊断，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、链球菌(化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌等)、致病性大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌及军团菌等检测。
3.沙门氏菌病的病原体，属肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌，已发现的近一千种(或菌株)，按其抗原成分，可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌组，其中与人体疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌，乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌，丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌，丁组的伤寒杆菌和肠炎杆菌等，除伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌引起人类的疾病外，大多数仅能目引起家畜、鼠类和禽类等动物的疾病，但有时也可污染人类的食物而引起食物中毒。
4.目前针对鸡类养殖的养殖场，为了防止大面积感染疾病，往往是采用定时抽检的方式，对鸡群和病死鸡进行检测，明确死因或者病因后集中治疗，防止感染规模的扩大，其次是在养殖规模扩大时，庞大的检测数量，会导致检测的效率降低，进而损失抢救的时间，极易无法及时控制感染规模。


技术实现要素：

5.本发明提供的发明目的在于提供一种方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法。本发明公开了一种方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法，结合采样的范围，以及最终的检测结果，当养殖场产生大量的沙门氏菌感染时，工作人员可以第一时间内了解到养殖场内的沙门氏菌是从饲料、垫料、环境和雏鸡自带的毒株，可以在第一时间内针对携带情况进行防疫措施，其次是在检测过程中，大量使用增菌措施，一方面提高测量精度，另外一方面可以结合样本的数量进行合并检测，提高检测的效率。
6.为了实现上述效果，本发明提供如下技术方案：一种方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法，包括以下步骤：
7.s1、实验材料准备，预先对所需材料进行杀菌消毒和校准作业；
8.s2、环境样本、垫料样本和饲料样本的采样，对样本的增菌处理，随后采用ss培养基进行菌落接种培养，待观察和分析；
9.s3、器官样本的采样处理，随后进行增菌处理，采用ss培养基进行菌落接种培养，待观察和分析；
10.s4、种鸡泄殖腔棉拭子弱雏样本采集，先进行增菌处理，随后将增菌液接种到无色透明中心黑色的菌落接种于沙门显色培养；
11.s5、沙门显色培养和ss培养基平板进行观察，选择纯化后的菌液进行进一步的分
子生物方法鉴定沙门氏菌的种属。
12.进一步的，根据s1中的操作步骤，所述实验环境消毒，操作台用75％酒精擦洗，然后实验室及超净台采用紫外线消毒30min，棉签、镊子、平皿、生理盐水高压灭菌121℃20min，提前配制sc液体增菌液、ss培养基、沙门显色培养基。
13.进一步的，根据s2中的操作步骤，所述饲料样本采用双手用75％酒精棉球擦拭消毒，取10克样品放入90毫升的sc增菌液中，置于37℃100rpm恒温摇床进行前增菌18
‑
24h。
14.进一步的，根据s2中的操作步骤，所述鸡舍内垫料可采用鞋套法采集的样品，用灭菌的棉签蘸取无菌的生理盐水使棉签的棉团稍湿润，涂抹鞋套采样的一面，然后放入sc增菌液中，一个鸡舍可采5个样品，棉签增菌一般采用试管增菌，于37℃温箱中培养18
‑
24h。
15.进一步的，根据s2中的操作步骤，所述环境样本双手用75％酒精棉球擦拭消毒，用灭菌的棉签蘸取无菌的生理盐水使棉签的棉团稍湿润，涂抹鞋套采样的一面，然后放入sc增菌液中，根据送检样品采取5个样品合样，棉签增菌一般采用试管增菌，于37℃温箱中培养18
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24h。
16.进一步的，根据s2中的操作步骤，所述环境样本、垫料样本和饲料样本的取增菌液划线接种于ss培养基上，置37℃温箱中培养22
‑
24小时后将无色透明中心黑色的菌落接种与沙门显色培养基上培养22
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24h。
17.进一步的，根据s3中的操作步骤，所述器官样本为肝脏与卵黄，所述双手用75％酒精棉球擦拭消毒，用酒精棉球处理器官表面，使用无菌手术刀切开器官，无菌取少量组织匀浆，放入3ml的sc增菌液中，置37℃温箱中培养18
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24小时；取上述增菌液划线接种于ss培养基上，置37℃温箱中培养22
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24小时后将无色透明中心黑色的菌落接种于沙门显色培养基上培养22
‑
24h后看结果。
18.进一步的，根据s4中的操作步骤，所述种鸡泄殖腔棉拭子：用无菌棉签采集种鸡泄殖腔后放入3ml的sc增菌液中，置37℃温箱中培养18
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24小时后；取上述增菌液划线接种于ss培养基上，置37℃温箱中培养22
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24小时后将无色透明中心黑色的菌落接种于沙门显色培养基上培养22
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24h后看结果，所述弱雏检测采用步骤3检测方法。
19.进一步的，根据s5中的操作步骤，所述ss培养基结果判定标准为生长情况和菌落颜色。
20.进一步的，根据s5中的操作步骤，所述沙门显色培养基结果判定标准为生长情况和菌落颜色。
21.本发明提供了一种方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法，具备以下有益效果：
22.实际上，本发明公开了一种方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法，结合采样的范围，以及最终的检测结果，当养殖场产生大量的沙门氏菌感染时，工作人员可以第一时间内了解到养殖场内的沙门氏菌是从饲料、垫料、环境和雏鸡自带的毒株，可以在第一时间内针对携带情况进行防疫措施，其次是在检测过程中，大量使用增菌措施，一方面提高测量精度，另外一方面可以结合样本的数量进行合并检测，提高检测的效率。
附图说明
23.图1为本发明方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法示意图；
24.图2为本发明方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法的沙门显色培养示意图。
具体实施方式
25.本发明提供一种技术方案：请参阅图1
‑
2，一种方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法，包括以下步骤：
26.步骤一、实验材料准备，预先对所需材料进行杀菌消毒和校准作业。
27.步骤二、环境样本、垫料样本和饲料样本的采样，对样本的增菌处理，随后采用ss培养基进行菌落接种培养，待观察和分析。
28.步骤三、器官样本的采样处理，随后进行增菌处理，采用ss培养基进行菌落接种培养，待观察和分析。
29.步骤四、种鸡泄殖腔棉拭子弱雏样本采集，先进行增菌处理，随后将增菌液接种到无色透明中心黑色的菌落接种于沙门显色培养。
30.步骤五、沙门显色培养和ss培养基平板进行观察，选择纯化后的菌液进行具体的分子生物方法鉴定沙门氏菌的种属。
31.具体的，根据s1中的操作步骤，实验环境消毒，操作台用75％酒精擦洗，然后实验室及超净台采用紫外线消毒30min，棉签、镊子、平皿、生理盐水高压灭菌121℃20min，提前配制sc液体增菌液、ss培养基、沙门显色培养基。
32.具体的，根据s2中的操作步骤，饲料样本采用双手用75％酒精棉球擦拭消毒，取10克样品放入90毫升的sc增菌液中，置于37℃100rpm恒温摇床进行前增菌18
‑
24h。
33.具体的，根据s2中的操作步骤，鸡舍内垫料可采用鞋套法采集的样品，用灭菌的棉签蘸取无菌的生理盐水使棉签的棉团稍湿润，涂抹鞋套采样的一面，然后放入sc增菌液中，一个鸡舍可采5个样品，棉签增菌一般采用试管增菌，于37℃温箱中培养18
‑
24h。
34.具体的，根据s2中的操作步骤，环境样本双手用75％酒精棉球擦拭消毒，用灭菌的棉签蘸取无菌的生理盐水使棉签的棉团稍湿润，涂抹鞋套采样的一面，然后放入sc增菌液中，根据送检样品采取5个样品合样，棉签增菌一般采用试管增菌，于37℃温箱中培养18
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24h。
35.具体的，根据s2中的操作步骤，环境样本、垫料样本和饲料样本的取增菌液划线接种于ss培养基上，置37℃温箱中培养22
‑
24小时后将无色透明中心黑色的菌落接种与沙门显色培养基上培养22
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24h。
36.具体的，根据s3中的操作步骤，器官样本为肝脏与卵黄，双手用75％酒精棉球擦拭消毒，用酒精棉球处理器官表面，使用无菌手术刀切开器官，无菌取少量组织匀浆，放入3ml的sc增菌液中，置37℃温箱中培养18
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24小时；取上述增菌液划线接种于ss培养基上，置37℃温箱中培养22
‑
24小时后将无色透明中心黑色的菌落接种于沙门显色培养基上培养22
‑
24h后看结果。
37.具体的，根据s4中的操作步骤，种鸡泄殖腔棉拭子：用无菌棉签采集种鸡泄殖腔后放入3ml的sc增菌液中，置37℃温箱中培养18
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24小时后；取上述增菌液划线接种于ss培养基上，置37℃温箱中培养22
‑
24小时后将无色透明中心黑色的菌落接种于沙门显色培养基上培养22
‑
24h后看结果，弱雏检测采用步骤3检测方法。
38.具体的，根据s5中的操作步骤，ss培养基结果判定标准为生长情况和菌落颜色。
39.具体的，根据s5中的操作步骤，沙门显色培养基结果判定标准为生长情况和菌落颜色。
40.实施例的方法进行检测分析，并与现有技术进行对照，得出如下数据：
[0041] 检测精确度检测全面性检测效率实施例较高较高较高现有技术较低较低较低
[0042]
ss培养基平板结果判定：
[0043]
在37℃培养22
‑
24h：
[0044]
质控菌株生长情况菌落颜色大肠杆菌+红色沙门氏菌++无色透明中心黑色
[0045]
沙门显色培养基平板结果判定：
[0046]
在37℃培养22
‑
24h：
[0047]
质控菌株生长情况菌落颜色单增李氏菌
‑‑
金黄色葡萄球菌
‑‑
大肠杆菌+/++蓝色沙门氏菌+++紫色鼠伤寒沙门氏菌+++紫色奇异变形杆菌
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无色铜绿假单胞菌
‑
淡紫色
[0048]
根据上述表格数据可以得出，当实施例时，通过本发明一种方便快捷鉴定养殖场沙门氏菌的方法，包括以下步骤：步骤一、实验材料准备，预先对所需材料进行杀菌消毒和校准作业，验环境消毒，操作台用75％酒精擦洗，然后实验室及超净台采用紫外线消毒30min，棉签、镊子、平皿、生理盐水高压灭菌121℃20min，提前配制sc液体增菌液、ss培养基、沙门显色培养基，步骤二、环境样本、垫料样本和饲料样本的采样，对样本的增菌处理，随后采用ss培养基进行菌落接种培养，待观察和分析，饲料样本采用双手用75％酒精棉球擦拭消毒，取10克样品放入90毫升的sc增菌液中，置于37℃100rpm恒温摇床进行前增菌18
‑
24h，鸡舍内垫料可采用鞋套法采集的样品，用灭菌的棉签蘸取无菌的生理盐水使棉签的棉团稍湿润，涂抹鞋套采样的一面，然后放入sc增菌液中，一个鸡舍可采5个样品，棉签增菌一般采用试管增菌，于37℃温箱中培养18
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24h，环境样本双手用75％酒精棉球擦拭消毒，用灭菌的棉签蘸取无菌的生理盐水使棉签的棉团稍湿润，涂抹鞋套采样的一面，然后放入sc增菌液中，根据送检样品采取5个样品合样，棉签增菌一般采用试管增菌，于37℃温箱中培养18
‑
24h，环境样本、垫料样本和饲料样本的取增菌液划线接种于ss培养基上，置37℃温箱中培养22
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24小时后将无色透明中心黑色的菌落接种与沙门显色培养基上培养22
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24h，步骤三、器官样本的采样处理，随后进行增菌处理，采用ss培养基进行菌落接种培养，待观察和分析，器官样本为肝脏与卵黄，双手用75％酒精棉球擦拭消毒，用酒精棉球处理器官表面，使用无菌手术刀切开器官，无菌取少量组织匀浆，放入3ml的sc增菌液中，置37℃温箱中培养18
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24小时；取上述增菌液划线接种于ss培养基上，置37℃温箱中培养22
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24小时后将无色透明中心黑色的菌落接种于沙门显色培养基上培养22
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24h后看结果，步骤四、种鸡泄殖
腔棉拭子弱雏样本采集，先进行增菌处理，随后将增菌液接种到无色透明中心黑色的菌落接种子沙门显色培养，种鸡泄殖腔棉拭子：用无菌棉签采集种鸡泄殖腔后放入3ml的sc增菌液中，置37℃温箱中培养18
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24小时后；取上述增菌液划线接种于ss培养基上，置37℃温箱中培养22
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24小时后将无色透明中心黑色的菌落接种于沙门显色培养基上培养22
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24h后看结果，弱雏检测采用步骤3检测方法，步骤五、沙门显色培养和ss培养基平板进行观察，选择纯化后的菌液进行分子生物方法鉴定沙门氏菌的种属，ss培养基结果判定标准为生长情况和菌落颜色，沙门显色培养基结果判定标准为生长情况和菌落颜色。
[0049]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这条例实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。