一种连续提取质粒DNA的装置和方法与流程

一种连续提取质粒dna的装置和方法
技术领域
1.本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种连续提取质粒dna的装置和方法。


背景技术：

2.近些年，随着生物制药领域的不断发展，对质粒dna的需求量逐渐增加，如何获得高纯度、高质量的质粒dna变得尤为重要。应用于基因治疗和细胞治疗的质粒dna，主要从大肠杆菌中，通过提取、超滤浓缩、纯化(离子交换作用、疏水相互作用、脱盐)等工艺来获得。
3.提取工艺对于高质量的质粒dna的获得有非常重要的作用。目前常用的质粒dna的提取方法包括碱裂解法、热裂解法和机械破碎法，其中碱裂解法的提取效果较好，质量高，而且重复性较高，例如，王宾、李小林(cn 1948481 a)公开了一种碱裂解法提取质粒的方法。对于高质量质粒dna需求量的不断增加，需要开发更加高效、简便快速的获取高产量的质粒dna的工艺。


技术实现要素：

4.一方面，本发明提供一种连续提取质粒dna的装置，包括提供菌体悬浮液的容器1、提供裂解试剂的容器2、裂解反应器3、提供中和试剂的容器4、中和反应器5、第一蠕动泵6、第二蠕动泵7、第三蠕动泵8以及离心机9；
5.其中所述裂解反应器3和中和反应器5均配备有搅拌装置10；
6.其中所述提供菌体悬浮液的容器1经第一蠕动泵6、提供裂解试剂的容器2经第二蠕动泵7与裂解反应器3的进料口通过三通连接；所述裂解反应器3的出料口、提供中和试剂的容器4经第三蠕动泵8与中和反应器5的进料口通过三通连接；
7.其中裂解反应器3和中和反应器5的进料口和出料口在竖直方向上有高度差。
8.在一些优选的实施方案中，所述裂解反应器3和中和反应器5是进料口位于下部、出料口位于上部的容器；或者
9.所述裂解反应器3和中和反应器5是进料口位于上部、出料口位于下部的单口容器。
10.在一些优选的实施方案中，所述裂解反应器(3)和中和反应器(5)是单口容器时，其出料口与蠕动泵连接。
11.在一些优选的实施方案中，所述裂解反应器3和中和反应器5为进料口位于下部、出料口位于上部的高硼硅生物补料瓶。高硼硅生物补料瓶可以通过商购获得。
12.在另一些优选的实施方案中，单口容器为黄口瓶，并配备有蠕动泵，其中所述黄口瓶的出料端口与蠕动泵连接。黄口瓶也可以通过商购获得。
13.另一方面，本发明提供一种连续提取质粒dna的方法，该方法使用本技术如上所述的装置。
14.在一些优选的实施方式中，本发明连续提取质粒dna的方法包括：
15.(1)在所述裂解反应器3中在搅拌下将菌体悬浮液与裂解试剂混合进行裂解，得到
菌体裂解液；
16.(2)在所述中和反应器5中在搅拌下将所述菌体裂解液与中和试剂混合进行中和，得到混合液；
17.(3)将混合液离心，取上清液，得到质粒。
18.优选地，所述步骤(1)和步骤(2)的搅拌速度为100-300rpm。
19.更优选地，所述菌体悬浮液与裂解试剂通过相同内径的管道以流速比为1:1-1:2进入所述裂解反应器3中进行裂解，裂解时间为1-10min。
20.进一步优选地，所述菌体裂解液与中和试剂通过相同内径的管道以流速比为2:1-1:1进入所述中和反应器5中进行中和，中和时间为1-10min。
21.本技术的装置和方法可以连续提取的方式，快速地获得高产量、高质量的质粒dna，易于操作，并且装置中的各组件可以重复利用，大大降低了生产成本。
附图说明
22.图1为本技术一个实施方案的连续提取质粒dna装置示意图；
23.图2为本技术一个实施方案的连续提取质粒dna装置示意图；
24.图3为本技术一个实施方案中的澄清液醇沉核酸电泳图谱；
25.图4为本技术一个实施方案中的澄清液醇沉核酸电泳图谱。
具体实施方式
26.以下，适当地参照附图详细说明本发明的连续提取质粒dna的方法和装置的实施方式。但是会有省略不必要的详细说明的情况。例如，有省略对已众所周知的事项的详细说明、实际相同结构的重复说明的情况。这是为了避免以下的说明不必要地变得冗长，便于本领域技术人员的理解。此外，附图及以下说明是为了本领域技术人员充分理解本技术而提供的，并不旨在限定权利要求书所记载的主题。
27.本技术所公开的“范围”以下限和上限的形式来限定，给定范围是通过选定一个下限和一个上限进行限定的，选定的下限和上限限定了特别范围的边界。这种方式进行限定的范围可以是包括端值或不包括端值的，并且可以进行任意地组合，即任何下限可以与任何上限组合形成一个范围。例如，如果针对特定参数列出了60-120和80-110的范围，理解为60-110和80-120的范围也是预料到的。此外，如果列出的最小范围值1和2，和如果列出了最大范围值3，4和5，则下面的范围可全部预料到：1-3、1-4、1-5、2-3、2-4和2-5。在本技术中，除非有其他说明，数值范围“a-b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。例如数值范围“0-5”表示本文中已经全部列出了“0-5”之间的全部实数，“0-5”只是这些数值组合的缩略表示。另外，当表述某个参数为≥2的整数，则相当于公开了该参数为例如整数2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12等。
28.如果没有特别的说明，本技术的所有实施方式以及可选实施方式可以相互组合形成新的技术方案。
29.如果没有特别的说明，本技术的所有技术特征以及可选技术特征可以相互组合形成新的技术方案。
30.如果没有特别的说明，本技术所提到的“包括”和“包含”表示开放式，也可以是封
闭式。例如，所述“包括”和“包含”可以表示还可以包括或包含没有列出的其他组分，也可以仅包括或包含列出的组分。
31.如果没有特别的说明，在本技术中，术语“或”是包括性的。举例来说，短语“a或b”表示“a，b，或a和b两者”。更具体地，以下任一条件均满足条件“a或b”：a为真(或存在)并且b为假(或不存在)；a为假(或不存在)而b为真(或存在)；或a和b都为真(或存在)。
32.本技术提供一种连续提取质粒dna的装置，包括提供菌体悬浮液的容器1、提供裂解试剂的容器2、裂解反应器3、提供中和试剂的容器4、中和反应器5、第一蠕动泵6、第二蠕动泵7、第三蠕动泵8以及离心机9；
33.其中所述裂解反应器3和中和反应器5均配备有搅拌装置10；
34.其中所述提供菌体悬浮液的容器1经第一蠕动泵6、提供裂解试剂的容器2经第二蠕动泵7与裂解反应器3的进料口通过三通连接；所述裂解反应器3的出料口、提供中和试剂的容器4经第三蠕动泵8与中和反应器5的进料口通过三通连接；
35.其中裂解反应器3和中和反应器5的进料口和出料口在竖直方向上有高度差。优选地，裂解反应器3和中和反应器5的进料口和出料口的设置如下：
36.(1)如图1所示，进料口位于裂解反应器3和中和反应器5的下部，出料口位于裂解反应器3和中和反应器5的上部；
37.(2)如图2所示，进料口位于裂解反应器3和中和反应器5的上部，出料口位于裂解反应器3和中和反应器5的下部；
38.在图2中，裂解反应器3和中和反应器5为单口容器，这时进料口是指进料管管口，出料口是指出料管管口。优选进料管管口伸入裂解反应器3和中和反应器5的上部、出料管管口伸入裂解反应器3和中和反应器5的下部(更优选底部)。
39.在本发明中，将裂解反应器3和中和反应器5的进料口和出料口在竖直方向上设置有一定的高度差，这种进料口远离出料口的结构可以使裂解反应器3和中和反应器5内的物料有足够的停留时间，混合效果更好，从而保证充分裂解或中和。另外，通过这种结构还可以实现连续提取。
40.其中所述裂解反应器3和中和反应器5是进料口位于下部、出料口位于上部的容器、或单口容器，是单口容器时，其出料口与蠕动泵连接。
41.在本发明中，裂解反应器3和中和反应器5是进料口位于下部、出料口位于上部的容器的技术方案相对于裂解反应器3和中和反应器5是单口容器的技术方案具有更好的技术效果：当裂解反应器3和中和反应器5是单口容器时，需要使用蠕动泵将裂解反应器3和中和反应器5中的物料泵出，而当裂解反应器3和中和反应器5是进料口位于下部、出料口位于上部的容器时，裂解反应器3和中和反应器5中的物料是充满容器后自动外溢导出，不需使用蠕动泵，可以减少泵的剪切力对质粒的损害，同时也节约设备、电力等资源。
42.所述进料口位于下部、出料口位于上部的容器可以使用高硼硅生物补料瓶。所述单口容器可以使用常规黄口瓶。
43.当使用本技术的连续提取质粒dna的装置时，首先将容器1中的菌体悬浮液经第一蠕动泵6并将容器2中的裂解试剂经第二蠕动泵7通过各自连接的管道将溶液汇于第一个三通处，随后溶液通过连接三通和裂解反应器3的管道进入到裂解反应器3中，在搅拌下将菌体悬浮液与裂解试剂混合均匀，得到菌体裂解液；接着将裂解反应器3中的菌体裂解液引出
并将提供中和试剂的容器4中的中和试剂经第二蠕动泵7通过各自连接的管道将溶液汇于第二个三通处，随后溶液通过连接三通和中和反应器5的管道进入到中和反应器5中，在搅拌下将菌体裂解液与中和试剂混合均匀，得到混合液；最后将中和反应器5中的混合液引入到离心机中进行离心，并最终获得质粒dna。
44.在一个优选的实施方案中，所述裂解反应器3和中和反应器5为市售可得的高硼硅生物补料瓶，其下部端口为进料口，上部端口为出料口。可根据实际需要选择不同容积的高硼硅生物补料瓶，溶液从下部端口进入瓶中，直接接触正在搅拌的转子，进行混匀，随着进入瓶中的溶液增多，液面逐渐升高，直至液面升高至瓶上部端口，可从出料口流出而无需借助例如蠕动泵等外力。在使用高硼硅生物补料瓶作为裂解反应器3和中和反应器5时，可认为瓶身上端的出料口流出溶液的速度与瓶身下端的进料口流入的溶液的速度相同。因此，在本技术中，瓶身上端的出料口流出溶液的速度即为通过第一蠕动泵6控制的流速和通过第二蠕动泵7控制的流速之和。
45.本技术的实施方案中，根据菌体悬浮液和裂解试剂各自在管道中的流速，来调整用于连接提供菌体悬浮液的容器1至三通处的管道长度与用于连接提供裂解试剂的容器2至三通处的管道的长度，以保证菌体悬浮液和裂解试剂能够同时到达三通处。同样，根据菌体裂解液和中和试剂各自在管道中的流速，来调整用于连接裂解反应器3出口至三通处的管道长度与用于连接提供中和试剂的容器4至三通处的管道的长度，以保证菌体裂解液和中和试剂能够同时到达三通处。
46.本技术的实施方案中，用于连接三通至裂解反应器3的管道的长度为1-1.5m；用于连接三通至中和反应器5的管道的长度为1.2m。
47.在一个优选的实施方案中，所述裂解反应器3和中和反应器5为市售可得的常规黄口瓶，其中所述黄口瓶的出料端口与蠕动泵连接。
48.在一个优选的实施方案中，所述搅拌装置10为磁力搅拌器，例如，购自上海梅颖浦仪器仪表制造有限公司，型号为90-1b的磁力搅拌器。所述裂解反应器3配备有搅拌装置10，能够使菌体悬浮液与裂解试剂得到更好的混合，提高细菌裂解效率；同时中和反应器5也配备有搅拌装置10，能够使菌体裂解液与中和试剂更好的混合，提高混合效率，从而通过本技术的装置能够提取出具有优异质量和高产量的质粒dna。
49.在一个优选的实施方案中，所述离心机9为例如，购自thermo公司，型号为st16r的离心机。
50.在本技术的实施方案中，用于连接各容器之间的管路均为管径相同的酸性硅胶管，所用的三通均是不锈钢三通。
51.在本技术的实施方案中，提供菌体悬浮液的容器1、提供裂解试剂的容器2、提供中和试剂的容器4可以是市售可得的用于盛装液体的容器，例如烧杯、平底烧瓶、试剂瓶等常规容器。
52.在本技术的实施方案中，所述蠕动泵可以是连续性可调速蠕动泵，例如购自于保定兰格恒流泵有限公司，型号为bt100-1f的蠕动泵。
53.本发明的各容器都是密闭容器，可以避免环境污染及气溶胶带来的交叉污染。即使当裂解反应器3和中和反应器5为单口容器时，也可以通过加盖或加塞子的方式来保证其为密闭容器，从而避免环境污染及气溶胶带来的交叉污染。
54.本技术提供一种连续提取质粒dna的方法，该方法使用本技术如上所述的装置实施。
55.优选地，本发明连续提取质粒dna的方法包括：
56.(1)在所述裂解反应器3中在搅拌下将菌体悬浮液与裂解试剂混合进行裂解，得到菌体裂解液；
57.(2)在所述中和反应器5中在搅拌下将所述菌体裂解液与中和试剂混合进行中和，得到混合液；
58.(3)将混合液离心，取上清液，得到质粒。
59.优选地，所述步骤(1)和步骤(2)的搅拌速度为100-300rpm。
60.更优选地，所述菌体悬浮液与裂解试剂通过相同内径的管道以流速比为1:1-1:2进入裂解反应器3中进行裂解，裂解时间为1-10min。
61.进一步优选地，所述菌体裂解液与中和试剂通过相同内径的管道以流速比为2:1-1:1进入中和反应器5中进行中和，中和时间为1-10min。
62.在一个优选的实施方案中，在步骤(1)中，所述菌体悬浮液与裂解试剂通过相同内径的管道以流速比为1:2进入裂解反应器3中进行裂解；所述搅拌速度200rpm；所述裂解时间为2-6min，优选为3min。
63.在一个更优选的实施方案中，在步骤(1)中，所述菌体悬浮液在管道中的流速为1-100ml/min，优选为20-80ml/min，更优选为40-60ml/min；所述裂解试剂在管道中的流速为1-200ml/min，优选为10-180ml/min，更优选为80-120ml/min。
64.在一个优选的实施方案中，所述裂解试剂为0.2m氢氧化钠(naoh)和1wt.％十二烷基硫酸钠(sds)的混合溶液。
65.在一个优选的实施方案中，所述菌体悬浮液通过如下制备：将菌体例如大肠杆菌菌株stbl3悬浮在包含以下的溶液中：50-500mmol/l葡萄糖、25-250mmol/l三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(tris-hcl)、10-100mmol/l乙二胺四乙酸(edta，ph为6.5-8.5)，优选悬浮在包含以下的溶液中：55mmol/l葡萄糖、50mmol/l三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(tris-hcl)、10mmol/l乙二胺四乙酸(edta，ph为8.0)。随后，调整菌悬液od600值为30-50。
66.在一个优选的实施方案中，在步骤(2)中，所述菌体裂解液与中和试剂通过相同内径的管道以流速比为2:1进入中和反应器5中进行中和；所述搅拌速度200rpm；所述中和时间为1-5min，优选为1min。
67.在一个更优选的实施方案中，在步骤(2)中，所述菌体裂解液在管道中的流速为2-300ml/min，优选为50-250ml/min，更优选为100-180ml/min；所述裂解试剂在管道中的流速为1-150ml/min，优选为20-120ml/min，更优选为70-100ml/min。
68.在一个优选的实施方案中，所述中和试剂为3m醋酸钾，ph为5.0
±
0.2。
69.在一个优选的实施方案中，在步骤(3)中，所述离心速度为10000～13000g，优选为12000g，离心时间为5-15min，优选为10min。
70.需要说明的是，在以下实施例中，本发明通过琼脂糖凝胶电泳法，进行灰度值分析从而检测质粒dna超螺旋比例时，计入了rna的含量。
71.实施例
72.以下，说明本技术的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本技术，
而不能理解为对本技术的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
73.【原料及设备】
74.原料：
75.葡萄糖(cas：10010518，购自于国药集团化学试剂有限公司)
76.三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(tris-hcl，自制，由50mm三(羟甲基)氨基甲烷和盐酸配制而成，盐酸的ph调节至8.0)
77.三(羟甲基)氨基甲烷(cas：77-86-1，购自于amresco公司)
78.盐酸(hcl，cas：7647-01-0，购自于国药集团化学试剂有限公司)
79.乙二胺四乙酸(edta，cas：60-00-4，购自于成都华邑药用辅料制造有限责任公司)
80.氢氧化钠(naoh，cas：1310-73-2，购自于成都华邑药用辅料制造有限责任公司)
81.十二烷基硫酸钠(sds，cas：151-21-3，购自于amresco公司)
82.醋酸钾(cas：127-08-2，购自于amresco公司)
83.无水乙醇(cas：64-17-5，购自于天津永大化学试剂有限公司)
84.大肠杆菌菌株(型号：stbl3，商品号：c737303，购自于invitrogen公司)
85.6倍浓缩的dna上样缓冲液(6
×
dnaloadiing buffer，商品号：el101，购自于博迈德生物技术有限公司)
86.dl15000 dna marker核酸电泳(商品号：3582a，购自于takara公司)
87.琼脂糖(商品号：ca1341-500g，购自于coolaber公司)
88.设备：
89.高硼硅生物补料瓶(购自于江苏三爱思科学仪器有限公司)
90.三通(型号为gd25-3，购自于gradeco)
91.蠕动泵(型号为bt100-1f，购自于保定兰格恒流泵有限公司)
92.搅拌器(型号为90-1b，购自于上海梅颖浦仪器仪表制造有限公司)
93.离心机(型号为st16r，购自于thermo公司)
94.超微量分光光度计(型号为nano 300，购自于allsheng公司)
95.凝胶成像仪(型号为wd-9413a，购自于六一厂)
96.琼脂糖水平槽(型号为dycp-31dn，购自于六一厂)
97.电泳仪电源(型号为dyy-6c，购自于六一厂)
98.(一)提取质粒dna
99.1.裂解反应时间
100.实施例1
101.菌体悬浮液的制备：首先将菌体和悬浮溶液(55mmol/l葡萄糖、50mmol/l tris-hcl、10mmol/l edta(ph为8.0))以质量比为1:5置于容器中，然后将该容器放在磁力搅拌器上使菌体均匀悬浮在悬浮溶液中，通过调整悬浮溶液的添加量将od 600值调至30-50。
102.利用图1所示的装置提取质粒dna。裂解反应器3和中和反应器5均为高硼硅生物补料瓶，其下部端口为进料口，上部端口为出料口。提供菌体悬浮液的容器1装有预先制得的菌体悬浮液、提供裂解试剂的容器2装有现配的含0.2m naoh和1wt.％sds的混合液，提供中
和试剂的容器4装有3m醋酸钾(用醋酸调至ph为5.0
±
0.2)。所述提供菌体悬浮液的容器1经第一蠕动泵6、提供裂解试剂的容器2经第二蠕动泵7与裂解反应器3的进料口通过三通连接；所述裂解反应器3的出料口、提供中和试剂的容器4经第三蠕动泵8与中和反应器5的进料口通过三通连接；所述裂解反应器(3)和中和反应器5均配备有搅拌装置10；用于连接各容器之间的管路均为管径相同的酸性硅胶管，所用的三通均是不锈钢三通。
103.设置第一蠕动泵6流速为54ml/min，第二蠕动泵7流速为108ml/min，裂解时间为1min(从溶液进入裂解反应器开始计时)，第三蠕动泵8流速为81ml/min，搅拌装置10的转速为200rpm，中和时间为2min(从溶液进入中和反应器开始计时)，取样品2ml，以离心速度为12000g离心10min，取上清放置4℃用于检测。
104.实施例2-5
105.除了将裂解时间设置为3min、5min、7min、9min，同时根据裂解时间选用具有相适配容积规格的裂解反应器3之外，其它与实施例1相同。
106.2.中和反应时间
107.实施例6-10
108.除了将裂解时间设置为3min并选用具有相适配容积规格的裂解反应器3；将中和时间设置为1min、3min、5min、7min、9min，同时根据中和时间选用具有相适配容积规格的中和反应器5之外，其它与实施例1相同。
109.实施例11
110.按照实施例1中的菌体悬浮液的制备方法制得菌体悬浮液。利用图2所示的装置提取质粒dna。裂解反应器3为黄口瓶并配备有第四蠕动泵11，且中和反应器5为黄口瓶并配备有第五蠕动泵12。提供菌体悬浮液的容器1装有预先制得的菌体悬浮液、提供裂解试剂的容器2装有现配的含0.2m naoh和1wt.％sds的混合液，提供中和试剂的容器4装有3m醋酸钾(ph为5.0
±
0.2)。所述提供菌体悬浮液的容器1经第一蠕动泵6、提供裂解试剂的容器2经第二蠕动泵7与裂解用的黄口瓶的进料口通过三通连接；所述裂解用的黄口瓶的出料口经第四蠕动泵11、提供中和试剂的容器4经第三蠕动泵8与中和用的黄口瓶的进料口通过三通连接，所述中和用的黄口瓶的出料口与第五蠕动泵12连接；所述裂解反应器3和中和反应器5均配备有搅拌装置10；用于连接各容器之间的管路均为管径相同的酸性硅胶管，所用的三通均是不锈钢三通。
111.设置第一蠕动泵6流速为54ml/min，第二蠕动泵7流速为108ml/min，裂解时间为3min(从溶液进入裂解反应器开始计时)，第三蠕动泵8流速为81ml/min，第四蠕动泵11流速为162ml/min，第五蠕动泵12流速为243ml/min，搅拌装置10的转速为200rpm，中和时间为1min(从溶液进入中和反应器开始计时)，取样品2ml，以离心速度为12000g离心10min，取上清放置4℃用于检测。
112.实施例12-15
113.除了将中和时间设置为3min、5min、7min、9min之外，其它与实施例11相同。
114.(二)质粒dna的产量和质量评价
115.1.使用nano 300检测核酸的浓度。
116.首先吸取2μl的te(10mmol/l tris-hcl、1mmol/l edta(ph为8.0))于检测器上，做为空白对照，之后依次吸取2μl样品于检测器上，测量样品的浓度，并进行记录。
117.2.通过琼脂糖凝胶电泳法，进行灰度值分析，检测质粒dna超螺旋比例，澄清液中超螺旋质粒的产量及质粒总产量(检测结果见表1、表2，以及图3、图4)。具体步骤为：将样品稀释至100ng/μl，在进行2倍稀释。取10μl样品于八连排中，做复孔，加入2μl 6
×
dna loadiing buffer。上样量5μl，加5μl的m 15000，胶浓度0.75％。设置仪器的参数为：电压130v，电流300ma，时间35min。
118.图3中为实施例6至10的核酸电泳图谱，其中“m”为maker，1min表示中和时间为1min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品；3min表示中和时间为3min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品；5min表示中和时间为5min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品；7min表示中和时间为7min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品；9min表示中和时间为9min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品。
119.在图4中为实施例11至15的核酸电泳图谱，其中“m”为maker，1min表示中和时间为1min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品；3min表示中和时间为3min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品；5min表示中和时间为5min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品；7min表示中和时间为7min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品；9min表示中和时间为9min，上样分别对应100ng/μl 2个，50ng/μl 2个，共4个样品。
120.表1不同裂解时间的质粒dna的产量和质量评价
[0121][0122]
表2不同中和时间的质粒dna的产量和质量评价
[0123]
[0124][0125]
表1和2中，超螺旋质粒浓度＝质粒浓度
×
超螺旋比例。
[0126]
实验表明，用本技术的装置和方法提取质粒，1l od600值为30-50的菌体悬浮液可以在120分钟内获得质粒dna。从表1和表2中的结果可以看出，本技术的装置和方法能够获得高质量和高产量的质粒dna，当裂解时间控制为3min、中和时间为1min时，得到373.97mg/l(以发酵液od600为50计算)质粒dna，超螺旋比例为34.32％。此外，本技术的装置和方法能够连续制得质粒dna，适合进行工艺放大来大规模提取质粒dna。
[0127]
需要说明的是，本技术不限定于上述实施方式。上述实施方式仅为示例，在本技术的技术方案范围内具有与技术思想实质相同的构成、发挥相同作用效果的实施方式均包含在本技术的技术范围内。此外，在不脱离本技术主旨的范围内，对实施方式施加本领域技术人员能够想到的各种变形、将实施方式中的一部分构成要素加以组合而构筑的其它方式也包含在本技术的范围内。