一种采收与加工对金银花品质影响的实验方法
【专利摘要】本发明公开了一种采收与加工对金银花品质影响的实验方法，以绿原酸为质量控制指标进行测定，对不同采收时期、加工方法和地质条件的金银花进行实验，得出了符合绿原酸质量指标的参考数据，为金银花的品质评价及质量控制提供依据。本发明通过对不同采收时间和加工方法对金银花品质的影响进行系统研究，确立了金华金银花的较优采收时间和加工方法，提高了金华金银花的品质，从而提高其在医药市场竞争力，保证人类健康，同时增加农民收益，促进了地方的经济发展，弥补了现有缺少关于采收与加工对金银花品质影响实验方法，无法为金银花的采收、加工提供参考依据的空白。
【专利说明】—种采收与加工对金银花品质影响的实验方法
【技术领域】
[0001]本发明属于金银花研究【技术领域】，尤其涉及一种采收与加工对金银花品质影响的实验方法。
【背景技术】
[0002]金银花始载《名医别录》，2005版中国药典首次将金银花与山银花两个品种分列，金银花为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花。山银花是忍冬科植物灰租毛忍冬LoniceramaeranthoidesHandMazz、红腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.或华南忍冬LoniceraconfusaDC.的干燥花蕾或带初开的花。金银花应用历史悠久，且应用范围极广，据资料分析，中医三分之一方剂中要用到金银花。传统医学认为金银花性味甘、寒，具有清热解毒、凉散风热的功能，用于痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热血毒痢、风热感冒、瘟病发热等症，属清热解毒之要药。金银花对多种致病菌均有抑制作用，是一种广谱抗菌中药，有“中药之中的青霉素”之美称，在“非典”防治、抗击禽流感及甲型HlNl病毒中都发挥着重要作用。
[0003]金银花富含挥发油，此外，还含有黄酮类、有机酸、三萜类及无机元素等。现代药理实验研究证明金银花具有抗菌、抗病毒、增强免疫功能、抗炎解热、利胆保肝、降血脂、止血、抗氧化、抗生育等作用。金银花为中药购销中实行国家管理的二类品种，产地集中，调剂面大，在市场上严禁非法倒卖、走私。是卫生部和国家工商局关于30个贵重药材通知中的品种，并列为出口创汇的主要品种之一。
[0004]金银花在在金华的种植面积较大，产量高，经济效益可观，但必须注重金银花的的质量，重视比较优势，以绿原酸为指标，评价金华金银花质量的品质是非常关键的。
[0005]现有缺少关于采收与加工对金银花品质影响实验方法，无法为金银花的采收、力口工提供参考依据，限制了金银花产业的发展，同时也制约了种植地的经济发展。
【发明内容】
[0006]本发明实施例的目的在于提供一种采收与加工对金银花品质影响的实验方法，旨在解决现有缺少关于采收与加工对金银花品质影响实验方法，无法为金银花的采收、加工提供参考依据的问题。
[0007]本发明实施例是这样实现的，一种采收与加工对金银花品质影响的实验方法，该采收与加工对金银花品质影响的实验方法包括:
[0008]用高效液相色谱法测定金银花中氯原酸的含量，以超声提取法提取金银花中绿原酸；
[0009]以大白期金银花为材料对杀青干燥、蒸后烘干、直接晒干、硫熏干燥对金银花外观性状和有效成分绿原酸的影响进行比较分析，确定金银花的加工方法以杀青干燥为主，选择杀青烘干法条件为杀青温度120°C，时间90秒；
[0010]采摘五月下旬至六月下旬，以及九月中旬至十月中旬的金银花，比较不同采收时间对金银花中绿原酸含量的影响，确定金银花中绿原酸的含量以五月底六月初时含量最闻;
[0011]通过比较不同产地不同品种金银花中绿原酸的含量，是否高于1.5%，确定产地的物候条件是否适宜种植金银花；
[0012]分别对金银花王，湘蕾一号，湘蕾二号，大花金银花不同品种金银花进行绿原酸含量测定，以确定大面积适宜种植的产品。
[0013]进一步，通过比较不同提取方法对绿原酸含量影响的方法为:
[0014]步骤一，色谱条件及系统适用性实验:
[0015]色谱柱:Z0BAXSB— C18 柱,250mmX 4.6mm, 5 μ m ;流动相:乙腈-0.4 % 磷酸溶液14:86 ;流速:1.0ml.mirT1 ;柱温:35°C;检测波长:327nm ;进样体积:5μ L，理论塔板数按绿原酸峰计算大于3000，与相邻色谱峰的达到基线分离，重复性好；
[0016]步骤二，供试品溶液的制备:
[0017]取金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0018]取金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉0.5g，置圆底烧瓶中，精密加入70%乙醇50ml,回流提取30min,过滤,药洛重复上述操作,合并两次滤液,浓缩,定容至50ml容量瓶中，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0019]取金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉0.5g，置圆底烧瓶中，精密加入水50ml，煮沸30min，过滤，药渣重复上述操作，合并两次滤液，浓缩，定容至50ml容量瓶中，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0020]步骤三，对照品溶液的制备:
[0021]称取绿原酸对照品，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每ml含0.1096mg的溶液，SP得对照品溶液；
[0022]步骤四，线性关系考察:
[0023]吸取对照品溶液1.0ml, 2.0ml, 3.0ml, 4.0ml, 5.0ml，分别置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0ml，摇匀，按色谱条件测定绿原酸的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=2.19X IO8X-L 52Χ105，r=0.9996，绿原酸进样浓度在21.20 μ g.πι 1~106.0 μ g.πι 1内峰面积积分值与浓度呈线性关系；
[0024]步骤五，进样精密度实验:
[0025]吸取对照品溶液2.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0ml，摇匀，作为对照液，连续进样5次，进行测定，峰面积的RSD=0.71% ；
[0026]步骤六，稳定性实验:
[0027]吸取步骤四下对照液，分别在0h，2h，4h，8h，12h进样，进行测定，绿原酸峰面积的RSD=0.77%，结果表明在12h内稳定性较好；
[0028]步骤七，重复性实验:
[0029]称取同一号样品五份，按步骤二供试品项下操作，制得供试品溶液，进行测定，绿原酸平均质量分数的RSD = 2.12% ；
[0030]步骤八，加样回收实验:[0031]称取已知含量的样品五份，精密加入对照品溶液2.0ml或0.212mg ^mr1,按步骤二的方法制备供试品溶液，测定并计算回收率，得平均加样回收率为102.3%, RSD = 1.57% ；
[0032]步骤九，样品测定:
[0033]按步骤二的供试品溶液制备方法制备3个样品溶液，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，分别进样测定，用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。
[0034]进一步，比较不同加工方法对金银花绿原酸含量影响的方法为:
[0035]步骤一，供试品溶液制备:分别取四种金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉各0.5g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0036]步骤二，样品测定:
[0037]取制备后的4个样品溶液，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，分别进样测定，用外标法计
算样品中绿原酸的百分含量。
[0038]步骤三，采用正交实验，确定杀青烘干最佳工艺，杀青时将温度控制在120°C，时间在90秒,绿原酸含量最闻。
[0039]进一步，比较不同采收时间对金银花绿原酸含量影响的方法为:
[0040]步骤一，第一次花期的采收时间集中在金银花大量采摘的六月上旬，隔I~2天采摘一次，第二次花期的采摘时间集中在九月下旬，隔五天采摘一次，样品采摘后，均采用杀青烘干法加工；
[0041]步骤二，分别取不同采收时间制得的各个样品研成细粉，过四号筛，称取细粉各
0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0042]步骤三，将取制得后的各样品溶液，按绿原酸含量测定方法操作，分别进样测定，用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。
[0043]进一步，九十月份的花蕾作为食品加工企业金银花饮料、凉茶的原材料。
[0044]进一步，比较产地对金银花绿原酸含量影响的方法:
[0045]步骤一，分别取金银花不同产地样品研成细粉，过四号筛，称取细粉各0.5g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0046]步骤二，按照步骤一制备4个样品溶液，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，分别进样测定，用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。
[0047]进一步，比较不同品种对金银花绿原酸含量影响的方法:
[0048]步骤一，选择金银花王，湘蕾一号，湘蕾二号，大花金银花，对不同品种的金银花进行含量测定，以确定大面积适宜种植的产品；
[0049]步骤二，分别取金银花不同品种样品研成细粉，过四号筛，称取细粉各0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲 醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0050]步骤三，按照步骤一制备4个样品溶液，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，分别进样测定，用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。
[0051]进一步，金银花王，湘蕾一号，湘蕾二号，大花金银花四个品种的绿原酸含量在
4.282?6.498之间，大花金银花的绿原酸含量最高。
[0052]本发明提供的采收与加工对金银花品质影响的实验方法，以绿原酸为质量控制指标进行测定，对不同采收时期、加工方法和地质条件的金银花进行实验，得出了符合绿原酸质量指标的参考数据，为金银花的品质评价及质量控制提供依据。本发明通过对不同采收时间和加工方法对金银花品质的影响进行系统研究，确立了金华金银花的较优采收时间和加工方法，提高了金华金银花的品质，从而提高其在医药市场竞争力，保证人类健康，同时增加农民收益，促进了地方的经济发展，弥补了现有缺少关于采收与加工对金银花品质影响实验方法，无法为金银花的采收、加工提供参考依据的空白。
【专利附图】
【附图说明】
[0053]图1是本发明实施例提供的采收与加工对金银花品质影响的实验方法流程图；
[0054]图2是本发明实施例提供的绿原酸对照品HPLC图谱示意图；
[0055]图3是本发明实施例提供的金银花样品HPLC图谱示意图。
【具体实施方式】
[0056]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0057]下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0058]如图1所示，本发明实施例的采收与加工对金银花品质影响的实验方法包括:
[0059]SlOl:用高效液相色谱法测定金银花中氯原酸的含量，以超声提取法提取金银花中绿原酸；
[0060]S102:以大白期金银花为材料对杀青干燥、蒸后烘干、直接晒干、硫熏干燥对金银花外观性状和主要有效成分绿原酸的影响进行比较分析，确定金银花的加工方法以杀青干燥为主，选择杀青烘干法条件为杀青温度120°C，时间90秒；
[0061]S103:采摘五月下旬至六月下旬，以及九月中旬至十月中旬的金银花，比较不同采收时间对金银花中绿原酸含量的影响，确定金银花中绿原酸的含量以五月底六月初时含量最闻;
[0062]S104:通过比较不同产地不同品种金银花中绿原酸的含量，是否高于1.5%，确定产地的物候条件是否适宜种植金银花；
[0063]S105:分别对金银花王，湘蕾一号，湘蕾二号，大花金银花不同品种金银花进行绿原酸含量测定，以确定大面积适宜种植的产品。
[0064]通过以下的实验对本发明的应用效果做进一步的描述:
[0065]一、实验样品:
[0066]1.1 基原:[0067]忍冬为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花，山银花为忍冬科植物灰租毛忍冬LoniceramacranthoidesHand.-Mazz.、红腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq或华南忍冬LoniceraconfuseDC.的干燥花蕾或带初开的花,夏初花开放前米收，干燥；
[0068]1.2产地:金银花(忍冬):主产山东、河南、河北，全国大部地区有分布，灰毡毛忍冬:主产湖南隆回、湖北、重庆、四川等地，华南忍冬:主产于广东、海南和广西，红腺忍冬:主产浙江、江西、福建、湖南、广东、广西、四川等省区；
[0069]1.3原植物形态:
[0070]忍冬，半常绿藤本；幼枝洁红褐色，密被黄褐色、开展的硬直糙毛、腺毛和短柔毛，下部常无毛，叶纸质，卵形至矩圆状卵形，有时卵状披针形，稀圆卵形或倒卵形，极少有I至数个钝缺刻，长3-5 (-9.5)厘米，顶端尖或渐尖，少有钝圆或微凹缺，基部圆或近心形，有糙缘毛，上面深绿色，下面淡绿色，小枝上部叶通常两面均密被短糙毛，下部叶常平滑无毛而下面多少带青灰色；叶柄长4-8毫米，密被短柔毛，总花梗通常单生于小枝上部叶腋，与叶柄等长或稍较短，下方者则长达2-4厘米，密被短柔后，并夹杂腺毛；苞片大，叶状，卵形至椭圆形，长达2-3厘米，两面均有短柔毛或有时近无毛；小苞片顶端圆形或截形，长约I毫米，为萼筒的1/2-4/5，有短糙毛和腺毛；萼筒长约2毫米，无毛，萼齿卵状三角形或长三角形，顶端尖而有长毛，外面和边缘都有密毛；花冠白色，有时基部向阳面呈微红，后变黄色，长(2-) 3-4.5 (-6)厘米，唇形，筒稍长于唇瓣，很少近等长，外被多少倒生的开展或半开展糙毛和长腺毛，上唇裂片顶端钝形，下唇带状而反曲；雄蕊和花柱均高出花冠，果实圆形，直径6-7毫米，熟时蓝黑色，有光泽；种子卵圆形或椭圆形，褐色，长约3毫米，中部有I凸起的脊，两侧有浅的横沟纹，花期4-6月(秋季亦常开花)，果熟期10-11月；
[0071]1.4化学成分:
[0072]有关金银花的化学成分研究表明，金银花富含挥发油(芳樟醇、双花醇等)，此外还含有机酸(绿原酸、异绿原酸、咖啡酸、棕榈酸等)、黄酮类、皂苷类等化学成分，金银花具有清热解毒，凉散风热之功效，绿原酸为其有效活性成分，具有抗菌、抗病毒、解热、升高白细胞、保肝利胆、免役调节、抗肿瘤、降血脂、清除自由基等作用；
[0073]1.5药材性状:
[0074]忍冬呈棒状，上粗下细，略弯曲，长2?3cm，上部直径约3mm，下部直径约1.5mm,表面黄白色或绿白色(贮久色渐深)，密被短柔毛，偶见叶状苞片，花萼绿色，先端5裂，裂片有毛，长约2_，开放者花冠筒状，先端二唇形；雄蕊5个，附于筒壁，黄色；雌蕊I个，子房无毛，气清香，味淡、微苦；
[0075]山银花:
[0076]灰毡毛忍冬呈棒状而稍弯曲，长3?4.5cm,上部直径约2mm，下部直径约1mm，表面绿棕色至黄白色，总花梗集结成簇，开放者花冠裂片不及全长之半，质稍硬，手捏之稍有弹性，气清香，味微苦甘；
[0077]红腺忍冬长2.5?4.5cm,直径0.8?2mm,表面黄白至黄棕色,无毛或疏被毛,萼筒无毛，先端5裂，裂片长三角形，被毛，开放者花冠下唇反转，花柱无毛；
[0078]华南忍冬长1.6?3.5cm，直径0.5?2mm，萼筒和花冠密被灰白色毛，子房有毛。
[0079]二、实验方法:[0080](一)不同提取方法对绿原酸含量的影响:
[0081]为了避免不同提取、测定方法对金银花的含量产生影响，本发明考察了水提法、乙醇回流提取法、超声提取法中金银花绿原酸的含量，优选合适的绿原酸提取方法；
[0082]1.样品制备:
[0083]1.1 仪器:
[0084]Agilentl200 液相色谱仪；电子天平(MettlerToledoAL104);超声仪 HS3120,
[0085]1.2试剂与试药:
[0086]甲醇与磷酸为分析纯；乙腈为色谱纯；水为重蒸水；绿原酸对照品(批号:110753-200413)；
[0087]金银花药材为忍冬科植物灰租毛忍冬LoniceramaeranthoidesHandMazz干燥花雷;
[0088]2.方法与结果:
[0089]2.1色谱条件及系统适用性实验:
[0090]色谱柱:Z0BAXSB— C18 柱(250_Χ4.6mm, 5 μ m);流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(14:86);流速:1.0ml.mirT1 ;柱温:35°C ;检测波长:327nm ;进样体积:5μ L，理论塔板数按绿原酸峰计算不低于3000，与其相邻色谱峰的达到基线分离，重复性好，对照品和供试品的高效液相色谱图见图2和图3 ;
[0091]2.2供试品溶液的制备:
[0092]①号样品制备:取金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0093]②号样品制备:取金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉约0.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入70%乙醇50ml，回流提取30min，过滤，药渣重复上述操作，合并两次滤液，浓缩，定容至50ml容量瓶中，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0094]③号样品制备:取金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉约0.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入水50ml，煮沸30min，过滤，药渣重复上述操作，合并两次滤液，浓缩，定容至50ml容量瓶中，摇匀，滤过，精密取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得；
[0095]2.3对照品溶液的制备:
[0096]精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每ml含0.1096mg的溶液，即得对照品溶液；
[0097]2.4线性关系考察:
[0098]精密吸取对照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml，分别置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0ml，摇匀，按上述色谱条件测定绿原酸的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=2.19X IO8X-L 52Χ105, r=0.9996，绿原酸进样浓度在21.20~106.0 μ g.ml-1内峰面积积分值与浓度呈线性关系；
[0099]2.5进样精密度实验:[0100]精密吸取对照品溶液2.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0ml，摇匀，作为对照液，连续进样5次，进行测定，峰面积的RSD=0.71% ；
[0101]2.6稳定性实验:
[0102]精密吸取2.4项下对照液，分别在0，2，4，8，12h进样，进行测定，绿原酸峰面积的RSD=0.77%，结果表明在12h内稳定性较好；
[0103]2.7重复性实验:
[0104]精密称取同一号样品五份，按2.2供试品项下操作，制得供试品溶液，进行测定，绿原酸平均质量分数的RSD = 2.12% ；
[0105]2.8加样回收实验:
[0106]精密称取已知含量的样品五份，精密加入对照品溶液2.0ml (0.212mg.ml-1)，按2.2项下方法制备供试品溶液，测定并计算回收率，如表1所示，得平均加样回收率为102.3%, RSD = 1.57% ；
[0107]表1.金银花中绿原酸加样回收率试验(η=5)
[0108]
【权利要求】
1.一种采收与加工对金银花品质影响的实验方法，其特征在于，该采收与加工对金银花品质影响的实验方法包括: 用高效液相色谱法测定金银花中氯原酸的含量，以超声提取法提取金银花中绿原酸；以大白期金银花为材料对杀青干燥、蒸后烘干、直接晒干、硫熏干燥对金银花外观性状和有效成分绿原酸的影响进行比较分析，确定金银花的加工方法以杀青干燥为主，选择杀青烘干法条件为杀青温度120°c，时间90秒； 采摘五月下旬至六月下旬，以及九月中旬至十月中旬的金银花，比较不同采收时间对金银花中绿原酸含量的影响，确定金银花中绿原酸的含量以五月底六月初时含量最高； 通过比较不同产地不同品种金银花中绿原酸的含量，是否高于1.5%，确定产地的物候条件是否适宜种植金银花； 分别对金银花王，湘蕾一号，湘蕾二号，大花金银花不同品种金银花进行绿原酸含量测定，以确定大面积适宜种植的产品。
2.如权利要求1所述的采收与加工对金银花品质影响的实验方法，其特征在于，通过比较不同提取方法对绿原酸含量影响的方法为: 步骤一，色谱条件及系统适用性实验: 色谱柱:ZOBAXSB — C18 柱,250mmX 4.6mm, 5 μ m ;流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液 14:86 ；流速:1.0ml.min-1 ;柱温:35°C ;检测波长:327nm ;进样体积:5μ L,理论塔板数按绿原酸峰计算大于3000，与相邻色谱峰的达到基线分离，重复性好； 步骤二，供试品溶液的制备: 取金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉0.5g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得； 取金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉0.5g，置圆底烧瓶中，加入70%乙醇50ml，回流提取30min，过滤，药渣重复上述操作，合并两次滤液，浓缩，定容至50ml容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得； 取金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉0.5g，置圆底烧瓶中，加入水50ml，煮沸30min,过滤，药渣重复上述操作，合并两次滤液，浓缩，定容至50ml容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得； 步骤三，对照品溶液的制备: 称取绿原酸对照品，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每ml含0.1096mg的溶液，即得对照品溶液； 步骤四，线性关系考察: 吸取对照品溶液1.0ml, 2.0ml, 3.0ml, 4.0ml, 5.0ml，分别置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0ml，摇匀，按色谱条件测定绿原酸的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=2.19X IO8X-L 52Χ105, r=0.9996，绿原酸进样浓度在21.20 μ g.ml-1~106.0 μ g.ml-1内峰面积积分值与浓度呈线性关系； 步骤五，进样精密度实验: 吸取对照品溶液2.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0ml，摇匀，作为对照液，连续进样5次，进行测定，峰面积的RSD=0.71% ；步骤六，稳定性实验: 吸取步骤四下对照液，分别在011，211，411，811，1211进样，进行测定，绿原酸峰面积的RSD=0.77%，结果表明在12h内稳定性较好； 步骤七，重复性实验: 称取同一号样品五份，按步骤二供试品项下操作，制得供试品溶液，进行测定，绿原酸平均质量分数的RSD = 2.12% ； 步骤八，加样回收实验: 称取已知含量的样品五份，加入对照品溶液2.0ml或0.212mg.ml-1，按步骤二的方法制备供试品溶液，测定并计算回收率，得平均加样回收率为102.3%, RSD = 1.57% ； 步骤九，样品测定: 按步骤二的供试品溶液制备方法制备3个样品溶液，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，分别进样测定，用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。
3.如权利要求1所述的采收与加工对金银花品质影响的实验方法，其特征在于，比较不同加工方法对金银花绿原酸含量影响的方法为: 步骤一，供试品溶液制备:分别取四种金银花样品研成细粉，过四号筛，称取细粉各0.5g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得； 步骤二，样品测定: 取制备后的4个样品溶液，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，分别进样测定，用外标法计算样品中绿原酸的百分含量， 步骤三，采用正交实验，确定杀青烘干最佳工艺，杀青时将温度控制在120°C，时间在90秒,绿原酸含量最闻。
4.如权利要求1所述的采收与加工对金银花品质影响的实验方法，其特征在于，比较不同采收时间对金银花绿原酸含量影响的方法为: 步骤一，第一次花期的采收时间集中在金银花大量采摘的六月上旬，隔I~2天采摘一次，第二次花期的采摘时间集中在九月下旬，隔五天采摘一次，样品采摘后，均采用杀青烘干法加工； 步骤二，分别取不同采收时间制得的各个样品研成细粉，过四号筛，称取细粉各0.5g，称定，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得； 步骤三，将取制得后的各样品溶液，按绿原酸含量测定方法操作，分别进样测定，用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。
5.如权利要求4所述的采收与加工对金银花品质影响的实验方法，其特征在于，九十月份的花蕾作为食品加工企业金银花饮料、凉茶的原材料。
6.如权利要求1述的采收与加工对金银花品质影响的实验方法，其特征在于，比较产地对金银花绿原酸含量影响的方法: 步骤一，分别取金银花不同产地样品研成细粉，过四号筛，称取细粉各0.5g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得； 步骤二，按照步骤一制备4个样品溶液，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，分别进样测定，用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。
7.如权利要求1述的采收与加工对金银花品质影响的实验方法，其特征在于，比较不同品种对金银花绿原酸含量影响的方法: 步骤一，选择金银花王，湘蕾一号，湘蕾二号，大花金银花，对不同品种的金银花进行含量测定，以确定大面积适宜种植的产品； 步骤二，分别取金银花不同品种样品研成细粉，过四号筛，称取细粉各0.5g，称定，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得; 步骤三，按照步骤一制备4个样品溶液，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，分别进样测定，用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。
8.如权利要求7所述的采收与加工对金银花品质影响的实验方法，其特征在于，金银花王，湘蕾一号，湘 蕾二号，大花金银花四个品种的绿原酸含量在4.282~6.498之间，大花金银花的绿原酸含量最高。
【文档编号】G01N30/02GK103808823SQ201410063999
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2014年2月25日 优先权日:2014年2月25日
【发明者】张慧芳, 罗国海, 邱娇英, 欧阳燕梅, 杨奕, 包卫华 申请人:金华职业技术学院