专利名称：Lc-ms/ms检测饮用水和饮料食品中双酚a的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测饮用水及饮料类食品中双酚A的方法，具体涉及一种以 LC-MS/MS定量检测饮用水和饮料类食品中双酚A的方法。
背景技术：
双酚A是近几年从食品包装材料中新发现的一种“内分泌干扰物”(Endocrine Disrupting Chemicals，E⑶)，具有某些雌激素特性。会影响儿童的发育进程，特别是发育 中的胎儿、婴儿和儿童。数以百计的研究证明了与BPA相关的疾病越来越多，如心血管疾 病、肠道疾病、免疫系统等，也证明了双酚A对干扰人体内分泌系统造成的重大危害。2008 年10月，加拿大联邦政府正式宣布将双酚A(BispherK)I Α,ΒΡΑ)列入有毒物质列表中。加 拿大也成为第一个将双酚A视为有毒物质的国家。加拿大卫生部近日对全国范围内公众 BPA暴露情况进行了调查，根据2010/8/17发布的一份关于加拿大人的尿液研究报告称，平 均每10人中有9个以上的人体内含有BPA (双酚Α)。其中年龄为6岁的加拿大儿童，尿液 中含有BPA占79%到91%。这些数据表明，加拿大儿童和青少年体内含有的BPA含量比以 往任何时候都要高。调查还发现，几乎每一位加拿大民众体内都含有一定数量的ΒΡΑ。美国 纽约州最近通过《禁止儿童和婴幼儿产品使用双酚A法令》，禁止生产、分销和销售含有双 酚A的某些儿童护理产品。《华盛顿邮报》报道说，93%的6岁以上美国人的尿液中，可以检 测到双酚A成分目前，检测双酚A的方法主要有液相/质谱联用(HPLC/MS)、气相/质谱联用(GC/ MS)、酶联免疫法等，这些方法主要应用于对双酚A含量高的样品进行检测，而对于一些双 酚A含量较低的食品类则无能为力。
发明内容
本发明的目的在于提供一种LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其 灵敏度高，检测限低，分析速度快，从而克服了现有技术中的不足。为实现上述发明目的，本发明采用了如下技术方案一种LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征在于，该方法包括 如下步骤(1) LC-MS/MS 条件的确定I、LC-MS色谱条件根据双酚A在色谱柱中保留特性，选取色谱柱，并制定色谱分 析条件；II、MS条件采用常规双酚A质谱分析条件；(2)标准曲线绘制取双酚A标准品溶于甲醇或甲醇与水的混合物，制成一系列浓度的双酚A标准液， 以上述LC-MS/MS条件检测该一系列浓度的双酚A标准液，并根据检测结果绘制标准曲线；(3)样品检测
a、以固相萃取小柱萃取饮用水中的双酚A，再以甲醇将双酚A从固相萃取小柱 中洗脱，除去洗脱液中的甲醇，残渣以甲醇或甲醇与水的混合物溶解，再经过滤后，以上述 LC-MS/MS条件进行检测，将检测结果与标准曲线对照，计算出样品中双酚A的含量；b、将饮料食品与有机溶剂充分混合萃取，经离心或静置处理后，取上层有机相以 无水硫酸钠脱水后，除去有机溶剂，，残渣以甲醇或甲醇与水的混合物溶解，再经过滤后，以 上述LC-MS/MS条件进行检测，将检测结果与标准曲线对照，计算出样品中双酚A的含量。进一步地讲所述LC-MS色谱条件具体为液相色谱柱VarianPolaris C18-A 100X2. 1mm, 5 μ m ；柱温室温；流动相A甲醇，B水；梯度条件0 3min 50% A 90% A，3 6min 90% A，6 12min 50% A ；流速0. 2 0. 5mL/min。
所述MS色谱条件具体为喷雾电压3500V，鞘气40arb，辅助气7arb，毛细管温度330°C，扫描窗口宽度 Q10. 7、Q30. 7，双酚 A 定量离子 212 (18eV)；所述甲醇与水的混合物采用体积比为1 1的甲醇与水形成的混合物。步骤(3)中，所述过滤是采用孔径0.45 μ m的滤膜进行过滤。步骤(3)a中，除去洗脱液中甲醇的操作具体为在40°C下，在氮吹仪上吹干洗脱液。步骤(3) b具体为将饮料食品与过量乙腈均勻混合，经超声、过滤处理后，在滤液中加入异丙醇均勻 混合，再在加热条件下蒸发除去有机溶剂，而后将残留溶液与过量乙酸乙酯均勻混合、静 置，分离出上层乙酸乙酯溶液；重复上述操作一次以上，合并各次所得乙酸乙酯溶液，经无水硫酸钠脱水后蒸干，残 渣用体积比为1 1的甲醇与水的混合物溶解后，以0.45μπι滤膜过滤后，进行LC-MS/MS检测。步骤(3) b具体为将饮料食品与过量乙酸乙酯充分混勻后，进行离心处理，分离出上层乙酸乙酯溶 液；重复上述操作一次以上，合并各次所得乙酸乙酯溶液，经无水硫酸钠脱水后再在 加热条件下蒸发除去有机溶剂，，残渣用体积比为1 1的甲醇与水的混合物溶解后，以 0. 45 μ m滤膜过滤后，进行LC-MS/MS检测。所述加热条件是温度为40°C的条件。步骤(3) a中，所述固相萃取小柱采用C18柱。与现有技术相比，本发明的有益效果是该LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双 酚A的方法检测限低，灵敏度高，检测速度快，能够准确地对样品中双酚A进行定性、定量检 测，适于标准化。
图1为双酚A标准曲线图。
具体实施例方式下面结合若干较佳实施例对本发明的技术方案做进一步详细说明，但本发明并不 仅仅局限于下述实施例。如下实施例中，采用如下LC-MS/MS条件I、LC-MS 色谱条件液相色谱柱:Varian Polaris C18-A 100X 2. 1mm，5 μ m ；柱 温室温；流动相A 甲醇，B 水；梯度条件=Omin 50% A,3min 90% A,3-6min 90% A, 6-8min 50% A ；流速0. 2 0. 5mL/min ；进样量:25 μ L ；当然，本领域技术人员也可根据习知材料，按照双酚A在各种色谱柱中的保留特 性，选取其它合适色谱柱，并制定相应的色谱分析条件；II,MS条件喷雾电压3500V ；鞘气40arb ；辅助气7arb ；毛细管温度330°C ；扫 描窗 口宽度:Q1 0. 7，Q3 :0. 7 ；母离子227，子离子(碰撞能量)133 (25eV), 212 (18eV)。在确定LC-MS/MS条件后，可参照如下方法绘制标准曲线准确称取双酚A 10mg，用甲醇溶解并定容至IOOmL,此时溶液的质量浓度为 0. lmg/mL (于冰箱4°C冷冻保存)，此为双酚A标准贮备液。将标准贮备液用甲醇+水(体 积比 1 1)依次稀释到 5. Ong/mLUO. 0ng/mL、20. 0ng/mL、50. 0ng/mLU00. 0ng/mL，按上述 LC-MS/MS条件进行检测，以双酚A浓度为横坐标，定量离子质谱峰面积为纵坐标绘制标准 曲线，用于分析样品中双酚A的含量。试验结果显示，双酚A的保留时间为4. 90min，定量离 子对为m/z 227/212。以双酚A浓度为横坐标，定量离子峰面积为纵坐标绘制标准曲线(如 图1所示)，得标准曲线函数关系为:y = -185. 14+1212. 7x，相关系数为R2 = 0. 9991，该标 准曲线线性良好，可用于测定样品中分析物的量。实施例1取SEP-PAR C18小柱先用5mL甲醇和5mL水依次淋洗，淋洗流速控制在4mL/min， 在洗净烘干的烧杯中倒入200mL桶装水样，经大体积采样器与该C18小柱相连，上样结束， 用2X4mL的甲醇洗脱，洗脱液在氮吹仪上(40°C )小心吹干，ImL甲醇水溶液(1+1)溶解残 渣，过0. 45 μ m滤膜后供LC/MS/MS检测。取饮用一水样做三个平行，分别为平行样1、平行 样2、平行样3，分析结果见表1。对平行样1重复测定6次，分析结果见表2。通过分析知， 平行样品的相当标准偏差(RSD)为1.52%，重复测定实验的相当标准偏差为2. 91%，重复 性较好。在200mL水样品(确定无BPA)中加入不等量的双酚A，用玻璃棒搅拌均勻，按上述 水的处理方法进行处理，LC/MS/MS方法检测，测其方法加标回收率，结果如表3所示。表1桶装水中双酚A的含量
权利要求
一种LC MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤(1)LC MS/MS条件的确定I、LC MS色谱条件根据双酚A在色谱柱中保留特性，选取色谱柱，并制定色谱分析条件；II、MS条件采用常规双酚A质谱分析条件；(2)标准曲线绘制取双酚A标准品溶于甲醇或甲醇与水的混合物，制成一系列浓度的双酚A标准液，以上述LC MS/MS条件检测该一系列浓度的双酚A标准液，并根据检测结果绘制标准曲线；(3)样品检测a、以固相萃取小柱萃取饮用水中的双酚A，再以甲醇将双酚A从固相萃取小柱中洗脱，除去洗脱液中的甲醇，残渣以甲醇或甲醇与水的混合物溶解，再经过滤后，以上述LC MS/MS条件进行检测，将检测结果与标准曲线对照，计算出样品中双酚A的含量；b、将饮料食品与有机溶剂充分混合萃取，经离心或静置处理后，取上层有机相以无水硫酸钠脱水后，除去有机溶剂，，残渣以甲醇或甲醇与水的混合物溶解，再经过滤后，以上述LC MS/MS条件进行检测，将检测结果与标准曲线对照，计算出样品中双酚A的含量。
2.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征在 于，所述LC-MS色谱条件具体为液相色谱柱Varian Polaris C18-A 100X2. 1mm, 5 μ m ；柱温室温；流动相A甲醇，B水；梯度条件0 3min 50% A 90% A，3 6min 90% A，6 12min 50% A ；流速0. 2 0. 5mL/min。
3.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征在 于，所述MS色谱条件具体为喷雾电压3500V，鞘气40arb，辅助气7arb，毛细管温度330°C，扫描窗口宽度Q1 0. 7、 Q3 0. 7，双酚A定量离子212(18eV)；
4.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征在 于，所述甲醇与水的混合物采用体积比为1 1的甲醇与水形成的混合物。
5.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征在 于，步骤(3)中，所述过滤是采用孔径0.45 μ m的滤膜进行过滤。
6.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征在 于，步骤(3)a中，除去洗脱液中甲醇的操作具体为在40°C下，在氮吹仪上吹干洗脱液。
7.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征在 于，步骤(3)b具体为将饮料食品与过量乙腈均勻混合，经超声、过滤处理后，在滤液中加入异丙醇均勻混 合，再在加热条件下蒸发除去有机溶剂，而后将残留溶液与过量乙酸乙酯均勻混合、静置， 分离出上层乙酸乙酯溶液；重复上述操作一次以上，合并各次所得乙酸乙酯溶液，经无水硫酸钠脱水后蒸干，残渣 用体积比为1 1的甲醇与水的混合物溶解后，以0.45 μ m滤膜过滤后，进行LC-MS/MS检2测。
8.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征在 于，步骤(3)b具体为将饮料食品与过量乙酸乙酯充分混勻后，进行离心处理，分离出上层乙酸乙酯溶液；重复上述操作一次以上，合并各次所得乙酸乙酯溶液，经无水硫酸钠脱水后再在加热 条件下蒸发除去有机溶剂，，残渣用体积比为1 1的甲醇与水的混合物溶解后，以0.45 μ m 滤膜过滤后，进行LC-MS/MS检测。
9.根据权利要求7或8所述的LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特 征在于，所述加热条件是温度为40°C的条件。
10.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，其特征 在于，步骤(3)a中，所述固相萃取小柱采用C18柱。
全文摘要
本发明涉及一种LC-MS/MS检测饮用水和饮料食品中双酚A的方法，包括如下步骤首先根据双酚A在色谱柱和质谱中的特性，制定合适LC-MS/MS条件；其后，藉上述LC-MS/MS条件，取双酚A标样进行测试，并根据检测结果绘制标准曲线；而后，针对不同样品，分别采用固相萃取、萃取、浓缩、过滤等操作对样品进行前处理后，再进行LC-MS/MS检测，将检测结果与标准曲线对照，计算出样品中双酚A的含量。本发明方法检测限低，灵敏度高，检测速度快，能够准确地对样品中双酚A进行定性、定量检测，适于标准化。
文档编号G01N30/06GK101968474SQ20101050474
公开日2011年2月9日 申请日期2010年10月13日 优先权日2010年10月13日
发明者俞晔, 姚卫蓉, 汪仕韬, 汪何雅 申请人:江南大学