小儿消积止咳口服液hplc指纹图谱的建立方法及其指纹图谱的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种小儿消积止咳口服液HPLC指纹图谱的建立方法，该方法包括供试品溶液的制备、HPLC色谱条件的确定及HPLC标准指纹图谱的制作。本发明同时公开了由该方法得到的小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱，该指纹图谱有19个共有峰，其相对保留时间tR依次分别为0.066、0.077、0.088、0.124、0.157、0.166、0.192、0.220、0.229、0.275、0.481、0.837、0.872、0.890、0.962、1.000、1.026、1.061、1.203。本发明方法操作简便、稳定性高、重现性好，所得图谱特征峰多，通过标准指纹图谱共有峰的比较，可对小儿消积止咳口服液的质量进行全面评价，有利于稳定产品质量，确保临床用药的安全性、有效性。
【专利说明】小儿消积止咳口服液HPLC指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种小儿消积止咳口服液HPLC指纹图谱的建立方法及其HPLC标准指纹图谱，属于中药制剂分析领域。
【背景技术】
[0002]小儿消积止咳口服液收载于《中国药典》2010年版一部第一增补本，由炒山楂、槟榔、积实、蜜枇杷叶、瓜萎、炒莱菔子、炒葶苈子、桔梗、连翅、蝉蜕十味中药制备而成，具有清热肃肺、消积止咳的功能，用于小儿饮食积滞、痰热蕴肺所致的咳嗽、夜间加重、喉间痰鸣、腹胀、口臭，具有确切的临床疗效，已收载入《国家基本药物目录(2012年版)》。
[0003]现行《中国药典》中小儿消积止咳口服液质量控制方法主要包括鉴别和含量测定两方面，其中鉴别项采用薄层色谱法，分别鉴定处方中的槟榔、连翘、枳实、桔梗；含量测定项采用HPLC测定枳实中辛弗林的含量。小儿消积止咳口服液由十味中药制备而成，仅用薄层色谱法定性鉴别药材及用HPLC色谱法检测其中一味中药中指标性成分的含量不足以全面、准确地控制小儿消积止咳口服液的质量。
[0004]中药指纹图谱作为一项质量控制技术，能够较为全面地控制药品的质量，具有系统性、整体性特点。目前，以指纹图谱控制小儿消积止咳口服液的质量，国内外尚未见专利公开及文献报道。本发明公开了一种小儿消积止咳口服液HPLC指纹图谱的建立方法，以及用该方法制作的小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱。在用相似度进行评价的情况下，可用其标准指纹图谱对小儿消积止咳口服液的质量进行全面地评价和控制，从而保证了产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对现有小儿消积止咳口服液质量控制方法的不足，提供一种HPLC指纹图谱的建立方法及用该方法所得的HPLC标准指纹图谱。其特点是将小儿消积止咳口服液制备成供试品溶液，经过HPLC分离检测，获得小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱，从而为小儿消积止咳口服液的真伪鉴别和内在质量控制提供可靠依据。
[0006]本发明一种小儿消积止咳口服液HPLC指纹图谱的建立方法，包括如下步骤:
[0007]I)供试品溶液的制备:取小儿消积止咳口服液，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
[0008]2) HPLC色谱条件的确定:精密吸取供试品溶液，经HPLC分离检测，其中，流动相的组成为乙腈一0.1 %磷酸溶液，米用梯度洗脱；
[0009]3)指纹图谱的制作:按步骤2)色谱条件对小儿消积止咳口服液供试品溶液进行分析，得HPLC色谱图，对色谱图进行比较，得到由样品共有特征峰构成的小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱。
[0010]其中，供试品溶液按具体按如下步骤制备:精密量取小儿消积止咳口服液2ml，置IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。
[0011]所述的HPLC色谱条件为:Kromasil C18柱，填料粒径5 μ m,柱长250mm,柱内径
4.6mm;流动相:乙腈为流动相A，0.1 %磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱:0_40min，流动相A的体积百分含量由2 %提高至30 %，流动相B的体积百分比由98 %降低至70 % ；40-50min,流动相A的体积百分含量有由O %提高至40 %，流动相B的体积百分比由70 %降低至60% ;检测波长:203nm ;流速:lml/min ;柱温:30°C。
[0012]按上述谱条件对22批小儿消积止咳口服液样品进行分析，得到22批样品的HPLC色谱图，对22批样品的色谱图进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱。
[0013]本发明还提供了由上述方法得到的小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱，具体步骤是将22份小儿消积止咳口服液样品按上述方法制备成供试品溶液，以HPLC分离检测，使用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版》软件分析，得到小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱。
[0014]所述HPLC标准指纹图谱有19个共有特征峰，其相对保留时间tK依次分别为:0.066,0.077,0.088,0.124,0.157,0.166,0.192,0.220,0.229,0.275,0.481,0.837、0.872,0.890,0.962,1.000,1.026,1.061,1.203。
[0015]与现有技术相比，本发明提供的小儿消积止咳口服液HPLC指纹图谱建立方法精密度高、重现性好，通过对比所得标准指纹图谱中共有峰的有无，可对小儿消积止咳口服液的质量进行全面地评价，有效地保证了成品的质量，可克服现有技术检测指标单一，不能反映内在质量的缺点。此外，本发明色谱条件下的各特征色谱峰均实现了基线分离，稳定性高、特征峰多，能全面、准确地评价小儿消积止咳口服液的质量，适用于对小儿消积止咳口服液真伪鉴别和产品质量的控制。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1是小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱(1-19为19个共有峰)；
[0017]图2为22批小儿消积止咳口服液的HPLC标准指纹图谱叠加图。
【具体实施方式】
[0018]下面结合具体实施例进一步阐述本发明。
[0019]实施例1小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱的建立
[0020]I仪器与试药
[0021]1.1 仪器
[0022]AgilentllOO高效液相色谱仪(美国)；DAD检测器，四元低压梯度泵，AgilentllOO色谱工作站。
[0023]1.2 试药
[0024]小儿消积止咳口服液由鲁南厚普制药有限公司提供(见表I);乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
[0025]表I小儿消积止咳口服液测试样品批号
[0026]
【权利要求】
1.一种小儿消积止咳口服液HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，该方法包括如下步骤: 1)供试品溶液的制备:取小儿消积止咳口服液，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液； 2)HPLC色谱条件的确定:精密吸取供试品溶液，经HPLC分离检测，其中，流动相的组成为乙腈一0.1 %磷酸溶液，米用梯度洗脱； 3)指纹图谱的制作:按步骤2)色谱条件对小儿消积止咳口服液供试品溶液进行分析，得HPLC色谱图，对色谱图进行比较，得到由样品共有特征峰构成的小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液按如下步骤制备:精密量取小儿消积止咳口服液2ml，置IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，HPLC分离检测条件为:KromasilC18柱，填料粒径5 μ m，柱长250mm，柱内径4.6mm ;流动相:乙腈为流动相A，0.1 %磷酸溶液为流动相B,采用梯度洗脱:0-40min，流动相A的体积百分含量由2%提高至30%，流动相B的体积百分比由98%降低至70% ;40-50min，流动相A的体积百分含量由30%提高至40%，流动相B的体积百分比由70%降低至60% ;检测波长:203nm ;流速:lml/min ;柱温:30°C。
4.如权利要求1一3中任一项所述的方法，其特征在于，按色谱条件对22批小儿消积止咳口服液样品进行分析，得到22批样品的HPLC色谱图，对22批的色谱图进行比较，得到由其共有特征峰构成的小儿消积止咳口服液HPLC的标准指纹图谱。
5.由权利要求1一4中任一项所述方法得到的小儿消积止咳口服液HPLC标准指纹图谱，其特征在于，有19个共有峰，其相对保留时间tK依次分别为:0.066,0.077,0.088、.0.124,0.157,0.166,0.192,0.220,0.229,0.275,0.481,0.837,0.872,0.890,0.962、.1.000,1.026,1.061,1.203。
【文档编号】G01N30/88GK103954719SQ201410188657
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年5月6日 优先权日:2014年5月6日
【发明者】赵志全, 苏瑞强, 刘武占, 李蔚群 申请人:鲁南厚普制药有限公司