鉴定饲用燕麦国审品种的方法及其专用引物组的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，尤其设及一种鉴定饲用燕麦国审品种的方法及其专用 引物组。
【背景技术】
[0002] 种及品种鉴定是种子质量检测工作中的一项重要内容，其主要目的是确定送验样 品与所声明的种或品种的符合程度。随着近年来种子市场贸易量的增加，国内种子经营者 片面追求经济效益而忽视质量，利用其他品种渗杂使假，不仅造成给经济损失，还引起市场 上品种混乱，难辨真伪，使真正的优良品种无法得到有效保护，缩短了品种的利用年限。因 此，准确可靠、快速简便的品种鉴定方法备受关注。SSR分子标记技术是一口新兴的技术，它 是W个体间遗传物质内核巧酸序列变异为基础的遗传标记技术，是DNA水平遗传多态性的 直接反映。与其他遗传标记技术相比，SSR分子标记技术具有信息丰富、检测快速准确、易 于标准化操作等特点，十分适合用来进行植物品种鉴定和分析。
[0003] 燕麦（Avenaspp.)为一年生禾本科早熟禾亚科燕麦属植物，是重要的牧草、饲料 和粮食作物，广泛分布于全世界五大州40多个国家，我国燕麦每年实际种植面积在100万 hm2左右，主要分布在华北北部的冀、晋、蒙的高寒山区、西北的六盘山麓和云贵川的高缔 度、高海拨的高寒山区，它是人类和动物可直接利用的优质粮食及饲料作物之一。燕麦主要 有皮燕麦（亦称有壳燕麦，Avenasativa)、裸燕麦（亦称无壳燕麦，Avenanuda)和野燕麦 等种。皮燕麦主要用于生产巧实精饲料和饲草，通常称为饲用燕麦。目前通过全国草品种 审定委员会审定的饲用燕麦品种有10个，分别为丹麦444、锋利、哈尔满、马匹牙、青引1号、 青引2号、青早1号、苏联、晚燕3号和阿巧。
[0004] 在一些主要农作物如玉米、大豆、小麦、大麦等已经建立起了品种鉴定的快速检测 方法，但目前在燕麦中还没有相关报道。鉴于SSR引物的种间特异性，迫切需要开发用于检 测饲用燕麦国审品种的专用引物和建立相应的检测流程。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的问题是如何鉴定待测草种为或候选为哪种燕麦国审品种。
[0006] 为解决上述问题，本发明首先提供了鉴定待测草种为或候选为哪种燕麦国审品种 的专用引物组。
[0007] 本发明所提供的鉴定待测草种为或候选为哪种燕麦国审品种的引物组，可为如下 (el)、（e2)、（e3)或（e4)中的任一种：
[0008] (el)引物对P04;
[0009] (e2)由引物对POl、引物对P02、引物对P03、引物对P04、引物对P05和引物对P06 组成；
[0010] (e：3)引物对P05; 1 ] (e4)引物对PO1、引物对P02、引物对P03、引物对P06或由下述六个引物对中的任 五对、任四对、任=对、任两对组成：引物对POI、引物对P02、引物对P03、引物对P04、引物对P05和引物对P06。 阳01引所述引物对POl可由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示 的单链DNA分子组成； 阳01引所述引物对P02可由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示 的单链DNA分子组成；
[0014] 所述引物对P03可由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示 的单链DNA分子组成；
[0015] 所述引物对P04可由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示 的单链DNA分子组成；
[0016] 所述引物对P05可由序列表中序列9所示的单链DNA分子和序列表中序列10所 示的单链DNA分子组成；
[0017] 所述引物对P06可由序列表中序列11所示的单链DNA分子和序列表中序列12所 示的单链DNA分子组成。
[0018] 所述引物组可包括所述引物对P04;所述引物组还可包括所述引物对P01、所述引 物对P02、所述引物对P03、所述引物对P05和所述引物对P06中的至少一对。
[0019] 所述引物组可包括所述引物对P05;所述引物组还可包括所述引物对P01、所述引 物对P02、所述引物对P03、所述引物对P04和所述引物对P06中的至少一对。
[0020] 本发明还提供了用于鉴定待测草种为或候选为哪种燕麦国审品种的方法。
[0021] 所述"用于鉴定待测草种为或候选为哪种燕麦国审品种的方法"具体可为方法 一，包括如下步骤：W待测草种的基因组DNA为模板，分别采用所述引物对P01、所述引物对 P02、所述引物对P03、所述引物对P04、所述引物对P05和所述引物对P06进行PCR扩增，然 后按照如下标准进行判断：
[0022] (al)采用所述引物对POl进行PCR扩增：如果得到197bp和199bp的扩增产物、待 测草种为或候选为马匹牙或锋利，如果得到2nbp、219bp和22化P的扩增产物、待测草种为 或候选为阿巧，如果得到213bp和215bp的扩增产物、待测草种为或候选为丹麦444,如果得 到217bp和219bp的扩增产物、待测草种为或候选为青引2号或青早1号，如果得到21化P 和2Ubp的扩增产物、待测草种为或候选为青引1号、苏联、哈尔满或晚燕3号； 阳02引（曰2)采用所述引物对P02进行PCR扩增：如果得到179bp和182bp的扩增产物、 待测草种为或候选为马匹牙；如果得到19化P的扩增产物、待测草种为或候选为阿巧、青引 2号、青引1号、哈尔满或青早1号；如果得到179bp和IWbp的扩增产物、待测草种为或候 选为丹麦444或晚燕3号；如果得到194bp的扩增产物、待测草种为或候选为锋利；如果得 到179bp和19化P的扩增产物、待测草种为或候选为苏联；
[0024](曰3)采用所述引物对P03进行PCR扩增：如果得到238bp和248bp的扩增产物、 待测草种为或候选为马匹牙；如果得到240bp和244bp的扩增产物、待测草种为或候选为阿 巧；如果得到242bp和244bp的扩增产物、待测草种为或候选为丹麦444、青引2号或青引1 号；如果得到240bp和24化P的扩增产物、待测草种为或候选为锋利；如果得到24化P的扩 增产物、待测草种为或候选为苏联；如果得到244bp和24化P的扩增产物、待测草种为或候 选为哈尔满或青早1号；如果得到246bp和25化P的扩增产物、待测草种为或候选为晚燕3 号； 阳02引（曰4)采用所述引物对P04进行PCR扩增：如果得到132bp、136bp和148bp的扩 增产物、待测草种为或候选为马匹牙；如果得到14化P、14化p、148bp和15化P的扩增产物、 待测草种为或候选为阿巧；如果得到13化P、HObp和148bp的扩增产物、待测草种为或候 选为丹麦444 ;如果得到146bp和148bp的扩增产物、待测草种为或候选为锋利；如果得到 144bp、148bp和152bp的扩增产物、待测草种为或候选为青引2号；如果得到142bp和14化P 的扩增产物、待测草种为或候选为苏联；如果得到14化p、144bp和148bp的扩增产物、待测 草种为或候选为青引1号；如果得到14化P、144bp、146bp和148bp的扩增产物、待测草种为 或候选为哈尔满；如果得到134bp、144bp和148bp的扩增产物、待测草种为或候选为晚燕3 号；如果得到144bp和148bp的扩增产物、待测草种为或候选为青早1号；
[0026](曰5)采用所述引物对P05进行PCR扩增：如果得到120bp、122bp、142bp、144bp 和15化P的扩增产物、待测草种为或候选为马匹牙；如果得到124bp、12化p、128bp、13化P、 132bp、142bp、144bp和16化P的扩增产物、待测草种为或候选为阿巧；如果得到124bp、 126bp、128bp、136bp、138bp、140bp、142bp和160bp的扩增产物、待测草种为或候选为丹麦 444 ;如果得到120bp、12化p、138bp、140bp和156bp的扩增产物、待测草种为或候选为锋利； 如果得到124bp、12化p、128bp、130bp、13化p、14化p、144bp和168bp的扩增产物、待测草种 为或候选为青引2号；如果得到12化P、124bp、12化P、14化P、142bp和156bp的扩增产物、待 测草种为或候选为苏联；如果得到13化P、13化P、14化P、14化P和160bp的扩增产物、待测草 种为或候选为青引1号；如果得到13化p、13化p、14化p、142bp和158bp的扩增产物、待测草 种为或候选为晚燕3号；如果得到124bp、12化P、13化P、13化P、14化P、144bp和16化P的扩 增产物、待测草种为或候选为青早1号；如果均不能获得扩增产物、待测草种为或候选为哈 尔满；
[0027] (曰6)采用所述引物对P06进行PCR扩增：如果得到138bp和14化P的扩增产物、待 测草种为或候选为马匹牙；如果得到138bp、14化P、142bp、144bp和146bp的扩增产物、待测 草种为或候选为阿巧；如果得到14化p、144bp、14化p、148bp、150bp和152bp的扩增产物、待 测草种为或候选为丹麦444 ;如果得到148bp和150bp的扩增产物、待测草种为或候选为锋 利、青引2号、苏联、青引1号或晚燕3号；如果得到156bp和158bp的扩增产物、待测草种 为或