一种菠菜果实的质量控制方法与流程

文档序号：18252794发布日期：2019-07-24 09:54阅读：440来源：国知局

本发明属于中药及药食两用资源开发利用领域，具体涉及一种菠菜果实的质量控制方法。

背景技术：

菠菜果实来源于藜科菠菜属植物菠菜（Spinacia oleracea L.）的果实，菠菜既可食用，又能做药用，其药用最早见于唐代《食疗本草》，据《中华本草》记载，菠菜具有止血、养血、平肝、润燥之功效，而菠菜果实（又称菠菜子、菠薐菜子）具有清肝明目，止咳平喘之效，主治风火目赤肿痛，咳喘。菠菜果实含有小龙骨素B、蜕皮甾酮、α-菠菜甾醇、豆甾烯醇、豆甾烷醇等，前期预实验研究发现菠菜果实（菠菜种子）中含有β-蜕皮激素，β-蜕皮激素能促进人表皮细胞的分化，能对慢性脑血管痉挛具有治疗作用，是菠菜果实活性物质之一。

菠菜在种植过程中会发生变异、变种现象，出现栽培学上的“圆叶菠菜”、“尖叶菠菜”，两种菠菜果实都容易和其他植物果实混淆，如“尖叶菠菜”果实多具有刺，极像蒺藜果实，仅凭性状特征难以鉴别其真伪，目前缺乏菠菜果实或干燥果实快速、准确的薄层色谱定性鉴别体系，制约菠菜果实的资源开发利用和作为药用原料的应用。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种菠菜果实的质量控制方法，以解决目前缺乏定性定量鉴定菠菜果实真伪和质量评价的方法。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种菠菜果实的质量控制方法，该方法采用薄层色谱法鉴别菠菜果实中特征性化学成分或采用高效液相色谱法控制菠菜果实中指标性成分β-蜕皮激素。

薄层色谱法包括以下步骤：

A、供试品制备：

取菠菜果实粗粉0.5-20重量份，加甲醇1-200体积份，密塞称量后加热回流提取或超声波提取1-60min，取出放冷至室温，用甲醇补足减失重量，滤过，将滤液浓缩至0.1-20体积份，于-4- -20℃下低温处理0.5-24h，再次滤过，即得到菠菜果实供试品溶液；低温条件与室温形成温差梯度，从而改变供试品溶液的溶解性，影响溶质在溶剂中的分配，加之种子类材料富含油脂、蛋白质、糊精、淀粉等成分，此类成分鉴别专属不明显，容易造成干扰，在温度较高条件下可一定程度溶于甲醇，在低温条件下则易聚集、凝结，其他被检测类成分和杂质形成溶解差，需要至少0.5h才能形成较好的溶解分配差，再次过滤能够除去杂质及其他影响鉴别的干扰成分，使被检测成分鉴别专属性更好，更灵敏；

B、对照品制备：

取β-蜕皮激素对照品0.01-0.5重量份，加甲醇1-10体积份，制成β-蜕皮激素对照品溶液作为母液；精密吸取上述母液0.04-0.4体积份，加甲醇1-10体积份，制成β-蜕皮激素目标浓度溶液；

C、薄层色谱鉴别：

吸取步骤A和步骤B的两种溶液各0.01-0.05体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇的体积比1-15：0.2-4为展开剂，薄层板置于展开缸中饱和5-40min，展开，取出，晾干，喷以0.1-20%硫酸乙醇溶液，加热或热风吹至斑点于日光下显色清晰，置紫外光灯365nm下检视。

步骤A中所述菠菜果实粗粉为10-200目。

步骤B中所述对照品溶液的浓度为0.067mg/ml。

步骤C中所述展开剂为三氯甲烷-甲醇的体积比8：2。

高效液相色谱法包括以下步骤：

A、供试品制备：

取菠菜果实0.5-20重量份，精密称定，置锥形瓶中，精密加甲醇1-200体积份，密塞，称量，超声处理1-60min，取出，放冷，用甲醇补足减失重量，滤过，取续滤液作为菠菜果实供试品溶液；

B、对照品制备：

C、高效液相色谱测定：

分别吸取步骤A得到的菠菜果实供试品溶液和步骤B得到的β-蜕皮激素对照品溶液各0.005-0.05体积份，注入高效液相色谱仪，测定，色谱条件为：

固定相：反相C18色谱柱；

流动相：乙腈-水；

洗脱方式：梯度洗脱，梯度洗脱时流动相中乙腈的体积比随时间变化为：0-4min，18-22%；4-8min，18-25%；8-15min，25-19%；15-20min，23-18%；

流速：0.2-1.2ml/min；

检测波长：240-254nm；

柱温：20-45℃。β-蜕皮激素(CAS NO：5289-74-7,MF：C27H44O7)属于甾酮类物质，含有多元酚羟基，空间结构复杂，极性较大，易溶于乙醇，在丙酮中略溶，在乙酸乙酯、氯仿及热水中微溶，在乙醚中几乎不溶。对其吸收波长和检测条件进行分析和实验，在最大吸收波长条件下，其检测等度洗脱效果一直不理想，因此，为了达到更好的分离和检测效果，在进一步优化流动相种类的基础上，改变等度洗脱方法，采取梯度洗脱，最终菠菜果实中β-蜕皮激素HPLC检测条件满足要求，可准确、快速检测菠菜果实中β-蜕皮激素含量。

步骤A和B中甲醇的浓度为10-100%。

步骤C中所述梯度洗脱时以乙腈的体积比为参照：0-4min，20%；4-8min，20→23%；8-15min，23→21%；15-20min，21→20%；

步骤C中所述流速为1ml/min，检测波长为240nm，柱温为25℃。

步骤C中乙腈的浓度为100%。

本发明相较于现有技术的有益效果为：

由于菠菜果实不同于菠菜，具有不同药用价值，本发明旨在建立菠菜果实真伪鉴别方法和菠菜果实中β-蜕皮激素含量测定方法，从而鉴别菠菜及其变种的真伪及评价质量，填补目前菠菜果实质量控制技术空白，并为菠菜果实法定质量控制标准制订提供依据。

本发明采用化学和现代分析技术手段，建立菠菜果实的快速、准确真伪鉴别和基于化学活性指标成分的质量控制体系，突破传统仅凭性状和经验鉴别方法控制菠菜果实真伪优劣，为菠菜果实科学、准确、快速鉴定和检测提供技术依据，基于鉴定和检测方法，采用改进一般常用放冷过滤的方法，采取低温冷藏处理样品后过滤，从而减少种子内蛋白、脂类等杂质，创造性地增加了鉴别方法的灵敏度，提高鉴别可信度，使整个质量控制体系更加完善。

本发明的菠菜果实鉴定方法建立了菠菜果实（含变种）的薄层鉴别方法，所建立的薄层色谱鉴别方法采用低温处理浓缩样品再过滤，除去样品中杂质及果实中油脂类、蛋白质类，极大提高了薄层鉴别斑点分离度和灵敏性，所建立的薄层鉴别方法适用于菠菜变种果实鉴别，薄层鉴别方法适用性好，专属性强，重现性好，可以有效检验菠菜果实真伪；建立了菠菜果实（含变种）中β-蜕皮激素含量检测方法，该方法准确性、灵敏度性高，稳定性好，符合准确、简便、灵敏、快速、可靠的原则，可以有效检测菠菜果实质量。

附图说明

图1为本发明中菠菜果实多批次样品低温处理薄层色谱图；

其中，从左到右，为β-蜕皮激素对照品和菠菜果实（圆叶菠菜）样品；

图2为本发明中菠菜果实多批次样品低温处理薄层色谱图；

其中，从左到右，为β-蜕皮激素对照品和菠菜果实（尖叶菠菜）样品；

图3为本发明中β-蜕皮激素对照品及菠菜果实（含变种）样品重叠高效液相色谱图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明。

菠菜果实标本采自甘肃省兰州市，样品收集来源于源全国，经鉴定为藜科菠菜属植物菠菜（Spinacia oleracea L.）及其变种的干燥或新鲜果实。

薄层鉴别所用试剂为分析纯，高效液相色谱含量测定所用试剂为色谱纯，其余试药未特殊说明均为普通市售。

实施例1：

1）供试品溶液制备：取菠菜果实粗粉（40目）1g，加甲醇10ml，称量，超声处理15分钟，取出放冷，加甲醇补足减失重量，滤过，滤液浓缩至约1.5ml，浓缩液-4℃处理0.5h后，过滤，作为供试品溶液备用；