一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，样品中残留农药用1%乙酸乙腈均质提取，提取液分别用Florisil固相萃取柱净化和乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、十八烷基硅烷键合相（C18）基质分散净化，气相色谱质谱（GC-MS）检测Florisil柱净化浓缩液中69种农药残留，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测基质分散净化液中27种农药残留，均采用空白基质溶液稀释标准建立校正的标准曲线，GC/MS检测时采用内标法定量，LC-MS/MS检测时采用外标法定量。本方法平均回收率为70.7%～118.6%，平均相对标准偏差（RSD）为3.2%～11.4%，检出限为0.13μg/kg～28.2μg/kg，具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。
【专利说明】一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，属于农药残留量的测定【技术领域】。
【背景技术】
[0002]蔬菜和水果是人类平衡膳食的重要组成部分，蔬菜和水果质量安全非常重要。近年来，由于不正确、不合理使用农药，导致污染蔬菜和水果，引起农药中毒的事件不断发生。为了保障国民消费者的安全，保护国际贸易有序进行，许多国家制定农产品的农药最高残留限量(MRL)标准来保证食品安全。同时，在国际贸易中，MRL也被部分国家和地区用于构建技术性贸易壁垒的工具。
[0003]辣椒及其制品是我国重要的出口创汇农产品，其中，很多辣椒及制品出口到韩国。但韩国食药厅从2012年10月2日起加强对进口辣椒(含干辣椒)中96种农药残留的入境检查，规定辣椒及制品中96种农药最大允许残留限量为0.01mg/kg?5mg/kg (辣椒)和0.07mg/kg?35mg/kg (干辣椒)，并要求所有出口到韩国的辣椒必须随附韩国国外公认检测机构出具的96种农药残留检测报告。
[0004]建立快速、可靠、灵敏和实用的辣椒中96种农药残留检测方法是有效破除该技术贸易措施、限制和缩短出口辣椒检测周期、促进辣椒及制品出口和控制辣椒中农药残留的基础。但目前国内外未见对输韩辣椒中96种农药残留检测方法的报道。可见，建立辣椒及其制品中96种农药残留量的检测方法具有重要意义。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法。
[0006]为实现以上目的，本发明所采用的技术方案是:一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，包括如下步骤:
[0007]( I)提取
[0008]称取辣椒及制品于具塞离心管中，加入1%乙酸乙腈均质提取lmin，加入无水硫酸镁、乙酸钠和水，振荡离心。
[0009](2)净化 I
[0010]移取一定体积样品提取液，浓缩至干后，经Florisil固相萃取柱净化，丙酮/正己烷(1/1，体积比)洗脱，将净化液浓缩定容过膜后，待气相色谱-质谱(GC-MS)检测。
[0011](3)净化 II
[0012]移取样品提取液于离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡，离心，吸取上清液过0.22 μ m有机相滤膜，待液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测。
[0013](4) 69种农药标准工作溶液的配制
[0014]将空白样品按上述步骤(I)、(2)处理，得样品提取净化残渣，加入适量溶剂、内标溶液和混合标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的69种农药系列混合标准工作液。[0015](5) 27种农药标准工作溶液的配制
[0016]将空白样品按上述步骤(I)、(3)处理，用该空白样品基质溶液配制至少三个浓度的27种农药系列混合标准工作液。
[0017](6)气相色谱-质谱(GC-MS)测定
[0018]将步骤(4)中各浓度梯度的标准工作液进行GC-MS测定，以标准工作液与内标物的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化后的样品液注入GC-MS测定，测得样品液中69种农药与内标物的色谱峰面积比，代入标准曲线，得到样品液中69种农药含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中69种农药残留量。
[0019](7)液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定
[0020]将步骤(5)中各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(3)中净化后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中27种农药的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中27种农药含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中27种农药残留量。
[0021]步骤(I)中辣椒及制品若为脱水样品，需降低称样量，并加适量水充分浸润。
[0022]步骤(2)中对提取液和净化液进行浓缩时，需加入一定量的正十烷，并控制温度在40°C下进行。
[0023]步骤(3)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸镁、C18和PSA组成，每体积提取液中无水硫酸镁、C18和PSA加入量分别为100mg、50mg和25mg。
[0024]步骤(4)中69种农药分别为唳虫脒(Acetemiprid)、氟丙菊酯(Acrinathrin)、P密菌酯(Azoxystrobin)、联苯菊酯(Bifenthrin)、唳酰菌胺(Boscalid)、硫线憐(Cadusafos)、溴虫臆(Chlorfenapyr)、百菌清(Chlorothalonil)、毒死蝶(Chlorpyrifos)、环氟菌胺(Cyflufenamid)、氟氯氰菊酯(Cyfluthrin)、氯氟氰菊酯(Cyhalothrin)、氯氰菊酯(Cypermethrin)、溴氰菊酯(Deltamethrin)、 二嗪磷(Diazinon)、乙霉威(Diethofencarb)、烯酰吗啉(Dimethomorph)、丙线磷(Ethoprophos)、乙螨唑(Etoxazole)、咪唑菌酮(Fenamidone)、氯苯卩密唳醇(Fenarimol)、杀螟硫磷(Fenitrothion)、氰戍菊酯(Fenvalerate)、卩密螨酯(Fluacrypyrim)、咯菌臆(Fludioxonil)、喹唑菌酮(Fluquinconazole)、氟娃唑(Flusilazole)、氟酰胺(Flutolanil)、却虫威(Indoxacarb)、异丙菌胺(Iprovalicarb)、亚胺菌(Kresoxim-methyl)、马拉硫憐(Malathion)、卩密菌胺(Mepanipyrim)、臆菌唑(Myclobutanil)、恶霜灵(Oxadixyl)、卩密卩定憐(Pirimiphos-ethyl)、甲基卩密 P定憐(Pirimiphos-methyl)、烯丙苯噻唑(Probenazole)、咪鲜胺(Prochloraz)、腐霉利(Procymidone)、丙溴磷(Profenofos)、卩比唑硫磷(Pyraclofos)、卩比唑醚菊酯(Pyraclostrobin)、咕螨灵(Pyridaben)、卩定虫丙醚(Pyridalyl )、卩密霉胺(Pyrimethanil )、批丙醚(Pyriproxyfen)、娃氟唑(Simeconazole)、卩比螨胺(Tebufenpyrad)、丁基卩密唳磷(Tebupirimf os)、七氟菊酯(Tef luthr in)、特丁磷(Terbuf os)、四氯杀螨砜(Tetradif on)、甲苯氟石黄胺(Tolylf luanid)、三唑环(Tricyclazole)、月亏菌酯(Trif loxystrobin)、氟菌唑(TrifIumizole)、苯酰菌胺(Zoxamide)、乙卩密酹磺酸酯(Bupirimate)、三氯杀螨醇(Dicofol)、硫丹(Endosulfan)、乙硫磷(Ethion)、甲氰菊酯(Fenpropathrin)、氟虫腈(FiproniI)、伏杀硫磷(Phosalone)、三唑磷(Triazophos)、喹硫磷(Quinalphos)、灭菌丹(FoIpet)、扑海因(Iprodione)。
[0025]步骤(5)中27种农药分别为Π引唑磺菌胺(Amisulbrom)、氯虫苯甲酰胺(Chlorantraniliprole)、噻虫胺(Clothianidin)、氰霜唑(Cyazofamid)、霜脲氰(Cymoxanil )、噻唑菌胺(Ethaboxam)、环酰菌胺(Fenhexamid)、氟唳虫酰胺(Flonicamid)、氟唳胺(Fluazinam)、氟虫双酰胺(Flubendiamide)、氟虫脲(Flufenoxuron)、氟丙氧服(Lufenuron)、叶菌唑(Metconazole)、灭多威(Methomyl)、甲氧虫酸餅(Methoxyfenozide)、苯菌酮(Metrafenone)、双苯氟服(Novalruon)、虫酸餅(Tebufenozide)、氟苯服(Teflubenzuron)、噻虫啉(Thiacloprid)、噻虫嗪(Thiamethoxam)、硫双威(Thiodicarb)、克百威(Carbofuran)、乐果(Dimethoate)、甲硫威(Methiocarb)、喹螨醚(Fenazaquin)、唑螨酯(Fenpyroximate)。步骤(6)中 GC-MS 分析条件为:色谱柱:HP-5MS毛细管色谱柱，柱长30m，内径0.25mm,膜厚0.25 μ m ;进样口温度2600C ;载气:He，不分流模式进样，进样量:1 μ L ;恒流模式，流速1.0mL/min ;升温程序:初温60°C保持2min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每分钟2°C的速度升至220°C，再以每分钟5°C的速度升至260°C，最后以每分钟10°C的速度升至280°C，保持IOmin ;传输线温度:280°C;电离模式:EI，能量70eV ;离子源温度200°C;扫描方式:选择离子监测(SM)模式。
[0026]步骤(6)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在这种农药；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
[0027]步骤(7)中液相色谱分析条件为:流动相A:含5mmol/L乙酸铵的水溶液，流动相B:乙腈；色谱柱填料为C18 ;采用梯度洗脱的方法，梯度洗脱程序为:
[0028]
【权利要求】
1.一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)提取 称取辣椒及制品于具塞离心管中，加入1%乙酸乙腈均质提取I min，加入无水硫酸镁、乙酸钠和水，振荡离心； (2)净化I 移取一定体积样品提取液，浓缩至干后，经Florisil固相萃取柱净化，丙酮/正己烷(1/1，体积比)洗脱，将净化液浓缩定容过膜后，待气相色谱-质谱(GC-MS)检测； (3)净化II 移取样品提取液于离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡，离心，吸取上清液过0.22 μπι有机相滤膜，待液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测； (4)69种农药标准工作溶液的配制 将空白样品按上述步骤(I )、(2)处理，得样品提取净化残渣，加入适量溶剂、内标溶液和混合标准溶液，涡旋混匀，配制成至少3个浓度的69种农药系列混合标准工作液； (5)27种农药标准工作溶液的配制 将空白样品按上述步骤(1)、(3)处理，用该空白样品基质溶液配制至少三个浓度的27种农药系列混合标准工作液； (6)气相色谱-质谱(GC-MS)测定 将步骤(4)中各浓度梯度的标准工作液进行GC-MS测定，以标准工作液与内标物的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化后的样品液注入GC-MS测定，测得样品中69种农药与内标物的色谱峰面积比，代入标准曲线，得到样品液中69种农药含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中69种农药残留量； (7)液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定 将步骤(5)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(3)中净化后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中27种农药的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中27种农药含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中27种农药残留量。
2.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(1)中辣椒及制品若为脱水样品，需降低称样量，并加适量水充分浸润。
3.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(2)中对提取液和净化液进行浓缩时，需加入一定量的正十烷，并控制温度在40°C下进行。
4.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(3)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸镁、C18和PSA组成，每体积提取液中无水硫酸镁、C18和PSA加入量分别为100 mg,50 mg和25 mg。
5.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(4)中69种农药分别为唳虫脒(Acetemiprid)、氟丙菊酯(Acrinathrin)、嘧菌酯(Azoxystrobin)、联苯菊酯(Bifenthrin)、P定酰菌胺(Boscalid)、硫线憐(Cadusafos)、溴虫臆(Chlorfenapyr)、百菌清(Chlorothalonil)、毒死蜱(Chlorpyrifos)、环氟菌胺(Cyflufenamid)、氟氯氰菊酯(Cyfluthrin)、氯氟氰菊酯(Cyhalothrin)、氯氰菊酯(Cypermethrin)、溴氰菊酯(Deltamethrin)、二嗪磷(Diazinon)、乙霉威(Diethofencarb)、烯酰吗啉(Dimethomorph)、丙线磷(Ethoprophos)、乙螨唑(Etoxazole)、咪唑菌酮(Fenamidone)、氯苯啼卩定醇(Fenarimol )、杀螟硫磷(Fenitrothion)、氰戊菊酯(Fenvalerate)、啼螨酯(Fluacrypyrim)、咯菌臆(Fludioxonil)、喹唑菌酮(Fluquinconazole)、氟娃唑(Flusilazole)、氟酰胺(Flutolanil )、節虫威(Indoxacarb)、异丙菌胺(Iprovalicarb)、亚胺菌(Kresoximnethyl)、马拉硫憐(Malathion)、啼菌胺(Mepanipyrim)、臆菌唑(Myclobutanil)、恶霜灵(Oxadixyl)、啼卩定憐(Pirimiphos-ethyl)、甲基啼 P定憐(Pirimiphos-methyl)、烯丙苯噻唑(Probenazole)、咪鲜胺(Prochloraz)、腐霉^lJ (Procymidone)λ丙溴磷(Profenofos)、吡唑硫磷(Pyraclofos)、吡唑醚菊酯(Pyraclostrobin)、PJi螨灵(Pyridaben)、卩定虫丙醚(Pyridalyl )、啼霉胺(Pyrimethanil )、批丙醚(Pyriproxyfen)、娃氟唑(Simeconazole)、吡螨胺(Tebufenpyrad)、丁基啼卩定磷(TebupirimfOs)、七氟菊酯(Tefluthrin)、特丁磷(TerbufOs)、四氯杀螨砜(Tetradifon)、甲苯氟横胺(Tolylf Iuanid)、三唑环(Tricyclazole)、月亏菌酯(Trif loxystrobin)、氟菌唑(TrifIumizole)、苯酰菌胺(Zoxamide)、乙啼酷磺酸酯(Bupirimate)、三氯杀螨醇(Dicofol)、硫丹(Endosulfan)、乙硫磷(Ethion)、甲氰菊酯(Fenpropathrin)、氟虫腈(FiproniI)、伏杀硫磷(Phosalone)、三唑磷(Triazophos)、喹硫磷(Quinalphos)、灭菌丹(FoIpet )、扑海因(Iprodione)。
6.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(5)中27种农药分别为Π引唑磺菌胺(Amisulbrom)、氯虫苯甲酉先胺(Chlorantraniliprole)、噻虫胺(Clothianidin)、氰霜唑(Cyazofamid)、霜脲氰(Cymoxanil)、噻唑菌胺(Ethaboxam)、环酰菌胺(Fenhexamid)、氟卩定虫酰胺(Flonicamid)、氟 P定胺(Fluazinam)、氟虫双酰胺(Flubendiamide)、氟虫脲(Flufenoxuron)、氟丙氧服(Lufenuron)、叶菌唑(Metconazole)、灭多威(Methomyl)、甲氧虫酸餅(Methoxyfenozide)、苯菌酮(Metrafenone)、双苯氟服(Novalruon)、虫酉先餅(Tebufenozide)、氟`苯服(Teflubenzuron)、噻虫啉(Thiacloprid)、噻虫嗪(Thiamethoxam)、硫双威(Thiodicarb)、克百威(Carbofuran)、乐果(Dimethoate)、甲硫威(Methiocarb )、喹螨醚(Fenazaquin )、唑螨酯(Fenpyroximate )。
7.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(6)中GC-MS分析条件为:色谱柱:HP-5 MS毛细管色谱柱，柱长30 m，内径0.25mm，膜厚0.25 Wn ;进样口温度260.(TC ;载气:He，不分流模式进样，进样量:I μ? ;恒流模式，流速1.0 mL/min ;升温程序:初温60 °C保持2 min，以每分钟20°C的速度升至200°C，然后以每分钟2°C的速度升至220°C，再以每分钟5°C的速度升至260°C，最后以每分钟10°C的速度升至280°C，保持IOmin ;传输线温度:280° C ;电离模式:EI，能量70 eV ;离子源温度200° C ;扫描方式:选择离子监测(SIM)模式。
8.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(6)中测定样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在这种农药；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
9.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(7)中液相色谱分析条件为:流动相A:含5 mmol/L乙酸铵的水溶液，流动相B:乙腈；色谱柱填料为C18 ;采用梯度洗脱的方法，梯度洗脱程序为:
10.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(7)中电喷雾电压为-3000至-4000 V条件下，质谱检测的农药为氟唳胺(Fluazinam)、氟虫双酰胺(Flubendiamide)、氟丙氧脲(Lufenuron)和氟苯脲(Teflubenzuron)中的一种或多种；电喷雾电压为+3000至+4000 V条件下质谱检测的农药为其余23种农药中的一种或多种。
11.根据权利要求1所述的一种辣椒及其制品中96种农药残留量的测定方法，其特征在于，步骤(7)中质谱检测使用多反应监测(MRM)扫描模式，检测所述滤液中农药的母离子和子离子对，若其离子色谱峰保留时间与标准工作溶液一致；且滤液(样品)中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当的空白基质标准溶液的离子相对丰度偏差不超过30%时，则判断该样品中存在该种农药；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。
【文档编号】G01N30/88GK103512993SQ201310475356
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2013年10月12日 优先权日:2013年10月12日
【发明者】崔淑华, 刘润珠, 刘靖靖, 汤志旭, 王建华, 王境堂 申请人:崔淑华