一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物及其制备方法和应用与流程

一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物及其制备方法和应用
【技术领域】
1.本发明属于植物提取的技术领域，尤其涉及一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.毛叶番荔枝属于番荔枝科落叶小乔木，可在中国云南南部、广东海南岛栽培。果可食用，为著名热带水果，含蛋白质1.83％，脂肪0.14％，糖类18.41％。毛叶番荔枝果皮含有许多具有生物学意义的天然化合物，如生物碱(主要为异喹啉类)、番荔枝内酯、环肽以及二聚酰胺。其中环肽是一类重要的天然产物化合物，万古霉素、环孢素、达托霉素、格拉米霉素s和博莱霉素等药物属于这一类，它们在市场上的成功证明，这些类型的分子可以是抗生素和抗真菌化合物，也可以是免疫抑制剂甚至抗癌药物。天然来源的环肽由于其迷人的化学结构和强大的生物活性受到合成化学家和生物学家的关注。植物中提取的环肽具有广泛的生物活性，包括细胞毒性活性、免疫抑制活性、抗疟活性、血管舒张活性、环氧合酶、ace和酪氨酸酶抑制活性以及抗炎活性。
3.环肽能够帮助皮肤建立可持续的内稳态平衡，改善皮肤健康，增强舒适感。其具有强大的适应原作用，通过激活cb2受体来支持皮肤内源性大麻素系统。借助这种作用，它可以减少trpv1介导的炎症过程。由组胺以及tnf-α和p物质介导的应激下调，il-31ra这种有害的重要皮肤受体的表达减少。环肽可以降低皮肤的敏感性，使其变得更加平衡，从而明显减轻瘙痒感。进而改善皮肤外观，提高皮肤的舒适感和生活质量等。
4.马齿苋是属于马齿苋科的一年生多肉多汁的小型草本植物，生长完成后全长能达到40cm。主要有效成份为omega-3,6、果胶、纤维、维生素、矿物质、抗氧化物、辅酶q-10、谷胱甘肽、去甲肾上腺素、多巴胺、碳水化合物等。omega-3,6是马齿苋的主要活性成份，其可以降低nf-κb的活性。
5.trpv1属于transient receptor potential protein(trp)蛋白家族，v亚家族，1号成员，为trp蛋白家族中第一个被发现的蛋白。广泛分布于神经元、免疫细胞、脏器上皮细胞及角质形成细胞。trpv1广泛表达于皮肤感觉神经纤维上，激活感觉神经元上trpv1，促进白介素8(il-8)的合成及分泌，导致产生疼痛、灼热及瘙痒感，最终导致多种皮肤病和瘙痒症的发生。
6.核转录因子kappa b(nf-κb)是细胞中重要的转录调节因子，通常以p50-p65异二聚体的形式与其抑制性蛋白(inhibitor kappab，iκb)结合而呈非活化状态。nf-κb通过促炎因子、tnf-α刺激物的活化，诱导一系列基因的表达，主要包含炎症刺激相关的细胞因子的基因(如白细胞介素相关基因)，产生多种细胞因子，参与炎症反应，最终导致皮肤呈现疼痛、红及瘙痒感。
7.目前，毛叶番荔枝中的提取物如环肽以及马齿苋的提取物如omega-3,6均是采用水提取获得的，这种提取方式会使得环肽和omega-3,6的收率比较低，在护肤品原料中直接添加环肽、omega-3,6会存在功效低的问题，主要体现在环肽、omega-3,6对trpv1和nf-κb的
活性降低效果不佳，对皮肤的舒缓效果也相对较差。


技术实现要素：

8.本发明的目的就是解决背景技术中的问题，提出一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物及其制备方法和应用，能够提高环肽和omega-3,6的收率，通过生物催化将环肽与omega-3,6催化生成环肽脂肪酸复合物，环肽脂肪酸复合物有效降低trpv1和nf-κb的活性，对皮肤起到舒缓作用。
9.为实现上述目的，本发明提出了一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物，所述复合物为由毛叶番荔枝含有的环肽与马齿苋含有的omega-3,6脂肪酸反应生成的环肽脂肪酸复合物。
10.本发明还提出了一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物的制备方法，其特征在于：包括以下几个步骤：
11.原料处理：将毛叶番荔枝果皮和马齿苋混合，烘干粉碎；
12.提取：将粉碎后的原料加入多元醇/水的混合溶液中，注入提取装置内，并向提取装置内加入超临界二氧化碳溶剂进行提取，获得含环肽和omega-3,6脂肪酸的提取液；
13.催化：向提取液中加入脂肪酶催化一段时间，离心过滤后得到环肽脂肪酸复合物。
14.作为优选，所述多元醇为1,2-丁二醇、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、1,3-丙二醇、1,5-戊二醇、丁二醇、丙二醇、己二醇、1,6-己二醇、2,3-丁二醇中的一种或多种。
15.作为优选，所述混合溶液由多元醇和水按质量比为1～2：2混合而成。
16.作为优选，所述脂肪酶为南极假丝酵母脂肪酶、黑曲霉脂肪酶、假单胞菌脂肪酶、链霉菌碱性脂肪酶、根霉脂肪酶、扩展青霉脂肪酶、圆弧青霉脂肪酶、嗜冷杆菌脂肪酶、嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶中的一种或多种。
17.作为优选，所述混合溶液与粉碎后的原料之间的质量比为1～5：1。
18.作为优选，所述提取装置为提取缸，提取缸内温度为30～45℃，所述超临界二氧化碳溶剂的流速为20～35l/h，时间为0.5～3h。
19.作为优选，所述烘干时的温度设置为60～100℃。
20.作为优选，加入所述脂肪酶后温度控制在10～50℃，催化时间为4～8h，所述脂肪酶与提取液的质量比为1～3:100，温度、催化时间及脂肪酶与提取液之间的质量比采用上述数值是为了在为了达到生物催化的最优化，在考虑生产成本的情况下最大化地完成催化反应。
21.本发明还提出了一种上述环肽脂肪酸复合物作为护肤品原料的应用。
22.本发明的有益效果：本发明通过提取时采用超临界二氧化碳溶剂进行提取，有效提高提取液中环肽与omega-3,6收率，并通过生物催化将环肽与omega-3,6催化生成环肽脂肪酸复合物，环肽脂肪酸复合物作为护肤品使用时有效降低trpv1和nf-κb的活性，进而改善肌肤疼痛、灼热及瘙痒感，达到舒缓皮肤的功效。
23.本发明的特征及优点将通过实施例结合附图进行详细说明。
【附图说明】
24.图1是本发明一种实施例的环肽及omega-3,6的得率检测结果示意图；
25.图2是本发明一种实施例的nf-κb活性检测示意图；
26.图3是本发明一种实施例的il-8产量检测结果示意图。
【具体实施方式】
27.本发明提供了一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物，复合物为由毛叶番荔枝含有的环肽与马齿苋含有的omega-3,6脂肪酸反应生成的环肽脂肪酸复合物，环肽脂肪酸复合物的结构式为
28.本发明还提供了一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物的制备方法，其特征在于：包括以下几个步骤：
29.s01原料处理：将毛叶番荔枝果皮和马齿苋混合，烘干粉碎；
30.s02提取：将粉碎后的原料加入多元醇/水的混合溶液中，注入提取装置内，并向提取装置内加入超临界二氧化碳溶剂进行提取，获得含环肽和omega-3,6脂肪酸的提取液；
31.s03催化：向提取液中加入脂肪酶催化一段时间，离心过滤后得到环肽脂肪酸复合物。
32.多元醇为1,2-丁二醇、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、1,3-丙二醇、1,5-戊二醇、丁二醇、丙二醇、己二醇、1,6-己二醇、2,3-丁二醇中的一种或多种。
33.混合溶液由多元醇和水按质量比为1～2：2混合而成。
34.脂肪酶为南极假丝酵母脂肪酶、黑曲霉脂肪酶、假单胞菌脂肪酶、链霉菌碱性脂肪酶、根霉脂肪酶、扩展青霉脂肪酶、圆弧青霉脂肪酶、嗜冷杆菌脂肪酶、嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶中的一种或多种。
35.混合溶液与粉碎后的原料之间的质量比为1～5：1。
36.提取装置为提取缸，提取缸内温度为30～45℃，所述超临界二氧化碳溶剂的流速为20～35l/h，时间为0.5～3h。
37.烘干时的温度设置为60～100℃。
38.加入脂肪酶后催化温度控制在10～50℃，催化时间为4～8h，脂肪酶与提取液的质量比为1～3:100。
39.本发明还提出了将上述环肽脂肪酸复合物作为护肤品原料的应用，护肤品包括但不限于精华液、面霜。
40.以下通过具体实施例进一步对本发明进行说明，下述实施例仅用于说明本发明而对本发明没有限制：
41.实施例1
42.一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物的制备方法，其特征在于：包括以下几个步骤：
43.s01原料处理：选取干净完整的毛叶番荔枝果皮和马齿苋，将毛叶番荔枝果皮和马齿苋混合放入罐体内，将罐体放置在100℃条件下烘干，之后将罐内的毛叶番荔枝果皮和马齿苋粉碎；
44.s02提取：取1kg粉碎后的原料粉末并将其加入5kg混合溶液中，混合后注入提取缸内，并向提取缸内加入超临界二氧化碳溶剂进行提取，获得含环肽和omega-3,6脂肪酸的提取液，其中，混合溶液由1,2-丁二醇与水按质量比为1:1混合而成，提取时提取缸内温度为45℃，超临界二氧化碳溶剂的流速为35l/h，提取时间为0.5h；
45.s03催化：向提取液中加入根霉脂肪酶，在50℃温度环境下催化4h，离心过滤后得到环肽脂肪酸复合物，其中，根霉脂肪酶与提取液的质量比为1:100；
46.其中，s02步骤中添加的超临界二氧化碳溶剂按以下方法制备而成：将二氧化碳注入到净化器中，过滤完成后，将其压入液化槽，在接近0℃时液化，然后将液体二氧化碳预热后加入提取缸，将缸内压力提升至40mpa，使二氧化碳成为超临界状态。
47.实施例2
48.一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物的制备方法，其特征在于：包括以下几个步骤：
49.s01原料处理：选取干净完整的毛叶番荔枝果皮和马齿苋，将毛叶番荔枝果皮和马齿苋混合放入罐体内，将罐体放置在60℃条件下烘干，之后将罐内的毛叶番荔枝果皮和马齿苋粉碎；
50.s02提取：取1kg粉碎后的原料粉末并将其加入1kg混合溶液中，混合后注入提取缸内，并向提取缸内加入超临界二氧化碳溶剂进行提取，获得含环肽和omega-3,6脂肪酸的提取液，其中，混合溶液由1,2-己二醇与水按质量比为1：2混合而成，提取时提取缸内温度为30℃，超临界二氧化碳溶剂的流速为20l/h，提取时间为3h；
51.s03催化：向提取液中加入嗜冷杆菌脂肪酶，在10℃温度环境下催化8h，离心过滤后得到环肽脂肪酸复合物，其中，嗜冷杆菌脂肪酶与提取液的质量比为2:100；
52.其中，s02步骤中添加的超临界二氧化碳溶剂按以下方法制备而成：将二氧化碳注入到净化器中，过滤完成后，将其压入液化槽，在接近0℃时液化，然后将液体二氧化碳预热后加入提取缸，将缸内压力提升至20mpa，使二氧化碳成为超临界状态。
53.实施例3
54.一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物的制备方法，其特征在于：包括以下几个步骤：
55.s01原料处理：选取干净完整的毛叶番荔枝果皮和马齿苋，将毛叶番荔枝果皮和马齿苋混合放入罐体内，将罐体放置在80℃条件下烘干，之后将罐内的毛叶番荔枝果皮和马齿苋粉碎；
56.s02提取：取1kg粉碎后的原料粉末并将其加入3kg混合溶液中，混合后注入提取缸内，并向提取缸内加入超临界二氧化碳溶剂进行提取，获得含环肽和omega-3,6脂肪酸的提取液，其中，混合溶液由1,3-丙二醇与水按质量比为1：1混合而成，提取时提取缸内温度为38℃，超临界二氧化碳溶剂的流速为27l/h，提取时间为1.8h；
57.s03催化：向提取液中加入圆弧青霉脂肪酶，在30℃温度环境下催化6h，离心过滤后得到环肽脂肪酸复合物，其中，圆弧青霉脂肪酶与提取液的质量比为3:100；
58.其中，s02步骤中添加的超临界二氧化碳溶剂按以下方法制备而成：将二氧化碳注入到净化器中，过滤完成后，将其压入液化槽，在接近0℃时液化，然后将液体二氧化碳预热
后加入提取缸，将缸内压力提升至30mpa，使二氧化碳成为超临界状态。
59.实施例4
60.一种毛叶番荔枝和马齿苋复合物的制备方法，其特征在于：包括以下几个步骤：
61.s01原料处理：选取干净完整的毛叶番荔枝果皮和马齿苋，将毛叶番荔枝果皮和马齿苋混合放入罐体内，将罐体放置在70℃条件下烘干，之后将罐内的毛叶番荔枝果皮和马齿苋粉碎；
62.s02提取：取1kg粉碎后的原料粉末并将其加入2.5kg混合溶液中，混合后注入提取缸内，并向提取缸内加入超临界二氧化碳溶剂进行提取，获得含环肽和omega-3,6脂肪酸的提取液，其中，混合溶液由1,3-丙二醇与水按质量比为1：1混合而成，提取时提取缸内温度为34℃，超临界二氧化碳溶剂的流速为22l/h，提取时间为2.4h；
63.s03催化：向提取液中加入嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶，在40℃温度环境下催化5h，离心过滤后得到环肽脂肪酸复合物，其中，嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶与提取液的质量比为2:100；
64.其中，s02步骤中添加的超临界二氧化碳溶剂按以下方法制备而成：将二氧化碳注入到净化器中，过滤完成后，将其压入液化槽，在接近0℃时液化，然后将液体二氧化碳预热后加入提取缸，将缸内压力提升至25mpa，使二氧化碳成为超临界状态。
65.性能检测：
66.一、超临界二氧化碳溶剂对提取液中环肽及omega-3,6的得率影响实验
67.分别对采用本发明制备方法中超临界二氧化碳溶剂提取步骤及传统提取工艺(水提取工艺)后获得的提取液中环肽及omega-3,6的得率(收率)进行检测，检测结果如图1所示，由图1可知，采用本技术制备方法中超临界二氧化碳溶剂提取步骤(图中标记为新工艺)获得的提取液中环肽及omega-3,6的得率明显高于传统提取工艺后获得的提取液中环肽及omega-3,6的得率。
68.通过采用超临界二氧化碳溶剂进行提取时，由于超临界二氧化碳溶剂以一种超临界流体形式存在，其性质将介于二氧化碳和液体之间，密度与毛叶番荔枝果皮和马齿苋混合液相近，黏度与二氧化碳相近，并同时具有二氧化碳的扩散能力和毛叶番荔枝果皮/马齿苋混合液的溶解能力，配合夹带剂多元醇，在分离过程中不会破坏物质的结构，分离结束也不会在萃取物中留下其他杂质，提高提取液中环肽与omega-3,6的收率及纯度。
69.二、环肽脂肪酸复合物对nf-κb的活性的影响实验
70.将nf-κb荧光素酶载体转染nih3t3细胞，培养24小时后，取相同的细胞等分为实验组、对照组1、对照组2、对照组3，其中，在实验组中加入10ng/ml tnf-α和2％环肽脂肪酸复合物，对照组1中仅加入10ng/mltnf-α，对照组2中加入10ng/mltnf-α和和2％毛叶番荔枝果皮提取物(环肽)，对照组3中加入10ng/mltnf-α和和2％马齿苋提取物(omega-3,6)，将四组细胞置于相同环境下培养24小时，检测上清液的荧光素酶活性，检测结果如图2所示。
71.由图2可知环肽脂肪酸复合物的荧光素酶活性相较于各对照组明显降低。说明环肽脂肪酸复合物能够最大程度上降低tnf-α刺激物导致nf-κb的活性，从而减少诱导一系列基因的表达，减少多种细胞因子的产生，对肌肤呈现舒缓的效果。
72.三、环肽脂肪酸复合物对细胞中il-8表达影响实验
73.取相同原代人角质形成细胞等分为实验组、对照组1、对照组2、对照组3和对照组4
并置于相同环境下培养24小时，其中，对照组1细胞不做任何处理，对照组2中加入0.1μm辣椒素，对照组3中加入2％毛叶番荔枝果皮提取物(环肽)，对照组4中加入2％马齿苋提取物(omega-3,6)，实验组中加入2％环肽脂肪酸复合物，分别测量各组中il-8产量，具体检测结果如图3所示。
74.由图3可知，以对照组1中il-8产量作为基准值记为100％，用辣椒素处理后，il-8产量增加了60％，而用毛叶番荔枝果皮提取物(环肽)、马齿苋提取物(omega-3,6)、环肽脂肪酸复合物分别进行预培养后il-8产量均有所降低，且以环肽脂肪酸复合物预培养时il-8产量降低幅度最明显。说明环肽脂肪酸复合物能够有效降低trpv1活性，使白介素8(il-8)的分泌水平明显下降，对肌肤呈现舒缓的效果。
75.上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。