马齿苋中甘菊蓝结构新化合物及其提取分离方法
【专利摘要】本发明涉及中药提取、分离领域，尤其涉及从马齿苋中提取、分离和鉴别出的一种甘菊蓝结构新化合物及其提取分离方法。一种甘菊蓝结构新化合物，分子式为C13H18O2，命名为Oleracone B。还提供上述新化合物的提取分离方法，依次采用水煎煮提取、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析、ODS中压柱、及SephadexLH?20，成功的提取分离出甘菊蓝结构新化合物，该新化合物具有抗炎、镇痛和抗肿瘤作用，本发明所述新化合物及其盐或衍生物可以作为其他化合物合成先导物，以及新药开发和药理活性研究的原料，用于制备抗炎、治疗疼痛和抗肿瘤的药物或保健品。
【专利说明】
马齿宽中甘菊蓝结构新化合物及其提取分离方法
技术领域
[0001] 本发明设及中药提取、分离领域，尤其设及从马齿宽药材中提取、分离和鉴别出的 一种甘菊蓝结构新化合物及其提取分离方法。
【背景技术】
[0002] 马齿宽(Portulaca oleracea L.)，又名长命菜、马宽菜，为马齿宽科植物。马齿宽 耐旱耐溃，且耐光耐阴，分布广泛，资源丰富，作为药食两用的野生植物备受关注，2015版 《中华人民共和国药典》中收载马齿宽的干燥地上部分入药，具有清热解毒、凉血止血、止频 等功效，用于热毒血频、痴肿疗疮、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤、便血、持血、崩漏下血等。
[0003] 马齿宽现代药理学研究表明，其具有抗炎止痛、抗菌抗病毒、降血压、降血脂、抗氧 化、抗癌、松弛骨骼肌和平滑肌、调节免疫功能等作用。研究表明马齿宽中众多化学成分，为 其多样的药理作用提供了物质基础，马齿宽主要化学成分包括黄酬类、香豆素、祗类、酱类、 生物碱、氨基酸、各种色素类和矿物质类等。其中生物碱是马齿宽中一类主要的化学成分， 目前已报道的生物碱类成分有去甲肾上腺素、多己胺、少量多己、腺巧、尿喀晚、腺嚷岭、N， N-二环己基脈、尿囊素、N-反式-阿魏酷基酪胺;还有环二肤生物碱和酷胺类生物碱:马齿宽 酷胺 A-I、K、L、N-S。
[0004] 目前从马齿宽中分离出的化学成分大多数是已知的，且结构新颖性较低，因此，对 马齿宽中新化合物的开发和分离是亟待需要的。
【发明内容】
[0005] 针对上述问题，本发明提供从马齿宽中提取的一种甘菊蓝结构新化合物，经研究 发现其具有抗炎、镇痛、抗肿瘤的作用；同时提供一种针对本发明新化合物的简便、快速、环 保、纯度高的提取分离方法。
[0006] 为实现本发明的上述目的，本发明提供一种甘菊蓝结构新化合物，分子式为 Cl出18〇2，命名为Oleracone B，化学结构式为：
[0007]
0- )
[000引为实现本发明的上述目的，本发明还提供一种马齿宽中甘菊蓝结构新化合物的提 取分离方法，具体步骤为。
[0009] 步骤1、取马齿宽干燥药材，采用水煎煮提取，水提液滤过，合并滤液直接加热浓 缩，放凉至室溫，得药液备用。
[0010] 步骤2、将步骤1中药液用乙酸乙醋反复萃取，减压回收乙酸乙醋至浸膏，得到乙酸 乙醋萃取物。
[0011] 步骤3、将步骤2中乙酸乙醋萃取物经硅胶柱层析分离，依次用石油酸-丙酬梯度洗 脱得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的洗脱部位，将合并后的洗脱 部位经减压浓缩至干，得到浓缩物备用。
[0012] 步骤4、将步骤3中所得浓缩物再经预处理的0DS柱(Octadecylsilyl，十八烷基娃 烧键合硅胶填料)层析分离，用甲醇-水梯度洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检 巧。，显色，将各显色的洗脱部位分别减压浓缩至干，得到浓缩物备用。
[0013] 步骤5、将步骤4中所得各浓缩物经预处理的S邱hadex LH-20(^丙基葡聚糖凝胶） 层析分离，分别W甲醇-水梯度洗脱，得到一种来源于马齿宽的甘菊蓝结构新化合物。
[0014] 所述0DS和S邱hadex LH-20凝胶的预处理过程为甲醇浸泡过24小时，上柱，用甲醇 洗至滴入水中无混浊，再W初始流动相平衡。
[0015] 与现有技术相比本发明的有益效果。
[0016] 本发明中所述马齿宽甘菊蓝结构新化合物的分离和药理活性研究未被现有的论 文期刊所报道;本发明提供一种来源于马齿宽的甘菊蓝结构新化合物W及一种针对本发明 新化合物的提取分离方法，依次采用水煎煮提取、乙酸乙醋萃取、硅胶柱层析、0DS中压柱、 及S邱hadex LH-20，成功提取分离出甘菊蓝结构新化合物，该方法操作步骤仅为五步，操作 方法简便及快速;提取分离过程主要采用水提取及乙酸乙醋萃取，工艺方法环保;且经该方 法分离得到的化合物纯度较高，均大于90%;此外经研究表明W上所述化合物具有抗炎、镇 痛和抗肿瘤作用，因此本发明新化合物及其盐和衍生物可W作为其他化合物合成先导物， W及新药开发和药理活性研究的原料，亦可用于制备抗炎、治疗疼痛和抗肿瘤的药物。
【附图说明】
[0017] 图1为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B的紫外光谱图。
[0018] 图2为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B的红外光谱图。
[0019] 图3为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B的高分辨质谱图。
[0020] 图4为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B iH-NMR光谱图。
[0021] 图5为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B Uc-NMR光谱图。
[0022] 图6为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B的核磁共振碳谱(DEPT)光谱图。
[0023] 图7为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B的核磁共振iH-i肥0SY光谱图。
[0024] 图8为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B的核磁共振HMBC光谱图。
[0025] 图9为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B的核磁共振服QC光谱图。
[00%]图10为本发明甘菊蓝结构新化合物Oleracone B的核磁共振N0ESY光谱图。
【具体实施方式】
[0027] 实施例1。
[0028] 本发明提供一种甘菊蓝结构新化合物，分子式为打抽18〇2，化学结构式为。
[0029]
[0030] 所述甘菊蓝结构新化合物根据结构命名为Oleracone B，表1为该甘菊蓝结构新化 合物的核磁数据:iH-NMR与Uc-NMR在CDC13中。
[0031 ]表1:本发明甘菊蓝结构新化合物化合物Oleracone B的核磁数据。
[0032]
[0033]
[0034] 请参阅图1-10,本发明所述的甘菊蓝结构新化合物的结构鉴定与推导。
[00；3日]Oleracone B:无色油状物，[α]% 〇(c 0.1 ,MeOH)，易溶于氯仿和甲醇等，不溶、微 溶于水。UV(MeOH)Amax:295nm，IRv〇-H 3420,化=0 1760,化=c1659，1625，v〇-h 1310,化=0 1203， 丫=cH 893cm-l，HRESI( + )T0FMS给出m/z:207.1389[M+HΓ的准分子离子峰，分子量为 206.1310。结合iH-NMR，"C-NMR W及DEPT数据，推测该化合物可能的分子式为Ci3出802，不饱 和度为5。"C-NIR谱和DEPT谱显示13个碳信号，分别3个C也(δ: 23.0，24.3，24.4)、3个C也(δ; 27.5,27.6,49.1)、2个CH(S :122.1,123.5)、5 个季碳(一个幾基碳，199.7;两个双键碳，δ; 149.9,154.1;两个脂肪碳，δ :39.8,71.3)。
[0036] iH-NMR 谱显示3 个甲基信号，分别为 δl.00(3H，s)，δl.l3(3H，s)，δl.93(3H，s)。3个 亚甲基信号为δ1.75(lH，dd，J = 5.0,1.7)，δ1.97(lH，dd，J = 5.0,1.7) ;S2.17(lH，d，J = 5)， 62.47(^，(1^ = 5)和62.07(^，(1^=15.0)，62.88(^，(1^=15.0)，2个次甲基信号为5 5.67(lH，s)，δ6.00αH，s)。由H-HC0SY谱可知，有相互禪合关系的H为δl.00与δl.l3，δl.93 与δ6.00，δ1.97与δ5.67。其中δ1.93化学位移较大，说明该甲基可能与双键相连。
[0037] 根据HMBC相关谱所列如下信息，出-1/与C-3a和C-8;也-2与C-1，C-3a，C-8和C-8a; Hb-2 与 C-6;出-9 与 C-2，C-3，C-3a 和 C-10;出-10 与 C-3，C-3a和C-9;此-4 与 C-3，C-3a和C-5; Hb- 6 与 C-4，C-7，C-8和 C-11; Hi-8 与 C-1，C-3a，C-6，C-fe和C-11;出-11 与 C-6，C-7 和C-8之间的相 互禪合，可W推断出该化合物基本骨架为多取代的甘菊蓝环状结构，结合H-H COSY谱所示 信息可知甲基C-11与C-7相连，甲基C-9和C-10均连接在C-3上.由于C-6化学位移偏高，推断 其与C-5所在幾基相连接。除上述各基团外，由红外光谱所示V0-H 3420信号，可知该化合物 有一个径基，同时，C-：3a出现在碳谱高场区，故推断该径基与C-3a相连，综上所述，可确定该 新化合物为上述结构。
[0038] 本发明还提供上述甘菊蓝结构新化合物的提取分离方法，具体步骤为：
[0039] 步骤1:称取马齿宽干燥药材150kg，采用水煎煮提取，水用量为药材的8~16倍，煎 煮提取两次，每次煎煮2小时，水提液滤过，合并滤液直接加热浓缩，放凉至室溫，得药液备 用。
[0040] 步骤2:将步骤1中所得药液，用乙酸乙醋反复萃取3次，乙酸乙醋与浓缩液的体积 比例为l:l(v:v)，4(rcw下减压回收乙酸乙醋至浸膏，得到乙酸乙醋萃取物。
[0041] 步骤3:将步骤2中所得乙酸乙醋萃取物干法上样，经硅胶柱层析分离，其中硅胶为 200~300目，依次用石油酸-丙酬（l:l、l:2、l:3、l:5，v:v)梯度洗脱，共得到150个部位（即 共得到150个瓶，每瓶400mL)，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的90~130洗脱部位（即 合并显色的90~130瓶，弃去1~89瓶与131~150瓶），将合并后的90~130部位经40°CW下 减压浓缩至干，备用。
[0042] 步骤4:将步骤3中所得物再经预处理的0DS中压柱层析分离，其中填料粒度为20~ 40μπι;用甲醇-水（10/90，30/70，50/50，70/30，100/0，v/v)梯度洗脱（加压，使流速为 1ml/ min,溫度为室溫），得到10个部位（即梯度洗脱得10个瓶，每瓶200mL)，经薄层色谱进行检 巧。，显色，将显色的部位分别合并，50°C W下减压浓缩至干，备用。所述0DS的预处理过程为 甲醇浸泡过24小时，上柱，用甲醇洗至滴入水中无混浊，再W初始流动相平衡。
[0043] 步骤5:将步骤4中所得各显色部位经预处理的Se地adex LH-20柱层析，分别W甲 醇-水(70/30，v/v)等度洗脱，得到甘菊蓝结构新化合物。经超高效液相色谱，归一法测定纯 度为90~99 %。所述Se地adex LH-20凝胶的预处理过程为甲醇浸泡过24小时，上柱，用甲醇 洗至滴入水中无混浊，再W初始流动相平衡。
[0044] 本发明甘菊蓝结构新化合物的抗炎作用。
[0045] 1主要材料。
[0046] 1.1药品和试剂：实验所用甘菊蓝结构新化合物由上述方法制备，纯度为90~ 99%，精密称取，用DMS0稀释至下述各剂量组所需溶液。DMEM高糖培养基、胎牛血清（美国 Hyclone公司）；青霉素、链霉素(杭州四季青公司）；LPS(美国Sigma公司）；IL-6、TNF-a、PGE2 的化ISA试剂盒(美国化yman公司）；细胞裂解液、Griess试剂(碧云天生物技术有限公司）。
[0047] 1.2细胞株:RAW264.7巨隧细胞(美国ATCC细胞库）。
[004引 1.3分组:分为对照组、LPS组和实验组，各一组。
[0049] 2实验方法。
[0050] 2.1细胞培养，DMEM高糖培养基，加入10 %的胎牛血清，1 %抗菌素（lOOU/mL青霉素 和1 OOyg/mL链霉素），置于37 °C、5 % C〇2培养箱中培养。
[0化1 ] 2.2MTT比色法测定细胞活力，上述Ξ组分别取对数生长期RAW264.7巨隧细胞接种 于96孔培养板中，细胞密度为1 X ΙΟ4个/mL，每孔10化L，溫度37°C，5 %C〇2条件下培养过夜 后，实验组加入不同浓度的本发明新化合物oleracone Β(Ι-100μΜ)，解育化后向LPS组和实 验组分别加入终浓度为化g/mL的LPS，另设一个调零组(含DMS0溶媒的培养液），每组设3个 复孔，考察加入药物后对细胞的影响。上述各组细胞培养2地后，在各孔细胞中加入5mg/mL MTT 2化L，溫度37 °C，5 %C〇2条件下继续解育4h后，终止培养，吸弃孔内液体，每孔加入10化 L二甲基亚讽(DMS0)，振荡lOmin，使细胞内结晶充分溶解，酶标仪570nm波长处测定各孔吸 光值。
[0052] 2.3格里斯(Griess)法测定NO的含量:考察本发明新化合物对LPS诱导的小鼠巨隧 细胞RAW264.7的NO产生量的抑制作用。小鼠巨隧细胞RAW264.7传代后在含10 %胎牛血清的 高糖细胞培养基DMEM中培养，实验组加入不同浓度的本发明新化合物oleracone Β(1-50μ Μ)，在37°C，5%C02条件下解育化后用LPS(终浓度为化g/mL)诱导炎症反应，24h后收集上清 液，每组处理重复3孔。Griess法测定细胞上清液中NO的含量，根据不同浓度本发明新化合 物对LI^诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响，用W反映 NO水平。
[0053] 2.4ELISA法测定炎症因子IL-6、TNF-a和炎症介质PGE2:将对数生长期RAW264.7巨 隧细胞接种于24孔培养板中，细胞密度为1 X 105个/mL，每孔ImL，溫度37°C，5%C02条件下培 养过夜，实验组加入本发明新化合物oleracone B( 1-50μΜ)，培育化后，在每孔加入LPS(终 浓度为lyg/mL)，共解育24h，每组处理重复3孔。ELISA法测定本发明新化合物处理后的 RAW264.7巨隧细胞分泌的IL-6、TNF-a和PGE2的含量。
[0化4] 3实验结果。
[0055] 实验结果表明本发明新化合物对LPS诱导的巨隧细胞RAW264.7的增殖无影响，安 全无毒;并可有效抑制LPS诱导的巨隧细胞RAW264.7所产生过量炎症细胞因子IL-6、TNF-a 和炎症介质NO、PGE2,且呈浓度依赖。
[0056] 细胞相对存活率实验结果如表2所示。
[0化7] 表2:本发明对RAW264.7巨隧细胞相对存活率的影响。
[0化引 [0化9]
[0060] 注:吁<0.05与对照组比较，高浓度组有显著性差异。
[0061] 利用格里斯(Griess)法测定NO的含量实验结果见表3。
[0062] 表3:本发明对LI^诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响（均数±标准差，η = 3)。
[0063]
[0064] 注:吁<0.05与对照组比较，咕<0.05与LI^组比较。
[00化]ELISA法测定炎症因子IL-6、TNF-a和炎症介质PGE2结果如表4所示。
[0066] 表4:本发明对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌的IL-6、TNF-a和PGE2含量的影响（均 数+标准差，n = 3)。
[0067]
[006引注:吁<0.05与对照组比较，咕<0.05与LI^组比较。
[0069] 本发明甘菊蓝结构新化合物的镇痛作用。
[0070] 1主要药品和试剂。
[0071] 实验所用甘菊蓝结构新化合物由上述方法制备，纯度为99%，精密称取，用生理盐 水稀释至下述各剂量组所需溶液。致痛剂为0.6 %乙酸，用生理盐水配制。盐酸吗啡注射液 (沈阳第一制药厂），用生理盐水稀释至下述剂量溶液。
[0072] 2实验动物。
[0073] 昆明种雄性小鼠，体重为20±2g，清洁级，由大连医科大学实验动物中屯、提供。室 溫20~25°C，自由饮食，实验室适应一周后用于实验。
[0074] 3实验方法。
[0075] 取健康小鼠，雌雄各半，共50只小鼠，体重20±2g，随机分为空白对照组、实验组 (分别为本发明甘菊蓝结构新化合物高剂量组(4mg/kg)、本发明甘菊蓝结构新化合物中剂 量组(2mg/kg)、本发明甘菊蓝结构新化合物低剂量组（Img/kg))、阳性药组(5mg/kg)共计五 组，每组10只。
[0076] 各组小鼠灌胃给予受试药物，每日两次，连续给药3天。空白对照组给予等体积的 生理盐水，阳性药组给予盐酸吗啡注射液。末次给药1小时后，各组小鼠腹腔注射0.6%乙酸 (0.1 mL/lOg体重），观察30分钟内各组小鼠扭体出现时间、扭体次数、扭体结束时间，与空白 对照组比较计算各组镇痛抑制率。按下式计算镇痛抑制率，对各组小鼠扭体次数进行统计 分析，P<〇. 05为有显著差异。
[0077] 抑制率％ =(空白对照组平均扭体数一给药组平均扭体数)/空白对照组平均扭体 数 X100%。
[007引 4实验结果。
[0079] 空白对照组小鼠腹腔注射乙酸后表现为显著的扭体次数多，表现出强烈的疼痛反 应;与空白对照组比较，中、高剂量组及阳性药组扭体次数及扭体结束时间均有减少趋势， 本发明甘菊蓝结构新化合物高剂量组、中剂量组、低剂量组及阳性药组潜伏期均有不同程 度延长趋势。结果表明本发明甘菊蓝结构新化合物对乙酸致小鼠扭体反应有一定的镇痛作 用。具体实验结果如表5所示。
[0080] 表5:本发明对乙酸致扭体反应小鼠的镇痛作用影响（均数±标准差，n = 10)。
[0081]
[008^ 注:中<0.05，*午<0.01，**午<0.001与空白对照组比较。
[0083] 本发明甘菊蓝结构新化合物的抗肿瘤作用。
[0084] 1主要材料。
[0085] 1.1药品和试剂：实验所用甘菊蓝结构新化合物由上述方法制备，纯度为90~ 99%，精密称取，用DMS0稀释至下述各剂量组所需溶液。DMEM高糖培养基、胎牛血清（美国 Hyclone公司）；青霉素、链霉素(杭州四季青公司）。
[00化]1.2细胞株:人结肠癌细胞化CO-2、人乳腺癌细胞MCF-7、人胃癌细胞BGC-823、人肺 腺癌细胞SPC-A1、人肝癌细胞肥k7402、人宫颈癌细胞化la-229、卵巢癌细胞化-8910、人类 口腔表皮样癌细胞KB (中科院上海细胞库）。
[0087] 1.3分组:分为对照组、实验组和调零组(含DMS0溶媒的培养液）。
[008引2实验方法。
[00例 2.1细胞培养，DMEM高糖培养基，加入10 %的胎牛血清，1 %抗菌素（lOOU/mL青霉素 和1 OOyg/mL链霉素），置于37 °C、5 % C02培养箱中培养。
[0090] 2.2Μ??法检测细胞增殖，取对数生长期细胞接种于96孔培养板中，细胞密度为IX 104个/mL，每孔l(K)yL，溫度37°C，5%C02条件下培养过夜后，实验组加入不同浓度的本发明 新化合物，每组设3个复孔，加药后置于37 °C，5 % C〇2培养箱中培养4她。将含药培养液吸去， 加入体积比为4:1的无血清培养液和MTT(终质量浓度为5mg/mL)共lOOmL，继续解育4h，小屯、 吸去上清液后，每孔加入DMS015化L，放于震荡器上震荡W使结晶完全溶解(5min)，酶标仪 在570nm波长下检测各孔的吸光度(A)值。然后，计算各浓度化合物对细胞生长的抑制率，抑 制率公式:细胞生长抑制率=X 100%，再应用SPSS软件处理数据，将抑制率 对药物浓度作曲线，计算IC50值。
[0091] 3实验结果。
[0092] 实验结果表明本发明新化合物对人结肠癌细胞化CO-2、人乳腺癌细胞MCF-7、人胃 癌细胞BGC-823、人肺腺癌细胞SPC-A1、人肝癌细胞肥心7402、人宫颈癌细胞化la-229、卵巢 癌细胞化-8910、人类口腔表皮样癌细胞KB、的增殖具有抑制作用，且随药物浓度增大，抑制 率也明显升高，即呈浓度依赖。本发明新化合物对上述八种肿瘤细胞IC50值见表6。
[0093] 表6本发明新化合物对肿瘤细胞的抑制作用。 Γ00941
[0095]综上所述，本发明提供一种甘菊蓝结构新化合物及其提取分离方法，依次采用水 煎煮提取、乙酸乙醋萃取、硅胶柱层析、0DS中压柱层析、及S邱hadex LH-20柱层析，成功的 提取分离出甘菊蓝结构新化合物，该方法简便，快速，环保，且经该方法分离得到的化合物 纯度较高，由于所得该化合物化学结构独特，从常用中药马齿宽中提取出来，其具有抗炎、 镇痛、抗肿瘤作用，因此本发明新化合物及其盐和衍生物可W作为天然产物开发中药新药， 具有广阔的前景。
【主权项】
1. 一种马齿宽中甘菊蓝结构新化合物，其特征在于，分子为Cl抽18〇2，命名为B，化学结构 式如下。2. 如权利要求1所述的新化合物的提取分离方法，其特征在于，具体步骤为： 步骤1取马齿干燥药材，采用水煎煮提取，水提液过滤，合并滤液直接加热浓缩，放凉 至室溫，得药液备用； 步骤2将步骤1中所得药液用乙酸乙醋反复萃取，减压回收乙酸乙醋至浸膏，得到乙酸 乙脂萃取物； 步骤3将步骤2中乙酸乙脂萃取物经硅胶柱层析分离，依次用石油酸-丙酬梯度洗脱得 到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的洗脱部位，将合并后的洗脱部位 经减压浓缩至干，备用； 步骤4将步骤3中所得物再经预处理的ODS柱(Octadecylsilyl，十八烷基硅烷键合娃 胶填料)层析分离，用甲醇-水梯度洗脱，得到若干洗脱部位，经薄层色谱进行检测，显色，将 各显色的洗脱部位分别减压浓缩至干，得浓缩物备用； 步骤5将步骤5中所得各浓缩物经预处理的S邱hadex LH-20(^丙基葡聚糖凝胶)层析 分离，分别W甲醇-水梯度洗脱得到一种马齿宽来源甘菊蓝结构新化合物。3. 如权利要求2所述提取分离方法，其特征在于，所述步骤1中水煎煮提取两次，每次煎 煮2小时，水用量为药材的8~16倍。4. 如权利要求2所述的提取分离方法，其特征在于，所述0DS和S邱hadex LH-20的预处 理过程为甲醇浸泡过24小时，上柱，用甲醇洗至滴入水中无混浊，再W初始流动相平衡。5. 如权利要求1所述的提取分离方法，其特征在于，所述步骤2中浓缩液用乙酸乙醋萃 取3次，乙酸乙醋与浓缩液的体积比为1:10。6. 如权利要求1所述的化合物用于制备抗炎、镇痛和抗肿瘤的药物或保健品。
【文档编号】A61P35/00GK106083556SQ201610393807
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月6日 公开号201610393807.5, CN 106083556 A, CN 106083556A, CN 201610393807, CN-A-106083556, CN106083556 A, CN106083556A, CN201610393807, CN201610393807.5
【发明人】英锡相, 英哲铭, 李翠玉, 张文洁
【申请人】辽宁中医药大学