一种电镜超薄切片批量染色装置制造方法
【专利摘要】本实用新型提供一种电镜超薄切片批量染色装置，由2个染色管，2个染色管盖，防污套管，预置有固体NaOH的防污套管盖及染色胶条组成，染色胶条置于染色管内，染色管置于防污套管内。2个染色管分别装载醋酸铀染液和柠檬酸铅染液。本实用新型设计合理，可对超薄切片载网样品进行批量化染色操作；节省操作时间，实现超薄切片染色批量化；染色过程在密闭容器中进行，隔绝铅染色液与二氧化碳接触，减少对样品的污染；染色使用的染液在不进行染色操作时可直接保存于装置中，反复使用，节省染液；染色过程更方便、安全，无需另行使用其他容器或设备，降低对容器和环境的污染；减少染色液毒性对操作者造成的污染；制备及使用极其简单易行，成本极低。
【专利说明】—种电镜超薄切片批量染色装置
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及一种电子显微镜超薄切片批量染色装置，属于生物电子显微科学领域。
技术背景
[0002]在生物电子显微科学领域中，超薄切片是一种经典方法，电子染色是其中的关键技术之一。传统的超薄切片电子染色，其染液采用醋酸铀和柠檬酸铅，具体染色方法是:在蜡板或parafilm M上滴铀染液，将载有超薄切片的载网的样品面向下悬浮在染液滴上，15-20分钟后用镊子夹持载网，在双蒸水的烧杯中上下反复冲洗多次，将载网放置在干净滤纸上，干燥后使用；样品经醋酸铀染色后，在蜡板或周围放置固体NaOH，操作同醋酸铀染色进行柠檬酸铅染色。醋酸铀具有毒性和放射性，柠檬酸铅不仅有化学毒性，而且极易与空气中的二氧化碳结合产生碳酸铅沉淀污染切片。这种常规染色方法效率低，染色后的清洗需要对每个超薄切片载网分别进行多达几十次的清洗，费时，费力；滴染过程暴露在空气中，柠檬酸铅会和空气中的二氧化碳反应，容易污染切片；柠檬酸铅在染色过程中受二氧化碳污染而无法重复使用，染色液消耗量大且每次需要清洗染色容器，对环境污染大，操作者在多次操作的过程中所受污染也大。
[0003]针对常规染色技术容易出现的问题，国内外很多实验室和专业厂商不断推出各种创新或改良方法。近几年的多个厂家生产出了几种染色套装(2013-2015年度，北京中镜科仪产品目录生物篇P17)，在方便染色操作等方面有一定改进，但仍存在一些问题。如:1，一套染色装置只能对20个左右的载网进行操作，无法满足日益增长的电镜样品需求；2，使用这些染色套装染色完毕，仍要清洗器皿，操作繁琐，且清洗干净与否影响下次染色质量；3，染色液无法重复使用，消耗量大且对环境的污染也较大；4，市售染色套装价格仍较高，数百元至上千元。
【发明内容】
[0004]本实用新型的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种电镜超薄切片批量染色装置，由染色管，染色管盖，防污套管，预置有固体NaOH的防污套管盖及染色胶条组成，染色胶条置于染色管内，染色管置于防污套管内，染色管盖与染色管活动连接，防污套管盖与防污套管活动连接，整套染色装置中有2个染色管和染色管盖,分别装载醋酸铀染液和朽1檬酸铅染液。
[0005]具体使用本发明装置的步骤如下:
[0006]1.非染色时,将醋酸铀染液保存于染色管中，盖紧染色管盖；将朽1檬酸铅染液保存于另一染色管中，盖紧管盖，置于装有固体NaOH的防污套管中，盖好防污套管盖。
[0007]2.染色步骤如下:
[0008](I)取市售染色胶条，或取塑料片自行裁剪做为染色胶条，在染色胶条中间段一面贴上双面胶，作为载网粘着区，将载有超薄切片的载网粘于染色胶条的两侧，确定不会脱落；
[0009](2)将带有载网的整根染色胶条置于装有醋酸铀染液的染色管中，盖好管盖，进行醋酸铀染色，双蒸水清洗；
[0010](3)将带有载网的整根胶条置于防污套管中的装有柠檬酸铅染色液的另一染色管中，盖紧防污套管盖，但不盖染色管盖，进行柠檬酸铅染色，之后取出带有载网的染色胶条，以NaOH水溶液、双蒸水依次清洗；
[0011](4)干燥后取下载网上机镜检。
[0012]3.装置中的醋酸铀及柠檬酸铅无需倒出，可直接保存并下次使用(可反复染色20次以上)。
[0013]本实用新型可对超薄切片载网样品进行批量化染色操作；节省操作时间，实现了超薄切片染色批量化；染色过程在密闭容器中进行，隔绝铅染色液与二氧化碳接触，减少对样品的污染；染色使用的染液在不进行染色操作时可直接保存于装置中，可反复使用，节省染液；染色过程更方便、安全，无需另行使用其他容器或设备，降低对容器和环境的污染；减少染色液毒性对操作者造成的污染；本实用新型设计合理，制备及使用极其简单易行，成本极低。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1为发明的结构示意图。
[0015]图2为醋酸铀染色液保存示意图。
[0016]图3为柠檬酸铅染色液保存示意图。
[0017]图4为将载网粘于染色胶条上的示意图。
[0018]图5为对载网进行醋酸铀染色示意图。
[0019]图6为分别应用本装置染色步骤(A)、传统染色步骤(B)所染色制备的肾小球基底膜电镜超薄切片样本。
【具体实施方式】
[0020]下面结合附图和实施例对本发明及其应用作进一步的说明。
[0021]实施例1 一种电镜超薄切片染液存储及批量染色装置
[0022]参见图1，本实用新型染色装置由染色管I，染色管盖2，预置有固体NaOH的防污套管3,防污套管盖4及染色胶条5组成,染色胶条5置于染色管I内，染色管I置于防污套管3内，染色管盖2与染色管I活动连接,防污套管盖4与防污套管3活动连,接整套染色装置中有2个染色管I和染色管盖2，分别装载醋酸铀染液和柠檬酸铅染液。
[0023]1.非染色时，将醋酸铀染液保存于一染色管I中，盖紧染色管盖2，参见图2。将柠檬酸铅染液保存于另一染色管I中，盖紧染色管盖2，置于预置有固体NaOH 6的防污套管3中，盖好防污套管盖4，参见图3。
[0024]2.染色步骤如下:
[0025](I)参见图4，将带有超薄切片的载网7以双面胶粘于染色胶条5中间段的两侧，确定不会脱落，如果中间段长度达60mm或以上则每根胶条可用于40个及以上的载网的同时染色，同时使用两根染色胶条则可粘贴载网数达80个；
[0026](2)参见图5，将带有载网7的染色胶条5置于装有醋酸铀染液的染色管I中，(如有两根染色胶条则将无双面胶的面靠在一起，同时置于铀存储染色管中，)盖好染色管盖2，进行醋酸铀染色，之后取出带有载网的染色胶条以双蒸水清洗；
[0027](3)参见图1，将带有载网7的染色胶条5置于装有柠檬酸铅染色液的存储染色管I中，染色胶条和染色管均放于预置有固体NaOH 6的防污套管3中，盖紧防污套管盖4,但不盖存储染色管盖2，进行柠檬酸铅染色，之后取出带有载网的染色胶条，以NaOH水溶液、双蒸水依次清洗；
[0028]( 4 )干燥后取下载网上机镜检。
[0029]3.装置中的醋酸铀及柠檬酸铅无需倒出，可直接保存并下次使用(可反复染色20次以上)。
[0030]实施例2
[0031]以本装置实施例1染色步骤处理带有超薄切片的载网，作为实验组；以常规染色步骤处理带有超薄切片的载网，作为对照组；比较两组染色操作时间及所需试剂，如表I所示，使用本装置对大批量载网染色时，大大节省了染色时间及试剂。
[0032]
表I __
载网数
__^批量染色法常规染色法
5片载网_30分钟 30分钟
40片载网 40分# — 75分钟用吋 80片载网 50分^中 150分钟站 _5 片 i_8mL 8ml ImL Iml
mmB —M
m B80 片扭网BmU Smi 16ml.16ml
m-m--^--
___ 400 片载网 8ml、8ml 80ml、80ml
[0033]1.染色过程中，实验组无需清洗染色用具，染液可反复使用，大大节省实验试剂耗材，同时减少对环境污染；
[0034]2.参见图6，以100KV透射电子显微镜观察检测两组样品的染色效果，实验组(A)和对照组(B)均对比度适中，结构清晰，均无污染，电镜下肾小球基底膜电子致密物结构均清晰可见。
【权利要求】
1.一种电镜超薄切片批量染色装置，其特征在于，由染色管(1)，染色管盖(2)，预置有固体NaOH的防污套管(3)，防污套管盖(4)及染色胶条(5)组成，染色胶条(5)置于染色管(O内，染色管(I)置于防污套管(3)内，染色管盖(2)与染色管(I)活动连接,防污套管盖(4)与防污套管(3)活动连接。
2.根据权利要求1所述的一种电镜超薄切片批量染色装置，其特征在于，整套染色装置中有2个染色管(I)和染色管盖(2)，分别装载醋酸铀染液和柠檬酸铅染液。
【文档编号】G01N1/31GK203981474SQ201420368138
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年7月6日 优先权日:2014年7月6日
【发明者】王贝贝, 王丽, 洪健 申请人:浙江大学