一种枸杞甜菜碱含量的测定方法与流程

本发明涉及一种枸杞甜菜碱含量的测定方法，属于分析检测技术领域。

背景技术：

枸杞(Lycium barbarum L.)为茄科、枸杞属多年生落叶灌木的干燥果实，是药食同源的功能性特色植物资源，具有滋肝名目、增强免疫力、降血脂、抗氧化、抗肿瘤等多种功效。枸杞种植区域遍布宁夏、新疆、河北、内蒙、青海、甘肃等地区，以宁夏所产枸杞最为道地。枸杞活性成分主要有三大类，甜菜碱为其中之一。甜菜碱是一类季胺盐类化合物，是枸杞果、叶、柄中主要生物碱之一，它在体内起到甲基供体的作用，具有促进脂肪代谢、抗脂肪肝、保护肾脏、降压、缓和应激、增进食欲、稳定维生素等多种药理作用。另外，由于甜菜碱化学性质稳定且不易人为添加，测定它的含量还可为含有甜菜碱的制剂提供可行的质控方法。

目前对枸杞中甜菜碱含量的测定方法的研究日益增多，主要有比色法、滴定法、薄层色谱扫描法、高效液相色谱法等。这些方法各有其特点，比色法需要对甜菜碱初提物进行脱色、雷氏盐沉淀法等多个步骤，处理方法繁琐，影响测定结果的准确度和重复性；滴定法成本低受样品中色素成分的干扰，测定终点不易判断；薄层扫描法分析过程中分离效果和方法重现性受色谱条件如展开剂等影响较大。HPLC-DAD检测法测定枸杞子中的甜菜碱含量，由于甜菜碱结构中无共轭体系，紫外吸收弱，需要在波长192nm、195nm处检测，灵敏度不太理想。目前有关采用HPLC-ELSD方法检测枸杞甜菜碱含量的研究还没有比较完善的方案。

技术实现要素：

本发明的目的是克服现有技术方法的不足，提供一种提取完全，操作简便，快速、准确分析枸杞甜菜碱含量的方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种枸杞甜菜碱含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：

a、取甜菜碱对照品加入甲醇溶解制成对照品溶液；

b、取枸杞干果或鲜果，加入适量液氮粉碎，加甲醇超声提取，得供试品溶液；

c、依据高效液相色谱-蒸发光散射法测定，采用十八烷基键和硅胶填料柱，流动相为甲醇∶水(V∶V，20∶80)，流速1ml/min，漂移管温度40℃，雾化温度40℃，取对照品和供试品溶液分别进样，得到相应色谱图；

d、记录对照品和供试品溶液对应的色谱图和峰面积，以外标法定量计算甜菜碱的含量，即得。

进一步，所述步骤b中所述的枸杞样品甜菜碱提取溶剂为甲醇。

进一步，所述步骤b中所述的枸杞样品与甲醇溶液质量体积比为1∶250。

进一步，所述步骤b中超声提取时间为15min。

进一步，所述步骤c中，流动相采用甲醇∶水(V∶V，20∶80)。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1、采用超声波提取法，超声波的空化效应可强化萃取，加速萃取过程，且条件温和，耗能少。

2、提取溶剂为甲醇，目标提取物在甲醇中的溶解度为55g/100g，而且与其他溶剂相比，甲醇作溶剂提取的样品经液相分析获得的色谱峰峰形最好，无拖尾现象。

3、与现有HPLC-DAD方法相比，HPLC-ELSD方法操作简便，样品无需进行衍生、纯化等处理，试验成本低，快速高效，样品分离度好，灵敏度高。

具体实施方式

以下为本发明较佳的实施方式，并不因此而限定了本发明的保护范围。

一种枸杞甜菜碱含量的测定方法其特征在于包括以下步骤：

a、取甜菜碱对照品加入甲醇溶解制成对照品溶液；

b、取枸杞干果或鲜果，加入适量液氮粉碎，加甲醇超声提取，得供试品溶液；

c、依据高效液相色谱-蒸发光散射法测定，采用十八烷基键和硅胶填料柱，流动相为甲醇∶水(V∶V，20∶80)，流速1ml/min，漂移管温度40℃，雾化温度40℃，取对照品和供试品溶液分别进样，得到相应色谱图；

d、记录对照品和供试品溶液对应的色谱图和峰面积，以外标法定量计算甜菜碱的含量，即得。

实施例1：

实施本发明中枸杞甜菜碱含量的测定方案，枸杞样品加适量液氮粉碎，精密称量按照质量体积比为1∶250加入甲醇超声提取15min，0.22μm微孔滤膜过滤，采用十八烷基键和硅胶填料柱，流动相为甲醇∶水(V∶V，20∶80)，流速1ml/min，漂移管温度40℃，喷雾温度40℃，进样10uL分析测定。

实施例2：

同实施例1所示，所不同的是提取溶剂为纯水和甲醇-水，测定结果发现，纯水提取样品分析的色谱峰峰形略有拖尾，甲醇-水提取的样品分析得到的色谱峰峰形拖尾严重。

本实施例的色谱图见图1、图2及图3所示，其中图1为甲醇提取样品色谱图，色谱峰峰形好；图2为纯水提取样品色谱图，色谱峰略有托尾；图3为甲醇-水提取样品色谱图，色谱峰托尾严重。

实施例3：

同实施例1所示，所不同的是提取方式采用回流提取，结果发现，超声提取较回流提取效率更高。不同的提取方式所得提取效果如下表：

表1 不同提取方式提取效果比较

实施例4：

同实施例1所示，所不同的是提取样品与溶剂的质量体积比为1∶125和1∶200，结果发现料液比减小或增加提取率均降低。其不同料液比所得的提取效果如下表：

表2 不同料液比提取效果