1.本发明涉及帕立骨化醇合成技术领域，具体为一种稳定的帕立骨化醇及其制备方法。
背景技术：
2.目前合成帕立骨化醇的方法主要分为结构修饰法和汇聚合成法。结构修饰法以deluca和asakotoyoda小组为代表的化学生物法和以thomasbader和chzesiongng小组为代表的全化学合成法。化学生物合成法主要是以25-羟基维生素d2为起始原料，经过一系列的保护和脱保护等步骤，最后通过生物转化法获得，但在合成过程中用到了剧毒和昂贵的双羟基化试剂四氧化锇，其对人体和环境有着严重的威胁，且最后一步生物转化法的收率也较低。全化学合成法主要是通过氧化法断裂c-22双键后，通过成烯反应带入带有羟基的侧链，其中的关键步骤在工业上较难实现，臭氧化具有爆炸危险，witting反应需要严格的无水条件和有重金属参与的julia-lythgoe成烯反应。而相比较而言，汇聚合成法是有两个单独的a环和c/d环成子，可以多位点修饰活性维生素d类似物。
3.帕立骨化醇为白色粉末，在水中不溶，在多数极性溶剂中可溶，如：乙醚，甲醇，乙醇等，其具有引湿性，化学性质非常不稳定，并且对ph、氧气较为敏感。
技术实现要素：
4.（一）解决的技术问题针对现有技术的不足，本发明提供一种稳定的帕立骨化醇及其制备方法。
5.（二）技术方案为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种稳定的帕立骨化醇的制备方法，包括以下步骤：步骤s1，以1l-表位-2-肌糖为起始原料先依次合成化合物p1-1、化合物p1-2、化合物p1-3，再合成结构式为化合物p1-4的单环瞵氧化物；步骤s2，以vitamind2为原料先合成化合物p2-1、再合成化合物p2-2；以(-)-甲基-d-bata-羟基异丁酸酯为起始原料先合成化合物p3-1、再合成化合物p3-2；步骤s3，通过化合物p2-2与化合物p3-2发生偶合反应合成双环酮的化合物p4-1，为化合物p4-1上保护基tms，得到化合物p4-2；步骤s4，通过化合物p4-2与化合物p1-4再次发生发生偶合反应合成化合物p5-1；步骤s5，将化合物p5-1进行冷冻干燥处理，制备得到稳定的帕立骨化醇。
6.优选的，所述步骤s1，化合物p1-3的合成：在装有搅拌器、温度计、回流冷凝管的三口烧瓶中，依次加入1-5份的丙二酸、吡啶、1-5份的化合物p1-2、哌啶，搅拌，升温至60-90℃，反应5-8h，干燥得到化合物p1-3。
7.优选的，所述步骤s2，化合物p3-2包括：2-15份的化合物p3-1、5-20份的二苯基次膦酰氯。
8.优选的，所述步骤s5，冷冻干燥处理的条件为：预冻温度范围为：-10～-40℃；抽真空的参数为：70～100pa、-30～-10℃；干燥条件为：0～30℃、80～100pa。
9.根据上述方法制备的稳定的帕立骨化醇。
10.（三）有益的技术效果与现有技术相比，本发明具备以下有益的技术效果：本发明：首先以1l-表位-2-肌糖为起始原料合成结构式为化合物p1-4的单环瞵氧化物；然后分别合成化合物p2-2、化合物p3-2；之后通过化合物p2-2与化合物p3-2发生偶合反应合成双环酮的化合物p4-1，为化合物p4-1上保护基tms，得到化合物p4-2；使化合物p4-2与化合物p1-4再次发生发生偶合反应合成化合物p5-1，将化合物p5-1进行冷冻干燥处理，制备得到稳定的帕立骨化醇，该合成方法路线短，操作简便。
附图说明
11.图1为化合物p1-1的化学结构式；图2为化合物p1-2的化学结构式；图3为化合物p1-3的化学结构式；图4为化合物p1-4的化学结构式；图5为化合物p2-1的化学结构式；图6为化合物p2-2的化学结构式；图7为化合物p3-1的化学结构式；图8为化合物p3-2的化学结构式；图9为化合物p4-1的化学结构式；图10为化合物p4-2的化学结构式；图11为化合物p5-1的化学结构式；其中，r1为otbs，r2为otbs，tbs为叔丁基二甲基硅烷；r3为otms，tms为三甲基硅基团。
具体实施方式
12.实施例1：一种稳定的帕立骨化醇的制备方法，包括以下步骤：步骤s1，化合物p1-1的合成：在25ml单口瓶中加入15ml无水甲醇，冷却到10℃，5min内滴加入0.5ml乙酰氯，继续搅拌15min，将1.85g1l-表位-2-肌糖加入到反应瓶中，室温搅拌15h，减压浓缩，用20mln,n-二甲基乙酰胺定量转移到50ml单口瓶中，加入4.5g叔丁基二甲基氯硅烷和0.13g4-二甲氨基吡啶，降温到8℃，开始滴加5ml三乙胺，0.5h滴加完，撤去冰水浴，室温搅拌20h，加入30ml乙酸乙酯和20ml氯化铵水溶液，分层，水层再用20ml乙酸乙酯萃取，经后处理，用柱层析提纯，得到化合物p1-1；步骤s2，化合物p1-2的合成：
100ml圆底烧瓶中，加入4g化合物p1-1、2.5gn,n'-硫羰基二咪唑、0.12g4-二甲氨基吡啶和20ml二氯甲烷，氮气保护室温下搅拌72h，浓缩除去二氯甲烷，直接柱层析提纯，得到固体组分；将1.5g固体组分和1g次亚磷酸钠溶解在20ml乙二醇单甲醚中，氮气保护下油浴加热110℃，同时称量0.05g偶氮二异丁腈溶解在10ml乙二醇单甲醚和1ml三乙胺的混合液中，将混合液加入到反应瓶中，在110℃油浴中搅拌3h，减压浓缩除去溶剂，加入20ml乙酸乙酯、20ml氯化铵水溶液洗涤，水相再用20ml乙酸乙酯萃取，有机相合并后水洗，盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩柱层析提纯，得到化合物p1-2；步骤s3，化合物p1-3的合成：在装有搅拌器、温度计、回流冷凝管的20ml三口烧瓶中，依次加入2.5g丙二酸、5ml吡啶、4g化合物p1-2、0.1ml哌啶，搅拌，升温至90℃，反应5h，冷却，将反应液倒入20ml浓度为2mol/l的盐酸中，搅拌，抽滤，水洗滤饼，干燥得到化合物p1-3；步骤s4，化合物p1-4的合成：在50ml三口圆底烧瓶中加入0.25g化合物p1-3和0.25ml四氢呋喃，氩气保护下降温到0℃，加入0.25ml浓度2.5m的正丁基锂、10ml溶解有0.1g对甲苯磺酰氯的四氢呋喃溶液，0℃搅拌2h，得到溶液s4-1；在25ml的三口瓶中加入0.15g二苯基次膦酰氯和10ml四氢呋喃，氩气保护下降温到0℃，滴加0.25ml浓度2.5m的正丁基锂，保温搅拌20min，得到溶液s4-2；在氩气保护下，将溶液s4-2滴加到溶液s4-1中，保温0-5℃搅拌1h，升到室温20℃，继续搅拌0.5h，在旋蒸上减压浓缩除去四氢呋喃，往残余物中加入50ml氯仿和40ml水，搅拌下加入6.8g浓度30%的双氧水，室温搅拌12h，加入80ml5%的碳酸氢钠溶液淬灭反应，水相用二氯甲烷萃取，经后处理，用柱层析提纯，得到化合物p1-4;步骤s5，化合物p2-1的合成：在100ml的三口瓶中加入5gvitamind2，0.7gnahco3，100ml二氯甲烷，25ml无水乙醇，将混合物冷却至-70℃，通入o3至出现深蓝色，停止通o3，通空气至溶液为无色，转移到200ml反应瓶中，加入4gnabh4，升温至0℃搅拌3h，得到化合物p2-1;步骤s6，化合物p2-2的合成：在100ml三口瓶中加入0.45g化合物p2-1和10ml甲苯，10ml乙酸乙酯，2ml水、0.2g溴化钠，0.02g2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物，降温到0℃，滴加由0.48g碳酸氢钠，6ml超纯水、1.6g浓度10%的氯酸钠配制成的溶液，0.5h滴加完毕，继续搅拌0.5h，分层，有机相用硫代硫酸钠水溶液和盐水相继洗涤，硫酸钠干燥，浓缩后柱层析提纯，得到化合物p2-2；步骤s7，化合物p3-1的合成：在100ml三口圆底烧瓶中加入20ml甲基格氏试剂，氮气保护下降温到10℃左右，开始滴加2g(-)-甲基-d-bata-羟基异丁酸酯溶解在10ml乙醚中的溶液，控制温度不超过20℃，0.5h滴加完，保持10℃继续搅拌2h，调节ph=6，得到化合物p3-1；步骤s8，化合物p3-2的合成：在100ml三口圆底烧瓶中加入0.7g化合物p3-1和24ml四氢呋喃，氩气保护下降温到0℃，加入0.25ml浓度2.5m的正丁基锂，0℃下搅拌10min，加入溶解有0.12g对甲苯磺酰氯的10ml四氢呋喃溶液，保持0℃搅拌2h，得到溶液s8-1；
在25ml的三口瓶中加入1.6g二苯基次膦酰氯和10ml四氢呋喃，氩气保护下降温到0℃，滴加0.25ml浓度2.5m的正丁基锂，保温搅拌20min，得到溶液s8-2；在氩气保护下，将溶液s8-2滴加到溶液s8-1中，保温0℃搅拌1h，升到室温20℃，继续搅拌0.5h，在旋蒸上减压浓缩除去四氢呋喃，往残余物中加入50ml氯仿和40ml水，搅拌下加入6.8g浓度30%的双氧水，室温搅拌12h，加入80ml浓度5%的碳酸氢钠溶液淬灭反应，水相用二氯甲烷萃取，经后处理，用柱层析提纯，得到化合物p3-2;步骤s9，化合物p4-1的合成：在10ml三口瓶中加入0.198g化合物p2-2和2ml无水四氢呋喃，氩气保护下降温到-50℃，加入正丁基锂搅拌15min，得到溶液s9-1;将0.166g化合物p3-2溶解在1ml四氢呋喃中，得到溶液s9-2；将溶液s9-2滴加到溶液s9-1中，保持-50℃下搅拌2.5h，自然升到室温，加入5ml水淬灭反应，用pe/ea=10/1的混合溶剂萃取，柱层析提纯得到化合物p4-1；步骤s10，化合物p4-2的合成：25ml单口瓶中加入0.15g化合物p4-1、0.15g（三甲基硅基)乙酸乙酯和10ml二氯甲烷，氮气保护下20℃反应16h，浓缩干后柱层析提纯，得到化合物p4-2；步骤s11，化合物p5-1的合成：在100ml三口瓶中加入0.5g化合物p1-4和2ml无水四氢呋喃，氩气保护下降温到-50℃，加入正丁基锂搅拌0.5h，得到溶液s11-1;将0.17g化合物p4-2溶解在1ml四氢呋喃中，得到溶液s11-2；将溶液s11-2滴加到溶液s11-1中，保持-50℃下搅拌2.5h，自然升到室温，加入5ml水淬灭反应，用pe/ea=10/1的混合溶剂萃取3次，经后处理，柱层析提纯得到化合物p5-1；步骤s12，稳定的帕立骨化醇的制备：将化合物p5-1进行冷冻干燥处理，制备得到稳定的帕立骨化醇，其中，冷冻干燥处理的条件为：预冻温度范围为：-30℃；抽真空的参数为：100pa、-20℃；干燥条件为：0℃、100pa；实施例2：一种稳定的帕立骨化醇的制备方法，包括以下步骤：步骤s1，化合物p1-1的合成：其合成方法见实施例1；步骤s2，化合物p1-2的合成：其合成方法见实施例1；步骤s3，化合物p1-3的合成：在装有搅拌器、温度计、回流冷凝管的20ml三口烧瓶中，依次加入1g丙二酸、5ml吡啶、5g化合物p1-2、0.1ml哌啶，搅拌，升温至60℃，反应8h，干燥得到化合物p1-3；步骤s4，化合物p1-4的合成：在50ml三口圆底烧瓶中加入0.1g化合物p1-3和0.25ml四氢呋喃，氩气保护下降温到0℃，加入0.25ml浓度2.5m的正丁基锂、10ml溶解有0.1g对甲苯磺酰氯的四氢呋喃溶液，0℃搅拌2h，得到溶液s4-1；在25ml的三口瓶中加入0.3g二苯基次膦酰氯和10ml四氢呋喃，氩气保护下降温到0℃，加入0.25ml浓度2.5m的正丁基锂，保温搅拌0.5h，得到溶液s4-2；在氩气保护下，将溶液s4-2加入到溶液s4-1中，保温0℃搅拌1h，升到室温10℃搅
拌1h，得到化合物p1-4;步骤s5，化合物p2-1的合成：其合成方法见实施例1;步骤s6，化合物p2-2的合成：在100ml三口瓶中加入0.1g化合物p2-1和10ml甲苯，10ml乙酸乙酯，2ml水、0.2g溴化钠，0.02g2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物，降温到5℃，滴加由0.48g碳酸氢钠，6ml超纯水、1.6g浓度10%的氯酸钠配制成的溶液，0.5h滴加完毕，搅拌1h，得到化合物p2-2；步骤s7，化合物p3-1的合成：其合成方法见实施例1；步骤s8，化合物p3-2的合成：在100ml三口圆底烧瓶中加入0.2g化合物p3-1和24ml四氢呋喃，氩气保护下降温到5℃，加入0.25ml浓度2.5m的正丁基锂，5℃下搅拌10min，加入溶解有0.12g对甲苯磺酰氯的10ml四氢呋喃溶液，保持5℃搅拌2h，得到溶液s8-1；在25ml的三口瓶中加入2g二苯基次膦酰氯和10ml四氢呋喃，氩气保护下降温到5℃，滴加0.25ml浓度2.5m的正丁基锂，保温搅拌20min，得到溶液s8-2；在氩气保护下，将溶液s8-2滴加到溶液s8-1中，保温5℃搅拌1h，升到室温10℃，继续搅拌0.5h，得到化合物p3-2;步骤s9，化合物p4-1的合成：在10ml三口瓶中加入0.1g化合物p2-2和2ml无水四氢呋喃，氩气保护下降温到-40℃，加入正丁基锂搅拌15min，得到溶液s9-1;将0.2g化合物p3-2溶解在1ml四氢呋喃中，得到溶液s9-2；将溶液s9-2滴加到溶液s9-1中，在-40℃下搅拌1h，自然升到室温，得到化合物p4-1；步骤s10，化合物p4-2的合成：25ml单口瓶中加入0.05g化合物p4-1、0.15g（三甲基硅基)乙酸乙酯和10ml二氯甲烷，氮气保护下25℃反应12h，得到化合物p4-2；步骤s11，化合物p5-1的合成：在100ml三口瓶中加入0.1g化合物p1-4和2ml无水四氢呋喃，氩气保护下降温到-40℃，加入正丁基锂搅拌1h，得到溶液s11-1;将0.3g化合物p4-2溶解在1ml四氢呋喃中，得到溶液s11-2；将溶液s11-2滴加到溶液s11-1中，保持-40℃下搅拌1h，得到化合物p5-1；步骤s12，稳定的帕立骨化醇的制备：将化合物p5-1进行冷冻干燥处理，制备得到稳定的帕立骨化醇，其中，冷冻干燥处理的条件为：预冻温度范围为：-10℃；抽真空的参数为：80pa、-10℃；干燥条件为：0℃、80pa；实施例3：一种稳定的帕立骨化醇的制备方法，包括以下步骤：步骤s1，化合物p1-1的合成：其合成方法见实施例1；步骤s2，化合物p1-2的合成：其合成方法见实施例1；步骤s3，化合物p1-3的合成：在装有搅拌器、温度计、回流冷凝管的20ml三口烧瓶中，依次加入5g丙二酸、5ml吡
啶、1g化合物p1-2、0.1ml哌啶，搅拌，升温至80℃，反应8h，干燥得到化合物p1-3；步骤s4，化合物p1-4的合成：在50ml三口圆底烧瓶中加入0.6g化合物p1-3和0.25ml四氢呋喃，氩气保护下降温到0℃，加入0.25ml浓度2.5m的正丁基锂、10ml溶解有0.1g对甲苯磺酰氯的四氢呋喃溶液，0℃搅拌2h，得到溶液s4-1；在25ml的三口瓶中加入0.05g二苯基次膦酰氯和10ml四氢呋喃，氩气保护下降温到0℃，加入0.25ml浓度2.5m的正丁基锂，保温搅拌0.5h，得到溶液s4-2；在氩气保护下，将溶液s4-2加入到溶液s4-1中，保温0℃搅拌1h，升到室温10℃搅拌1h，得到化合物p1-4;步骤s5，化合物p2-1的合成：其合成方法见实施例1;步骤s6，化合物p2-2的合成：在100ml三口瓶中加入1g化合物p2-1和10ml甲苯，10ml乙酸乙酯，2ml水、0.2g溴化钠，0.02g2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物，降温到5℃，滴加由0.48g碳酸氢钠，6ml超纯水、1.6g浓度10%的氯酸钠配制成的溶液，0.5h滴加完毕，搅拌1h，得到化合物p2-2；步骤s7，化合物p3-1的合成：其合成方法见实施例1；步骤s8，化合物p3-2的合成：在100ml三口圆底烧瓶中加入1.5g化合物p3-1和24ml四氢呋喃，氩气保护下降温到5℃，加入0.25ml浓度2.5m的正丁基锂，5℃下搅拌10min，加入溶解有0.12g对甲苯磺酰氯的10ml四氢呋喃溶液，保持5℃搅拌2h，得到溶液s8-1；在25ml的三口瓶中加入0.5g二苯基次膦酰氯和10ml四氢呋喃，氩气保护下降温到5℃，滴加0.25ml浓度2.5m的正丁基锂，保温搅拌20min，得到溶液s8-2；在氩气保护下，将溶液s8-2滴加到溶液s8-1中，保温5℃搅拌1h，升到室温10℃，继续搅拌0.5h，得到化合物p3-2;步骤s9，化合物p4-1的合成：在10ml三口瓶中加入0.5g化合物p2-2和2ml无水四氢呋喃，氩气保护下降温到-40℃，加入正丁基锂搅拌15min，得到溶液s9-1;将0.08g化合物p3-2溶解在1ml四氢呋喃中，得到溶液s9-2；将溶液s9-2滴加到溶液s9-1中，在-40℃下搅拌1h，自然升到室温，得到化合物p4-1；步骤s10，化合物p4-2的合成：25ml单口瓶中加入0.6g化合物p4-1、0.15g（三甲基硅基)乙酸乙酯和10ml二氯甲烷，氮气保护下25℃反应12h，得到化合物p4-2；步骤s11，化合物p5-1的合成：在100ml三口瓶中加入1.5g化合物p1-4和2ml无水四氢呋喃，氩气保护下降温到-40℃，加入正丁基锂搅拌1h，得到溶液s11-1;将0.05g化合物p4-2溶解在1ml四氢呋喃中，得到溶液s11-2；将溶液s11-2滴加到溶液s11-1中，保持-40℃下搅拌1h，得到化合物p5-1；步骤s12，稳定的帕立骨化醇的制备：将化合物p5-1进行冷冻干燥处理，制备得到稳定的帕立骨化醇，其中，冷冻干燥处
理的条件为：预冻温度范围为：-40℃；抽真空的参数为：70pa、-30℃；干燥条件为：30℃、100pa。
13.性能测试将纯化的目标产物帕立骨化醇经过电喷雾离子质谱(esi-ms)、核磁共振氢谱(1h-nmr)和核磁共振碳谱(
13
c-nmr)鉴定；其中，质谱分析条件:正离子模式，样品通过流动注射泵进样，体积流量0.2ml/min，干燥气温度350℃，干燥器流量9.0l/min，雾化气压强24.1pa，毛细管电压4kv，质量扫描范围m/z50-1200；核磁共振过程中溶剂为甲醇，四甲基硅烷(tms)作为内标物质；其结果如下：实施例1：1h-nmr(cd3od,400mhz)δ:5.83-6.15(d,j=11.2hz,1h)，3.82-5.33(m,2h)，2.30-2.82(m,1h)，2.01-2.16(m,2h)，1.82-1.89(m,4h)，1.14-1.76(m,11h)，1.07(s,3h),1.00(s,3h)，0.90(d,j=6.4hz,3h)，0.98(d,j=6.8hz,3h)，0.46(s,3h)；
13
cnmr(cd3od,100mhz)δ:132.1，128.7，124.7，121.4，115.0，107.1，64.4，58.1，58.0，48.4，48.8，39.6，36.4，36.7，32.7，31.4，32.7，28.0，21.4，20.4，19.7，16.2，15.3，14.9，12.6，6.0，3.5；hrms(esi)，基峰439.34 c
27h44
o3na [m+na
+
]；实施例2：1h-nmr(cd3od,400mhz)δ:5.11-6.84(d,j=11.2hz,1h)，3.17-5.30(m,2h)，2.20-2.75(m,1h)，1.97-2.04(m,2h)，1.67-1.80(m,4h)，1.35-1.64(m,11h)，1.14(s,3h),1.08(s,3h)，0.97(d,j=6.4hz,3h)，1.02(d,j=6.8hz,3h)，0.48(s,3h)；
13
cnmr(cd3od,100mhz)δ:131.8，128.0，127.1，122.0，111.7，101.3，61.2，54.1，58.2，46.5，47.8，37.2，34.9，35.8，32.0，31.3，32.1，28.7，21.8，22.4，19.7，15.2，15.8，14.0，11.6，6.3，3.7；hrms(esi)，基峰439.24 c
27h44
o3na [m+na
+
]；实施例3：1h-nmr(cd3od,400mhz)δ:5.65-6.34(d,j=11.2hz,1h)，3.41-5.56(m,2h)，2.21-2.77(m,1h)，1.90-2.07(m,2h)，1.61-1.88(m,4h)，1.30-1.65(m,11h)，1.12(s,3h),1.01(s,3h)，0.90(d,j=6.4hz,3h)，1.03(d,j=6.8hz,3h)，0.52(s,3h)；
13
cnmr(cd3od,100mhz)δ:131.1，126.5，125.1，120.3，110.7，102.0，67.1，54.7，50.2，46.1，40.1，39.2，36.0，35.4，31.0，30.3，32.4，29.7，20.4，20.7，20.3，15.8，15.6，14.7，11.0，6.8，3.4；hrms(esi)，基峰439.40 c
27h44
o3na [m+na
+
]。