抗folr1免疫缀合物给药方案的制作方法

抗folr1免疫缀合物给药方案的制作方法
【专利说明】抗F0LR1免疫缀合物给药方案 发明领域
[0001 ] 本发明的领域整体涉及施用抗F0LR1免疫缀合物以治疗疾病诸如癌症的方法。该 方法提供使不希望的副作用降至最低的给药方案。
[0002] 发明背景
[0003] 癌症是发达国家中死亡的主要原因之一，仅在美国每年就有超过一百万人诊断患 有癌症并且有500, 000例死亡。总的来说，据估计超过1/3的人会在他们的一生中出现某 种形式的癌症。癌症有200多种不同的类型，其中四种（乳腺癌、肺癌、结直肠癌和前列腺 癌）占所有新发病例的一半以上（Jemal等，2003,CancerJ.Clin. 53:5-26) 〇
[0004] 叶酸受体1 (F0LR1)也被称为叶酸受体-α或叶酸结合蛋白，是在细胞质膜上表达 的Ν-糖基化蛋白。F0LR1具有对叶酸和若干还原型叶酸衍生物的高亲和力。F0LR1介导生 理叶酸即5-甲基四氢叶酸向细胞内部的递送。
[0005] F0LR1在绝大多数的卵巢癌以及在许多子宫癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肾癌、肺 癌和乳腺癌中过表达，而在正常组织上的F0LR1表达仅限于肾近端小管、肺的肺泡肺细 胞、膀胱、睾丸、脉络丛以及甲状腺中的上皮细胞顶膜上（WeitmanSD等，CancerRes 52:3396-3401(1992);AntonyAC,AnnuRevNutr16:501-521(1996);KalliKR等Gynecol Oncol108:619-626(2008))。F0LR1的这种表达模式使其成为F0LR1导向的癌症疗法的理 想靶标。
[0006] 因为卵巢癌在晚期之前通常是无症状的，所以它经常是在晚期被诊断出来，并且 用目前可用的方法（通常是减积手术（surgicalde-bulking)之后的化疗药物）治疗时具 有不良预后（vonGruenigenV等，Cancer112:2221-2227(2008);AyhanA等，AmJObstet Gynecol196:81e81-86 (2007);HarryVN等，ObstetGynecolSurv64:548-560(2009))。 因此，对用于卵巢癌的更有效的治疗剂存在明显的尚未满足的医疗需求。
[0007] 抗体作为治疗此类癌症的有前景的方法逐渐兴起。此外，包含缀合到另一种化合 物（例如，细胞毒素）的抗体的免疫缀合物也作为潜在的治疗剂正受到研究。尤其是，包 含美登木素（其为植物源性抗真菌和抗肿瘤剂）的免疫缀合物已证实具有一些有益的活 性。S.M.Kupchan等首先报道了由卵叶美登木（Maytenusovatus)和山檨美登木（Maytenus buchananii)的乙醇萃取物中分离出三种桥环（ansa)大环内酯，它们连同其在鼠模型中以 yg/kg剂量范围抗白血病作用的论证一起是美国专利号3, 896, 111的主题。然而，美登木 素具有不可接受的毒性，从而引起中枢和外周神经病变以及副作用：尤其是恶心、呕吐、腹 泻、肝功能检测指标升高以及少见的虚弱和嗜睡。该总体毒性通过将美登木素缀合到抗体 而一定程度地降低，因为抗体缀合物对抗原阴性细胞的毒性比对抗原阳性细胞的毒性低几 个数量级。然而，包含美登木素的免疫缀合物仍与不可接受水平的不良副作用相关。例如， 注射高剂量的包含美登木素的抗F0LR1免疫缀合物的动物显示出眼毒性。该毒性的原因 (例如，可能是与Cmax还是与AUC相关）尚不清楚。因此，仍需要确定在人中在治疗上有效 的但避免不良反应的抗F0LR1免疫缀合物的特定给药方案。
[0008] 发明概述
[0009] 本文提供以使不希望的副作用降至最低的治疗有效的给药方案施用抗F0LR1免 疫缀合物的方法。因此，本文所述的是用于治疗患有癌症的患者的方法，其包括向患者施用 有效剂量的结合到F0LR1的免疫缀合物，其中免疫缀合物以约3.Omg/kg至约6mg/kg的剂 量施用。抗F0LR1免疫缀合物可包含带电的接头。在一些实施方案中，抗F0LR1免疫缀合 物包含抗体huMovl9、接头磺基-SPDB和美登木素DM4。
[0010] 在一些实施方案中，免疫缀合物包含抗体或其抗原结合片段，其竞争性抑制具有 SEQIDN0:3和SEQIDN0:5的序列的抗体与F0LR1的结合。在一些实施方案中，抗体或其 片段包含huMovl9 的CDR(即，SEQIDN0:6-10 和 12 或SEQIDN0:6-9、ll和 12)。在一些 实施方案中，抗体或片段不含鼠Movl9的六个CDR(即，SEQIDN0:6-9、16和12)。在一些 实施方案中，抗体为huMovl9。在一些实施方案中，免疫缀合物包含美登木素。在一些实施 方案中，美登木素为DM4。在一些实施方案中，免疫缀合物包含磺基-SPDB接头。在一些实 施方案中，免疫缀合物为頂GN853 (huMovl9-磺基-SroB-DM4)。
[0011] 在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SPDB-DM4)以 约3.Omg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺 基-STOB-DM4)以约3. 3mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如， huMovl9-磺基-SH)B-DM4)以约4.Omg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂 (例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)以约5mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，抗F0LR1 结合剂（例如，huMovl9-磺基-SPDB-DM4)以约5. 5mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中， 抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SPDB-DM4)以约6mg/kg的剂量施用。
[0012] 根据本文所述的方法，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)可以约 每4周施用一次。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 约每3周施用一次。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 约每2周施用一次。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 约每1周施用一次。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 约每周施用两次。
[0013] 在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-STOB-DM4)通过静脉 内输注约每21天施用一次。
[0014] 根据本文所述的方法，施用可产生约10,000-18,000h·yg/mL、约 10, 000-17, 500h·μg/mL、约 10, 000-17, 000h·μg/mL或约 10, 000-16, 000h·μg/mL的 AUC(。inf)。在一些实施方案中，AUC(。inf)为约 12,OOOh·μg/mL至约 13, 500h·μg/mL。在 一些实施方案中，AUC(。inf)为约12, 708h·μg/mL。在一些实施方案中，AUC(。inf)为实施例 1中所得的并在图1中所示的AUC(。inf)。
[0015] 根据本文所述的方法，施用可产生约7, 500-12, 500h·yg/mL、约 7, 500-12, 000h·μg/mL、约 7, 500-10, 000h·μg/mL或约 8, 000-10, 000h·μg/mL的 AUCW16S)。在一些实施方案中，AUCW16S)为约 8,OOOh·μg/mL至约 8, 500h·μg/mL。在一 些实施方案中，AUC(。16S)为约8, 254h·μg/mL。在一些实施方案中，AUC(。16S)为实施例1中 所得的并在图1中所示的AUC(。168)。
[0016] 根据本文所述的方法，施用可产生约50-250μg/mL、约50-200μg/mL、约 50-175μg/mL、约 50-150μg/mL、约 50-125μg/mL、约 75-250μg/mL、约 75-200μg/mL、约 75-175μg/mL、约 75-150μg/mL或约 75-125μg/mL的Cmax。在一些实施方案中，Cmax为 约100μg/mL至约150μg/mL。在一些实施方案中，Cmax为约100μg/mL至约120μg/mL。 在一些实施方案中，Cmax为约108μg/mL。在一些实施方案中，Cmax是在实施例1中所得 的并在图1中所示的Cmax。
[0017] 根据本文所述的方法，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)的 清除率可低于l.OmL/h/kg。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺 基-STOB-DM4)的清除率低于0.6mL/h/kg。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如， huMovl9_磺基-SFOB-DM4)的清除率为约0. 2mL/h/kg至约0. 6mL/h/kg。在一些实施方 案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SPDB-DM4)的清除率为约0· 3mL/h/kg至约 0. 4mL/h/kg。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)的清除 率为约0· 3mL/h/kg。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 的清除率为约〇.4mL/h/kg。在一些实施方案中，清除率是在实施例1中所得的并在图1中 所示的清除率。
[0018] 根据本文所述的方法，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-STOB-DM4)的半衰 期可为至少约4天。在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-STOB-DM4) 的半衰期为约3至约5天，或约4至约4. 5天。在一些实施方案中，半衰期为约4. 4天。在 一些实施方案中，半衰期是在实施例1中所得的并在图1中所示的半衰期。
[0019] 根据本文所述的方法，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)的稳态 表观分布容积（Vss)可为约25至约100mL/kg、约25至约75mL/kg、约30至约75mL/kg或 约35至约70mL/kg。在一些实施方案中，Vss为约55mL/kg至约65mL/kg。在一些实施方 案中，Vss为约61mL/kg。在一些实施方案中，Vss是在实施例1中所得的并在图1中所示 的Vss〇
[0020] 在一些实施方案中，抗F0LR1结合剂（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)经静脉内 施用。
[0021] 本文所述的方法可用于治疗癌症。在一些实施方案中，癌症选自卵巢癌、脑癌、乳 腺癌、子宫癌、子宫内膜癌、胰腺癌、肾癌（例如，肾细胞癌）和肺癌（例如，非小细胞肺癌或 细支气管肺泡癌（BAC))。在一些实施方案中，癌症为卵巢癌或肺癌。在一些实施方案中，癌 症为上皮性卵巢癌。
[0022] 在一些实施方案中，癌症表达F0LR1多肽或核酸。在一些实施方案中，癌症具有升 高的F0LR1多肽表达水平，如通过免疫组织化学（IHC)所测量。例如，在一些实施方案中， 癌症是以2异质或更高的水平（通过IHC确定）表达F0LR1多肽的癌症。在一些实施方案 中，癌症是以2均质或更高的水平（通过IHC确定）表达F0LR1多肽的癌症。在一些实施 方案中，癌症是以3异质或更高的水平（通过IHC确定）表达F0LR1多肽的癌症。在一些 实施方案中，癌症是以3均质或更高的水平（通过IHC确定）表达F0LR1多肽的癌症。在 一些实施方案中，癌症是以2异质或更高的水平（通过IHC确定）表达F0LR1多肽的肺癌。 在一些实施方案中，癌症是以3异质或更高的水平（通过IHC确定）表达F0LR1多肽的肺 癌。在一些实施方案中，癌症是以3异质或更高的水平表达F0LR1多肽的上皮性卵巢癌（例 如，铂耐性的或复发性的或难治性的）。
[0023] 在一些实施方案中，方法还包括向患者施用类固醇。类固醇可作为预治疗而施用， 即，在施用抗F0LR1结合剂之前。类固醇可以是地塞米松。
[0024] 本文所述的方法可导致肿瘤尺寸的减小。本文所述的方法可导致卵巢癌患者中 CA125水平的降低。在一个实例中，在治疗前测量得自卵巢癌患者的样品中的CA125水平， 然后在治疗后测量一次或多次，并且CA125水平随着时间的降低指示疗效。本文所述的方 法可导致癌症治疗之间的时间延长。本文所述的方法可导致无进展生存期（PFS)延长。本 文所述的方法可导致无病生存期（DFS)延长。本文所述的方法可导致总生存期（0S)延长。 本文所述的方法可导致完全应答（CR)增加。本文所述的方法可导致部分应答（PR)增加。 本文所述的方法可导致稳定的疾病（SD)增加。本文所述的方法可导致进行性疾病（PD)减 少。本文所述的方法可导致进展时间（TTP)减少。
[0025] 本文所述的方法还可以导致不良反应减少。
[0026] 尤其是，本文所提供的给药方案实现功效（例如，PR)与降低的毒性之间最佳的平 衡，如例如在实施例1和2以及图1中所示。
[0027] 附图简述
[0028] 图1提供如实施例1中所述因頂GN853 (0· 15mg/kg至7.Omg/kg)的施用而产生的 药代动力学数据。
[0029] 发明详述
[0030] 本发明提供F0LR1结合免疫缀合物的新给药方案。
[0031] I.定义
[0032] 为了有利于理解本发明，下文定义了多个术语和短语。
[0033] 如本文所用的术语"人叶酸受体1"、"F0LR1"或"叶酸受体α(FR-α) "除非另外指 明否则是指任何天然的人F0LR1。因此，所有这些术语均可指如本文所指示的蛋白或核酸序 列。术语"F0LR1"涵盖"全长"、未加工的F0LR1，以及由细胞内的加工所产生的任何形式的 F0LR1。该术语还涵盖天然存在的F0LR1变体，例如剪接变体、等位基因变体以及同工型。本 文所述的F0LR1多肽可以从多种来源诸如从人组织类型或从另一种来源中分离，或通过重 组或合成方法制备。F0LR1序列的实例包括但不限于NCBI参考号P15328、NP_001092242. 1、 AAX29268.UAAX37119. 1、ΝΡ_057937· 1 和ΝΡ_057936· 1。
[0034] 术语"抗体"意指通过免疫球蛋白分子可变区内的至少一个抗原识别位点识别并 特异性结合到靶标的免疫球蛋白分子，所述靶标诸如为蛋白、多肽、肽、碳水化合物、多核苷 酸、脂质或前述物质的组合。如本文所用，术语"抗体"涵盖完整的多克隆抗体、完整的单克 隆抗体、抗体片段（诸如Fab、Fab'、F(ab'）2和Fv片段）、单链Fv(SCFv)突变体、多特异性 抗体诸如由至少两个完整的抗体生成的双特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包 含抗体的抗原决定部分的融合蛋白，以及包含抗原识别位点的任何其它修饰的免疫球蛋白 分子，只要该抗体表现出所需的生物活性即可。抗体可以是以下五大类免疫球蛋白中的任 何一类 ：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其亚类（同种型）（例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和IgA2)，分别基于它们的重链恒定结构域（分别称为α、δ、ε、γ和μ)的种类。不同 类的免疫球蛋白具有不同的且熟知的亚基结构和三维构型。抗体可以是裸抗体或缀合到其 它分子，诸如毒素、放射性同位素等。
[0035] "阻断性"抗体或"拮抗性"抗体是抑制或降低其结合的抗原诸如F0LR1的生物活 性的抗体。在一些实施方案中，阻断性抗体或拮抗性抗体基本上或完全抑制抗原的生物活 性。生物活性可以降低 10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95%或甚至100%。
[0036] 术语"抗F0LR1抗体"或"结合到F0LR1的抗体"是指这样的抗体，其能够以足够 的亲和力结合F0LR1以使得该抗体可用作靶向F0LR1的诊断剂和/或治疗剂。抗F0LR1 抗体与不相关的非F0LR1蛋白的结合程度可小于抗体结合到F0LR1的约10%，如例如通过 放射性免疫测定法（RIA)所测定。在某些实施方案中，结合到F0LR1的抗体具有<ΙμΜ、 彡ΙΟΟηΜ、彡ΙΟηΜ、彡InM或彡0·InM的解离常数（Kd)。
[0037] 术语"抗体片段"是指完整抗体的一部分，并指完整抗体的抗原决定可变区。抗体 片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab'）2和Fv片段、线性抗体、单链抗体以及由抗体片 段形成的多特异性抗体。
[0038] "单克隆抗体"是指在单个抗原决定簇或表位的高度特异性识别和结合中涉及到 的均质性抗体群。这与多克隆抗体形成对比，多克隆抗体则通常包括针对不同抗原决定簇 的不同抗体。术语"单克隆抗体"涵盖完整及全长单克隆抗体以及抗体片段（诸如Fab、 Fab'、F(ab'）2、Fv)、单链（scFv)突变体、包含抗体部分的融合蛋白以及任何其它包含抗原 识别位点的修饰的免疫球蛋白分子。此外，"单克隆抗体"是指通过任何多种方式制备的此 类抗体，包括但不限于通过杂交瘤、噬菌体筛选、重组表达和转基因动物。
[0039] 术语"人源化抗体"是指作