本发明属于皮肤药代动力学技术领域，尤其涉及一种猪皮皮肤表皮和真皮层分离取材的方法。
背景技术：
皮肤药代动力学是研究药物及其代谢物在皮肤局部的吸收、分布、代谢和消除过程的一门科学，其对于皮肤局部外用药物的研发和评价具有极其重要的指导作用。不同皮肤疾病的病变累及部位不同，有的病变仅累及表皮层，有的病变部位不仅可累及表皮层，还可深达真皮组织。因此，对于不同的适应症，应针对其病变累及部位的不同，采用不同的取材方法进行药代试验，以观察药物能否达到病变部位，并测定在该部位的药物浓度是否足以发挥疗效。小型猪的皮肤与人的皮肤结构较接近，常用于皮肤用药临床前药理毒理研究。小型猪真皮与表皮之间没有明显的分界，肉眼无法判断，而且表皮极薄，只有30-120μm，要精确地取到表皮和真皮组织，常规的技术方法无法实现。现有常用皮肤角质层取材方法为胶带粘贴法，在不同的给药时间，利用胶带反复黏贴角质层进行取样，对黏下的角质层中的药物浓度进行测定，可得出不同用药时间角质层内的药物浓度。这种方法的局限在于取样位置表浅，仅适用作用于角质层的药物，不能适用于作用于表皮更深层(如基底层、棘状层、颗粒层、透明层等)和真皮层的药物；此方法影响因素很多，取样时所用的压力不同，每次取样所贴下的角质层量也不同。
综上所述，现有技术存在的问题是：现有常用皮肤角质层取材方法为胶带粘贴法仅适用作用于角质层-的药物，不能适用于作用于表皮更深层(如基底层、棘层、颗粒层、透明层等)和真皮层的药物，取样时所用的压力不同，每次取样所贴下的角质层量也不同，也就是说角质层的厚度不一样，进而药物的分布和含量也不同，常用的方法会影响试验结果。
技术实现要素：
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种猪皮皮肤表皮和真皮层分离取材的方法。
本发明是这样实现的，一种猪皮皮肤表皮和真皮层分离取材的方法，所述猪皮皮肤表皮和真皮层分离取材的方法利用显微镜下精准测量表皮层和真皮层的厚度，然后采用冰冻切片，将表皮和真皮分离取材。
进一步，所述猪皮皮肤表皮和真皮层分离取材的方法包括以下步骤：
步骤一，从皮肌处将小型猪的表皮和真皮从皮肤上分离下；
步骤二，分离下来小型猪皮肤用硬纸板铺平，用手术刀片将小型猪皮肤按井字形划成方块；
步骤三，放在-20℃冰箱中冷冻后，从硬纸板上取下皮肤，将皮肤表皮面贴在冷冻标本托上，用冰冻切片机切去皮肤皮下组织，并保持切面平整；
步骤四，将去掉皮下组织的皮肤竖立粘贴在冷冻标本托上，用冰冻切片机横切皮肤组织，粘贴在载玻片上，0.1％苏木素染色，甘油封片，20倍显微镜下观察皮肤组织学结构，分别测量表皮层和真皮层的厚度；
步骤五，然后将皮肤真皮面平整粘贴在冷冻标本托上，用冰冻切片机纵切皮肤表皮层，切面厚度设置稍低于测量的表皮层厚度，切下的皮肤即为表皮层；
步骤六，再切去表皮和真皮交界的皮肤，剩余部分即为真皮层。
进一步，所述用锐利手术刀片将小型猪皮肤按井字形划成1.0cm*2.0cm的方块。
进一步，在-20℃条件下，用冰冻切片机切去皮肤皮下组织，并保持切面平整。
进一步，用冰冻切片机横切厚度为10μm的皮肤组织。
进一步，所述再切去90μm的皮肤，皮肤剩余部分即为真皮层。
本发明的优点及积极效果为：利用显微镜下精准测量表皮层和真皮层的厚度，然后采用冰冻切片技术，将表皮和真皮分离取材，从而实现对药物皮肤分层分布的研究。本发明的方法科学、有效、精准，无污染，对皮肤局部外用药物临床前药代动力学研究具有极其重要的意义。科学、影响因素少：首先通过显微镜精确测量表皮层厚度，再根据测量的结果精准切下表皮层，切去表皮层和真皮层交界的部分，留取真皮层；操作较简单、无污染。
利用本发明，可以将不同的猪皮不同厚度的角质层和真皮层准确的分离出来，更进一步提高试验结果的可靠性。
附图说明
图1是本发明实施例提供的猪皮皮肤表皮和真皮层分离取材的方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的猪皮皮肤表皮和真皮层分离取材的方法包括以下步骤：
S101：从皮肌处将小型猪的表皮和真皮一起从皮肤上分离下；
S102：分离下来小型猪皮肤用硬纸板铺平，保持皮肤平整，用锐利手术刀片将小型猪皮肤按井字形划成1.0cm*2.0cm的方块；
S103：放在-20℃冰箱中冷冻后，从硬纸板上取下皮肤，将皮肤表皮面贴在冷冻标本托上，在-20℃条件下，用冰冻切片机切去皮肤皮下组织，并保持切面平整；
S104：将去掉皮下组织的皮肤竖立粘贴在冷冻标本托上，用冰冻切片机横切厚度为10μm的皮肤组织，粘贴在载玻片上，0.1％苏木素染色，甘油封片，20倍显微镜下观察皮肤组织学结构，分别测量表皮层和真皮层的厚度，表皮层一般为30-120μm；
S105：然后将皮肤真皮面平整粘贴在冷冻标本托上，用冰冻切片机纵切皮肤表皮层，切面厚度设置稍低于测量的表皮层厚度，一般为30μm，切下的皮肤即为表皮层；
S106：再切去表皮和真皮交界的皮肤，剩余部分即为真皮层。
本发明利用显微镜下精准测量表皮层和真皮层的厚度，然后采用冰冻切片技术，将表皮和真皮分离取材，从而实现对药物皮肤分层分布的研究。本发明的方法科学、有效、精准，无污染，对皮肤局部外用药物临床前药代动力学研究具有极其重要的意义。科学、影响因素少：首先通过显微镜精确测量表皮层厚度，再根据测量的结果精准切下表皮层，切去表皮层和真皮层交界的部分，留取真皮层；操作较简单、无污染。
利用本发明，可以将不同的猪皮不同厚度的角质层和真皮层准确的分离出来，更进一步提高试验结果的可靠性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。