一种古代丝织品的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种古代丝织品的检测方法，采用免疫荧光的方法对古代丝织品进行了检测，将兔抗丝素蛋白抗体浸渍于文物样表面，洗涤干净后，加入绿色荧光素标记的山羊抗兔IgG（H+L）抗体，形成抗原-一抗-二抗复合物，然后洗涤干净将文物样放在激光共聚焦显微镜下观察。可根据样品有没有发出绿色荧光进行定性分析。本发明采用免疫荧光的方法对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白的干扰，特异性强。
【专利说明】一种古代丝织品的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于古代丝织品的检测领域，尤其涉及一种古代丝织品的检测方法。
【背景技术】
[0002]丝绸是中国历史最早的发明之一，是中国民族的宝贵文化，但近年来，关于丝绸的起源却众说纷纭，因此如何采用科学的手段确定丝绸是中国的原创成了燃眉之急。目前对丝织品检测主要是拉曼光谱、X-衍射等技术，但是，由于杂质的干扰，后期谱图解析困难，不能对结果进行直观的判定。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是:针对上述现有技术存在的问题提供一种直观的、快捷的检测方法。
[0004]为此采用如下的技术方案:一种古代丝织品的检测方法，其特征在于采用如下步骤:
a)PH 7.4 的 PBS 缓冲溶液配制:KC1 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至7.4 ；PH 9.6的PBS缓冲溶液配制:Na2C030.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至9.6 ;缓冲甘油的配制:将PH 9.6的PBS缓冲溶液和丙三醇按照体积比1:1混合而成；
b)取三块大小一致的文物样，放置于打孔皿中，分别标记为A，B，C;用PH 7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向A中加入10-50 μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液10-200倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体，C中加入10-50 μ I ΡΗ7.4的PBS溶液；Β不作处理，分别将Α、B、C放置于4°C冰箱中12h ;然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min，洗涤三次，每次三分钟；
c)分别向A、B中加入10-50μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液50-500倍稀释的绿色荧光素标记山羊抗兔IgG (H+L)抗体，C中加入10-50 μ I PH 7.4的PBS溶液；然后分别将Α，B，C放置于底层铺有湿毛巾的盒子中，用锡箔纸将盒子密封，37°C避光孵育0.5-2h ；然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
d)分别向A，B，C中加入10μ I的缓冲甘油进行封片；
e)将Α，B，C放置于激光共聚焦显微镜下进行观察；
若B，C未发出绿色的荧光，而A发出了绿色的荧光，说明文物样与兔抗丝素蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为丝织品。
[0005]本发明的有益成果为:I本发明采用免疫荧光的方法对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白的干扰，特异性强。2与现有技术相比，本发明成本低，结果直观，易于分析。
【具体实施方式】
[0006]本发明采用免疫荧光的方法对古代丝织品进行了检测，将兔抗丝素蛋白抗体浸渍于文物样表面，洗涤干净后，加入绿色荧光素标记的山羊抗兔IgG(H+L)抗体，形成抗原-一抗-二抗复合物，然后洗涤干净将文物样放在激光共聚焦显微镜下观察。可根据样品有没有发出绿色荧光进行定性分析。下面结合实施案例对本发明进行进一步说明。
[0007]实施例1采用如下步骤:
a)PH 7.4 的 PBS 缓冲溶液配制:KC1 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至7.4 ；PH 9.6的PBS缓冲溶液配制:Na2C030.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至9.6 ;缓冲甘油的配制:将PH 9.6的PBS缓冲溶液和丙三醇按照体积比1:1混合而成；
b)取三块大小一致的文物样，放置于打孔皿中，分别标记为A，B，C;用PH 7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向A中加入10 μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液10倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体，C中加入10 μ I ΡΗ7.4的PBS溶液；Β不作处理，分别将Α、B、C放置于4°C冰箱中12h ;然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min，洗涤三次，每次三分钟；
c)分别向A、B中加入10μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液50倍稀释的绿色荧光素标记山羊抗兔IgG (H+L)抗体，C中加入10 μ I PH 7.4的PBS溶液；然后分别将Α，B，C放置于底层铺有湿毛巾的盒子中，用锡箔纸将盒子密封，37°C避光孵育0.5h ;然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
d)分别向A，B，C中加入10μ I的缓冲甘油进行封片；
e)将Α，B，C放置于激光共聚焦显微镜下进行观察；
若B，C未发出绿色的荧光，而A发出了绿色的荧光，说明文物样与兔抗丝素蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为丝织品。
[0008]实施例2采用如下步骤:
a)PH 7.4 的 PBS 缓冲溶液配制:KC1 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至7.4 ；PH 9.6的PBS缓冲溶液配制:Na2C03
0.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至9.6 ;缓冲甘油的配制:将PH 9.6的PBS缓冲溶液和丙三醇按照体积比1:1混合而成；
b)取三块大小一致的文物样，放置于打孔皿中，分别标记为A，B，C;用PH 7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向A中加入30 μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液100倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体，C中加入30 μ I ΡΗ7.4的PBS溶液；Β不作处理，分别将Α、B、C放置于4°C冰箱中12h ;然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min，洗涤三次，每次三分钟；
c)分别向A、B中加入30μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液300倍稀释的绿色荧光素标记山羊抗兔IgG (H+L)抗体，C中加入30 μ I PH 7.4的PBS溶液；然后分别将Α，B，C放置于底层铺有湿毛巾的盒子中，用锡箔纸将盒子密封，37°C避光孵育Ih ;然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
d)分别向A，B，C中加入10μ I的缓冲甘油进行封片；
e)将Α，B，C放置于激光共聚焦显微镜下进行观察； 若B，C未发出绿色的荧光，而A发出了绿色的荧光，说明文物样与兔抗丝素蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为丝织品。
[0009]实施例3采用如下步骤:
a)PH 7.4 的 PBS 缓冲溶液配制:KC1 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至7.4 ；PH 9.6的PBS缓冲溶液配制:Na2C030.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至9.6 ;缓冲甘油的配制:将PH 9.6的PBS缓冲溶液和丙三醇按照体积比1:1混合而成；
b)取三块大小一致的文物样，放置于打孔皿中，分别标记为A，B，C;用PH 7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向A中加入50 μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液200倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体，C中加入50 μ I ΡΗ7.4的PBS溶液；Β不作处理，分别将Α、B、C放置于4°C冰箱中12h ;然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min，洗涤三次，每次三分钟；
c)分别向A、B中加入50μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液500倍稀释的绿色荧光素标记山羊抗兔IgG (H+L)抗体，C中加入50 μ I PH 7.4的PBS溶液；然后分别将Α，B，C放置于底层铺有湿毛巾的盒子中，用锡箔纸将盒子密封，37°C避光孵育2h ;然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
d)分别向A，B，C中加入10μ I的缓冲甘油进行封片；
e)将Α，B，C放置于激光共聚焦显微镜下进行观察；
若B，C未发出绿色的荧光，而A发出了绿色的荧光，说明文物样与兔抗丝素蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为丝织品。
【权利要求】
1.一种古代丝织品的检测方法，其特征在于采用如下步骤:
a)PH 7.4 的 PBS 缓冲溶液配制:KC1 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HPO4 1.42g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至7.4 ；PH 9.6的PBS缓冲溶液配制:Na2C03.0.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸馏水溶解并定容至1000ml，调节PH至9.6 ;缓冲甘油的配制:将PH 9.6的PBS缓冲溶液和丙三醇按照体积比1:1混合而成； b)取三块大小一致的文物样，放置于打孔皿中，分别标记为A，B，C;用PH 7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向A中加入10-50 μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液10-200倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体，C中加入10-50 μ I ΡΗ7.4的PBS溶液；Β不作处理，分别将Α、B、C放置于4°C冰箱中12h ;然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min，洗涤三次，每次三分钟； c)分别向A、B中加入10-50μ I用质量浓度为1%的牛血清白蛋白溶液50-500倍稀释的绿色荧光素标记山羊抗兔IgG (H+L)抗体，C中加入10-50 μ I PH 7.4的PBS溶液；然后分别将Α，B，C放置于底层铺有湿毛巾的盒子中，用锡箔纸将盒子密封，37°C避光孵育0.5-2h ；然后分别加入2ml PH 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟； d)分别向A，B，C中加入10μ I的缓冲甘油进行封片； e)将Α，B，C放置于激光共聚焦显微镜下进行观察； 若B，C未发出绿色的荧光，而A发出了绿色的荧光，说明文物样与兔抗丝素蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为丝织品。
【文档编号】G01N33/542GK104483478SQ201410846331
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月31日 优先权日:2014年12月31日
【发明者】刘苗苗, 李毅, 王秉 申请人:浙江理工大学