Pzp基因在胆管癌诊断和治疗中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体地设及PZP基因在胆管癌诊断和治疗中的用途。
【背景技术】
[0002] 胆管癌是指原发于左右肝管汇合部至胆总管下端的肝外胆管恶性肿瘤，其病因尚 不清楚，与其发病可能有关的因素有：溃瘍性结肠炎、胆结石、中华分枝睾吸虫感染、胆总管 囊肿等，运些因素都能增加胆管癌发病的危险性。临床表现主要为伴有上腹部不适的进行 性黄痘、食欲不振、消瘦、痊痒等。如肿瘤破溃出血，可有黑便或大便潜血试验阳性、贫血等 表现。
[0003] 胆管癌的恶性程度极高，在欧美地区发病率很低，但在东南亚地区及我国的发病 率成上升趋势，且整体治疗水平很不理想，迄今无满意的治疗方法。由于临床上出现症状较 晚，早期诊断困难，同时由于胆管癌具有沿胆管壁局部浸润的生物学特性，易侵犯肝口部血 管及二级胆管，根治性手术切除的机会不多（约15%~20% )，常规手术后导致局部复发， 预后较差平均生存期为6~12个月，而5年存活率为2%~16. 5%。由于其对化疗与放疗 等非手术治疗不敏感，综合治疗手段目前仍无明确改善远期疗效的意义，早期预防、早期发 现、早期治疗是提高人胆管癌手术根治率的关键。
[0004] 目前临床上用于胆管癌诊断的方法包括：临床表现、血液检查、血清肿瘤标记物检 查、胆管癌目前并没有发现特异性肿瘤标记物，仅CA-19、CA125、CEA有一定价值；影像学检 查、ERCP和PTC、十二指肠镜、肠道母子镜、细胞学和组织学诊断。但是上述方法的使用不能 提供一种特意和敏感的诊断。尽管现在临床上会使用一些肿瘤标记物进行检查，但由于运 些肿瘤标记物相对于胆管癌是非特异性性的，其仅具有一定的参考价值，因此发现一种特 异性的胆管癌标记物具有重要的意义。
【发明内容】
[0005] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于胆管癌早期诊断的 分子标志物-PZP基因。相比传统的胆管癌的诊断方法，使用基因标志物来诊断胆管癌具有 及时性、特异性和灵敏性，使患者在癌症早期就能知晓癌症风险，针对风险高低，采取相应 的预防和治疗措施。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007]本发明提供了一种PZP基因及其表达产物在制备诊断胆管癌的产品中的应用。
[0008] 进一步，上面所提到的诊断产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位 杂交或忍片检测PZP基因及其表达产物的表达水平W诊断胆管癌的产品。
[0009] 进一步，所述用RT-PCR诊断胆管癌的产品至少包括一对特异扩增PZP基因的引 物；所述用实时定量PCR诊断胆管癌的产品至少包括一对特异扩增PZP基因的引物；所述 用免疫检测诊断胆管癌的产品包括：与PZP蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断 胆管癌的产品包括：与PZP基因的核酸序列杂交的探针；所述用忍片诊断胆管癌的产品包 括：蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括与PZP蛋白特异性结合的抗体，基因忍片包 括与PZP基因的核酸序列杂交的探针。
[0010] 本发明提供了一种诊断胆管癌的产品，所述的产品能够通过检测胆管组织中PZP基因的表达水平来诊断胆管癌。
[0011] 进一步，上面所述的产品包括忍片、或试剂盒。其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白 质忍片；所述基因忍片包括固相载体W及固定在固相载体上的寡核巧酸探针，所述寡核巧 酸探针包括用于检测PZP基因转录水平的针对PZP基因的寡核巧酸探针；所述蛋白质忍片 包括固相载体W及固定在固相载体上的PZP蛋白的特异性抗体；所述试剂盒包括基因检测 试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测PZP基因转录水平的试 剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括PZP蛋白的特异性抗体。
[0012] 进一步，上面所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或忍 片方法检测PZP基因表达水平过程中所需的试剂。优选地，所述试剂包括针对PZP基因的 引物和/或探针。
[0013] 进一步，所述基因忍片可用于检测包括PZP基因在内的多个基因（例如，与胆管癌 相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质忍片可用于检测包括PZP蛋白在内的多个蛋白 质（例如与胆管癌相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与胆管癌的标志物同时检 巧。，可大大提高胆管癌诊断的准确率。
[0014] 本发明还提供了PZP基因及其表达产物在制备治疗胆管癌的药物组合物中的应 用。
[0015] 进一步，所述药物组合物包括能够促进PZP基因表达或增强PZP表达功能的试剂。
[0016] 进一步，所述试剂包括：含有能编码功能性PZP蛋白的核酸的试剂、PZP蛋白的激 活剂、含有PZP蛋白质的试剂。
[0017] 其中，所述含有能编码功能性PZP蛋白的核酸的试剂可W是在有利条件下翻译成 活性形式的PZP蛋白的单链核酸（如mRNA)或双链核酸（如DNA)，所述的核酸可W连接在 表达载体上或重组到宿主细胞里，只要能编码成活性PZP蛋白，任何一种PZP基因的携带方 式均可。所述的PZP蛋白激活剂是指刺激PZP蛋白活性、增加PZP蛋白活性、促进PZP蛋白 活性、增强PZP蛋白激活、使PZP蛋白活性敏感化或上调PZP蛋白活性的试剂，如去甲基化 试剂、PZP启动子和/或增强子特异性的转录激活剂、PZP蛋白的激动剂（如激活抗体）等。
[0018] 本发明还提供了上面所述的试剂在制备治疗胆管癌的药物组合物中的应用。
[0019] 本发明还提供了一种治疗胆管癌的药物组合物，所述药物包括能够促进PZP基因 表达或增强PZP表达功能的试剂。
[0020] 本发明的药物可W用于补充内源性的PZP蛋白的缺失或不足，通过提高PZP蛋白 的表达，从而治疗因PZP蛋白减少导致的胆管癌。
[0021] 本发明所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、 粘粒、隧菌体、病毒等。
[0022] 在本发明中，术语"宿主细胞"包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的 例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物 细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，如CH0细胞、cos细胞等。
[0023] 进一步，本发明中PZP蛋白或编码PZP蛋白的核酸可W通过脂质体给予，所述脂质 体的作用是将药物祀向于特定的组织，w及增加药物的半衰期。脂质体包括乳化剂、起泡 剂、液态脂质、固态脂质、不溶性单层、憐脂分散剂、表面活性剂等。所述的脂质体中还可W 包括能与祀向的细胞中的受体分子结合或其他治疗性或免疫原性组合物。
[0024] 进一步，本发明的药物还包括药学上可接受的一种或多种载体，运类载体包括 (但并不限于）：稀释剂或填充剂如乳糖、葡萄糖、薦糖、甘露醇、山梨醇、纤维素（如乙基纤 维素、微晶纤维素）、糖胶、果胶、聚丙締酸醋和/或憐酸氨巧、硫酸巧，润滑剂如娃石、滑石、 硬脂酸、硬脂酸儀或硬脂酸巧、金属硬脂酸盐、胶体二氧化娃、氨化植物油、玉米淀粉、苯甲 酸钢和/或聚乙二醇，粘合剂如娃酸儀侣、淀粉糊、明胶、黄巧胶、甲基纤维素、簇甲基纤维 素钢、聚乙締化咯烧酬和/或径丙基纤维素，崩解剂如淀粉（如马铃馨淀粉或淀粉钢）、乙醇 酸盐（醋）、琼脂、褐藻酸或其钢盐、或起泡混合物，湿润剂如月桂基硫酸钢和/或吸收剂、着 色剂、芳香剂和甜味剂。可W将本发明的化合物和药剂及它们生理学上可接受的盐及溶剂 化物进行配制，用于通过任何合适的途径给药，包括吸入给药、局部给药、经鼻给药、经口给 药、肠胃外给药或直肠给药。
[0025] 药物组合物可W被配制成任何的给药类型，例如，利用注射器或其它装置的皮内 注射、皮下注射、静脉内注射、腹膜内注射、胸膜内注射、膀脫内注射、冠状动脉内或肿