肥胖控制剂的评价方法

专利名称：：肥胖控制剂的评价方法
技术领域：
：本发明涉及一种评价或筛选肥胖控制剂、血胰岛素调节剂、或血糖调节剂的方法。
背景技术：
：肥胖症是脂肪组织非正常增加的病症，据信可导致与生活方式有关的疾病，如糖尿病、心脏病和动脉硬化。在现代社会中，由于高脂饮食、过量运动或缺乏运动，肥胖已成为严重的问题，而寻找对肥胖症有预防/改善作用的物质也已成为重要的课题。作为选择肥胖改善剂的方法，已报道如下方法测定成熟脂肪细胞表达的脂联素(adiponectin)的量的方法(专利文献1);测定作为解偶联蛋白之一的UCP-2的活性、或转录/mRNA的方法(专利文献2);测定SPARC基因或SPARC蛋白质的表达水平或活性的方法(专利文献3)等。另外，作为选择体重增加抑制剂的方法，己报道一种对刺激松弛素-3(relaxin-3)受体的物质进行评价的方法(专利文献4)。此外，胰岛素是主要受血液中的葡萄糖水平，即血糖水平的升高刺激的结果，由胰腺分泌的激素(非专利文献l)，并且已知餐后胰岛素分泌量的调节取决于碳水化合物的摄入量或碳水化合物的吸收率。但是，目前还不清楚摄入碳水化合物和脂类引起的胰岛素分泌量的变化，以及这些变化与肥胖之间的关系。专利文献l:JP-A-2006-249064专利文献2:JP-A-2002-508770专利文献3:JP-A-2004-517308专利文献4:JP-A-2006-290826非专利文献1:DictionaryofBiochemistry(生化辞典)，2ndEd,，TokyoKagakuDozinCo.,Ltd.,November1990,pp.141-14
发明内容本发明涉及以下1)至6)。1)评价或筛选肥胖控制剂的方法，该方法包括向动物施予碳水化合物和脂类，和对减少或增加胰岛素分泌的物质进行评价或选择；2)评价或筛选肥胖控制剂的方法，该方法包括以下步骤(1)至(4):(1)通过下述方法(a)和/或(b)向动物施予试验物质的步骤a)在碳水化合物和脂类中添加试验物质，和/或b)用试验物质代替碳水化合物和脂类中至少一种的部分或全部；(2)测定血胰岛素水平和确定胰岛素分泌量的步骤；(3)比较步骤(2)中确定的胰岛素分泌量，和只施予碳水化合物和脂类的对照组中的胰岛素分泌量的步骤；禾口(4)基于步骤(3)的结果，对减少或增加胰岛素分泌的试验物质评价或选择为肥胖控制剂的步骤；3)评价或筛选血胰岛素调节剂的方法，该方法包括向动物施予碳水化合物和脂类，和对减少或增加胰岛素分泌的物质进行评价或选择；4)评价或筛选血胰岛素调节剂的方法，该方法包括以下步骤(1)至(4):(1)通过下述方法(a)和/或(b)向动物施予试验物质的步骤a)在碳水化合物和脂类中添加试验物质，和/或b)用试验物质代替碳水化合物和脂类中至少一种的部分或全部；(2)测定血胰岛素水平和确定胰岛素分泌量的步骤；(3)比较步骤(2)中确定的胰岛素分泌量，和只施予碳水化合物和脂类的对照组中的胰岛素分泌量的步骤；和(4)基于步骤(3)的结果，对减少或增加胰岛素分泌的试验物质评价或选择为血胰岛素调节剂的步骤；5)评价或筛选血糖调节剂的方法，该方法包括向动物施予碳水化合物和脂类，和对减少或增加胰岛素分泌的物质进行评价或选择；和6)评价或筛选血胰岛素调节剂的方法，该方法包括以下步骤(1)至(4):(1)通过下述方法(a)和/或(b)向动物施予试验物质的步骤a)在碳水化合物和脂类中添加试验物质，和/或b)用试验物质代替碳水化合物和脂类中至少一种的部分或全部；(2)测定血胰岛素水平和确定胰岛素分泌量的步骤；(3)比较步骤(2)中确定的胰岛素分泌量，和只施予碳水化合物和脂类的对照组中的胰岛素分泌量的步骤；和(4)基于步骤(3)的结果，对减少或增加胰岛素分泌的试验物质评价或选择为血糖调节剂的步骤。具体实施例方式本发明涉及提供一种有效地评价或选择肥胖控制物质、血胰岛素调节物质或血糖调节物质的方法。本发明人对餐后胰岛素的分泌进行了研究，结果发现，与只摄入碳水化合物的情况相比较，在摄入碳水化合物和脂类的情况下，血胰岛素水平会升得更高。此外，发明人还对餐后胰岛素分泌量和肥胖症之间的相关性进行了研究，并且发现，摄入碳水化合物和脂类后的血胰岛素水平升高，与饮食性肥胖的进展极其相关，因此该升高可以作为评价/选择肥胖控制剂的一个指标。根据本发明，无须进行长期的进食试验，可以对具有控制肥胖、调节血胰岛素水平和血糖水平效果的物质或组合物进行有效地评价或选择。众所周知，作为主要受血糖水平升高的刺激的结果，胰岛素由胰腺分泌，其分泌量取决于碳水化合物摄入量或碳水化合物的吸收率而调节。然而，现有发明都是基于如下发现与只摄入碳水化合物的情况相比较，在摄入碳水化合物和脂类的情况下，餐后胰岛素分泌(血液中水平，分泌量)增加。此外，还发现，摄入碳水化合物和脂类后的胰岛素分泌，与在进食期间每克摄入的食物量所增加的体重(g)有很高的正相关性，并且胰岛素分泌量是与肥胖高度相关的因素。因此，根据本发明评价或筛选肥胖控制剂、血胰岛素调节剂或血糖调节剂，是通过向实验动物施予碳水化合物和脂类引起的胰岛素分泌量作为指标而进行的，具体包括以下步骤(1)至(4):(1)通过下述方法(a)和/或(b)向动物施予试验物质的步骤a)在碳水化合物和脂类中添加试验物质，和/或b)用试验物质代替碳水化合物和脂类中至少一种的部分或全部；(2)测定血胰岛素水平和确定胰岛素分泌量的步骤；(3)比较步骤(2)中确定的胰岛素分泌量，和只施予碳水化合物和脂类的对照组中的胰岛素分泌量的步骤；和(4)基于步骤(3)的结果，对减少或增加胰岛素分泌的试验物质评价或选择为肥胖控制剂、血胰岛素调节剂或血糖调节剂的步骤。根据本发明，碳水化合物可以是促进胰岛素分泌的任何碳水化合物，且可以是单糖、寡糖或多糖。单糖的例子包括例如葡萄糖、甘露糖、果糖和半乳糖的糖类，或甘油醛、葡糖胺和乙酰葡糖胺的糖衍生物。寡糖的例子包括蔗糖、麦芽糖、乳糖等；多糖的例子包括淀粉、糊精、糖原等。这些可以单独使用或者作为其两种或多种的混合物使用。此外，也可以使用含有这些糖的糊化大米或小麦。其中，从增加胰岛素分泌量的观点考虑，优选使用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉和糖原中的一种或多种，更优选葡萄糖。脂类的例子是使胰岛素分泌增加的脂类，例如，三酰甘油、1,3-二酰甘油和1,2-二酰甘油之类的脂肪酸甘油酯，或游离脂肪酸，或含有它们的油脂。具体而言，可以举出三棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三油酸甘油酯、1,3-二棕榈酸甘油酯、1,3-二硬脂酸甘油酯、1,3-二油酸甘油酯、1，2-二棕榈酸甘油酯、1，2-二硬脂酸甘油酯、1，2-二油酸甘油酯、棕榈酸、硬脂酸、油酸、牛油、猪油、可可脂、黄油、玉米油、豆油、葵花籽油、芝麻油、菜籽油、米糠油、橄榄油、红花油、椰子油、棕榈油等。这些可以单独使用或作为其两种或多种的混合物使用。其中，从增加胰岛素分泌量的观点考虑，优选使用三油酸甘油酯、1,3-二油酸甘油酯、玉米油、菜籽油、米糠油、橄榄油、芝麻油和棕榈油中的一种或多种，更优选三油酸甘油酯、玉米油、菜籽油和橄榄油。这些碳水化合物和脂类可以同时施予，或以一定的时间间隔分别施予。此外，也可以使用乳化组合物，该乳化组合物通过混合碳水化合物和脂类，并使用例如卵磷脂的乳化剂将其乳化而制备。施予碳水化合物的量为0.01至100mg/g体重，优选为0.1至30mg/g体重，更优选为0.5至10mg/g体重。施予脂类的量为0.01至100mg/g体重，优选为0.1至30mg/g体重，更优选为0.5至10mg/g体重。试验物质可以与碳水化合物和脂类同时施予，或者可以分开施予。试验物质可以是碳水化合物或脂类中的一种、或是其组合。在后一种情况下，可以通过判断待测的碳水化合物或脂类有否促使胰岛素分泌活性降低，评价试验物质的组合效果。另外，碳水化合物或脂类之外的试验物质也可以与由碳水化合物或脂类组成的试验物质组合，对比该组合进行评价。当试验物质是碳水化合物的情况下，碳水化合物的部分或全部可被试验物质(待测的碳水化合物)代替，并与脂类一起施予，而当试验物质是脂类的情况下，脂类的部分或全部可被试验物质(待测的脂类)代替，并与碳水化合物一起施予。本发明中所用的动物可以是任何种类的动物，不论性别和年龄，只要该动物是在血液中分泌胰岛素的非人类的哺乳动物。例如，可以举出小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔、猫、狗或猴子，但是由于易于获得且容易操作而优选例如大鼠或小鼠的啮齿类动物，更优选小鼠系，如C57BL/6J、AKR、DBA和C3H。此外，更优选使用空腹的动物。根据本发明，作为向动物施予碳水化合物和脂类、以及试验物质的方法，可以举出如口服给药、肠内给药、腹膜内给药、血管内给药、皮内给药、皮下给药等。然而，从方便或低侵入性的观点考虑，优选口服给药的方法。通过在给药前1至300分钟、优选5至240分钟，给药后一定时间(例如给药后10分钟、30分钟、60分钟、120分钟等)采取血样，并测量各时间点的血胰岛素水平，进行血胰岛素水平的测定。此外，采血可以在例如眼眶静脉或尾静脉的通常采血部位进行。从采取的血样中制备血清或血浆后，对胰岛素进行定量，例如，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法、放射免疫测定(RIA)法、或高效液相色谱法。采用最高胰岛素水平或曲线下面积(AUC)，从给药后各时间点的血胰岛素水平来确定胰岛素分泌量。接着，通过在碳水化合物和脂类中添加试验物质、或用试验物质(碳水化合物或脂类)代替碳水化合物或脂类，引起的胰岛素相关值的变化，与只施予碳水化合物和脂类的对照组中的变化进行比较。在任何情况下当变化变小时，可以将试验物质评价为具有使血胰岛素水平降低的作用、改善肥胖的作用、或使血糖水平升高的作用，并且可以选择这种物质。此外，当上述胰岛素的相关值之一增加时，可以将试验物质评价为具有使血胰岛素水平升高的作用、促进肥胖的作用、使血糖水平降低的作用、增加体重的作用、以及促进生长的作用，并且可以选择这种物质。此外，近年来人们认为，胰岛素参与了老化，或老化后的变化；即，人们认为随着胰岛素的分泌量增加，不断老化(ParrT."Insulinexposureandagingtheory(胰岛素曝光和老化原理)"Gerontology.1997;43(3):182-200)。因此，本发明的评价方法可用作评价和筛选老化控制剂的方法。实施例实施例1:由摄入碳水化合物和脂类引起的餐后胰岛素分泌增加对空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，7-8周龄)进行分组，每组十只，使用探针(sonde)以乳液的剂型对小鼠经口施予仅2mg/g体重的葡萄糖(WakoPureChemicalIndustries,Ltd.)作为碳水化合物，或与碳水化合物一起还施予0.5、1.0或2.0mg/g体重的三油酸甘油酯(SigmaCorp.)作为脂类，该乳液用蛋黄卵磷脂乳化0,02mg/g体重的脂类而得到(分别为碳水化合物+脂类0、碳水化合物+脂类1、碳水化合物+脂类2、和碳水化合物+脂类3)。给药物质的组成如表1所示。在给药前和给药10分钟和30分钟后，从每只小鼠的眼眶静脉处采取血样，测量血胰岛素的水平，并计算曲线图的曲线下面积(AUC)。通过ELISA法(胰岛素测定试剂盒，MorinagaBiochemicalLab,Inc.)进行胰岛素的测量。给药10分钟后的血胰岛素的水平值，和给药后30分钟内的胰岛素分泌量(AUC)，如表2所示。9表l<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>从表2的结果可知，与只摄入碳水化合物(葡萄糖)的情况相比较，摄入脂类(三油酸甘油酯)时，餐后胰岛素分泌(血液中水平，分泌量)增加。实施例2:餐后胰岛素分泌与肥胖的相关性(1)餐后胰岛素分泌的测定使用三油酸甘油酯(SigmaCorp.)作为脂类，使用获自甘薯、木薯、马铃薯、野葛、西米、蜡质种玉米、糯米、玉米、小麦和普通大米的淀粉(糊化，得自NipponStarchChemicalCo.,Ltd.)作为碳水化合物。对空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，10至11周龄)进行分组，每组4至5只，使用探针对小鼠经口施予2mg/g体重的碳水化合物，或与碳水化合物一起还施予2mg/g体重的三油酸甘油酯加0.08mg/g体重。给药10分钟后，从每只小鼠的眼眶静脉处采血，测定血糖水平和血胰岛素水平。采用小型血糖仪(葡萄糖脱氢酶/电位差测量法，RocheDiagnostics,Inc.)测定血糖水平。通过ELISA法(胰岛素测定试剂盒，MorinagaBiochemicalLab,Inc.)领!j定胰岛素7K平。(2)进食试验试验饲料中使用的试验淀粉为上述材料，而猪油、酪蛋白、纤维素、AIN76矿物质混合物、AIN76维生素混合物和糊化马铃薯淀粉得自OrientalYeastCo"Ltd.,且使用由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.制造的蔗糖细粒(特级)作为蔗糖。另外，所用的脂肪(TG)是高亚油酸红花油、菜籽油和紫苏子油，脂肪酸的主要组成是油酸、亚油酸、a-亚油酸和棕榈酸。试验饲料的组成是28.5%的淀粉、25%的TG、5%的猪油、13%的蔗糖、20%的酪蛋白、3.5%的AIN76矿物质混合物，和1%的AIN76维生素混合物。用普通饲料(CRF-1:OrientalYeastCo.，Ltd.)喂养七周龄的雄性小鼠C57BL/6JJcl(CREAJapan,Inc.)—周，然后将小鼠分组，使在8周龄时小鼠的初体重几乎一致，并开始试验。每个笼子喂养5只小鼠，每个试验饲料组指定两只笼子(N=10)。通过使用RodenCa促(OrientalYeastCo.，Ltd.)自由喂养来进行喂养，每2天或3天更换新鲜的试验饲料。预先将所用的试验饲料分份成供2至3天，并储存在4"C冰箱中直至使用。喂水通过使用专用的饮水器自由地给予自来水而实现。在试验喂养期，每周测定食物的摄入量和体重。(3)餐后胰岛素分泌与肥胖之间的相关性分析对只摄入碳水化合物、或同时摄入碳水化合物和脂类后的最高血糖水平、最高血胰岛素水平，与在喂养期间增加的体重之间的关系进行分析。结果如表3所示。证明在10周喂养期内，每克摄入量增加的体重(g)，与血糖水平的升高有很高的正相关性，并且较之只摄入碳水化合物(试验淀粉)后的胰岛素分泌的情况，与摄入碳水化合物(试验淀粉)和脂类后的胰岛素分泌有很高的正相关性。因此，发现摄入碳水化合物和脂类后的胰岛素分泌是与肥胖高度相关的因素。表3体重增加的相关系数<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实施例3:糖原的低胰岛素分泌诱导性使用三油酸甘油酯(SigmaCorp.)作为脂类，而使用葡萄糖(WakoPureChemicalIndustries,Ltd.)或糖原(来自甜玉米，QPCorp.)作为碳水化合物。对空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，10至11周龄)进行分组，每组9至10只，并使用探针对小鼠经口施予2mg/g体重的葡萄糖；以乳液剂型与葡萄糖一起还施予2mg/g体重的三油酸甘油酯，该乳液通过用蛋黄卵磷脂乳化0.02mg/g体重的脂类而得到(分别为葡萄糖、和葡萄糖+脂类)；施予2mg/g体重的糖原；或以乳液剂型与糖原一起还施予2mg/g体重的三油酸甘油酯(TAG)，该乳液通过用蛋黄卵磷脂乳化0.02mg/g体重的脂类而得到(分别为糖原、和糖原+脂类)。给药物质的组成如表4所示。在给药前、和给药10分钟和30分钟后，从每只小鼠的眼眶静脉处采取血样，测定血胰岛素水平，并计算曲线图的曲线下面积(AUC)。通过ELISA法(胰岛素测定试剂盒，MorinagaBiochemicalLab，Inc.)测定胰岛素水平。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>给药后30分钟内，分泌的胰岛素量(AUC)的值如表5所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>从表5的结果可知，在只摄入葡萄糖或只摄入糖原的情况下，餐后胰岛素分泌量相当，但是当同时摄入脂类时，与葡萄糖相比较，糖原导致餐后胰岛素分泌量较低。因此，在与脂类共存时，可以看到糖原具有低胰岛素分泌诱导性。实施例4:糖原的抗肥胖作用(1)试验饲料试验饲料(粉状饲料)的组成如表6所示。低脂饲料含有5%的脂类(甘油三酯)，而高脂饲料含有30%的脂类(5%的猪油+25%的丁0)。通过在高脂饲料中搭配5%、10%或28.5%的糖原，制备糖原混合饲料。试验饲料中所用的糖原是来自甜玉米的糖原(QPCorp.)，而猪油、酪蛋白、纤维素、AIN76矿物质混合物、AIN76维生素混合物和糊化马铃薯淀粉得自OrientalYeastCo.,Ltd.，使用由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.制造的蔗糖细粒(特级)作为蔗糖。此外，所用的油脂(TG)是高亚油酸红花油、菜籽油和紫苏子油的混合物，且脂肪酸的主要组成是油酸、亚油酸、a-亚油酸和棕榈酸。表6试验词料组成表<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>(2)试验动物及其喂养用普通饲料(CRF-1:OrientalYeastCo.,Lted.)喂养七周龄的雄性小鼠C57BL/6JJcl(CREAJapan,Inc.)—周，然后将小鼠分组，使在8周龄时，小鼠的初体重几乎一致，并开始试验。每个笼子喂养5只小鼠，为每个试验饲料组指定两只笼子(N=10)。通过用RodenCa伝(OrientalYeastCo.,Ltd.)自由喂养来进行喂养，每2天或3天更换新鲜的试验饲料。预先将所用的试验词料分份成供2至3天，并储存在4t冰箱中直至使用。喂水通过使用专用的饮水器自由地给予自来水而实现。(2)体重测量和内脏脂肪的收集在试验喂养期，每周测量体重。在最后一天的实验中，自由喂养小鼠直至立刻解剖，这样在非空腹条件下收集内脏脂肪，如下所述。麻醉的小鼠立即进行剖腹术，从腹主动脉收集血液，并让小鼠流血致死。收集更多的内脏脂肪(附睾周围的脂肪、肾脏周围的脂肪、腹膜后脂肪、和肠脂)，称重，计算总量作为内脏脂肪量。(4)结果由于每只笼子中集体喂养5只小鼠，在15周的喂养期内有打架的小鼠。因此，2只被认为会突然和快速减肥的动物被排除。结果如表7所示。可以看出，与低脂饲料相比，在15周喂养期内，高脂饲料(对照)造成体重和内脏脂肪量增加，从而导致肥胖。随着糖原搭配量增加，体重和内脏脂肪量下降。表7喂养15周后小鼠的体重和内脏脂肪量(平均)低脂饲料高脂饲料糖原的搭配量(％)对照(0%)5%10%28.5%体重(g)33.736.636.434.432.0内脏脂肪量(g)2.022.882.832.431.77实施例5:l-MAG的降低胰岛素分泌的作用使用三油酸甘油酯(获自SigmaCorp.)作为三酰甘油，并使用1-单油酸甘油酯(获自SigmaCorp.)作为单酰甘油。使用葡萄糖(KantoChemicalCo.,Inc.)作为碳水化合物。将空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，8周龄)分组，每组8只，使用探针向小鼠经口施予仅2mg/g体重的葡萄糖；或以乳液剂型形式施予葡萄糖和2mg/g体重的三油酸甘油酯(TAG),该乳液用蛋黄卵磷脂乳化0.02mg/g体重的脂类而获得(分别为葡萄糖和TAG/MAG0);或施予14混合物，该混合物通过在乳液中分别添加0.08、0.2和0.4mg/g体重的1-单油酸甘油酯(MAG)而得到(分别为TAG/MAG1、TAG/MAG2和TAG/MAG3)。乳液的组成如表8所示。在给药前、给药10分钟和30分钟后，从每只小鼠的眼眶静脉处采取血样，测量血胰岛素的水平，并计算曲线图的曲线下面积(AUC)。通过ELISA法(胰岛素测定试齐U盒，MorinagaBiochemicalLab,Inc,)领!j定胰岛素水平。只摄入葡萄糖的小鼠的胰岛素AUC值作为100，相对于此，给药30分钟后胰岛素分泌量的相对值(AUC)，如表9所示。表8乳液葡萄糖(mg/g体重)三油酸甘油酯(mg/g体重)1-单油酸甘油酯(mg/g体重)葡萄糖2.00.00.0TAG/MAG02.02.00.0TAG/MAG12.02.00.08TAG/MAG22.02.00.2TAG/MAG32.02.00.4表9小鼠的餐后胰岛素分泌量(AUC，相对值)乳液组成餐后胰岛素分泌量(平均)葡萄糖100TAG/MAG0166.7TAG/MAG1147.0TAG/MAG2115.0TAG/MAG386,0从表9的结果可以看出，与只摄入碳水化合物(葡萄糖)的情况相比较，当摄入脂类(TAG)时，餐后胰岛素分泌量增加，但是当小鼠摄入相对于TAG/MAGO量的十分之一量或五分之一量的MAG时，显示餐后胰岛素分泌量降低，从而证明血液中抑制餐后胰岛素分泌的作用。实施例6:l-MAG的抗肥胖作用(1)试验饲料试验饲料(粉状饲料)的组成如表IO所示。低脂饲料含有5%的脂类(TG),高脂饲料含有30%的脂类(TG)。通过在高脂饲料中搭配3%或6%的l-MAG，制备1-单酰甘油酯(l-MAG)混合饲料。试验饲料中所用的l-MAG是Excel0-95R(KaoCorp.),而酪蛋白、纤维素、AIN76矿物质混合物、AIN76维生素混合物和糊化马铃薯淀粉从OrientalYeastCo.，Ltd.获得，且使用由WakoPureChemicalIndustries,Ltd.制造的蔗糖细粒(特级)作为蔗糖。此外，使用的油脂(TG)是高亚油酸红花油，菜籽油和紫苏子油的混合物，脂肪酸的主要组成的是油酸、亚油酸、a-亚油酸和棕榈酸。表10试验饲料组成表高脂饲料搭配量(%)低脂饲料l-MAG的搭配比例对照(0%)3%6%TG303030l-MAG-036蔗糖-131313酪蛋白20202020纤维素4444AIN76矿物质混合物3.53.53.53.5AIN76维生素混合物1111糊化马铃薯淀粉66.528.525.522.5总量(％)100100100100(1)试验动物及喂养用普通饲料(CE-2:CREAJapan,Inc.)喂养七周龄的雄性小鼠C57BL/6JJcl(CREAJapan,Inc.)—周，然后将小鼠分组，使在8周龄时小鼠的初体重几乎一致，并开始试验。每个笼子喂养4只小鼠，为每个试验词料组指定两只笼子(N二8)。通过用RodenCafKOrientalYeastCo.,Ltd.)自由喂养而进行喂养，每2天或3天更换新鲜的试验饲料。预先将所用的试验饲料分份成可供2至3天，并储存在4"C冰箱中直至使用。喂水通过使用专用的饮水器自由地给予自来水而实现。(2)体重测量和内脏脂肪的收集在试验喂养期，每周测量体重。在最后一天的实验中，自由喂养小鼠直至立刻解剖，这样在非空腹条件下收集内脏脂肪，如下所述。麻醉的小鼠立即进行剖腹术，从腹主动脉收集血液，并让小鼠流血致死。收集更多的内脏脂肪(附睾周围的脂肪、肾脏周围的脂肪、腹膜后脂肪、和肠脂)，称重，计算总量作为内脏脂肪量。16结果如表ll所示。可以看出，与低脂词料相比较，在9周喂养期内，高脂饲料(对照)造成体重和内脏脂肪量增加，从而导致肥胖。随着l-MAG搭配量的增加，体重和内脏脂肪量下降。表11喂养9周后小鼠的体重和内脏脂肪量低脂饲料高脂饲料l-MAG的搭配量(％)对照(0%)3%6%体重(g)29.332.931,228.3内脏脂肪量(g)1.562.462.05.50实施例7:羟丙基化磷酸交联淀粉的低胰岛素分泌诱导性已知与高直链淀粉(JP-A-2004-269458)相比，加工淀粉具有肥胖改善作用。将同时摄入加工淀粉和脂类时的胰岛素分泌与摄入高直链淀粉时的胰岛素分泌相比较。使用羟丙基化磷酸交联淀粉(以下称为加工淀粉)(来自木薯，NationalFreejeks,获自NationalStarchandChemicalCompany)禾口高直链淀粉(来自高直链淀粉玉米，Fibos，获自NipponStarchChemicalCo.,Ltd.)作为碳水化合物，且使用三油酸甘油酯(SigmaCorp.)作为脂类。将空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，8周龄)分组，每组8只，使用探针向小鼠经口施予2mg/g体重的加工淀粉或高直链淀粉，或施予乳液剂型的碳水化合物和2mg/g体重的脂类，该乳液用蛋黄卵磷脂乳化0.02mg/g体重的脂类而得到(分别为加工淀粉+脂类、和高直链淀粉+脂类)。在给药前、给药10分钟、30分钟和60分钟后，从每只小鼠的眼眶静脉处采取血样，测定血胰岛素的水平，并计算曲线图的曲线下面积(AUC)。通过ELISA法(胰岛素测定试剂盒，MorinagaBiochemicalLab，Inc.)测定胰岛素水平。给药60分钟后胰岛素分泌量的值(AUC)如表12所示。表12小鼠的餐后胰岛素分泌量餐后胰岛素分泌量(平均AUC)加工淀粉+脂类55.1高直链淀粉+脂类125从表12的结果可以看出，当同时摄入脂类时，与高直链淀粉相比，加工淀粉获得低餐后胰岛素分泌量，而且较之高直链淀粉，加工淀粉与脂类共存时具有低胰岛素分泌诱导性。实施例8:DAG和鱼油的低胰岛素分泌诱导性当二酰甘油和鱼油与碳水化合物一起摄入时的胰岛素分泌，与三酰甘油的胰岛素分泌相比较，其中二酰甘油已知是一种具有肥胖改善作用的脂类。将三酰甘油(TAG)、二酰甘油(DAG，KaoCorp.)和鱼油(得自NOFCorp.，DHA含量47X)用作脂类。而且，所用的油脂(TAG)是高亚油酸红花油、菜籽油和紫苏子油的混合物，脂肪酸的主要组成与DAG相同，是油酸、亚油酸、a-亚油酸和棕榈酸。将空腹小鼠(C57BL/6J，雄性，8周龄)分组，每组10只，使用探针向小鼠经口仅施予2mg/g体重的葡萄糖；或施予乳液剂型的碳水化合物和2mg/g体重的三酰甘油(TAG)、二酰甘油(DAG)或鱼油，该乳液用蛋黄卵磷脂乳化0.02mg/g体重的脂类而得到(分别为仅碳水化合物、碳水化合物+TAG、碳水化合物+DAG，和碳水化合物+鱼油)。在给药前，和给药10分钟和30分钟后，从眼眶静脉处采取血样，测量血胰岛素水平，并计算曲线图的曲线下面积(AUC)。通过ELISA法(胰岛素测定试剂盒，MorinagaBiochemicalLab,Inc.)测定胰岛素水平。将给药30分钟后只摄入葡萄糖的小鼠的胰岛素AUC作为100，相对于此，胰岛素分泌量的相对值如表13所示。表13小鼠的餐后胰岛素分泌量(AUC，相对值)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>从表13的结果可以看出，与只摄入碳水化合物(葡萄糖)的情况相比，当摄入三酰甘油作为脂类时，餐后胰岛素分泌量增加，但是与碳水化合物+TAG的情况相比较，摄入二酰甘油或鱼油作为脂类的小鼠表现出较少的餐后胰岛素分泌量，从而证明血液中抑制餐后胰岛素分泌的作用。众所周知，DAG(MuraseT,etal.,J.LipidRes.2001,42:372-378)和鱼油(IkemotoS，etal.，Metabolism1996,45:1539-1546)与一般脂类相比较，具有肥胖改善作用。权利要求1.一种评价或筛选肥胖控制剂的方法，所述方法包括向动物施予碳水化合物和脂类，和对减少或增加胰岛素分泌的物质进行评价或选择。2.—种评价或筛选肥胖控制剂的方法，所述方法包括以下步骤(l)至(4):(1)通过下述方法(a)和/或(b)向动物施予试验物质的步骤a)在碳水化合物和脂类中添加试验物质，和/或b)用试验物质代替碳水化合物和脂类中至少一种的部分或全部；(2)测定血胰岛素水平和确定胰岛素分泌量的步骤；(3)将步骤(2)中确定的胰岛素分泌量，与只施予碳水化合物和脂类的对照组中的胰岛素分泌量进行比较的步骤；和(4)基于步骤(3)的结果，对减少或增加胰岛素分泌的试验物质评价或选择为肥胖控制剂的步骤。3.—种评价或筛选血胰岛素调节剂的方法，所述方法包括向动物施予碳水化合物和脂类，和对减少或增加胰岛素分泌的物质进行评价或选择。4.一种评价或筛选血胰岛素调节剂的方法，所述方法包括以下步骤(1)至(4):(1)通过下述方法(a)和/或(b)向动物施予试验物质的步骤a)在碳水化合物和脂类中添加试验物质，和/或b)用试验物质代替碳水化合物和脂类中至少一种的部分或全部；(2)测定血胰岛素水平和确定胰岛素分泌量的步骤；(3)将步骤(2)中确定的胰岛素分泌量，与只施予碳水化合物和脂类的对照组中的胰岛素分泌量进行比较的步骤；和(4)基于步骤(3)的结果，对减少或增加胰岛素分泌的试验物质评价或选择为血胰岛素调节剂的步骤。5.—种评价或筛选血糖调节剂的方法，所述方法包括向动物施予碳水化合物和脂类，和对减少或增加胰岛素分泌的物质进行评价或选择。6.—种评价或筛选血糖调节剂的方法，所述方法包括以下步骤(l)至(4):(1)通过下述方法(a)和/或(b)向动物施予试验物质的步骤a)在碳水化合物和脂类中添加试验物质，和/或b)用试验物质代替碳水化合物和脂类中至少一种的部分或全部；(2)测定血胰岛素水平和确定胰岛素分泌量的步骤；(3)将步骤(2)中确定的胰岛素分泌量，与只施予碳水化合物和脂类的对照组中的胰岛素分泌量进行比较的步骤；和(4)基于步骤(3)的结果，对减少或增加胰岛素分泌的试验物质评价或选择为血糖调节剂的步骤。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述碳水化合物是选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉和糖原中的至少一种，所述脂类是选自三酰甘油、l,3-二酰甘油和1，2-二酰甘油中的至少一种。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述动物是啮齿动物。全文摘要本发明提供一种有效评价或选择肥胖控制物质、血胰岛素调节物质或血糖调节物质的方法。本发明还提供一种评价或筛选肥胖控制剂、血胰岛素调节剂或血糖调节剂的方法，该方法包括向动物施予碳水化合物和脂类，和对减少或增加胰岛素分泌的物质进行评价或选择。文档编号G01N33/74GK101548189SQ20078004460公开日2009年9月30日申请日期2007年11月7日优先权日2006年12月6日发明者下丰留玲,水野智仁,目黑真一,福冈大介,竹野菜奈美,铃木淳子申请人:花王株式会社