本发明涉及医药领域的一种呼吸道通气治疗时使用的抑菌湿化液，主要用于氧疗、呼吸机通气以及气道湿润等使用，属于临床药品与医疗器械范畴。
背景技术：
：在吸氧治疗、呼吸机通气、气管湿润等呼吸道通气护理操作中，均需要医用湿化液。临床护理使用的湿化液一般要求为灭菌水或蒸馏水，因其本身不具有抑菌功能，在长时间临床护理过程中，湿化液极易被细菌污染，给患者带来院内感染风险。石兰萍等的《氧气湿化液的污染状况分析及对策》（护理研究，2005年第5期第19卷第5期）、徐丹等的《大连市氧气湿化液细菌污染程度的监测》（中国感染控制杂志，2004年4月第3卷第2期）以及童建华的《氧气湿化液的细菌培养调查》（中华医院感染杂志，2006年第16卷第7期）等几十篇文章都对现有的氧气湿化液引起的细菌感染与院内感染问题进行了系统的论述。尽管有不少学者已经提出了在湿化液中添加抑菌剂的技术方案，比如《复方黄连氧气湿化液的临床研究》（中国优秀硕士论文电子期刊网，2006年第12期，第1页）、专利号ZL200910135422.9等，主要侧重于湿化液的抑菌性能研究，但由于医用湿化液具有一定的特殊性，这些技术方案在实践中并不能有效实施应用。所述的医用湿化液的特殊性在于：1、应无异味：湿化液应没有病人长时间使用时不能耐受的异味、刺激性；2、应无泡沫：用于吸氧时，水溶液在氧气气泡作用下不能产生泡沫，避免泡沫蓄积后不断升高，使湿化液冲出湿化瓶并沿鼻氧管管路进入患者鼻腔，造成患者呛水。专利号ZL200910135422.9采用了聚赖氨酸作为抑菌剂，但是聚赖氨酸单独使用在低浓度溶液中抑菌效果一般，特别是对于真菌效果很不理想，而高浓度溶液又会在通气时产生大量泡沫，引发患者呛水风险，存在缺憾。3、在氧气长时间作用下，抑菌物质稳定性好，抑菌物质不易氧化、分解失活。4、气管切开患者呼吸道天然防御屏障消失，湿化液采用的抑菌剂不当可能使正常菌群失调，而耐药菌易于繁殖，因此抑菌剂应不会引起耐药性或菌群紊乱。5、不会影响肺泡张力，不会增加痰液粘滞程度，影响痰液正常咳出；6、湿化液适用人群广泛，对新生儿、老年人等应当均没有禁忌，呼吸道吸入后对人体安全可靠，无毒副作用。由此可见，筛选一种具有抑菌性能的湿化液绝对不是简单选用一种或者几种抑菌成分，制备成溶液就能够实现，必须要满足湿化液的特殊性要求。为此，本发明提出一种呼吸道通气治疗时使用的抑菌湿化液，满足临床需求。技术实现要素：一种呼吸道通气治疗时使用的抑菌湿化液，主要有效成分为ε-聚赖氨酸、乳酸链球菌素，与医用水配伍制备成复方湿化液，其中ε-聚赖氨酸在复方湿化液中的浓度为5mg/L～3g/L、乳酸链球菌素在复方湿化液中的浓度为4mg/L～2.4g/L，采用pH值调节剂将复方湿化液pH值调整为5.0～7.0之间，优选的技术方案是，ε-聚赖氨酸在湿化液中的浓度为250mg/L、乳酸链球菌素在湿化液中的浓度为200mg/L，湿化液pH值为5.5～6.5之间。所述的医用水指医用纯化水、灭菌水、蒸馏水等。所述的pH值调节剂可以是氢氧化钠、盐酸、醋酸、磷酸等常用食用级添加剂中的任意一种或者几种。ε-聚赖氨酸(ε-PL)在80年代就首次应用于食品防腐。ε-聚赖氨酸具有安全性能高、在水中的溶解性极强、热稳定性好、使用范围广等优点,在中性和微酸性环境条件均有较强的抑菌性具有强烈的抑菌能力。ε-聚赖氨酸作用机理是破坏微生物的细胞膜结构，引起细胞的物质、能量及信息传递中断，最终导致细胞死亡。它对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌有很好的抑菌效果，ε-聚赖氨酸在pH值为5.0～8.0时稳定性最好、抑菌能力最佳。但是单独使用时ε-聚赖氨酸时对枯草芽孢杆菌、黑曲霉、真菌抑制作用并不明显，加大湿化液中ε-聚赖氨酸的浓度则容易引起异味和泡沫产生。因此，筛选一种与ε-聚赖氨酸具有协同作用的抑菌剂在湿化制备时复方组合是一种有效的技术方案。本经过与几十种抑菌剂复方组合后安全性能评价、稳定性实验、体外抑菌实验以及湿化液的特殊性能测试，发现ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素组合效果最佳，各项性能均能满足。乳酸链球菌素（Nisin）是一种乳酸菌代谢所产生的具有很强杀菌作用的天然代谢产物，被认为是一种高效、天然、绿色食品防腐剂。乳酸链球菌素属于窄谱抗生素，对许多革兰氏阳性菌尤其是能产生芽孢的菌具有抑制作用，如肉毒梭菌、金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、利斯特氏菌、以及嗜热脂肪芽抱杆菌的生长和繁殖，尤其对产生孢子的革兰氏阳性细菌有特效。乳酸链球菌素的抗菌作用机理是通过干扰细胞v膜的正常功能，造成细胞膜的渗透，养分流失和膜电位下降，从而导致致病菌和腐败菌细胞的死亡。乳酸链球菌素进入人体后不会改变人体正常菌群以及产生如其它抗菌素所出现的抗性问题，更不会与其它抗菌素出现交叉抗性，是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品防腐剂。1、复方湿化液安全性研究ε-聚赖氨酸是一种靠肽键连接羧基与氨基基团的多聚L-赖氨酸，是一种具有抑菌功效的多肽物质。ε-聚赖氨酸具有极高的安全性，进入人体后可分解为人体必需的营养氨基酸——赖氨酸，而赖氨酸是人体必须的八种氨基酸，因此它被誉为“营养型防腐剂”。ε-聚赖氨酸于80年代初日本率先在食品保鲜中应用，2003年通过了美国食品和医药管理(FDA)的许可，目前日本、美国、欧洲以及我国（2014年）均也已列入食品添加剂范围。乳酸链球菌素亦称乳酸链球菌肽，是乳酸链球菌产生的一种多肽物质，由34个氨基酸残基组成，由多种氨基酸组成的多肽类化合物，可作为营养物质被人体吸收利用。1969年联合国粮食及农业组织/世界卫生组织(FAL/WHO)食品添加剂联合专家委员会确认乳酸链球菌素可作为食品防腐剂。1992年3月中国卫生部批准实施的文件指出：“可以科学地认为乳酸链球菌作为食品保藏剂是安全的”。由此可见，ε-聚赖氨酸、乳酸链球菌素均属于非常安全的抑菌剂，而且在稳定性研究中发现，两种抑菌剂复方组合没有产生其他新的化合物，因此用于湿化液是绝对安全的。2、复方湿化液体外抑菌性能研究本发明人选择呼吸道感染中最常见的金黄色葡萄球菌，通过对ε-聚赖氨酸溶液单独使用、以及ε-聚赖氨与乳酸链球菌素复方湿化液使用进行体外抑菌实验比较，发现复方湿化液体外抑菌效果明显好于ε-聚赖氨酸溶液单独使用（实验结果见实施例2），说明采用ε-聚赖氨与乳酸链球菌素复方湿化液具有临床意义。3、复方湿化液稳定性研究由于湿化液制备过程中涉及溶液的湿热灭菌，因此必须研究ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素复方组合的热稳定性；由于乳酸链球菌素的抑菌性能与pH值相关，制备复方湿化液时需要调整溶液的pH值，因此必须研究ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素复方组合的酸碱稳定性；湿化液产品需要长时间储运保存，因此必须研究ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素复方组合的长期稳定性；湿化液在高浓度富氧环境下长时间使用，必须研究ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素复方组合的抗氧化性能。本发明人在对ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素复方组合的以上项目稳定性研究后发现，ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素复方组合稳定性好，体外协同抑菌作用也没有改变（实验结果见实施例3）。2、复方湿化液的的物理性能实验用于湿化液的抑菌剂必须满足无异味、不易产生泡沫等物理特征，本发明人分别采用高、中、低三种浓度配比，对ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素复方湿化液的物理性状进行研究。其中，高浓度组湿化液中ε-聚赖氨酸含量1g/L、乳酸链球菌素含量0.8g/L；中浓度组湿化液中ε-聚赖氨酸含量0.5g/L、乳酸链球菌素含量0.4g/L；低浓度组湿化液中ε-聚赖氨酸含量0.25g/L、乳酸链球菌素含量0.2g/L。研究发现，低浓度组复方湿化液物理性能完全满足湿化液的物理性能要求，实验结果见表1。表1：湿化液物理性能实验结果实验组性状气泡判断结果高浓度微黄色液体，有特异性酸味。泡沫丰富，低于6L/min流量通气时，未发现湿化液从潮化杯溢出。不适宜高流量吸氧或气味敏感患者使用中浓度无色液体，有轻微酸味，长时间使用无不适感。泡沫较丰富，低于8L/min流量通气时，未发现湿化液从潮化杯溢出。不适宜气味敏感患者使用低浓度无色澄明液体，无异味。无泡沫，10L/min流量通气时，未发现湿化液从潮化杯溢出。适用于所有患者本发明的优点和临床意义是：提供一种新型的医用氧气湿化液组方，不仅能够在长时间使用过程中有效抑制细菌滋生，同时能满足湿化液的特殊性要求，满足临床需要。附图说明图1是本发明实施例2中的实验结果示意图具体实施方式下面结合附图和实施例具体地说明本发明。实施例1：本发明的产品制备举例，采用本发明组方，制备10000ml医用湿化液的制备，用于常规患者的氧气湿化用，根据《医院消毒规范》要求，湿化液为灭菌水，细菌菌落总数应≤100cfu/ml，致病菌不得检出。处方：药用纯化水10000mlε-聚赖氨酸2.5g乳酸链球菌素3.75g醋酸适量制成10000ml混合溶液制备方法:1、按以上处方比例精密称取ε-聚赖氨酸原料2.5g、乳酸链球菌素3.75g。2、量取9000ml纯化水，将ε-聚赖氨酸原料2.5g、乳酸链球菌素3.75g投入到纯化水中,搅拌至完全溶解，继续加入剩余纯化水，定容至10000ml溶液，备用。3、用精密酸度计测量溶液pH值，并用醋酸调节PH值至5.5～6.0之间。4、用0.25um～0.3um微孔滤膜过滤除菌。5、按照每瓶100ml灌装，密封，检测合格后存放备用。实施例2湿化液的体外抑菌性能研究实验目的：选择引发呼吸道感染常见的金黄色葡萄球菌作为实验菌种，将浓度为含ε-聚赖氨酸0.25g/L的单方氧气湿化液与实施例1制备的湿化液进行体外抑菌效果比较。1、材料与方法ε-聚赖氨酸(浙江银象生物工程有限公司)；乳酸链球菌素(洛阳奇泓生物科技有限公司)；牛肉膏、蛋白胨(北京奥博星生物技术责任有限公司)。1.1培养基牛肉膏蛋白胨：牛肉膏0.3％、蛋白胨1％、NaCl0.5％、琼脂2％、蒸馏水（pH值7.0～7.2）；肉汤培养基：牛肉粉0.3％、蛋白胨l％、NaC10.5％、蒸馏水。1.2单方ε-聚赖氨酸湿化液的配制精密称取ε-聚赖氨酸0.025g溶于100ml无菌水中，配制成浓度为0.25g/L的ε-聚赖氨酸溶液；用酸度计测量溶液pH值，并用醋酸调节PH值至5.5～6.0之间，备用。1.3菌悬液的制备将保藏的金黄色葡萄球菌菌接种到牛肉膏、蛋白胨斜面培养基上，在恒温箱中37℃培养24小时进行活化，再将活化后的菌种划线接种到牛肉膏、蛋白胨培养基上，使其形成单菌落。挑取金黄色葡萄球菌单菌落一环接种到肉汤培养基中，在37℃下摇床培养5h～7h，使菌体生长到对数期，形成菌体数为106～l07个／ml的菌悬液，备用。1.4滤纸片的制备1.4.1用直径9～10mm的打孔器将滤纸打孔制成圆滤纸片备用。1.4.2将ε-聚赖氨酸溶液、实施例1制备的复方溶液分别制备为0.35g／L、0.30g／L、0.25g／L、0.20g／L、0.15g／L、0.10g／L不同浓度的供试液。1.4.2将圆滤纸片分别浸入不同浓度的供试液中，取出烘干，并在紫外线下灭菌15min后备用。然后分别取0.1ml菌悬液于牛肉膏、蛋白胨平板上，用灭菌棉棒涂布均匀，待菌液被完全吸收后，将不同浓度圆滤纸片贴于平板上，置于37℃培养24h，观察抑菌圈的生成情况，用游标卡尺测量抑菌圈直径，记录结果。每个梯度做3个平行。2、统计分析各数据均取相同浓度平行实验均值进行比较，并分别进行标准偏差分析。3、实验结果从下表2可以看出，随着ε-聚赖氨酸浓度的增大，抑菌圈也逐渐增大，说明抑菌作用也逐渐增强。表2：ε-聚赖氨酸体外抑菌效果两组湿化液比较，实施例1制备的ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素复方组合，对金黄色葡萄球菌的协同增效作用较显，且抑菌效果显著高于单方的ε-聚赖氨酸溶液，结果见图1。实施例3本发明制备的湿化液稳定性研究取实施例1制备的复方湿化液30瓶，每瓶100ml，备用。1、热稳定性试验将复方湿化液9瓶，分为3个批次，每批次各3瓶；分别于45℃、65℃、95℃不同温度在恒温水浴锅中处理1h后，测其抑菌效果变化。以实施例2中浓度为0.25g／L的未经热处理的湿化液抑菌圈结果作为对照。试验结果发现，复方湿化液具有很好的热稳定性，经过三个不同温度点的热处理后，其抑菌性能几乎没有变化。2、酸碱稳定性试验取复方湿化液5瓶，分别用1mol/LNaOH和1mol/LHC1将湿化液的pH值调至为2、4、6、8、10，分别测其抑菌效果变化，以实施例2中浓度为0.25g／L的湿化液抑菌圈结果作为对照。试验结果发现，复方湿化液在pH值为6时抑菌性能与对照品无差异，而在pH值为2、4的酸性条件以及pH值为8、10的碱性条件下，其抑菌性均明显下降，提示复方湿化液的在弱酸及中性条件下抑菌效果较好，而在酸性、碱性增强时抑菌效果下降。3、稳定性试验将复方湿化液6瓶，选择40℃±2℃、RH75％±5％条件下，进行6个月试验。在试验期间第0、1、2、3、6个月末取样检测，测其抑菌效果变化，以实施例2中浓度为0.25g／L的湿化液抑菌圈结果作为对照；并根据复方湿化液颜色、气味、产生泡沫等物理性能变化。实验结果表明，经过6个月的加速实验，复方湿化液抑菌性能没有显著变化，颜色、气味、产生泡沫等物理性能没有明显变化，提示复方湿化液的稳定性较好。4、抗氧化性能将复方湿化液4瓶，钢瓶20L装医用氧气3瓶，浮标式氧气吸入器3个。按照3L/min流量，分别在复方湿化液中连续通入纯氧气6h、12h、24h，与未通入纯氧气复方湿化液对照，观察湿化液微生物限度以及颜色、气味物理性状变化。实验结果见表3。表3抗氧化性能实验结果从表2可见，复方湿化液连续24小时通入纯氧后，颜色、气味等物理性状显著改变，说明产品抗氧化性能好。通气24小时后复方湿化液的总菌落数尽管比初始状态有所增加，但仍满足医用湿化液要求的总菌落数低于100cfu/ml的微生物限度要求，相比文献报道的湿化液通气24小时阳性污染率超过50%有显著改善，说明复方湿化液具有抑菌作用。上述附图及实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中，对本发明的保护范围不构成任何限制。当前第1页1 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