本发明涉及医学检验技术领域，特别是一种血小板聚集功能检测系统及方法。
背景技术：
血小板功能水平与血栓发生密切相关，血小板功能检测对于血栓风险预警、抗血小板治疗指导具有重要临床价值。血小板功能检测方法有多种，这些方法存在操作繁琐、检测结果不稳定、耗时间长且用血量大、检测结果重复性不好等问题，因此血小板功能检测难以在临床普及应用。
技术实现要素：
发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种血小板聚集功能检测系统及方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种血小板聚集功能检测系统及方法，检测系统包括显微扫描单元、图像处理单元及控制单元。
所述显微扫描单元用于沿血样涂片平面一定轨迹对添加诱聚剂和未添加诱聚剂的血样涂片区分别进行扫描，当视野图像中扫描目标不清晰时，显微扫描单元自动进行连续多次不同轴向距离聚焦扫描，获取更清晰的目标图像；所述图像处理单元用于将显微扫描单元获得的图像进行处理，先选择一个总体清晰的基准层细胞图像，随后筛选基准层图像中不清晰的细胞及颗粒，利用各次不同轴向聚焦扫描，获取该不清晰局部及单体靶目标的清晰图像，替代原不清晰的细胞或靶目标图像，即用每一细胞或颗粒最清晰的图像替换不清晰的图像，而后整合为整幅清晰细胞图像，并在此基础上进行血小板、血小板聚集体以及各细胞的识别分类和计数；所述控制单元控制各单元间的协调工作；
仪器通过对不添加诱聚剂和添加诱聚剂的血样涂片分别进行检测，将相同血样的不添加诱聚剂和添加诱聚剂两个血样涂片的血小板数量进行比较，根据两涂片单体血小板数量的差异，计算出该血样在一定诱聚剂作用下的血小板聚集率，计算公式如下：
本发明中，检测系统还包括专用检测卡、检测卡位、样品吸取及转移单元、涂片单元、染色剂添加单元和清洗单元。
本发明中，专用检测卡上设有一个对照管和一个以上检测管，对照管中不加诱聚剂，各检测管分别加入不同诱聚剂，对照管和检测管中分别加入定量血样。
本发明中，检测卡位用于装载专用检测卡，混匀检测卡中血样并保持检测卡血样恒温；
本发明中，样品吸取及转移单元包括一个吸样针、一个定量注射器、连接管路、阀门以及吸样针移动装置，用于分别定量吸取对照管和各检测管中的血样，并将血样分别转移至载玻片的对照区和各检测区；
本发明中，染色剂添加单元包括一个以上的由控制单元控制的注射器、一个以上的染色剂瓶、连接管路和阀门，染色剂瓶中装有染色剂，用于在载玻片的对照区和各检测区加入定量染色剂与待检血样混匀，对细胞进行染色的同时稀释血样；
本发明中，涂片单元包括载玻片架、载玻片、微流空气混匀及涂片器；每一检测卡对应一个载玻片，每一载玻片具有该检测卡对照管血样涂片区和各检测管血样涂片区；微流空气混匀及涂片器用于混匀载玻片的各涂片区内的血样和染色剂，并在各涂片区内完成血样涂片；
本发明中，清洗单元包括一个由控制单元控制的注射器、连接管路、阀门和一个清洗液瓶，清洗液瓶中装有清洗液。
本发明中，检测时取两份等量同一血样，一份加入诱聚剂，另一份加入等量生理盐水，不加诱聚剂，分别混匀两份血样，并将两份血样分别涂布在两个相同面积的不同透明载体涂片区域，通过比较未加诱聚剂但加等量生理盐水血样涂片和加入诱聚剂后血样涂片检测获得各自单体及复合血小板数量，单体血小板及两个以上紧密结合的血小板复合体均计为一个血小板，计算出血样在该诱聚剂作用下的血小板聚集率，检测的血小板聚集率值越大，血小板的聚集功能越强，计算公式为：
本发明中，血液涂片厚薄不但影响细胞观察效果，而且也不便于细胞含量的判断，因此单纯直接对涂片中血小板读数，难以准确判断血样中血小板含量。由于各不同血样涂片中血小板数量与该血样涂片的红细胞数量成正比例，用涂片中红细胞的数量代表血样的量，相同血样不同涂片中获得的相同红细胞数量，可以代表等量的该血样，在相同红细胞数量中读取获得的血小板数量可以代表等量血样中的血小板数量。
由于诱聚剂不会导致红细胞聚集，而仅仅使血小板聚集，导致血样中血小板数量减少。在正常混匀血样中，红细胞与血小板数量成正比，根据相同血样添加诱聚剂前后的两个涂片中，一定红细胞数量中血小板的数量，通过比较计算两涂片中血小板数量的差异，计算出该血样在一定诱聚剂作用下的血小板聚集程度。
本发明中，为避免由于血样涂布不均匀导致的检测误差，仪器分别读取加诱聚剂血样涂片区和不加诱聚剂涂片区的红细胞数量，并将各自涂片中的红细胞的数量作为计量血小板数的基准，在此基础上分别计算两涂片中一定红细胞数量中的血小板数量，即分别计算加诱聚剂和不加诱聚剂血样涂片区中，各自一定红细胞数量中所读取获得的血小板数量，根据各自一定红细胞数量中的血小板数量，比较计算血样的血小板聚集率，血小板聚集率越大血小板聚集功能越强，计算公式为：
本发明中，通过检测加入诱聚剂前血样即对照血样中血小板的数量和血小板聚集体所占比例，判断样品是否在检测前就发生聚集；当对照血样中血小板数量小于100×109/l时，或且所检测获得的血小板聚集体占血小板与血小板聚集体总和大于等于10％时，仪器就自动判断该血样血小板在检测前已发生较高程度聚集，并提示样本质量可疑。
本发明中，仪器通过对比加诱聚剂和不加诱聚剂血样中血小板聚集体数量，计算血小板的聚集率，血小板聚集体是指两个以上相互紧密联合一体的血小板复合体，计算公式为：
本发明中，染色剂添加单元还将定量染色剂加在载玻片的指定位置做标识。
本发明还公开了一种血小板聚集功能检测系统及方法，包括以下步骤：
步骤1：先将待检血样分别等量加入专用检测卡的对照管和各检测管中，分别混匀，而后将专用检测卡放到血小板聚集功能分析仪的检测卡位上；
步骤2：按仪器检测键，仪器即开始检测过程。首先仪器控制单元控制样品吸取及转移单元分别自对照管和各检测管中吸取定量的血样至载玻片的指定区域；
步骤3：染色剂添加单元自染色剂瓶中吸取定量染色剂，至载玻片的各指定区域与血样混匀并稀释血样，随后染色剂添加单元还将定量染色液加在该载玻片的指定位置做标识；
步骤4：微流空气混匀及涂片器利用空气微流混匀血样及染色剂，随后将混匀的血样在微气流的推动下均匀附着在载玻片指定区域内，形成均匀的薄层血膜；
步骤5：显微扫描单元对各区域涂片进行扫描；
步骤6：分析比较对照管涂片血小板数量和血小板聚集体数量，与各检测管涂片血小板数量和血小板聚集体数量的比值差异，计算该血样的血小板聚集率。
本发明中，采用特异血小板标识物分别对未加诱聚剂血样和加入诱聚剂后血样分别标记，分别涂片后检测各自获得的散在血小板数量，最后进行比较计算获得该血样在一定诱聚剂作用下的血小板聚集率。
本发明中，仪器通过检测一份加入定量诱聚剂后血样中血小板单体数量和血小板聚集体数量，即可自动计算获得血小板聚集功能，其计算公式为：
本发明中，仪器仅检测涂片中细胞良好分布区域的血小板数量和体积，并进行分析比较；当涂片中出现红细胞边沿重叠度为5％以上，且该重叠的红细胞达到30％及以上的边缘被重叠时，则涂片区域细胞数量过大，仪器自动判断该区域为不适宜读取图像数据的区域；仪器仅仅读取红细胞边沿重叠度10％以下，且该部分红细胞累计低于40％的边缘被重叠的区域，即该区域的红细胞发生重叠的不超过10％，且重叠的这部分红细胞累计边沿低于40％发生重叠，凡不符合此标准的判断为细胞重叠区；对于细胞重叠区域仪器自动记录该区域面积，并通过比色检测该重叠区域，确定该重叠区域的细胞厚度，根据该区域的面积、厚度计算该涂片中细胞重叠区域所耗用的血样量；通过从涂片总血样量中扣减细胞重叠区域所耗用血样量，计算出涂片细胞分散良好区域血样量，对涂片细胞分散良好区域进行细胞计数和细胞比例分析，作为该血样细胞构成比例的基准，仪器进一步按照该比例推算出细胞重叠区域各种细胞及血小板数量，最终计算出该血样的各种细胞的含量。
本发明中，本方法通过检测细胞正常分布区域中各细胞数量，获得各细胞所占细胞总数的比例，并通过检测细胞重叠区域总吸光度和重叠区面积，计算重叠区域内的细胞总数及各种细胞的数量；
仪器对正常分布区血样细胞组成分析的具体方式为：如血样细胞成份为三种，分别命名为a、b和c，仪器根据细胞正常分布区域中检测获得的各细胞数量，确定该血样中各细胞所占细胞总数的比例，如各细胞比例分别为a细胞70％、b细胞20％和c细胞10％；
仪器对血样涂片细胞重叠区细胞组成分析的具体方式为：仪器分别测量细胞正常分布区域内各细胞在某波长下的吸光度，如获得该血样中三种细胞各自的吸光度值分别为ad、bd和cd，则涂片正常分布区按比例混合细胞合计吸光度值计算公式如下：
正常分布区总细胞理论面积指的是细胞正常分布区理论细胞单层紧密分布构成的面积。
重叠区总细胞数的计算公式为
其中每一血样细胞重叠区总吸光度值可直接检测，重叠区域总面积可直接测量，混合细胞合计吸光度值按照计算式计算获得。
重叠区内各细胞总数＝重叠区总细胞数×各细胞在血样中的比例。
本发明中，仪器在检测杯及对照杯中直接加入染色液，血样与染色液混匀后，载玻片盖在各检测杯和对照杯口，载玻片相应区域对应检测杯及对照杯，而后倒置检测杯和对照杯，将对应血样涂布在载玻片相应区域，随后放正检测杯和对照杯，检测杯和对照杯口紧贴载玻片进行平移，在载玻片表面形成血样薄膜，之后进行显微扫描。
本发明中，血样细胞染色涂片后，分析仪利用不同波长对涂片进行扫描，根据不同波长下细胞的显色差异、细胞颗粒大小以及细胞结构图像信息对血小板及血小板聚集体进行识别；血小板聚集体识别原则：镜下两个以上的血小板聚集粘附形成聚集体时，聚集体外边缘不整齐，且90％以上的转折处为圆润的转折，聚集体内部有不规则分界线，聚集体中各单一小体内均质无核。
本发明中，根据已有判断条件无法对细胞进行分类确认，或分类指标不足的异常细胞，分析仪自动将获得的该类细胞图像信息显示在显示屏上，并提示需要通过人工帮助识别分类；人工分类后分析仪自动记忆该类型细胞，后续检测按照设定提示记录；分析仪自动标记新增细胞图像，便于随时分析和更新定义。
有益效果：本发明通过仪器自动涂片，镜检后对细胞形态学进行鉴别分析，检测系统操作简单，故障率低；采用多种方法计算血小板聚集率，包括分别计算加入诱聚剂前后血样中血小板单体数量、血小板聚集体数量、血小板单体和聚集体数量、单位红细胞中血小板数量，检测速度快，结果精准；通过检测细胞正常分布区域中各细胞数量，获得各细胞所占细胞总数的比例，并通过检测细胞重叠区域总吸光度和重叠区面积，计算重叠区域内的细胞总数及各种细胞的数量；本发明仪器暂用空间小，耗材试剂消耗少，检测过程不易受外界因素干扰。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明做更进一步的具体说明，本发明的上述或其他方面的优点将会变的更加清楚。
图1为本发明样品吸取及转移单元结构示意图，清洗单元设有清洗瓶。
图2为本发明的染色剂添加单元结构示意图。
图3为本发明样品吸取及转移单元结构示意图，清洗单元不设清洗瓶。
图4a为正常血小板形态示意图，图4b为聚集后的血小板形态示意图。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明作详细说明。
实施例1：
如图1，本实施例中，样品吸取及转移单元工作原理：将专用检测卡放到血小板聚集功能分析仪的检测卡位上，关闭第一阀门2，开启第二阀门3，第一注射器4下拉，仪器吸样针从样品管9中吸取等量样品至注射器4中，之后吸样针转移至检测卡上方，注射器4上推，将等量样品转移至对照管10、第一检测管11和第二检测管12中，之后开启检测卡位下的混匀电机，分别混匀检测卡上对照管和检测管中的血样；
清洗针转移至清洗池上方，开启第一阀门2，关闭第二阀门3，注射器下拉，清洗水1进入注射器4中，之后关闭第一阀门2，开启第二阀门3，注射器上推，清洗水对吸样针内部进行清洗；
如图2，吸样针分别从检测卡的对照管和各检测管中吸取混匀血样，并将血样分别转移至载玻片的指定区域；之后第一阀门2打开，第二阀门3关闭，第一注射器4下拉，染色液5进入第一注射器4中，之后开启第二阀门3，关闭第一阀门2，第一注射器4上推，染色液加在载玻片13的指定位置；
微流空气混匀及涂片器通过微流气体喷出口形成的气流分别将显微载玻片上不同区域的血样与染色液分别充分混匀，随后继续由于微气流的推动将各混合血样分别在各区域一定范围内由微气流推动涂布成薄层血膜，该过程将同一个血样的检测样、对照样分别在载玻片的各相应区域涂布成血膜，随后显微扫描单元对各区域涂片进行扫描。
实施例2：
如图3，本实施例中，仪器不设清洗液瓶，设有清洗池，针清洗时，吸样针转移至清洗池中，开启第三阀门14，第二注射器15下拉，吸样针从清洗池中吸取清洗水，之后吸样针转移至废液收集器上方，第二注射器上推，清洗水排至废液收集器。
实施例3：
仪器在不加诱聚剂涂片区中读取10000个红细胞中有450个血小板，之后在添加诱聚剂的涂片区中读取10000个红细胞中有40个血小板，根据公式
计算血小板的聚集率为91％。