一种广温性的球等鞭金藻及其应用

rrna的基因片段进行测序，获得18s rrna基因序列。
11.本发明所述球等鞭金藻mem410分离自海口市海域的海水；所述分离采用的培养基由如下组分组成：
12.nano3200 g/l，nah2po413.3 g/l，fecl33.65 g/l，na2edta
·
2h2o 4.235g/l，cuso4·
5h2o 0.0196g/l，na2moo4·
2h2o 0.0126g/l，znso4·
7h2o 0.044g/l,cocl2·
6h2o 0.01092g/l，mncl2·
4h2o 0.36g/l，维生素b121mg/l,biotin1mg/l,thiamine hcl 200mg/l和tris 0.01mol/l，ph＝7.6-8.0。
13.本发明中，所述球等鞭金藻耐受的温度为15～35℃。
14.实验表明，本发明所述的球等鞭金藻mem409在15℃、25℃、28℃、35℃下生长均可保持较高的生长速率，具有较强的高温耐受能力。
15.本发明还提供了所述球等鞭金藻在制备富含不饱和脂肪酸的产品中的应用。
16.所述产品包括保健品、食品或药品。
17.本发明还提供了所述的球等鞭金藻在制备动物饲料或饲料添加剂中的应用。
18.所述动物为水产动物，具体包括轮虫、鱼类；其中，鱼类以淡水养殖鱼类为主，包括四大家鱼，青草鲢鳙，海水养殖贝类蛤蜊、牡蛎等；所述饲料为开口饵料。
19.本发明还提供了所述的球等鞭金藻在制备生态制剂中的应用。
20.本发明提供的球等鞭金藻mem-a-409在15℃～35℃下可保持较高的生长速率，同时具有良好的耐盐性能。相比其他藻株，耐高温性和耐盐性均明显得到提高。
21.生物保藏说明
22.球等鞭金藻mem-a-409(isochrysisgalbana mem-a-409)，于2021年9月1日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址为:中国，武汉，武汉大学，保藏编号为cctccno:m20211116。
附图说明
23.图1为分离后活化培养的显微镜照片；
24.图2为所涉微藻在不同温度梯度下的生长曲线图；
25.图3为所涉微藻在低温下不同盐度的生长曲线图。
具体实施方式
26.本发明公开了一种广温性的球等鞭金藻及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本

技术实现要素：
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
27.下面结合实施例，进一步阐述本发明：
28.实施例1微藻的分离活化培养
29.从周边海域采集水样，及时拿回实验室进行藻种的分离。于显微镜下，用毛细管对单个藻细胞进行吸取，置于实验室的f2培养基下进行培养。水样中细胞过多时，加入灭菌水进行反复稀释，直到可以顺利吸出藻细胞。于锥形瓶中培养至细胞数量达到对数生长期后，在f2培养基平板上进行进一步划线分离，纯化，获得藻株mem-a-409。纯化后进行生长性能
的测定。
30.实验时所用f2培养基母液配方：nano3200 g/l,nah2po413.3 g/l,f/2trace metal solution(微量元素)200ml(含fecl33.65 g/l,na2edta
·
2h2o 4.235g/l,cuso4·
5h2o 0.0196g/l,na2moo4·
2h2o 0.0126g/l,znso4·
7h2o 0.044g/l,cocl2·
6h2o 0.01092g/l,mncl2·
4h2o 0.36g/l)，f/2vitamin solution(维生素)(b121mg/l,biotin 1mg/l,thiamine hcl 200mg/l)，tris 0.01mol/l，使用浓hcl调节ph＝7.2-8.0。
31.分离纯化后的藻株采用18s rrna基因通用引物18scomf1(5
’‑
gcttgtctcaaagattaagccatc-3’)和18scomr1(5
’‑
cacctacggaaaccttgttacggc-3’)扩增18s rrna片段进行测序，获得18srrna基因序列。
32.使用光学显微镜观察微藻的形态，结果见图1。
33.结合形态学结果和测序结果鉴定该微藻mem-a-409为球等鞭金藻(isochrysisgalbana)。
34.实施例2不同温度下微藻的生长条件及生长曲线的测定
35.实验时所用f2培养基配方：nano3200 g/l,nah2po413.3 g/l,f/2trace metal solution(微量元素)200ml(含fecl33.65 g/l,na2edta
·
2h2o 4.235g/l,cuso4·
5h2o 0.0196g/l,na2moo4·
2h2o 0.0126g/l,znso4·
7h2o 0.044g/l,cocl2·
6h2o 0.01092g/l,mncl2·
4h2o 0.36g/l)，f/2vitamin solution(维生素)(b121mg/l,biotin 1mg/l,thiamine hcl 200mg/l)，tris 0.01mol/l，使用浓hcl调节ph＝7.2-8.0。
36.控制光照强度为50μe
·
m-2
·
s-1
，24小时不间断，分别于15℃、25℃、28℃、35℃下进行实验，以相同方法配制f2培养基，控制微藻起始浓度od
750
在0.5以上，集体配制再进行分装，每株藻3个平行，每两天测定一次od值，并进行细胞计数，于第八天测定干重和脂质含量。根据测定的指标绘制生长曲线，结果见图2。
37.根据图2可以看出，mem409与对比的小球藻均有很广的温度适应范围，且培养过程中mem409在35℃以下的温度梯度下比小球藻的生长更快且不易衰败。以上条件中，随着温度的提高，两株藻的生长速率也在提高，推测两株藻均有较强的高温耐受能力。
38.实施例3低温下微藻的耐盐性能的测定
39.实验时所用f2培养基母液配方：nano3200 g/l,nah2po413.3 g/l,f/2trace metal solution(微量元素)200ml(含fecl33.65 g/l,na2edta
·
2h2o 4.235g/l,cuso4·
5h2o 0.0196g/l,na2moo4·
2h2o 0.0126g/l,znso4·
7h2o 0.044g/l,cocl2·
6h2o 0.01092g/l,mncl2·
4h2o 0.36g/l)，f/2vitamin solution(维生素)，tris 0.01mol/l，使用浓hcl调节ph＝7.2-8.0。
40.所述的两株微藻，于5℃下，设置盐度梯度为15g/l，35g/l，70g/l，105g/l，其余条件与正常培养条件一致。使用实验室配制的培养基进行培养，每隔两天测定一次od值，观察两株藻的长势。以35g/l作为对照组，挑选出与对照组差距较小的盐浓度中藻种，筛选出低温下耐盐的藻种，并与25℃下，高盐度培养的微藻的生长性能进行对比，筛选出抗逆性能强的样本。进一步测定fv/fm值，以衡量两株藻在低温高盐下的耐受能力。与对照组能有相近生长性能可视为具有较强的耐受力。
41.由图3可以看出，在低温环境下，两株藻对低盐的耐受性较差，而当盐度达到正常海水的2-3倍盐度时，可以看到mem409比小球藻的适应力更强，且与对照组的差距很小，具
有更广的盐度适应性。这意味着使用一些浓缩海产品加工废水即便是经过低温处理过也可以用于所述微藻的培养。
42.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。