技术特征：
1.一种用于检测人体液中乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片的制备方法，其特征在于，包括：将乙酰胆碱受体的各个亚基的重组真核表达载体与一个无外源基因连入的真核表达载体按照一定的比例混合，进行共同转染，再经过固定、洗涤、终止、洗涤、烘干处理，制得检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片。2.根据权利要求1所述的用于检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片的制备方法，其特征在于，所述将乙酰胆碱受体的各个亚基的重组真核表达载体与一个无外源基因连入的真核表达载体混合，按照一定的比例进行共转，具体操作为：将乙酰胆碱受体的各个亚基基因α1(p3a
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)、β1、δ1、ε和γ通过分子克隆方法分别连至一个空载质粒，分别构建得到各个亚基基因α1(p3a
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)、β1、δ1、ε和γ的重组载体；再将上述各个亚基基因α1(p3a
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)、β1、δ1、ε和γ的重组载体与一个无外源基因连入的真核表达载体混合，获得共转质粒，将该共转质粒转染至已经铺好细胞的爬片上。3.根据权利要求2所述的用于检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片的制备方法，其特征在于，各个亚基基因α1(p3a
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)、β1、δ1、ε和γ的重组载体与一个无外源基因连入的真核表达载体的转染质量比为2:1:1:1:1:(20～60)。4.根据权利要求2所述的用于检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片的制备方法，其特征在于，共转质粒的总质量为1ug～10ug，对应转染所用转染试剂的质量为2ug～20ug。5.根据权利要求2所述的用于检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片的制备方法，其特征在于，已经铺好细胞的爬片上所铺细胞的密度为30％～40％。6.根据权利要求2所述的用于检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片的制备方法，其特征在于，所述空载质粒选择pcdna3.1，所述无外源基因连入的真核表达载体选择17
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t2a。7.根据权利要求1所述的用于检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片的制备方法，其特征在于，所述固定是将共同转染处理后的爬片采用细胞固定液进行处理，所述洗涤是采用pbs缓冲液进行洗涤处理。8.根据权利要求1所述的用于检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片的制备方法，其特征在于，所述终止是将固定完成后经洗涤的爬片用(nh4)2so4溶液进行处理。9.采用权利要求1～8中任意一项所述的制备方法制得的用于检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片。10.权利要求9中所述的用于检测乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片在制备检测重症肌无力自身抗体的试剂盒中的应用。
技术总结
本发明公开了一种用于检测人体液中乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片及其制备方法和应用，属于生物技术领域。采用的方案包括：将乙酰胆碱受体的各个亚基与空载质粒按照一定的比例进行共同转染，再经过固定、洗涤、终止、洗涤、烘干处理，制得检测人体液中乙酰胆碱受体自身抗体的细胞爬片。该方法与放免法和酶联免疫法相比，具有较高的灵敏度；与现有技术的文献所报道的免疫荧光方法相比，在降低了背景的同时提高了检测的特异性。因此，无论从研究角度还是作为重症肌无力疾病的辅助诊断手段，本发明均具有良好的应用前景。发明均具有良好的应用前景。
技术研发人员：闫亚平 赵子越 郝文斌 封雪 李科
受保护的技术使用者：陕西脉元生物科技有限公司
技术研发日：2021.09.01
技术公布日：2021/11/17