专利名称：用于淋巴结检查的快速显示液及其用法的制作方法
技术领域：
本发明涉及恶性肿瘤标本淋巴结检查，尤其是检查的用液。
临床上对恶性肿瘤的切除标本必须尽量检查出所有的淋巴结，从而进一步检查有无淋巴转移及转移程度，以指导诊断、治疗、预后。以大肠癌为例，国际上要求平均每个标本最少应摘取的淋巴结数目标准是8～16枚。
背景技术：
目前对恶性肿瘤的切除标本进行淋巴结检查的方法有1.临床常用的手工方法，是通过眼视手触发现挑拣标本上的淋巴结，简便易行，但容易遗漏直径在5mm以下的转移淋巴结，而这部分被遗漏的转移淋巴结占全部转移淋巴结的50％左右，因此可能造成对患者的诊断和治疗不准确。
2.实验室常用的透明法(又称清洗法)是用化学药物溶解清除标本上的脂肪，能彻底检查出标本的淋巴结，使患者得到准确的诊断和治疗，但该法费时(约需10天)费力且费用昂贵。
发明内容
本发明的目的在于克服上述已有技术的不足，为恶性肿瘤的淋巴结检查寻求一种既准确快速又简便易行的办法。
为实现上述目的，本发明提供一种用于淋巴结检查的快速显示液及其用法。
1.用于淋巴结快速显示液的组成(体积百分比，以1000ml计)99％无水酒精 55％乙醚 20％松节油 10％冰醋酸 5％缓冲富尔马林 10％磷酸二氢钠 5g美蓝粉剂 2g酒精可溶解美蓝并渗透入组织；乙醚有渗透、助染及对抗组织收缩作用；松节油有脱水并透明、硬化淋巴结作用；冰醋酸可助染及对抗组织收缩；福尔马林为固定组织作用；磷酸二氢钠为溶液缓冲剂，美蓝与淋巴结有很强的亲和力，染色后长时间冲洗浸泡也不易脱色；而周围的脂肪组织不易着色，且容易冲洗褪色，这样淋巴结被染成深蓝色，与周围浅蓝色的系膜背景对比明显，淋巴结更易被辩认，即使被包在系膜中。
2.用于淋巴结检查的快速显示液的使用方法首先将已用10％富尔马林液固定的恶性肿瘤标本置于盛有淋巴结检查快速显示液的器皿中并且密封，浸泡6～12小时；显示液的用量为标本体积的2.5～3.5倍；然后取出标本，流水冲洗；接着每隔2～3mm切割标本；此时可见淋巴结呈兰色，在黄色脂肪的背景下清晰醒目，便于挑拣，平均每个标本摘取的淋巴结数目标准在20个以上，不遗漏转移淋巴结；检出的淋巴结送病理切片检查。
快速显示液在实际应用中不仅显著提高检出正常的和转移的淋巴结数目，更重要的是能够辩认出更小淋巴结。
本发明的淋巴结快速显示液用于恶性肿瘤淋巴结的检查具有以下优点1.准确彻底共检查31例标本，其中大肠癌15例，胃癌10例，乳腺癌6例。首先用手工法检查上述标本，共检出254枚淋巴结，平均每例检出淋巴结数为8.2枚，其中11例检出29枚转移淋巴结，转移率(转移病例数与病例总数的百分比)为35.5％。
然后用淋巴结检查用的快速显示液法检查，有26例新检出489枚淋巴结，其中50枚转移淋巴结，有6例为经手工法未发现转移者，平均每例检出淋巴结数上升为24枚，转移率上升为54.9％。
接着再经透明法检查，虽然又有4例标本新发现23枚淋巴结，但均无转移。
上述结果提示，淋巴结快速显示液法检查明显优于传统手工法，不亚于透明法，检查结果准确彻底。
2.简便易行用本液浸泡后，淋巴结呈蓝色，在黄色脂肪的背景下清晰醒目，便于挑拣，操作简便易行。小淋巴结也得以彻底检出，不会出现手工法遗漏转移淋巴结的错误。
3.省时价廉用透明法检查需耗时10天左右，而本显示液法仅需6～12小时，较透明法用时短、显示快。
透时法检查用液多，费力，平均每例耗费高，而使用本显示液法费用降低，较透明法价廉。
图1此图为经快速显示液处理后的系膜标本，可以看出左侧第一个标本中的淋巴结被脂肪组织所包裹，由于染成蓝色的淋巴结与淡黄色脂肪组织对比明显，因此可以轻易透过脂肪组织辩别出淋巴结。中间的为一个切成两半的淋巴结，右侧的为两个切开的淋巴结，可以看出淋巴结与组织的对比非常强烈。
具体实施例方式
1.材料和方法1.1 材料 中南大学湘雅三院普外科2001年6月至12月期间共20例大肠癌根治术后标本，其中男11例，女9例。年龄从38岁至68岁，平均55.35岁；结肠癌13例，直肠癌7例；均为结直肠癌经手术完整切除原发灶肠段及其余系膜。
快速显示液的成分按体积百分比95％无水酒精55％，乙醚20％，松节油10％，冰醋酸5％，缓冲富尔马林10％，磷酸二氢钠5g，美蓝粉剂2g混合均匀，配制1000ml，用密封性好的容器装好备用。
1.2 方法 采用自身对照法，每一标本都先后进行传统法和快速显示液法的分别处理。
传统法即将手术后新鲜标本用10％福尔马林浸泡24h后由同一病理科医师用眼看、手摸法将标本系膜组织中淋巴结取出，记下数目及直径，再将其进一步包埋、染色、切片、镜检。
快速显示液法即将传统法处理后的标本之系膜从标本上剔除下来，用3倍于系膜体积的快速显示液浸泡6h至12h；然后取出标本，流水冲洗，尽量洗去系膜的染色；接着每隔2～3mm切割标本；此时可见淋巴结呈蓝色，在黄色的脂肪背景下对比鲜明，便于挑拣，平均每个标本摘取的淋巴结数目标准在20个以上，不遗漏转移淋巴结；检出淋巴结再做病理切片检查。观察指标分别观察传统法及快速显示液法检出的淋巴结数目、直径大小，分别记录下两法淋巴结转移数目(阳性淋巴结)。
2.结果本组20例标本用传统法检出淋巴结共205枚，其中直径＜5mm有37枚，＞5mm有168枚。此标本进一步用快速显示液法处理后多检出220枚淋巴结，其中直径＜5mm有191枚，直径＞5mm有29枚。经过两次处理后20例大肠癌标本共检出淋巴结425枚，其中直径＜5mm共228枚，直径＞5mm共197枚。本组20例标本用传统法在常规镜检下检出24枚阳性，总共4例发生转移，转移率为20％(4/20例)。
在进一步用快速显示液法处理后，多检出56枚阳性，淋巴结阳性率为25.5％(56枚/220枚)，多发现6例阳性标本；6例分期从B期变为C期。两步汇总后(经传统法和法后)共发现阳性淋巴结80枚，总淋巴结为425枚，总阳性率为18.8％(80/425)，总共有10例阳性，转移率为50％(10/20)。
表1 传统法与快速显示液法统计学分析
3.讨论从表1的结果看出用快速显示液法较传统法有明显的优势，它不仅显著提高检出正常的和转移的淋巴结数目，更重要的是能够发现更多更小的淋巴结，尤其是直径＜5mm的淋巴结。
本组20例标本中用传统法共发现205枚，平均每例10.3枚。用快速显示液法后总共发现425枚，平均每例21.25枚，配对t检验P＜0.01，有显示性差异。
对于直径＜5mm的淋巴结，用传统法共找出37枚，占总205枚的18.05％。
用快速显示液法后又找出直径＜5mm的淋巴结191枚，占快速显示液法多找出淋巴结数220枚的86.5％，配对t检验P＜0.01，有显著性差异，表明快速显示液法可找出更多小淋巴结。
用快速显示液法后两步总共找出直径＜5mm的淋巴结228枚，占总425枚的53.65％，说明经快速显示液法后找出的淋巴结大约一半为小淋巴结。
另外，用快速显示液检查新发现6例病人的肠系膜有转移，使转移率从20％升高到50％。
由此显示出用快速显示液在检出小淋巴结时的明显优势，为进一步镜检查出小淋巴结的微转移灶提供了可能。
因此，淋巴结快速显示液不仅可以显著提高肠系膜淋巴结检出的数量，而且使转移率更为准确。
权利要求
1.用于淋巴结检查的快速显示液，其特征在于；淋巴结快速显示液的组成(体积百分比，以1000ml计)95～99％无水酒精55％乙醚20％松 节 油10％冰 醋 酸5％缓冲富尔马林10％磷酸二氢钠 5g美蓝粉剂2g
2.用于上述淋巴结检查的快速显示液的使用方法，其特征在于首先将已用10％富尔马林液固定的恶性肿瘤标本置于盛有淋巴结检查快速显示液的器皿中并且密封，浸泡6～12小时；显示液的用量为标本体积的2.5～3.5倍，然后取出标本，流水冲洗；接着每隔2～3mm切割标本；此时可见淋巴结呈兰色，在黄色脂肪的背景下清晰醒目；平均每个标本摘取的淋巴结数目标准在20个以上；送病理切片检查。
全文摘要
本发明快速显示液的组成(体积百分比)为无水酒精、乙醚、松节油以及加磷酸二氢钠、少量美蓝等混合而成；其用法是将已用10％富尔马林液固定的恶性肿瘤标本置于盛有淋巴结检查快速显示液的器皿中并且密封，浸泡6～12小时；显示液的用量为标本体积的3倍；本发明不仅显著提高正常的和转移的淋巴结检出数目，而且能够使转移率(即转移病例数与病例总数的百分比)更为准确。显示速度快、省时、价廉，检查结果准确。
文档编号G01N33/574GK1570630SQ03178569
公开日2005年1月26日 申请日期2003年7月18日 优先权日2003年7月18日
发明者陈道瑾, 向开敏 申请人:中南大学