小柴胡颗粒的检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种小柴胡颗粒的检测方法，包括性状、鉴别、含量测定、检查项目，其中，鉴别包括黄芩的鉴别、甘草的鉴别、柴胡的鉴别、大叶柴胡的鉴别，含量测定是黄芩苷的含量测定，本发明针对目前还没有一套完善的检测方法对其有效成份进行相应的检测，导致无法监测不法厂商少投或不投相应原料和监测伪品大叶柴胡的混入，本发明制定了科学合理、切实可行的成分鉴别和含量测定方法，保证了小柴胡颗粒的临床疗效，让几种药材有了明确的质量指标，确保了小柴胡颗粒中各药材的使用，从而保证了药品的疗效；另一方面，柴胡的伪品大叶柴胡也能有效的检测，避免了大叶柴胡中含有的柴胡毒素和乙酰柴胡毒素这两种有毒成份危害患者的健康。
【专利说明】小柴胡颗粒的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种小柴胡颗粒的检测方法。
【背景技术】
[0002]小柴胡颗粒是《中国药典》2010年版一部收载的品种，处方为柴胡、姜半夏、黄芩、党参、甘草、生姜、大枣，是纯中药的颗粒剂，具有解表散热，疏肝和胃的作用，目前市场上用于治疗寒热往来、胸胁苦满、食欲不振、心烦喜呕、口苦咽干的常用药品。但是到目前为止，还没有一套完善的检测方法对其有效成份进行相应的检测，不法厂商就可能在生产药品时不严格按照处方的剂量配料，肆意减少价格高的原料，致使药品的疗效明显下降，影响药品的安全有效，严重损害患者的利益。另一方面，本药品的处方来源于《伤寒杂病论》中的名方小柴胡汤，方中用量最大的是柴胡，占整个处方量的三分之一，其功效主要是和解少阳，和胃降逆，扶正祛邪，但是因为柴胡属于常用药且使用量较大，而柴胡的产量有限，所以其伪品大叶柴胡也被有意或者无意混入使用，大叶柴胡中含有柴胡毒素和乙酰柴胡毒素，这两种成份均为有毒物质，此前已多次发生因服用混有大叶柴胡的药品而中毒的药害事件，所以控制大叶柴胡很有必要。《山东医药工业》于2003年第二十二卷第5期发表了《对中国药典2000年版柴胡检验方法的补充》一文，探讨过药典上大叶柴胡药材的鉴别控制问题，但是其方法有明显的不足:放置24小时，检测时间太长，不利于药品生产过程控制和药品质量监督检查；因柴胡毒素和乙酰柴胡毒素含量相对较低，点样仅2 μ 1，点样量过少，影响检验的准确性；因柴胡毒素和乙酰柴胡毒素含量相对较低，在紫外灯下检视，不用显色剂显色来观察，观察效果不好，更重要的是小柴胡颗粒处方药味多、所含成份复杂，其它成份会产生混淆和干扰，所以，寻找一种更好的办法来控制大叶柴胡已是当务之急。
【发明内容】
[0003]本发明的目的，是提供一种小柴胡颗粒的检测方法，一方面，可有效地监测不法厂商少投或不投相应原料，致使药品的疗效下降的问题；另一方面，控制伪品大叶柴胡的混入，防止了服用后中毒的药害事件的发生，保证该药品安全有效。
[0004]本发明的技术方案是这样的:
[0005]本小柴胡颗粒的处方是:柴胡150g、姜半夏56g、黄岑56g、党参56g、甘草56g、生姜56g、大率56g。
[0006]本发明所述的小柴胡颗粒的检测方法，包括性状、鉴别、含量测定、检查项目；其中，鉴别包括对颗粒中柴胡的鉴别、黄芩的鉴别、党参的鉴别、甘草的鉴别、大叶柴胡的鉴别；含量测定是对颗粒中黄芩苷的含量测定。
[0007]性状:本品为黄色至棕褐色的颗粒；味甜。
[0008]检查:应符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2010年版一部附录I C)。
[0009]所述检测方法包括以下:
[0010](I)黄芩的鉴别[0011]取本品6g，研细，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用盐酸调PH值至2?3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯:丁酮:甲酸:水=5:3:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以I %三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0012](2)甘草的鉴别
[0013]取本品6g，研细，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用盐酸调PH值至2?3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取甘草对照药材lg，加水适量，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法吸取供试品溶液10 μ I与对照药材溶液5?10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇:水=40:10:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 %香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0014](3)柴胡的鉴别
[0015]取本品6g，加水20ml，搅拌使溶解，离心，取上清液，加在聚酰胺柱(100?200目，8g,内径为2.5?3cm，湿法装柱)上，分别用水、20%乙醇和50%乙醇各IOOml洗脱，收集50%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材lg，力口水适量，煎煮1.5小时，滤过，滤液浓缩至约10ml，加在聚酰胺柱(100?200目，4g，内径为2cm，湿法装柱)上，分别用水IOOml和50%乙醇150ml洗脱，收集50%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2?IOul和对照药材溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯:乙醇:水=12:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0016](4)大叶柴胡的鉴别
[0017]取本品10g，加石油醚20?40ml，浸泡5?20分钟，超声处理10?30分钟，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液，另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品，加甲醇制成每Iml含柴胡毒素对照品Img和乙酰柴胡毒素对照品Img的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷:乙酸乙酯=7?9:0.7?1.3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %磷钥酸乙醇溶液，在105 °C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；
[0018](5)党参的鉴别
[0019]取本品20g，研细，再加正丁醇30?70ml，超声处理20?40分钟，滤过，滤液用10?30ml正丁醇饱和的水溶液洗漆,弃去水液,将正丁醇液浓缩至干，残洛加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取党参对照药材lg，加水煎煮I小时，放冷，滤过，滤液置分液漏斗中，加正丁醇30?70ml,超声处理20?40分钟,滤过,滤液用10?30ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各IOy 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯=13?17:3?5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0020]其中，大叶柴胡更具体的鉴别方法如下:
[0021]取本品10g，加60?90°C石油醚30ml，浸泡10分钟，超声处理15分钟，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液，另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品，加甲醇制成每Iml含柴胡毒素对照品Img和乙酰柴胡毒素对照品Img的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷:乙酸乙酯=8:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；
[0022]丹参更具体的鉴别方法如下:
[0023]取本品20g，研细，再加正丁醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用20ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取党参对照药材lg，加水煎煮I小时，放冷，滤过，滤液置分液漏斗中，加正丁醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用20ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯=15: 4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0024]黄岑苷的含量测定:
[0025]照高效液相色谱法测定
[0026]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:水:磷酸=47:53:0.2为流动相，检测波长为315nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。
[0027]对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每Iml含60ug溶液，即得。
[0028]供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，混匀，取适量，研细，取约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50KHZ) 30分钟，放冷，再称定重量，用70 %乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0029]测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0030]本品每袋含黄芩以黄芩苷(C21H18011)计，不得少于20.0mgo
[0031]本发明所述的展开剂之比和流动相之比均以体积比计。
[0032]本发明的技术效果:
[0033]本发明通过对小柴胡颗粒中黄芩的鉴别、甘草的鉴别、柴胡的鉴别、大叶柴胡的鉴另IJ、党参的鉴别、黄芩苷的含量测定，让几种药材有了明确的质量指标，确保了小柴胡颗粒中各味药材的使用，从而保证了药品的疗效，另一方面，柴胡的伪品大叶柴胡也能有效的检测，避免了大叶柴胡中含有的柴胡毒素和乙酰柴胡毒素这两种有毒成份危害患者的健康。本发明能更好更全面地反映小柴胡颗粒的质量，而且能有效地控制不法厂商生产伪劣小柴胡颗粒，从而保证了药品的疗效和安全，保证了患者的利益，本发明科学合理、切实可行。
【具体实施方式】
[0034]实施例1:
[0035]【处方】柴胡150g姜半夏56g黄岑56g党参56g甘草56g生姜56g大率56g
[0036]【制法】以上七味，柴胡、黄岑、党参、甘草及大枣加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量。姜半夏、生姜用70%乙醇作溶剂，浸溃24小时后进行渗漉，收集渗漉液600ml，回收乙醇，与上述浓缩液合并，浓缩至适量，加入适量的蔗糖，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。
[0037]【性状】本品为黄色至棕褐色的颗粒；味甜。
[0038]【鉴别】⑴黄芩的鉴别
[0039]取本品6g，研细，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用盐酸调PH值至2~3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯:丁酮:甲酸:水=5:3:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以I %三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0040](2)甘草的鉴别
[0041]取本品6g，研细，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用盐酸调PH值至2~3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。取甘草对照药材lg，加水适量，煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法吸取供试品溶液10 μ I与对照药材溶液5~10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇:水=40:10:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 %香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0042](3)柴胡的鉴别
[0043]取本品6g，加水20ml，搅拌使溶解，离心，取上清液，加在聚酰胺柱(100~200目，8g,内径为2.5~3cm，湿法装柱)上，分别用水、20%乙醇和50%乙醇各100mL洗脱，收集50%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材lg，加水适量，煎煮1.5小时，滤过，滤液浓缩至约10ml，加在聚酰胺柱(100~200目，4g，内径为2cm,湿法装柱)上，分别用水100mL和50%乙醇150ml洗脱，收集50%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2~10 μ I和对照药材溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯:乙醇:水=12:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0044](4)大叶柴胡的鉴别
[0045]取本品IOgJP 60~90°C石油醚20ml，浸泡5分钟，超声处理10分钟，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液，另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品，加甲醇制成每1ml含柴胡毒素对照品Img和乙酰柴胡毒素对照品Img的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷:乙酸乙酯=7:0.7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；
[0046](5)党参的鉴别
[0047]取本品20g，研细，再加正丁醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液用IOml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取党参对照药材lg，加水煎煮I小时，放冷，滤过，滤液置分液漏斗中，加正丁醇30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液用IOml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯=13:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0048]【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定(《中国药典》2010年版一部附录IC)。
[0049]【含量测定】黄芩苷的含量测定:
[0050]照高效液相色谱法测定
[0051]色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:水:磷酸=47:53:0.2为流动相，检测波长为315nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。
[0052]对照品溶液的制备取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含60ug溶液，即得。
[0053]供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，混匀，取适量，研细，取约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50KHZ) 30分钟，放冷，再称定重量，用70 %乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0054]测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0055]本品每袋含黄芩以黄芩苷(C21H18011)计21.9mg，不少于20.0mg0
[0056]实施例2:
[0057]本实施例中，除大叶柴胡的鉴别和党参的鉴别方法不同之外，其余检测方法均与实施例1相同，具体鉴别方法如下:
[0058]大叶柴胡的鉴别: [0059]取本品10g，加60~90°C石油醚30ml，浸泡10分钟，超声处理15分钟，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液，另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品，加甲醇制成每1ml含柴胡毒素对照品Img和乙酰柴胡毒素对照品Img的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷:乙酸乙酯=8:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；
[0060]丹参的鉴别方法:
[0061]取本品20g，研细，再加正丁醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用20ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取党参对照药材lg，加水煎煮I小时，放冷，滤过，滤液置分液漏斗中，加正丁醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用20ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯=15: 4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0062]实施例3:
[0063]本实施例中，除大叶柴胡的鉴别和党参的鉴别方法不同之外，其余检测方法均与实施例1相同，具体鉴别方法如下:
[0064]大叶柴胡的鉴别
[0065]取本品IOg,加石油醚40ml,浸泡20分钟,超声处理30分钟,滤过,滤液挥至Iml,作为供试品溶液，另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品，加甲醇制成每Iml含柴胡毒素对照品Img和乙酰柴胡毒素对照品Img的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷:乙酸乙酯=9:1.3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；
[0066](5)党参的鉴别
[0067]取本品20g，研细，再加正丁醇70ml，超声处理40分钟，滤过，滤液用30ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取党参对照药材lg，加水煎煮I小时，放冷，滤过，滤液置分液漏斗中，加正丁醇70ml，超声处理40分钟，滤过，滤液用30ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯=17:5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【权利要求】
1.一种小柴胡颗粒的检测方法，包括性状、鉴别、含量测定、检查项目，其特征在于:所述鉴别方法包括黄芩的鉴别、甘草的鉴别、柴胡的鉴别、大叶柴胡的鉴别、党参的鉴别，所述含量测定是黄芩苷的含量测定，检测方法如下: (1)黄芩的鉴别 取本品6g，研细，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用盐酸调PH值至2~3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯:丁酮:甲酸:水=5:3:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2)甘草的鉴别 取本品6g，研细，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用盐酸调PH值至2~3，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，取甘草对照药材Ig,加水适量,煎煮30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μ I与对照药材溶液5~10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇:水=40:10:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以.5 %香草醛硫酸溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的 斑点； (3)柴胡的鉴别 取本品6g，加水20ml，搅拌使溶解，离心，取上清液，加在聚酰胺柱a上，分别用水、20%乙醇和50%乙醇各100mL洗脱，收集50%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取柴胡对照药材lg，加水适量，煎煮1.5小时，滤过，滤液浓缩至10ml，加在聚酰胺柱b上，分别用水100mL和50%乙醇150ml洗脱，收集50%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2~IOul和对照药材溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯:乙醇:水=12:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置波长为365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4)大叶柴胡的鉴别 取本品10g，加石油醚20~40ml，浸泡5~20分钟，超声处理10~30分钟，滤过，滤液挥至1ml，作为供试品溶液，另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品，加甲醇制成每1ml含柴胡毒素对照品Img和乙酰柴胡毒素对照品Img的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷:乙酸乙酯=7~.9:0.7~1.3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点； (5)党参的鉴别取本品20g，研细，再加正丁醇30~70ml，超声处理20~40分钟，滤过，滤液用10~30ml正丁醇饱和的水溶液洗漆,弃去水液,将正丁醇液浓缩至干,残洛加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取党参对照药材lg，加水煎煮I小时，放冷，滤过，滤液置分液漏斗中，加正丁醇30~70ml，超声处理20~40分钟，滤过，滤液用10~30ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯=13~17:3~5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (6)黄芩苷的含量测定: 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇:水:磷酸=47:53:0.2为流动相，检测波长为315nm，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000，取黄芩苷对照品适量，加70%乙醇制成每1ml含60ug溶液，即得对照品溶液，取装量差异项下的本品，混匀，研细，取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.根据权利要求1所述的小柴胡颗粒的检测方法，其特征在于: (1)大叶柴胡更具体的鉴别 取本品10g，加60~90°C石油醚30ml，浸泡10分钟，超声处理15分钟，滤过，滤液挥至lml，作为供试品溶液，另取柴胡毒素、乙酰柴胡毒素对照品，加甲醇制成每1ml含柴胡毒素对照品Img和乙酰柴胡毒素对照品Img的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷:乙酸乙酯=8:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点； (2)党参更具体的鉴别 取本品20g，研细，再加正丁醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用20ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液，另取党参对照药材lg，加水煎煮I小时，放冷，滤过，滤液置分液漏斗中，加正丁醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用20ml正丁醇饱和的水溶液洗涤，弃去水液，将正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ I,分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯=15: 4为展开剂,展开,取出，晾干，喷以20%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1所述的小柴胡颗粒的检测方法，其特征在于:步骤(3)所述聚酰胺柱a为聚酰胺过100~200目筛，称取过筛后的聚酰胺Sg，选择内径为2.5~3cm的层析柱，湿法装柱。
4.根据权利要求1所述的小柴胡颗粒的检测方法，其特征在于:步骤(3)所述聚酰胺柱b为聚酰胺过100~200目，称取过筛后的聚酰胺4g，选择内径为2cm的层析柱，湿法装柱。
【文档编号】G01N30/02GK103954723SQ201410174576
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年4月28日 优先权日:2014年4月28日
【发明者】钟茂团, 黎勇, 何德中, 古莉 申请人:四川逢春制药有限公司