一种鉴别半夏、虎掌的方法与流程

本发明涉及一种鉴别半夏、虎掌的方法。
背景技术：
：半夏为天南星科半夏属植物半夏Pinelliaternata(Thunb.)Breit的干燥块茎。虎掌为天南星科半夏属植物虎掌PinelliaePedatisectaSchott的干燥块茎。半夏的伪品较多，主要有天南星科的虎掌、天南星、水半夏等，这些药材经加工处理后，外观与半夏极为相似，鉴别难度大，不法商贩常在半夏中添加这几种药材，非法谋取利益，严重损害半夏种植户、半夏饮片生产企业利益，同时也严重影响半夏药材质量、疗效及用药安全。目前，虎掌是半夏中常见的掺伪品，半夏与虎掌药材的鉴别方法主要是性状鉴别，但鉴别难度非常大。半夏与虎掌属同科同属植物，虎掌因有较多小块茎，形似“虎掌”而得名。不乏商贩为了谋取利益，将虎掌加工后经过筛选、打磨，原有的子块茎特征不明显，与半夏非常相似，难以鉴别；如果炮制成饮片，几乎无法通过性状进行鉴别。目前在半夏与虎掌的性状鉴别方面，仍然存在很多问题，传统认为半夏是球形或椭圆形，一般没有子块茎的，但栽培半夏存在栽培变异，一些栽培半夏药材是具有子块茎的，这就造成了通过子块茎的有无来鉴别半夏与虎掌，存在鉴别不准确的问题，有些通过子块茎的个数来判断半夏与虎掌(多于3个判定为虎掌)，这样的方法依然不够严谨，不能达到准确鉴别的目的。技术实现要素：为了克服上述问题，发明人首次在虎掌中发现了水麦冬酸，并将其用于半夏和虎掌的鉴别。本发明提供了水麦冬酸在用于药材半夏、虎掌的鉴别中的用途。本发明提供了一种鉴别半夏、虎掌的方法，它包括如下步骤：a、取待检药材；b、取对照品水麦冬酸；c、检测；d、结果判断：含有水麦冬酸的为虎掌；半夏中不含有水麦冬酸。其中，所述的检测方法包括定性或定量检测方法。所述的待检药材为半夏、半夏伪品、半夏掺虎掌伪品。其中，所述的定性检测方法有薄层检测法；所述的定量检测方法有HPLC检测方法。其中，所述的HPLC检测方法包括如下步骤：a、取水麦冬酸对照品适量，加流动相溶解；b、取待检药材粉末1g，加水20－40ml，超声提取30－60min以上，滤过或离心，取澄清提取液10ml，加磷酸、甲酸或盐酸0.1－0.5ml，乙酸乙酯萃取1－5次，每次20～30ml，回收乙酸乙酯，残渣加5ml流动相溶解，过微孔滤膜，即得；c、色谱条件：流动相：A(乙腈)-B(0.1％磷酸)(3:97)色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18液相色谱柱(4.6×250mm，5μm)流速：0.8ml/min检测波长：210nm柱温：25－40℃进样量：5－25ul；d、检索结果分析：HPLC图谱中含有水麦冬酸的为虎掌；HPLC图谱中不含有水麦冬酸的为半夏。进一步优选地，它包括如下步骤：a、取水麦冬酸对照品适量，加流动相溶解，制成浓度为0.05mg/ml的溶液；b、取待检药材粉末1g，加水20ml，超声提取30min以上，滤过或离心，取澄清提取液10ml，加磷酸0.1ml，乙酸乙酯萃取4次，每次20～30ml，回收乙酸乙酯，残渣加5ml流动相溶解，过微孔滤膜，即得；c、色谱条件：流动相：A(乙腈)-B(0.1％磷酸)(3:97)色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18液相色谱柱(4.6×250mm，5μm)流速：0.8ml/min检测波长：210nm柱温：40℃进样量：20ul；d、检索结果分析：HPLC图谱中含有水麦冬酸的为虎掌；HPLC图谱中不含有水麦冬酸的为半夏。本方法采用高效液相色谱的方法，通过鉴别水麦冬酸的有无，鉴别半夏中是否有虎掌掺伪，若含有水麦冬酸则含有虎掌掺伪。鉴别过程简单快捷有效，可用于虎掌的鉴别，以及半夏中掺伪虎掌的鉴别，虎掌经炮制后依旧可以鉴别，方法稳定可靠。附图说明图1本发明化合物1H-NMR图图2本发明化合物13C-NMR图图3本发明化合物HPLC图谱图4全波长扫描图图5水麦冬酸对照品HPLC图谱图610份不同来源半夏样品HPLC图谱图7不同来源虎掌样品HPLC图谱具体实施方式试验例1本发明化合物提取分离方法1、取虎掌药材，粉碎，加水混匀，超声提取3次；2、合并提取液，滤过，滤液加酸，用乙酸乙酯萃取3次；3、乙酸乙酯层加压浓缩至干，加水稀释过滤得水溶液；4、将水液上C18制备柱，流动相采用5％乙腈(加0.2％磷酸)进行洗脱，流速：140ml/min，波长210nm监视，收集洗脱液。5、将洗脱液浓缩，继续上C18制备柱，流动相采用5％乙腈(加0.1％磷酸)进行洗脱，流速：140ml/min，波长210nm监视，收集洗脱液，冷冻干燥，得到白色固体。本品为白色粉末，经分析其分子式为C7H8O6；表11H-NMR(见图1)表213C-NMR(见图2)经NMR分析，与文献数据对比，鉴定该化合物为水麦冬酸。纯度分析：对制备的水麦冬酸纯度进行分析，条件为：仪器：汉邦HPLC色谱仪；色谱柱：AgilentEclipsePlus-C18，4.6*250mm，5μm；流动相：乙腈-0.2％磷酸水溶液(5：95)；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测器：UV-210nm；配制浓度：1.0mg/ml。经高效液相色谱法测定，本发明方法制备的水麦冬酸的纯度达到了98％以上。(见图3)实施例2本发明半夏、虎掌的鉴别方法1、对照品溶液的制备取水麦冬酸对照品适量，加流动相溶解，制成浓度为0.05mg/ml的溶液。2、供试品溶液的制备取半夏或虎掌药材粉末1g，加水20ml，超声提取30min以上，滤过或离心，取澄清提取液10ml，加磷酸0.1ml，乙酸乙酯萃取4次，每次20～30ml，回收乙酸乙酯，残渣加5ml流动相溶解，过微孔滤膜，即得。3、色谱条件流动相：A(乙腈)-B(0.1％磷酸)(3:97)色谱柱：AgilentZORBAXEclipsePlusC18液相色谱柱(4.6×250mm，5μm)流速：0.8ml/min检测波长：210nm柱温：40℃进样量：20ul4、结果半夏HPLC图谱中不含有水麦冬酸，虎掌HPLC图谱中含有水麦冬酸。实施例3本发明提取方法条件筛选试验1、提取方法考察(1)提取溶剂用量称取虎掌样品1g，分别加水20ml、30ml、40ml，超声提取，分别取10ml澄清提取液，加酸0.1ml，乙酸乙酯萃取，回收溶剂，用5ml流动相溶液溶解，过微孔滤膜，高效液相色谱仪检测。表3提取溶剂用量考察水用量20ml30ml40ml水麦冬酸峰面积16210270换算峰面积162153140水体积为20ml时峰面积最高，提取效果最好。(2)提取时间的考察称取虎掌样品1g，加水20ml，超声提取，提取时间分别为30min、45min、60min，分别取10ml澄清提取液，加酸0.1ml，乙酸乙酯萃取，回收溶剂，用5ml流动相溶液溶解，过微孔滤膜，高效液相色谱仪检测。表4提取时间考察提取时间30min45min60min水麦冬酸峰面积86.410191以超声提取45min峰面积最大，提取效果最好。(3)酸的选择称取虎掌样品1g，加水20ml，超声提取，取10ml澄清提取液，分别加甲酸、盐酸、磷酸0.1ml，乙酸乙酯萃取，回收溶剂，用5ml流动相溶液溶解，过微孔滤膜，高效液相色谱仪检测。表5酸的选择酸的种类甲酸盐酸磷酸水麦冬酸峰面积150162168加磷酸后峰面积最大。(4)磷酸用量的考察称取虎掌样品1g，加水20ml，超声提取，取10ml澄清提取液，分别加磷酸0.1ml、0.2ml、0.5ml，乙酸乙酯萃取，回收溶剂，用5ml流动相溶液溶解，过微孔滤膜，高效液相色谱仪检测。表6磷酸用量的选择磷酸用量0.1ml0.2ml0.5ml水麦冬酸峰面积140147143考察的3种磷酸用量之间无显著差异，故加磷酸0.1ml。(5)萃取次数考察称取虎掌样品1g，加水20ml，超声提取，取10ml澄清提取液，加酸0.1ml，用乙酸乙酯分别萃取1、2、3、4、5次，每次20ml，合并乙酸乙酯，回收溶剂，残渣加5ml流动相溶液溶解，过微孔滤膜，高效液相色谱仪检测。表7萃取次数考察萃取次数12345水麦冬酸峰面积73116142158154萃取4次后，基本可以萃取完全。2、色谱条件的考察(1)检测波长经全波长扫描，水麦冬酸最大吸收波长为210nm，故检测波长设定为210nm(见图4)。(2)流动相考察考察了乙腈-磷酸盐系统(3:97)、乙腈-磷酸系统(3:97)、乙腈-甲酸系统(3:97)。乙腈-甲酸系统色谱峰峰形较差，基线不平稳；乙腈-磷酸盐系统及乙腈-磷酸系统均可以较好实现水麦冬酸的鉴别。(3)柱温的考察分别考察25℃、30℃、35℃、40℃。表8柱温考察柱温25℃30℃35℃40℃水麦冬酸峰面积143142144140峰高5.46.37.48.1峰宽0.400.350.300.26对称因子0.750.750.750.75柱温越高，峰高越大，峰宽越窄，而峰面积及对称因子无显著差异，故柱温选择40℃。(4)进样量的考察分别考察进样量为5、10、15、20、25ul。表9进样量的考察进样量(ul)510152025水麦冬酸峰面积3772104141174峰高2.14.76.48.110.4进样量越大，峰面积越大，峰高越大。进样量考虑到峰面积、色谱柱的耐用性，选择了常规进样量20ul。(5)重复性试验取同一批样品1.0g，共取5份，精密称定，制定5份供试品溶液，分别测定。表10重复性试验结果重复性实验12345RSD％水麦冬酸峰面积140.5145.0141.7143.9146.91.78(6)稳定性试验取同一供试品溶液于不同时间，分别进样20ul，测定。表11稳定性试验结果3、鉴别结果(1)水麦冬酸对照品HPLC图谱(见图5)(2)10份不同来源半夏样品HPLC图谱，半夏中不含有水麦冬酸。(见图6)(3)不同来源虎掌样品HPLC图谱，虎掌中含有水麦冬酸。见图7(3)炮制品的鉴别参照中国药典2015年版，将虎掌生品按照与半夏各种炮制品(清半夏、姜半夏、法半夏)相同的炮制方法进行处理，得到清半夏、姜半夏、法半夏的伪品炮制品。鉴定结果同生品一致，伪品炮制品依然含有水麦冬酸。通过以上鉴别，找到了虎掌区别于半夏的特征成分水麦冬酸，可有效的用于虎掌鉴别，也可用于半夏生品或炮制品中掺伪虎掌的情况。当前第1页1 2 3