本发明涉及兽医诊断技术领域，尤其涉及一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法。
背景技术：
鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的传染性疾病，世界各地均有发生，是危害养鸡业最严重的疾病之一，鸡白痢的主要症状：雏鸡表现不吃饲料，怕冷，身体蜷缩，翅膀下垂，精神沉郁或昏睡，排白色粘稠或淡黄、淡绿色稀便，肛门有时被硬结的粪块封闭，呼吸困难；成年鸡表现精神萎靡，排黄绿色或蛋清样稀便，主要病变可见肝脏、脾脏肿大、脆弱，有坏死点，肾脏暗红充血或苍白贫血，常出现腹膜炎变化。为了保障鸡的正常生长，通常使用多价染色平板凝集试验抗原进行检测，但是该抗原在实际使用中存在敏感度低、诊断速度慢和凝集图像不清晰的问题。
为了解决多价染色平板凝集试验抗原所存在敏感度低、诊断速度慢和凝集图像不清晰的问题，人们提出了专利公布号为“cn104789500a”的一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法和应用，该专利具有敏感度高、诊断速度快和凝集图像清晰的优点，但是该专利中仅通过灭菌纱布进行过滤灭菌处理，使得灭菌效果较差，进而对鸡白痢染色凝集抗原的纯净度产生不利的影响。
为了解决专利公告号“cn104789500a”的一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法和应用所存在的问题，提出了一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法。
技术实现要素：
本发明提出的一种鸡白痢染色凝集抗原及其制备方法，解决了对内部杂菌的灭菌效果差，进而对鸡白痢染色凝集抗原的纯净度产生不利影响的问题。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种鸡白痢染色凝集抗原，由鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441制成，所述鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441均在中国典型培养物保藏中心保藏。
优先的，所述鸡白痢染色凝集抗原含有的细胞浓度为1.5×1010cfu/ml，且其中鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441的细胞数量分别为15％、25％、55％和5％。
本发明还提出了一种鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，包括以下步骤：
s1：将鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441分别利用营养肉汤培养基进行复苏繁殖，营养肉汤培养基的培养时间设置为20-23h，得到鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441所对应的培养液；
s2：s1中所述的四种不同的培养液分别接种在ss琼脂培养基中，ss琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置44-46h，且恒温箱内部的温度设置为38-40℃；
s3：s2中所述的ss琼脂培养基分别利用生理盐水洗下菌苔，得到一级种子液，然后一级种子液利用紫外线照射灯，在34-36℃下进行照射10-20min；
s4：s3中所述的一级种子液分别接种在ss琼脂培养基中，ss琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置44-46h，且恒温箱内部的温度设置为38-40℃；
s5：s4中所述的ss琼脂培养基分别利用盐酸生理盐水洗下菌苔，并利用盐酸进行酸化处理，得到二级种子液，并置于无菌瓶中，无菌瓶放置到30-32℃的水中，且放置时间设置为20-25min，最后将无菌瓶外侧的水迹进行擦拭干净；
s6：利用光学显微镜对s5中所述的无菌瓶中的二级种子液进行观察，筛选出内部暂无杂菌的无菌瓶；
s7：s6中所述的无菌瓶所放置的二级种子液放置到除菌箱中，除菌箱利用其内部的氦氖激光器对无菌瓶所放置的二级种子液进行2-4次照射，且氦氖激光器的每次照射时间均设置为25-30min，得到灭菌的二级种子液；
s8：s7中所述的经过灭菌处理的二级种子液在冰箱的内部放置21-23h，且冰箱的内部温度设置为2-4℃，得到灭活的二级种子液；
s9：s8中所述的二级种子液利用离心设备去除上清液，得到悬浮的菌泥，然后菌泥利用生理盐水通过浊法配置成1.5×1010cfu/ml的菌液；
s10：s9中所述的菌液同时加入革兰氏染液和石碳酸复红染液进行染色，然后加入染液后的菌液进行摇匀，最后在35℃的恒温箱内进行放置44-46h，得到染色抗原；
s11：s10中的分别对应鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441的染色抗原按照以下质量比例混合：鸡白痢沙门氏菌菌种s0808为15％、鸡白痢沙门氏菌菌种c79-6为25％、鸡白痢沙门氏菌菌种c79-11-s11为55％、鸡白痢沙门氏菌菌种sp8441为5％，混合后的染色抗原利用转速为3500-4500r/min的离心设备进行均匀摇晃，且离心设备的离心时间设置为20-40min，得到鸡白痢染色凝集抗原。
优选的，所述s1中，营养肉汤培养基为改良性马丁肉汤，营养肉汤培养基的ph值为6.5-6.8，营养肉汤培养基放置于干燥箱中，且干燥箱的内部温度设置为38-40℃。
优选的，所述s2中，恒温箱的最佳放置时间为45h，且恒温箱的最佳内部温度设置为39℃。
优选的，所述s3中，生理盐水均为0.4-0.6％浓度的福尔马林生理盐水。
优选的，所述s4中，恒温箱的最佳放置时间为45h，且恒温箱的最佳内部温度设置为39℃。
优选的，所述s7中，氦氖激光器的激光距离为35-45cm，且氦氖激光器的激光电流为30ma。
优选的，所述s9中，离心设备对二级种子液进行离心的过程中，需要利用吸管进行反复吹洗。
优选的，所述s10中，菌液利用转速为3000-3500r/min的离心设备进行摇匀。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明通过将s2中所述的ss琼脂培养基利用0.4％浓度的福尔马林生理盐水洗下菌苔，得到一级种子液，且一级种子液利用紫外线照射灯，在34-36℃下进行照射10-20min，使得一级种子液进行初步灭菌；
2、本发明通过将s6中所述的无菌瓶所放置的二级种子液放置到除菌箱中，除菌箱利用其内部的氦氖激光器对无菌瓶所放置的二级种子液进行2-4次照射，且氦氖激光器的每次照射时间均设置为25-30min，使得二级种子液再次进行灭菌；
3、本发明通过在二级种子液再次进行灭菌之前新增了筛选操作，使得鸡白痢染色凝集抗原的灭菌效果和纯净度均得到了极大的提高；
本发明中的一级种子液和二级种子液均进行不同的灭菌操作，且在二级种子液再次进行灭菌之前新增了筛选操作，使得鸡白痢染色凝集抗原的灭菌效果和纯净度均得到了极大的提高。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例一
本实施例中提出了一种鸡白痢染色凝集抗原，由鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441制成，鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441均在中国典型培养物保藏中心保藏，鸡白痢染色凝集抗原含有的细胞浓度为1.5×1010cfu/ml，且其中鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441的细胞数量分别为15％、25％、55％和5％。
本实施例中还提出了一种鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，包括以下步骤：
s1：将鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441分别利用改良性马丁肉汤进行复苏繁殖，营养肉汤培养基的ph值为6.5，且营养肉汤培养基的培养时间设置为20h，营养肉汤培养基放置于干燥箱中，此时干燥箱的内部温度设置为38℃，得到鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441所对应的培养液；
s2：s1中所述的四种不同的培养液分别接种在ss琼脂培养基中，ss琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置44h，且恒温箱内部的温度设置为38℃；
s3：s2中所述的ss琼脂培养基分别利用0.4％浓度的福尔马林生理盐水洗下菌苔，得到一级种子液，然后一级种子液利用紫外线照射灯，在34℃下进行照射10min；
s4：s3中所述的一级种子液分别接种在ss琼脂培养基中，ss琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置44h，且恒温箱内部的温度设置为38℃；
s5：s4中所述的ss琼脂培养基分别利用盐酸生理盐水洗下菌苔，并利用盐酸进行酸化处理，得到二级种子液，并置于无菌瓶中，无菌瓶放置到30℃的水中，且放置时间设置为20min，最后将无菌瓶外侧的水迹进行擦拭干净；
s6：利用光学显微镜对s5中所述的无菌瓶中的二级种子液进行观察，筛选出内部暂无杂菌的无菌瓶；
s7：s6中所述的无菌瓶所放置的二级种子液放置到除菌箱中，除菌箱利用其内部的氦氖激光器对无菌瓶所放置的二级种子液进行2次照射，氦氖激光器的激光距离为35cm，且氦氖激光器的激光电流为30ma，氦氖激光器的每次照射时间均设置为25min，得到灭菌的二级种子液；
s8：s7中所述的经过灭菌处理的二级种子液在冰箱的内部放置21h，且冰箱的内部温度设置为2℃，得到灭活的二级种子液；
s9：s8中所述的二级种子液利用离心设备去除上清液，同时需要利用吸管进行反复吹洗，得到悬浮的菌泥，然后菌泥利用生理盐水通过浊法配置成1.5×1010cfu/ml的菌液；
s10：s9中所述的菌液同时加入革兰氏染液和石碳酸复红染液进行染色，然后加入染液后的菌液转速为3000r/min的离心设备进行摇匀，最后在35℃的恒温箱内进行放置44h，得到染色抗原；
s11：s10中的分别对应鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441的染色抗原按照以下质量比例混合：鸡白痢沙门氏菌菌种s0808为15％、鸡白痢沙门氏菌菌种c79-6为25％、鸡白痢沙门氏菌菌种c79-11-s11为55％、鸡白痢沙门氏菌菌种sp8441为5％，混合后的染色抗原利用转速为3500r/min的离心设备进行均匀摇晃，且离心设备的离心时间设置为20min，得到鸡白痢染色凝集抗原。
实施例二
本实施例中提出了一种鸡白痢染色凝集抗原，由鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441制成，鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441均在中国典型培养物保藏中心保藏，鸡白痢染色凝集抗原含有的细胞浓度为1.5×1010cfu/ml，且其中鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441的细胞数量分别为15％、25％、55％和5％。
本实施例中还提出了一种鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，包括以下步骤：
s1：将鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441分别利用改良性马丁肉汤进行复苏繁殖，营养肉汤培养基的ph值为6.6，且营养肉汤培养基的培养时间设置为21.5h，营养肉汤培养基放置于干燥箱中，此时干燥箱的内部温度设置为39℃，得到鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441所对应的培养液；
s2：s1中所述的四种不同的培养液分别接种在ss琼脂培养基中，ss琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置45h，且恒温箱内部的温度设置为39℃；
s3：s2中所述的ss琼脂培养基分别利用0.5％浓度的福尔马林生理盐水洗下菌苔，得到一级种子液，然后一级种子液利用紫外线照射灯，在35℃下进行照射15min；
s4：s3中所述的一级种子液分别接种在ss琼脂培养基中，ss琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置45h，且恒温箱内部的温度设置为39℃；
s5：s4中所述的ss琼脂培养基分别利用盐酸生理盐水洗下菌苔，并利用盐酸进行酸化处理，得到二级种子液，并置于无菌瓶中，无菌瓶放置到31℃的水中，且放置时间设置为23min，最后将无菌瓶外侧的水迹进行擦拭干净；
s6：利用光学显微镜对s5中所述的无菌瓶中的二级种子液进行观察，筛选出内部暂无杂菌的无菌瓶；
s7：s6中所述的无菌瓶所放置的二级种子液放置到除菌箱中，除菌箱利用其内部的氦氖激光器对无菌瓶所放置的二级种子液进行3次照射，氦氖激光器的激光距离为40cm，且氦氖激光器的激光电流为30ma，氦氖激光器的每次照射时间均设置为27min，得到灭菌的二级种子液；
s8：s7中所述的经过灭菌处理的二级种子液在冰箱的内部放置22h，且冰箱的内部温度设置为3℃，得到灭活的二级种子液；
s9：s8中所述的二级种子液利用离心设备去除上清液，同时需要利用吸管进行反复吹洗，得到悬浮的菌泥，然后菌泥利用生理盐水通过浊法配置成1.5×1010cfu/ml的菌液；
s10：s9中所述的菌液同时加入革兰氏染液和石碳酸复红染液进行染色，然后加入染液后的菌液转速为3250r/min的离心设备进行摇匀，最后在35℃的恒温箱内进行放置45h，得到染色抗原；
s11：s10中的分别对应鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441的染色抗原按照以下质量比例混合：鸡白痢沙门氏菌菌种s0808为15％、鸡白痢沙门氏菌菌种c79-6为25％、鸡白痢沙门氏菌菌种c79-11-s11为55％、鸡白痢沙门氏菌菌种sp8441为5％，混合后的染色抗原利用转速为4000r/min的离心设备进行均匀摇晃，且离心设备的离心时间设置为30min，得到鸡白痢染色凝集抗原。
实施例三
本实施例中提出了一种鸡白痢染色凝集抗原，由鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441制成，鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441均在中国典型培养物保藏中心保藏，鸡白痢染色凝集抗原含有的细胞浓度为1.5×1010cfu/ml，且其中鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441的细胞数量分别为15％、25％、55％和5％。
本实施例中还提出了一种鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，包括以下步骤：
s1：将鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441分别利用改良性马丁肉汤进行复苏繁殖，营养肉汤培养基的ph值为6.8，且营养肉汤培养基的培养时间设置为23h，营养肉汤培养基放置于干燥箱中，此时干燥箱的内部温度设置为40℃，得到鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441所对应的培养液；
s2：s1中所述的四种不同的培养液分别接种在ss琼脂培养基中，ss琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置46h，且恒温箱内部的温度设置为40℃；
s3：s2中所述的ss琼脂培养基分别利用0.6％浓度的福尔马林生理盐水洗下菌苔，得到一级种子液，然后一级种子液利用紫外线照射灯，在36℃下进行照射20min；
s4：s3中所述的一级种子液分别接种在ss琼脂培养基中，ss琼脂培养基所接种的培养液均在恒温箱的内部放置46h，且恒温箱内部的温度设置为40℃；
s5：s4中所述的ss琼脂培养基分别利用盐酸生理盐水洗下菌苔，并利用盐酸进行酸化处理，得到二级种子液，并置于无菌瓶中，无菌瓶放置到32℃的水中，且放置时间设置为25min，最后将无菌瓶外侧的水迹进行擦拭干净；
s6：利用光学显微镜对s5中所述的无菌瓶中的二级种子液进行观察，筛选出内部暂无杂菌的无菌瓶；
s7：s6中所述的无菌瓶所放置的二级种子液放置到除菌箱中，除菌箱利用其内部的氦氖激光器对无菌瓶所放置的二级种子液进行4次照射，氦氖激光器的激光距离为45cm，且氦氖激光器的激光电流为30ma，氦氖激光器的每次照射时间均设置为30min，得到灭菌的二级种子液；
s8：s7中所述的经过灭菌处理的二级种子液在冰箱的内部放置23h，且冰箱的内部温度设置为4℃，得到灭活的二级种子液；
s9：s8中所述的二级种子液利用离心设备去除上清液，同时需要利用吸管进行反复吹洗，得到悬浮的菌泥，然后菌泥利用生理盐水通过浊法配置成1.5×1010cfu/ml的菌液；
s10：s9中所述的菌液同时加入革兰氏染液和石碳酸复红染液进行染色，然后加入染液后的菌液转速为3500r/min的离心设备进行摇匀，最后在35℃的恒温箱内进行放置46h，得到染色抗原；
s11：s10中的分别对应鸡白痢沙门氏菌菌种s0808、c79-6、c79-11-s11和sp8441的染色抗原按照以下质量比例混合：鸡白痢沙门氏菌菌种s0808为15％、鸡白痢沙门氏菌菌种c79-6为25％、鸡白痢沙门氏菌菌种c79-11-s11为55％、鸡白痢沙门氏菌菌种sp8441为5％，混合后的染色抗原利用转速为4500r/min的离心设备进行均匀摇晃，且离心设备的离心时间设置为40min，得到鸡白痢染色凝集抗原。
对比传统的鸡白痢染色凝集抗原的制备方法与实施例一至三的鸡白痢染色凝集抗原的制备方法，实施例一至三的鸡白痢染色凝集抗原的制备方法的提高百分比如下表：
由上述表格可知，本发明提出的鸡白痢染色凝集抗原的制备方法的灭菌效果和染色凝集抗原纯净度均得到了明显的改善，且实施二为最佳实施例。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。