干细胞培养基的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及及干细胞培养技术领域，具体涉及一种干细胞培养基。
【背景技术】
[0002]诸多研究表明干细胞不仅可以自我更新，在条件合适的情况下能分化成其他功能细胞，因此干细胞有望成为治疗人类疑难疾病的有效手段。然而，干细胞在正常成体组织中含量甚微，在体外如何快速扩增与培养干细胞培养是研究干细胞的作用机制及探索其在治疗人类疾病治疗方法的重要技术。
[0003]干细胞尽量含量甚微，但广泛分布于哺乳动物的各个组织器官，这些组织或器官包括但不局限于骨髓、脐带、脂肪组织、脑组织、视网膜、心脏、肝脏、肺以及皮肤等。大量研究表明，这些低含量的干细胞在体外可以通过适当的方法进行进一步扩增，最常规的一种干细胞培养基就是添加有10%胎牛血清的培养基。然而，采用这种培养基培养的干细胞，不仅生长比较缓慢，而且传递次数超过5代之后其分化成功能细胞的潜能大大降低。
【发明内容】
[0004]为解决上述问题，本发明提供了一种干细胞培养基。
[0005]为实现上述目的，本发明采取的技术方案为:
[0006]干细胞培养基，包括改良DMEM/F12基础培养基和添加剂，所述添加剂包括
[0007]碳酸氢钠400-600 μ g/ml、氨基酸螯合砸8_20ng/ml、重组人胰岛素生长因子10-30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80_120ng/ml、重组人乳铁蛋白7-13 μ g/ml,抗坏血酸50-70 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子3-7 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子l_7ng/ml、二十八烧醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀卩比略烧酮0.1-10 μ g/ml、重组人表皮生长因子1_10 μ g/ml。
[0008]优选地，所述改良DMEM/F12基础培养基包括DMEM/F12基础培养、维生素和营养元素。
[0009]优选地，所述维生素包括维生素C 1-50 μ g/ml，维生素B族30-100 μ g/ml，维生素E 10-100 μg/mL0
[0010]优选地，所述营养元素包括L-谷氨酰胺l_5mg/ml，蛋氨酸锰Ι-lOmg/ml，氯化锌 l_5mg/ml、氨基酸螯合镁 l_5mg/ml、砸蛋氨酸 1.5-5.5mg/ml、植酸酶 0.5-0.75mg/ml、P比啶酸络0.055-0.065mg/ml、碘酸I丐0.1-0.3mg/ml、赖氨酸l_6mg/ml、三氯化六氨合钴0.05-0.065mg/ml、蛋白错 0.55-0.75mg/ml、鹏酵母 2_6mg/ml、氣化铜 0.1-lmg/ml。
[0011]优选地，所述添加剂包括碳酸氢钠400 μ g/ml、氨基酸螯合砸8ng/ml、重组人胰岛素生长因子10ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80ng/ml、重组人乳铁蛋白7 μ g/ml,抗坏血酸50 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子3 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子lng/ml、二十八烧醇0.1 μ g/ml、聚乙稀醇0.1 μ g/ml、聚乙稀P比略烧酮0.1 μ g/ml、重组人表皮生长因子I μ g/ml ο
[0012]优选地，所述添加剂包括碳酸氢钠500 μ g/ml、氨基酸螯合砸14ng/ml、重组人胰岛素生长因子20ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子100ng/ml、重组人乳铁蛋白10 μ g/ml、抗坏血酸60 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子5 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子4ng/ml、二十八烷醇5.05 μ g/ml、聚乙烯醇5.05 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮5.05 μ g/ml、重组人表皮生长因子5.5 μ g/ml。
[0013]优选地，所述添加剂包括碳酸氢钠600 μ g/ml、氨基酸螯合砸20ng/ml、重组人胰岛素生长因子30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子120ng/ml、重组人乳铁蛋白13 μ g/ml、抗坏血酸70 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子7 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子7ng/ml、二十八烧醇10 μ g/ml、聚乙稀醇10 μ g/ml、聚乙稀卩比略烧酮10 μ g/ml、重组人表皮生长因10 μ g/ml。
[0014]本发明具有以下有益效果:
[0015]基能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，干细胞的扩增速度较常规培养基提高3-5倍，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，具有很高的科研和医学应用价值，培养基成分明确，品质稳定，使得培养的干细胞在移植后不容易产生人体排斥反应。
【具体实施方式】
[0016]为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0017]实施例1
[0018]一种干细胞培养基，包括DMEM/F12基础培养、维生素C lyg/ml，维生素B族30 μ g/ml,维生素E 10 μ g/mL、L-谷氨酰胺lmg/ml，蛋氨酸猛lmg/ml，氯化锌lmg/ml、氨基酸螯合镁lmg/ml、砸蛋氨酸1.5mg/ml、植酸酶0.5mg/ml、P比啶酸络0.055mg/ml、碘酸I丐0.lmg/ml、赖氨酸lmg/ml、三氯化六氨合钴0.05mg/ml、蛋白锗0.55mg/ml、碘酵母2mg/ml、氯化铜0.lmg/ml、碳酸氢钠400 μ g/ml、氨基酸螯合砸8ng/ml、重组人胰岛素生长因子10ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80ng/ml、重组人乳铁蛋白7 μ g/ml、抗坏血酸50 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子3 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子lng/ml、二十八烧醇0.1 μ g/ml、聚乙稀醇0.1 μ g/ml、聚乙稀P比略烧酮0.1 μ g/ml、重组人表皮生长因子 I μ g/ml ο
[0019]实施例2
[0020]一种干细胞培养基，包括DMEM/F12基础培养、维生素C 50 μ g/ml，维生素B族100 μ g/ml，维生素 E 100 μ g/mL、L-谷氨酰胺 5mg/ml，蛋氨酸猛 10mg/ml，氯化锌 5mg/ml、氨基酸螯合镁5mg/ml、砸蛋氨酸5.5mg/ml、植酸酶0.75mg/ml、[!比啶酸络0.065mg/ml、碘酸I丐0.3mg/ml、赖氨酸6mg/ml、三氯化六氨合钴0.065mg/ml、蛋白锗0.75mg/ml、碘酵母6mg/ml、氯化铜lmg/ml、碳酸氢钠500 μ g/ml、氨基酸螯合砸14ng/ml、重组人胰岛素生长因子20ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子100ng/ml、重组人乳铁蛋白10 μ g/ml、抗坏血酸60 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子5 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子4ng/ml、二十八烷醇5.05 μ g/ml、聚乙烯醇5.05 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮5.05 μ g/ml、重组人表皮生长因子5.5 μ g/ml。
[0021]实施例3
[0022]一种干细胞培养基，包括DMEM/F12基础培养、维生素C 25.5 μ g/ml，维生素B族65 μ g/ml，维生素E 55 μ g/mL、L_谷氨酰胺3mg/ml，蛋氨酸猛5.5mg/ml，氯化锌3mg/ml、氨基酸螯合镁3mg/ml、砸蛋氨酸3.5mg/ml、植酸酶0.625mg/ml、[!比啶酸络0.06mg/ml、碘酸I丐0.2mg/ml、赖氨酸3.5mg/ml、三氯化六氨合钴0.0575mg/ml、蛋白锗0.65mg/ml、碘酵母4mg/ml、氯化铜0.55mg/ml、碳酸氢钠600 μ g/ml、氨基酸螯合砸20ng/ml、重组人胰岛素生长因子30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子120ng/ml、重组人乳铁蛋白13 μ g/ml、抗坏血酸70 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子7 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子7ng/ml、二十八烷醇10 μ g/ml、聚乙烯醇10 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮10 μ g/ml、重组人表皮生长因10 μ g/mlο
[0023]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.干细胞培养基，其特征在于，包括改良DMEM/F12基础培养基和添加剂，所述添加剂包括 碳酸氢钠400-600 μ g/ml、氨基酸螯合砸8_20ng/ml、重组人胰岛素生长10_30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80-120ng/ml、重组人乳铁蛋白7_13 μ g/ml、抗坏血酸50-70 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子3_7 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子l_7ng/ml、二十八烧醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀醇0.1-10 μ g/ml、聚乙稀R比略烧酮0.1-10 μ g/ml、重组人表皮生长因子1_10 μ g/ml。2.根据权利要求1所述的干细胞培养基，其特征在于，所述改良DMEM/F12基础培养基包括DMEM/F12基础培养、维生素和营养元素。3.根据权利要求2所述的干细胞培养基，其特征在于，所述维生素包括维生素C1-50 μ g/ml，维生素 B 族 30-100 μ g/ml，维生素 E 10-100 μ g/mL。4.根据权利要求2所述的干细胞培养基，其特征在于，所述营养元素包括L-谷氨酰胺l-5mg/ml，蛋氨酸猛l-10mg/ml，氯化锌l_5mg/ml、氨基酸螯合镁l_5mg/ml、砸蛋氨酸1.5-5.5mg/ml、植酸酶 0.5-0.75mg/ml、吡啶酸铬 0.055-0.065mg/ml、碘酸钙 0.1-0.3mg/ml、赖氨酸l_6mg/ml、三氯化六氨合钴0.05-0.065mg/ml、蛋白锗0.55-0.75mg/ml、碘酵母2_6mg/ml、氯化铜 0.1-lmg/ml。5.根据权利要求1所述的干细胞培养基，其特征在于，所述添加剂包括碳酸氢钠400 μ g/ml、氨基酸螯合砸8ng/ml、重组人胰岛素生长因子10ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80ng/ml、重组人乳铁蛋白7 μ g/ml、抗坏血酸50 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子3 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子lng/ml、二十八烷醇0.lyg/ml、聚乙烯醇0.1 μ g/ml、聚乙稀卩比略烧酮0.1 μ g/ml、重组人表皮生长因子I μ g/ml。6.根据权利要求1所述的干细胞培养基，其特征在于，所述添加剂包括碳酸氢钠500 μ g/ml、氨基酸螯合砸14ng/ml、重组人胰岛素生长因子20ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子100ng/ml、重组人乳铁蛋白10 μ g/ml、抗坏血酸60 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子5 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子4ng/ml、二十八烧醇5.05 μ g/ml、聚乙稀醇5.05 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮5.05 μ g/ml、重组人表皮生长因子5.5 μ g/ml。7.根据权利要求1所述的干细胞培养基，其特征在于，所述添加剂包括碳酸氢钠600 μ g/ml、氨基酸螯合砸20ng/ml、重组人胰岛素生长因子30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子120ng/ml、重组人乳铁蛋白13 μ g/ml、抗坏血酸70 μ g/ml、重组人血小板衍生生长因子7 μ g/ml、重组人血管内皮细胞生长因子7ng/ml、二十八烷醇10 μ g/ml、聚乙烯醇10 μ g/ml、聚乙烯吡咯烷酮10 μ g/ml、重组人表皮生长因10 μ g/ml O
【专利摘要】本发明公开了一种干细胞培养基，包括改良DMEM/F12基础培养基和添加剂，所述添加剂包括碳酸氢钠、氨基酸螯合硒、重组人胰岛素生长因子、重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人乳铁蛋白、抗坏血酸、重组人血小板衍生生长因子、重组人血管内皮细胞生长因子、二十八烷醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、重组人表皮生长因子。本发明基能够快速扩增干细胞同时又不影响干细胞的潜能，干细胞的扩增速度较常规培养基提高3-5倍，而且能用于培养多种组织的干细胞，具有极佳的适用性，所培养的干细胞分化能力强，可分化成多种功能细胞，具有很高的科研和医学应用价值，培养基成分明确，品质稳定，使得培养的干细胞在移植后不容易产生人体排斥反应。
【IPC分类】C12N5/0789, C12N5/095, C12N5/0775, C12N5/0735, C12N5/0797, C12N5/074
【公开号】CN105200008
【申请号】CN201510717978
【发明人】李晓娟, 白瑞樱, 郭勇, 王歌, 郭直岳, 朱晓谦, 王亚莉
【申请人】新乡医学院
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年10月23日