本申请涉及一种软脂固定液，属于测试用样品制备技术领域。
背景技术
癌症转移的主要途径为淋巴道，癌细胞经淋巴回流转移至淋巴结，不但造成局部组织的破坏，而且在淋巴结隐匿，成为其它脏器转移的发源地，切除包括原发灶和引流区域淋巴结的根治性手术是癌症患者最为重要的手术治疗方式。癌症根治性手术后的淋巴结解剖与病理取材是临床诊疗的重要步骤之一。有研究显示，充分的淋巴结根治性切除能大幅度降低癌症相关事件，即使所有淋巴结病理检查均无转移，对于患者的远期存活率也有重要影响。淋巴结的转移状态往往是癌症患者的独立预后因素，切除的淋巴结数越多，患者的复发率和病死率越低，这种趋势也体现在有淋巴结转移的患者中。有研究证实，转移的淋巴结最小直径为0.4cm，淋巴结有无转移单凭肉眼大体特征很难判断。显然，充分而确切地淋巴结检查可以降低淋巴结假阴性的发生率，axelsson等检查了31679例乳腺癌患者的手术标本，提示切除的淋巴结越多，淋巴结的转移率越高；与以10-14枚淋巴结取材为基数与以20枚淋巴结取材作为基数相比，能使直径1-5mm的淋巴结阳性率由14.2％升高到25.9％，使直径11-20mm淋巴结阳性率由38.6％升高到90.0％。癌症区域淋巴结切除个数及转移阳性率是影响患者预后的重要因素，也是制定治疗方案的重要依据之一，全数淋巴结取材对确定癌症分期、评估预后以及制定个体化治疗方案具有重要意义。
目前，癌症根治术标本的淋巴结解剖取材大都沿用传统方法，即对新鲜或福尔马林固定的手术标本，病理医师采用刀切手摸的方法，根据经验判断通常包裹于脂肪组织中的淋巴结并取材。而淋巴结取材过程中最困难的就是脂肪组织过多，与淋巴结分辨困难，导致取得淋巴结数目不足，使得临床病理分期不准确，严重影响病人手术后的治疗方案，尤其是小于0.5cm的小淋巴结极易漏检，而这些小淋巴结同样存在转移癌的可能。淋巴结解剖取材的数量、质量以及所需时间受脂肪含量、解剖技术甚至操作人员的责任心等多种因素的影响。临床实际工作中急需能够溶解妨碍淋巴结暴露和判断的脂肪组织，并能保证淋巴结充分固定的方法。本研究即为解决这一临床急需的问题而设计。
虽然已有肿瘤病理学家指出淋巴结取材可能需要考虑脂肪溶解技术，近年来研究主要集中于脂肪溶解液在乳腺癌腋窝淋巴结清扫术中，以保护淋巴管，防止传统腋窝清扫手术造成的上肢麻痹、疼痛、提肩运动障碍、上肢水肿、腋窝及胸部皮下积液等并发症。关于包括常规乳腺癌改良根治术、胃及结肠癌根治术在内的临床常见癌症根治性手术后标本取材用的脱脂固定方法鲜见报道。张琴琴等将手术中的脂肪溶解液应用于乳腺常规改良根治术的新鲜标本，并与常规解剖取样方法比较，提示用脂肪溶解液预处理标本可增加淋巴结检出的数目、减低解剖难度以及缩短解剖时间。但是该方法存在的主要问题是不适用于临床更为常见的固定标本。
基于此，做出本申请。
技术实现要素：
针对现有淋巴结检出技术所存在的上述缺陷，本申请提供一种全新的软脂固定液，该软脂固定液不仅兼具了溶脂、固定、淋巴结染色的多重作用，在溶解经处理过的脂肪组织的同时，保证淋巴结结构的完整和最佳染色效果。
为实现上述目的，本申请采取的技术方案如下：
一种软脂固定液，包括以下按浓度计的各组分：甲醛50～150ml/l，卵磷脂30～70g/l，无水乙醇200～300ml/l，丙酮200～300ml/l。
进一步的，作为优选：
还包括有去氧胆酸，去氧胆酸在固定液中的浓度为30～70g/l。
还包括有甲醇，甲醇在固定液中的浓度为200-300ml/l。
还包括有美兰，美兰在固定液中的浓度为0.05-0.15g/l。
还包括有pbs溶液，pbs溶液添加在固定液至浓度为100-200ml/l。
还包括有去氧胆酸、pbs溶液，去氧胆酸在固定液中的浓度为30～70g/l，pbs溶液在固定液中的浓度为100-200ml/l。
还包括有去氧胆酸、甲醇、pbs溶液，去氧胆酸在固定液中的浓度为30～70g/l，甲醇在固定液中的浓度为200-300ml/l，pbs溶液添加在固定液至浓度为100-200ml/l。
还包括有去氧胆酸、pbs溶液和美兰，去氧胆酸在固定液中的浓度为30～70g/l，pbs溶液添加在固定液至浓度为100-200ml/l，美兰在固定液中的浓度为0.05-0.15g/l。
还包括有去氧胆酸、甲醇、pbs溶液和美兰，去氧胆酸在固定液中的浓度为30～70g/l，甲醇在固定液中的浓度为200-300ml/l，pbs溶液添加在固定液至浓度为100-200ml/l，美兰在固定液中的浓度为0.05-0.15g/l。更优选的，所述软脂固定液构成中，各组分浓度分别为：甲醛100ml/l，卵磷脂50g/l，去氧胆酸47.5g/l，无水乙醇250ml/l，甲醇250ml/l，丙酮250ml/l，pbs溶液1×，美兰0.1g/l。
上述pbs溶液，是将pbs粉末加入蒸馏水中搅拌溶解配制而成，或者以7×pbs溶液稀释而成。
配制过程中，先量取无水乙醇、丙酮以及甲醛(必要时额外增加甲醇、pbs溶液)搅拌均匀后，加入卵磷脂(必要时增添去氧胆酸、美兰粉末)，搅拌使其溶解，即可。
将上述软脂固定液处理标本，其优点主要体现为：
(1)在应用于癌症常规根治性手术后的标本解剖与取材时，在有效溶解脂肪组织的同时，还保证了淋巴结的及时充分固定。
(2)提高了淋巴结的检出数目，精确淋巴结转移阳性率，也减少了病理科医生的解剖取材时间，在当下病理医生极为短缺的现状下，节省人力资源更具重要而现实的意义。
(3)为后期病理学科的室外质量控制提供了可能，商品化后在临床广泛推广应用中的作用尤其突出。
附图说明
图1为本申请所提供软脂固定液处理前后的脂肪组织，其中，a为处理前的新鲜脂肪组织，b为处理后的脂肪；c为转移癌放大40倍，d为微小转移癌放大200倍；
图2为乳腺组织采用本申请所提供软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规he染色及cd10、p63和pr免疫组化染色，×200；
图3为甲状腺样本采用本申请所提供软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规he染色及ttf-1、cd20和cd3免疫组化染色，×200；
图4为肺组织标本采用本申请所提供软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规he染色及ck、p63和ttf-1免疫组化染色，×200；
图5为结肠组织标本采用本申请所提供软脂固定液(上行)与采用常规中性福尔马林(下行)处理的效果对照图，其中从左至右依次为常规he染色及actin、ck20和s100免疫组化染色，×200。
具体实施方式
实施例1：不同构成的软脂固定液
本申请所提供的软脂固定液的核心作用成分主要是甲醛、卵磷脂、无水乙醇和丙酮，在不同实施环境下，还可以额外增加去氧胆酸、甲醇、pbs溶液和美兰中的任一种或多种，具体成分选择方式可参见表1所示。
表1不同组成的软脂固定液
我们分别对核心构成成分的软脂固定液(即表1中的序号1)以及补充成分进行测试，可以得到上述16种情况，相同组分采用相同浓度对同样的样品做平行试验，结果表明：核心构成成分的软脂固定液不论是对脂肪组织还是器官组织(如甲状腺组织、乳腺组织、肺组织)或者结肠组织，都具有很好的固定效果，淋巴结得到良好暴露；但补充成分的作用也不容忽视，如采用表1中序号2所提供方案时，去氧胆酸与核心构成成分的配合下，脂肪的消化效果较好，该趋势在序号1与序号2、序号3与序号6、序号8与序号12以及序号14与序号16的对比中有同样体现；序号3所提供的方案中，甲醇与无水乙醇起到协同的作用，配合其他核心构成成分，溶出效率更高，该趋势在序号1与序号3、序号4与序号8、序号6与序号7以及序号15与序号16的对比中有同样体现；序号4所提供的方案中，pbs溶液与核心构成成分的配合下，脂肪的溶出与软化效果更加均匀，该趋势在序号1与序号4、序号13与序号16；序号5所提供的方案中，与核心构成成分的配合下，在后续染色处理中可以更加快速的显色，该特性在序号1与序号5、序号6与序号13、序号12与序号16的对比中也有同样体现。
因此，基于不同的固定目的和处理要求，可以选择上述不同构成的软脂固定液进行软脂(溶脂)处理。
我们还对固定液中核心构成成分(甲醛、卵磷脂、无水乙醇、丙酮)与补充成分(去氧胆酸、甲醇、pbs溶液、美兰)的浓度进行了实验，结果表明在软脂固定液中，甲醛的浓度适宜控制在50-150ml/l、卵磷脂的浓度适宜控制在30-70g/l、无水乙醇的浓度适宜控制在200-300ml/l、丙酮的浓度适宜控制在200-300ml/l，在这种情况下，四种核心作用成分可以很好的发挥协同与配合作用，达到溶解或软化脂肪的效果，低于或者超出上述范围则会对溶脂效果造成一定的干扰和不利影响；当进行补充成分的添加时，可保持上述四种核心作用成分添加量不变或者在上述范围内适当调整，补充成分的添加不宜过大，否则很容易造成固定液失衡，影响软化与溶解效果，因此，去氧胆酸在固定液中的浓度为30～70g/l，甲醇在固定液中的浓度为200-300ml/l，pbs溶液在固定液中的浓度为100-200ml/l，美兰在固定液中的浓度为0.05-0.15g/l，且这四种补充成分可同时添加，也可选择任一种或任几种分别添加。
实施例2：相同组成不同浓度的软脂固定液
本实施例给出了全构成(即包含了全部的核心构成成分与全部补充成分)的软脂固定液组成与浓度，并将具有代表性的几组罗列如表2所示：
表2不同浓度的软脂固定液
应用表2各序号所对应的软脂固定液处理经预处理的手术切除网膜标本4小时，再进行淋巴结取材、脱水、包埋、切片、染色、免疫组化，镜下观察，结果表明：上述各浓度均可不同程度的对样本实现溶解，脂肪柔软液化，淋巴结得到有效暴露，淋巴结细胞形态保存完整，无变形，免疫组化效果良好，特别是采用表2中序号9-12所提供方案进行软脂实验时，其溶脂效果显著，固定效果好，脂肪柔软液化，淋巴结暴露明显，淋巴结细胞形态保存完整，无变形，免疫组化效果良好。
应用效果对照
以下分别以表2中序号12所提供的软脂固定液作为代表，对不同标本进行软脂固化，并与常规中性福尔马林(10％福尔马林，ph7.2)处理效果进行对比，具体如下：
(1)脂肪组织
取手术切除新鲜脂肪组织小块及淋巴结，一式两份，均采用同样的处理方法。首先用化学法处理，即用0.01nhcl室温下浸泡10min，弃处理液，pbs冲洗后，用0.25％胰蛋白酶-edta37℃恒温水浴箱浸泡10min。下一步，将标本取出放入脱脂固定液中，随后每隔0.5-1h拍照观察并记录。如图1所示，此为原脂肪组织与脱脂固定液处理2h后的比较，可见采用本申请软脂固定液处理后，脂肪组织明显变软变薄，淋巴结结构完整，转移癌组织及微小转移癌细胞团均清晰可见。
(2)器官组织
取手术切除新鲜乳腺腺组织，首先通过化学法处理，即用0.01nhcl室温下浸泡10min，弃处理液pbs冲洗后，再用0.25％胰蛋白酶-edta在恒温水浴箱中37℃浸泡10min。下一步，将标本取出放入脱脂固定液中，4h后依次进行常规取材、脱水、石蜡包埋、切片及染色，结果如图2所示，结果表明：与常规福尔马林固定同标本相比，本法固定液的处理对乳腺组织标本的普通形态学、免疫组化染色均无差别。
取手术中切除新鲜甲状腺腺组织，如上方式处理，结果如图3所示，结果表明：与常规福尔马林固定同标本相比，本法固定液的处理对甲状腺组织标本的普通形态学、免疫组化染色均无差别。
取手术切除新鲜肺组织，如上方式处理，结果如图4所示，结果表明：与常规福尔马林固定同标本相比。本法固定液的处理对肺组织标本的普通形态学、免疫组化染色均无差别。
取手术切除结肠组织，如上方式处理，结果如图5所示，结果表明：与常规福尔马林固定同标本相比。本法固定液的处理对结肠粘膜组织标本的普通形态学、免疫组化染色均无差别。